專利名稱：一種脫膠菌株的篩選方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物領(lǐng)域，更具體的說(shuō)是涉及一種脫膠菌株的篩選方法。
背景技術(shù)：
苧麻，別名白葉苧麻，多年生宿根性草本植物，是中國(guó)特有的以紡織為主要用途的農(nóng)作物，其單纖維長(zhǎng)、強(qiáng)度大，吸濕和散濕快，熱傳導(dǎo)性能好，脫膠后潔白有絲光，可以純紡， 也可和棉、絲、毛、化纖等混紡，是重要的紡織纖維作物。苧麻中含有大量雜質(zhì)，其中以多糖膠狀物質(zhì)為主，紡紗前要求將韌皮中絕大部分膠質(zhì)去除，并使苧麻的單纖維相互分離，這一過(guò)程稱為脫膠。傳統(tǒng)的脫膠工藝采用化學(xué)脫膠法，即燒堿蒸煮的脫膠方法，該方法污染嚴(yán)重、能耗高、對(duì)纖維有損傷，已不再適應(yīng)現(xiàn)代工業(yè)生產(chǎn)的要求。隨著科學(xué)技術(shù)和現(xiàn)代紡織工業(yè)的的發(fā)展，出現(xiàn)了一種新的脫膠工藝，即生物脫膠。 生物脫膠主要是利用微生物產(chǎn)生的果膠酶、半纖維素酶等分解植物韌皮纖維中的果膠、半纖維素等物質(zhì)，但不損傷纖維素結(jié)構(gòu)，具有反應(yīng)條件溫和、節(jié)水節(jié)能、污染少等優(yōu)點(diǎn)。苧麻生物脫膠一般包括酶脫膠和菌脫膠兩種方式。酶脫膠是直接利用脫膠酶制劑或者脫膠菌株產(chǎn)生的酶作用于苧麻上，利用酶的生物活性，降解苧麻纖維外包裹的膠質(zhì)復(fù)合體，從而使纖維分離出來(lái)；菌脫膠是把經(jīng)過(guò)篩選的脫膠菌株接種到生苧麻上，以苧麻上的膠質(zhì)為營(yíng)養(yǎng)源，讓脫膠菌在生苧麻上大量繁殖，在脫膠菌繁殖過(guò)程中，分泌出脫膠酶分解膠質(zhì)，使高分子量的果膠及半纖維素等大分子分解成小分子物質(zhì)而溶于水中。但是，不論哪種生物脫膠方式都與脫膠菌密切相關(guān)，脫膠菌的特性直接影響著脫膠過(guò)程的變化和最終脫膠效果，因此在生物脫膠中，菌株的篩選是最重要的環(huán)節(jié)。目前研究脫膠菌的篩選方法的報(bào)道較多，主要是兩種方法，第一種是采用果膠配制培養(yǎng)基(見(jiàn)吳麗艷等，亞麻脫膠菌的分離、篩選和鑒定，云南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)， 2007,29(4) :419-423)，該方法能較快地獲得能分解果膠的菌株，但因?yàn)槁轭惖哪z質(zhì)中不只有果膠，還有半纖維素等物質(zhì)，因此這種方法會(huì)局限脫膠菌的篩選范圍，導(dǎo)致某些脫膠菌不能獲得。第二種方法主要是采用麻類直接進(jìn)行篩選，例如用劍麻葉篩選脫膠菌株(見(jiàn)陳青等，劍麻生物制漿脫膠菌株的篩選與鑒定及初步應(yīng)用，農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào)，2008二4(6) 277-281)；采用以苧麻粉為唯一碳源的平板培養(yǎng)基進(jìn)行脫膠菌的篩選(陳楊棟等，苧麻微生物脫膠菌株篩選及脫膠效果評(píng)價(jià)紡織學(xué)報(bào)，2010，31 (5) :69-72)；用大麻莖篩選脫膠菌株(見(jiàn)彭源德等，大麻快速脫膠菌株的選育與脫膠性能鑒定，紡織學(xué)報(bào)，2007，觀(12) 65-68)。這種方法能篩選到以麻為營(yíng)養(yǎng)的各類菌株，包括了能分解果膠、半纖維素和纖維素等成分的菌株，但是在麻類脫膠中分解纖維素的菌株會(huì)嚴(yán)重?fù)p傷麻類纖維的品質(zhì)，因此通過(guò)這種方法所獲得的菌株并不都適用于生物脫膠。此外，通過(guò)這些篩選方法篩選出的菌株脫膠率較低、脫膠速度較慢，制約了其生物脫膠在生產(chǎn)中的應(yīng)用
發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種脫膠菌株的篩選方法，該方法以苧麻汁為唯一有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分進(jìn)行篩選，可快速獲得分解苧麻膠質(zhì)成分的菌株，不損傷苧麻中纖維素成分，脫膠率、脫膠速度較高。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種脫膠菌株的篩選方法，包括以下步驟步驟1、將包含有果膠桿菌、芽孢桿菌或腸桿菌的樣品接種到富集培養(yǎng)基中恒溫振蕩培養(yǎng)，所述富集培養(yǎng)基包含3-10%苧麻、0. 5-1. 5%蛋白胨、0. 1-0. 5%牛肉膏、0. 3-1. 0% NaCl，其余成分為水；步驟2、將步驟1培養(yǎng)后的培養(yǎng)物涂布在初篩培養(yǎng)基上恒溫培養(yǎng)，將在初篩培養(yǎng)基上產(chǎn)生水解圈的菌落進(jìn)行純化，所述初篩培養(yǎng)基包含5-10%苧麻、0. 01-0. 08% K2HPO4, 0. 03-0. 1% NH4Cl和1. 5-2. 5%瓊脂，其余成分為水；步驟3、將步驟2純化后的菌株接種到復(fù)篩培養(yǎng)基恒溫振蕩培養(yǎng)15_24h測(cè)定菌株脫膠率，脫膠率大于80 %的菌株為篩選出的目的菌株，所述復(fù)篩培養(yǎng)基包含8-15g生苧麻、 0. 01-0. 08% K2HPO4 和 0. 03-0. 1% NH4Cl,其余成分為水。在復(fù)篩時(shí)，設(shè)置實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組即步驟3所述；對(duì)照組即復(fù)篩培養(yǎng)基中不接種菌株，根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 5889-86中測(cè)含膠率的方法測(cè)定對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的含膠率，分別記為和G1,脫膠率為Gr。按公式Gr = I-G1ZG0計(jì)算得出脫膠率。其中，步驟1所述培養(yǎng)為在35°C、轉(zhuǎn)速170rpm的恒溫?fù)u床中培養(yǎng)Μ_4 ι，步驟2 所述培養(yǎng)為在35°C恒溫?fù)u床中培養(yǎng)M-4 !，步驟3所述培養(yǎng)為在35°C、轉(zhuǎn)速ISOrpm的恒溫?fù)u床中培養(yǎng)。優(yōu)選地，所述富集培養(yǎng)基包含5%苧麻、蛋白胨、0.3%牛肉膏、0.5% NaCl，其余成分為水。富集培養(yǎng)基的制備將5g生苧麻剪成Icm左右長(zhǎng)的小段，加水在電爐上加熱，待沸騰后，改用小火熬煮，當(dāng)杯內(nèi)苧麻變軟，溶液變成棕黃色后，把苧麻撈出，然后加入0. 3g牛肉膏、Ig蛋白胨、0. 5g NaCl，溶液定容至100ml，大量制備富集培養(yǎng)基均參照此比例。優(yōu)選地，所述初篩培養(yǎng)基包含8%苧麻汁、0. 03% K2HPO4、0. 05% NH4Cl和2%瓊月旨， 其余成分為水。初篩培養(yǎng)基的制備將8g生苧麻剪成Icm左右長(zhǎng)的小段，加水在電爐上加熱，待沸騰后，改用小火熬煮，當(dāng)杯內(nèi)苧麻變軟，溶液變成棕黃色后，把苧麻撈出，然后加入0. 03g K2HP04、0. 05gNH4Cl、2g瓊脂，溶液定容至100ml，大量制備初篩培養(yǎng)基均參照此比例。優(yōu)選地，所述復(fù)篩培養(yǎng)基包含IOg生苧麻、0. 03% K2HPO4和0. 05% NH4Cl,其余成分為水。復(fù)篩培養(yǎng)基的制備加入0. 03g K2HP04、0. 05gNH4Cl，溶液定容至100ml，然后加入
IOg生苧麻，大量制備復(fù)篩培養(yǎng)基均參照此比例。本發(fā)明所述篩選方法利用苧麻汁為篩選培養(yǎng)基的主要成分，苧麻汁是原麻在沸水中蒸煮時(shí)苧麻膠脫落到水溶液中而形成的，所以苧麻汁的主要成分是苧麻中的各類膠質(zhì)物質(zhì)，基本不含纖維素。因此，利用以苧麻汁為唯一有機(jī)物的培養(yǎng)基來(lái)篩選脫膠菌株，能克服現(xiàn)有篩選方法中所篩菌株損傷麻類纖維素和限制脫膠菌株篩選范圍的問(wèn)題，提高脫膠菌株篩選的效率。本發(fā)明所述篩選方法篩選出的脫膠菌株果膠水解實(shí)驗(yàn)呈陽(yáng)性，纖維素分解實(shí)驗(yàn)呈陰性，表明該菌株能夠分解果膠，但不會(huì)對(duì)纖維素造成損傷。同時(shí)，采用本發(fā)明所述篩選方法篩選出的菌株在接種到苧麻上后8-Mh，脫膠率就已達(dá)80%以上。由以上技術(shù)方案可知，本發(fā)明所述篩選方法以苧麻汁為唯一有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分進(jìn)行篩選，能快速獲得分解苧麻膠質(zhì)成分的菌株，不損傷苧麻纖維素成分，且篩選出的菌株脫膠率高，脫膠速度較快，具有工業(yè)應(yīng)用性。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明公開(kāi)了一種脫膠菌株的篩選方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明所述篩選方法已經(jīng)通過(guò)較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來(lái)實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。實(shí)施例1 利用本發(fā)明所述篩選方法篩選脫膠菌株(1)富集培養(yǎng)將Ig包含有果膠桿菌的樣品加入裝有20ml無(wú)菌水的200ml三角瓶中，加入無(wú)菌玻璃珠，在150rpm搖床中振蕩20min。吸取IOml振蕩后的溶液，加入IOOml富集培養(yǎng)基中， 置于35 °C、轉(zhuǎn)速170rpm的恒溫?fù)u床中培養(yǎng)4 。富集培養(yǎng)基5%苧麻、蛋白胨、0.3%牛肉膏、0. 5% NaCl，其余成分為水。富集培養(yǎng)基的制備將5g生苧麻剪成Icm左右長(zhǎng)的小段，加水在電爐上加熱，待沸騰后，改用小火熬煮，當(dāng)杯內(nèi)苧麻變軟，溶液變成棕黃色后，把苧麻撈出，然后加入0. 3g牛肉膏、Ig蛋白胨、0. 5g NaCl，溶液定容至100ml，大量制備富集培養(yǎng)基均參照此比例。(2)初篩將富集培養(yǎng)后的培養(yǎng)物稀釋，涂布在以苧麻汁為唯一有機(jī)物的初篩培養(yǎng)基平板上，在35°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，將在初篩培養(yǎng)基上產(chǎn)生水解圈的菌落作為初篩的結(jié)果。 初篩培養(yǎng)基苧麻8%、K2HPO4 0. 03%, NH4Cl 0. 05%、瓊脂2%，其余組分為水。初篩培養(yǎng)基的制備將8g生苧麻剪成Icm左右長(zhǎng)的小段，加水在電爐上加熱，待沸騰后，改用小火熬煮，當(dāng)杯內(nèi)苧麻變軟，溶液變成棕黃色后，把苧麻撈出，然后加入0. 03g K2HP04、0. 05gNH4Cl、2g瓊脂，溶液定容至100ml，大量制備初篩培養(yǎng)基均參照此比例。(3)純化將初篩出來(lái)的菌株，于肉湯培養(yǎng)基平板上劃線，置于35°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h， 重復(fù)劃線培養(yǎng)三次以上，如連續(xù)多次在顯微鏡下觀察到形態(tài)單一的菌體則認(rèn)為菌株已純化。(4)復(fù)篩將純化的菌株進(jìn)行苧麻脫膠，在滅菌后的復(fù)篩培養(yǎng)基中接種菌株，在35°C、轉(zhuǎn)速 ISOrpm恒溫?fù)u床中振蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)24h測(cè)定菌株的脫膠率，脫膠率大于80 %的菌株為篩選出的目的菌株，從脫膠率大于80%的菌株中挑取脫膠率最高的一株作為最優(yōu)的目的菌株。 復(fù)篩培養(yǎng)基生苧麻10g、K2HPO4O. 03%, NH4Cl 0. 05%，其余組分為水。復(fù)篩培養(yǎng)基的制備加入0. 03g K2HP04、0. 05gNH4Cl，溶液定容至100ml，然后加入IOg生苧麻，大量制備復(fù)篩培養(yǎng)基均參照此比例。將實(shí)施例1中篩選出的菌株送至上海生物工程有限公司測(cè)序，所用測(cè)序儀為 ABI-PRISM3730,測(cè)序試劑為 BigDyeterminator v3. 1，所得 16S rDNA 序列與 GenBank 數(shù)據(jù)庫(kù)中的所有序列進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果顯示與果膠桿菌的16SrDNA序列同源性大于99%，16S rDNA是目前細(xì)菌分類鑒定的“公認(rèn)尺子”，一般相似性高于98%以上可認(rèn)為是一個(gè)屬，故本實(shí)施例篩選出的脫膠菌株屬果膠桿菌屬。實(shí)施例2 利用本發(fā)明所述篩選方法篩選脫膠菌株(1)富集培養(yǎng)將Ig包含有產(chǎn)氣腸桿菌和成團(tuán)腸桿菌的樣品加入裝有20ml無(wú)菌水的200ml三角瓶中，加入無(wú)菌玻璃珠，在150rpm搖床中振蕩lOmin。吸取IOml振蕩后的溶液，加入IOOml 富集培養(yǎng)基中，置于35°C、轉(zhuǎn)速170rpm的恒溫?fù)u床中培養(yǎng)Mh。富集培養(yǎng)基3%苧麻、0. 5% 蛋白胨、0. 牛肉膏、0. 3% NaCl，其余成分為水。富集培養(yǎng)基的制備將3g生苧麻剪成Icm左右長(zhǎng)的小段，加水在電爐上加熱，待沸騰后，改用小火熬煮，當(dāng)杯內(nèi)苧麻變軟，溶液變成棕黃色后，把苧麻撈出，然后加入0. Ig牛肉膏、0. 5g蛋白胨、0. 3g NaCl，溶液定容至100ml，大量制備富集培養(yǎng)基均參照此比例。(2)初篩將富集培養(yǎng)后的培養(yǎng)物稀釋，涂布在以苧麻汁為唯一有機(jī)物的初篩培養(yǎng)基平板上，在35°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)Mh，將在初篩培養(yǎng)基上產(chǎn)生水解圈的菌落作為初篩的結(jié)果。 初篩培養(yǎng)基苧麻5%、K2HPO4 0.01%, NH4Cl 0. 03%、瓊脂1. 5%，其余組分為水。初篩培養(yǎng)基的制備將5g生苧麻剪成Icm左右長(zhǎng)的小段，加水在電爐上加熱，待沸騰后，改用小火熬煮，當(dāng)杯內(nèi)苧麻變軟，溶液變成棕黃色后，把苧麻撈出，然后加入0. Olg K2HP04、0. 03gNH4Cl、l. 5g瓊脂，溶液定容至100ml，大量制備初篩培養(yǎng)基均參照此比例。(3)純化將初篩出來(lái)的菌株，于肉湯培養(yǎng)基平板上劃線，置于35°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)Mh， 重復(fù)劃線培養(yǎng)三次以上，如連續(xù)多次在顯微鏡下觀察到形態(tài)單一的菌體則認(rèn)為菌株已純化。(4)復(fù)篩將純化的菌株進(jìn)行苧麻脫膠，在滅菌后的復(fù)篩培養(yǎng)基中接種菌株，在35°C、轉(zhuǎn)速 ISOrpm恒溫?fù)u床中振蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)24h測(cè)定菌株的脫膠率，脫膠率大于80%的菌株為篩選出的目的菌株，從脫膠率大于80%的菌株中挑取脫膠率最高的一株作為最優(yōu)的目的菌株。 復(fù)篩培養(yǎng)基生苧麻8g、K2HPO4 0.01%, NH4Cl 0. 03%，其余組分為水。復(fù)篩培養(yǎng)基的制備加入0. Olg K2HP04、0. 03gNH4Cl，溶液定容至100ml，然后加入 Sg生苧麻，大量制備復(fù)篩培養(yǎng)基均參照此比例。將實(shí)施例2中篩選出的菌株送至上海生物工程有限公司測(cè)序，所用測(cè)序儀為 ABI-PRISM3730，測(cè)序試劑為 BigDyeterminator v3. 1，所得 16S rDNA 序列與 GenBank 數(shù)據(jù)庫(kù)中的所有序列進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果顯示與腸桿菌的16S rDNA序列同源性大于99%，16S rDNA 是目前細(xì)菌分類鑒定的“公認(rèn)尺子”，一般相似性高于98%以上可認(rèn)為是一個(gè)屬，故本實(shí)施例篩選出的脫膠菌株屬腸桿菌屬。實(shí)施例3 利用本發(fā)明所述篩選方法篩選脫膠菌株
(1)富集培養(yǎng)將Ig包含有枯草芽孢桿菌、多粘芽孢桿菌以及地衣芽胞桿菌的樣品加入裝有 20ml無(wú)菌水的200ml三角瓶中，加入無(wú)菌玻璃珠，在150rpm搖床中振蕩15min。吸取IOml 振蕩后的溶液，加入IOOml富集培養(yǎng)基中，置于35°C、轉(zhuǎn)速170rpm的恒溫?fù)u床中培養(yǎng)36h。 富集培養(yǎng)基10%苧麻、1. 5%蛋白胨、0. 5%牛肉膏、1. 0% NaCl，其余成分為水。富集培養(yǎng)基的制備將IOg生苧麻剪成Icm左右長(zhǎng)的小段，加水在電爐上加熱，待沸騰后，改用小火熬煮，當(dāng)杯內(nèi)苧麻變軟，溶液變成棕黃色后，把苧麻撈出，然后加入0. 5g 牛肉膏、1.5g蛋白胨、l.Og NaCl，溶液定容至100ml，大量制備富集培養(yǎng)基均參照此比例。(2)初篩將富集培養(yǎng)后的培養(yǎng)物稀釋，涂布在以苧麻汁為唯一有機(jī)物的初篩培養(yǎng)基平板上，在35°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)36h，將在初篩培養(yǎng)基上產(chǎn)生水解圈的菌落作為初篩的結(jié)果。 初篩培養(yǎng)基苧麻10%、K2HPO4 0. 08%, NH4Cl 0. 1 %、瓊脂2. 5%，其余組分為水。初篩培養(yǎng)基的制備將IOg生苧麻剪成Icm左右長(zhǎng)的小段，加水在電爐上加熱，待沸騰后，改用小火熬煮，當(dāng)杯內(nèi)苧麻變軟，溶液變成棕黃色后，把苧麻撈出，然后加入0. 08g K2HP04、0. IgNH4Cl,2. 5g瓊脂，溶液定容至100ml，大量制備初篩培養(yǎng)基均參照此比例。(3)純化將初篩出來(lái)的菌株，于肉湯培養(yǎng)基平板上劃線，置于35°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)36h， 重復(fù)劃線培養(yǎng)三次以上，如連續(xù)多次在顯微鏡下觀察到形態(tài)單一的菌體則認(rèn)為菌株已純化。(4)復(fù)篩將純化的菌株進(jìn)行苧麻脫膠，在滅菌后的復(fù)篩培養(yǎng)基中接種菌株，在35°C、轉(zhuǎn)速 ISOrpm恒溫?fù)u床中振蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)24h測(cè)定菌株的脫膠率，脫膠率大于80 %的菌株為篩選出的目的菌株，從脫膠率大于80%的菌株中挑取脫膠率最高的一株作為最優(yōu)的目的菌株。 復(fù)篩培養(yǎng)基生苧麻15g、K2HPO4O. 08%, NH4Cl 0. 1%，其余組分為水。復(fù)篩培養(yǎng)基的制備加入0. 08g K2HP04、0. IgNH4Cl,溶液定容至100ml，然后加入 15g生苧麻，大量制備復(fù)篩培養(yǎng)基均參照此比例。將實(shí)施例3中篩選出的菌株送至上海生物工程有限公司測(cè)序，所用測(cè)序儀為 ABI-PRISM3730,測(cè)序試劑為 BigDyeterminator v3. 1，所得 16S rDNA 序列與 GenBank 數(shù)據(jù)庫(kù)中的所有序列進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果顯示與芽孢桿菌的16SrDNA序列同源性大于99%，16S rDNA是目前細(xì)菌分類鑒定的“公認(rèn)尺子”，一般相似性高于98%以上可認(rèn)為是一個(gè)屬，故本實(shí)施例篩選出的脫膠菌株屬芽孢桿菌屬。實(shí)施例4 本發(fā)明所述脫膠菌株的脫膠率及生理生化檢測(cè)在實(shí)驗(yàn)組中，將實(shí)施例1-3中篩選出的脫膠菌株接種到裝有60ml肉湯培養(yǎng)基三角瓶中，在35°C、轉(zhuǎn)速170rpm的恒溫?fù)u床中振蕩培養(yǎng)他，取15ml菌液接入裝有300ml自來(lái)水和30g生苧麻的三角瓶中，在35°C、轉(zhuǎn)速170rpm的恒溫?fù)u床中振蕩培養(yǎng)后(即脫膠)，檢測(cè)脫膠率。對(duì)照組為相同處理但不接種菌株。根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 5889-86中測(cè)含膠率的方法測(cè)定對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的含膠率，分別記為和G1，脫膠率為Gr，按公式Gr = I-G1ZG0計(jì)算得出脫膠率。同時(shí)，依照《常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》對(duì)實(shí)施例1-3中篩選出的脫膠菌株進(jìn)行果膠水解實(shí)驗(yàn)以及纖維素水解實(shí)驗(yàn)。具體結(jié)果見(jiàn)表1。表1本發(fā)明所述脫膠菌株脫膠率及生理生化檢測(cè)
權(quán)利要求
1.一種脫膠菌株的篩選方法，包括以下步驟步驟1、將包含有果膠桿菌、芽孢桿菌或腸桿菌的樣品接種到富集培養(yǎng)基中培養(yǎng)，所述富集培養(yǎng)基包含3-10%苧麻、0. 5-1. 5%蛋白胨、0. 1-0. 5%牛肉膏、0. 3-1.0% NaCl，其余成分為水；步驟2、將步驟1培養(yǎng)后的培養(yǎng)物涂布在初篩培養(yǎng)基上培養(yǎng)，將在初篩培養(yǎng)基上產(chǎn)生水解圈的菌落進(jìn)行純化，所述初篩培養(yǎng)基包含5-10%苧麻、0. 01-0. 08% Κ2ΗΡ04、0. 03-0. 1% NH4Cl和1. 5-2. 5%瓊脂，其余成分為水；步驟3、將步驟2純化后的菌株接種到復(fù)篩培養(yǎng)基培養(yǎng)15-24h測(cè)定菌株脫膠率，脫膠率大于80%的菌株為篩選出的目的菌株，所述復(fù)篩培養(yǎng)基包含8-15g生苧麻、0. 01-0. 08% K2HPO4 和 0. 03-0. 1% NH4Cl,其余成分為水。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述篩選方法，其特征在于，所述富集培養(yǎng)基包含5%苧麻、1 %蛋白胨、0. 3%牛肉膏、0. 5% NaCl，其余成分為水。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述篩選方法，其特征在于，所述初篩培養(yǎng)基包含8%苧麻、0.03% Κ2ΗΡ04、0. 05% NH4Cl和2%瓊脂，其余成分為水。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述篩選方法，其特征在于，所述復(fù)篩培養(yǎng)基包含IOg生苧麻、 0. 03% K2HPO4 和 0. 05% NH4Cl，其余成分為水。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述篩選方法，其特征在于，步驟1所述培養(yǎng)為在35°C、轉(zhuǎn)速170rpm 的恒溫?fù)u床中培養(yǎng)Μ-4 ι。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述篩選方法，其特征在于，步驟2所述培養(yǎng)為在35°C恒溫?fù)u床中培養(yǎng)Μ-4 ι。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述篩選方法，其特征在于，步驟3所述培養(yǎng)為在35°C、轉(zhuǎn)速ISOrpm 的恒溫?fù)u床中培養(yǎng)。
全文摘要
本發(fā)明涉及微生物領(lǐng)域，具體公開(kāi)了一種脫膠菌株的篩選方法。該篩選方法將包含有果膠桿菌、芽孢桿菌或腸桿菌的樣品接種到富集培養(yǎng)基中培養(yǎng)，將培養(yǎng)后的培養(yǎng)物涂布在初篩培養(yǎng)基上培養(yǎng)，將在初篩培養(yǎng)基上產(chǎn)生水解圈的菌落進(jìn)行純化，將純化后的菌株接種到復(fù)篩培養(yǎng)基培養(yǎng)15-24h測(cè)定菌株脫膠率，脫膠率大于80％的菌株為篩選出的目的菌株。本發(fā)明所述脫膠菌株的篩選方法以苧麻汁為唯一有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分進(jìn)行篩選，能快速、重復(fù)獲得分解苧麻膠質(zhì)成分的菌株，不損傷苧麻纖維素成分，且菌株的脫膠率高，脫膠速度快，具有工業(yè)應(yīng)用性。
文檔編號(hào)C12N1/20GK102250804SQ20111017977
公開(kāi)日2011年11月23日 申請(qǐng)日期2010年9月3日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月3日
發(fā)明者倉(cāng)道平, 曾曉希, 楊政 申請(qǐng)人:湖南潤(rùn)久科技有限公司