專利名稱：可抑制流感病毒血球凝集素的藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本案涉及一種可抑制流感病毒血球凝集素(Hemagglutinin)的藥物組合物及其制備方法，尤其涉及一種利用低溫崩解藍(lán)藻的制備方法，所獲得的提取物可有效抑制A型及/或B型流行性感冒病毒的血球凝集素與唾液酸(sialic acid)結(jié)合，進(jìn)而達(dá)到抑制流行性感冒病毒感染與復(fù)制的目的。對(duì)于具有神經(jīng)胺酶(Neuraminidase)抑制劑抗藥性的突變A型流行性感冒病毒，此藥物組合物也能抑制其感染能力。
背景技術(shù)：
藻類的種類繁多，植物學(xué)家根據(jù)其所含的色素種類、細(xì)胞核和細(xì)胞構(gòu)造的特征，把藻類分為九大門，其中海水中的藻類稱為海藻，海藻的植物體是多細(xì)胞體，其大小和形狀的變化很大，小者只有數(shù)毫厘，大者有如巨藻可達(dá)六十公尺長。因此，海藻由體型大小區(qū)分為微藻與巨藻兩大類型。而生長在溫帶地區(qū)的海藻，較多大型的，其海藻的植物相也較豐富； 相反的，在亞熱帶和熱帶地區(qū)的海藻都較小，其海藻的植物相也較貧乏。若依所產(chǎn)生的色素類別，海藻可有藍(lán)藻、綠藻、褐藻和紅藻四大群。這些海藻都生長在潮間和較淺的潮下帶的巖石或礁石上。以馬尾藻為例，分類上屬于褐藻，型態(tài)上屬于巨藻，臺(tái)灣有二十余種，為臺(tái)灣產(chǎn)海藻中，種類和產(chǎn)量最多也最大型的海藻，可長到二公尺多高。馬尾藻植物體的構(gòu)造也是藻類中最復(fù)雜的，有大型盤狀，或枝狀附著器外，有如高等植物的莖、枝和葉的部份，此外亦有氣泡和生殖托等器官。以藍(lán)藻為例，藍(lán)藻是屬于微藻，屬于原核生物，又叫藍(lán)綠藻或藍(lán)細(xì)菌，種類包括有藍(lán)球藻、顫藻、螺旋藻和念珠藻。在所有藻類生物中，藍(lán)藻是最簡單、最原始的一種。藍(lán)藻是單細(xì)胞生物，沒有細(xì)胞核，但細(xì)胞中央含有核物質(zhì)，通常呈顆粒狀或網(wǎng)狀，染色質(zhì)和色素均勻的分布在細(xì)胞質(zhì)中。該核物質(zhì)沒有核膜和核仁，但具有核的功能，故稱其為原核。由于藻類的型態(tài)、色素顏色與細(xì)胞構(gòu)造差異性大，因此在培養(yǎng)的環(huán)境、藻內(nèi)所含的生物活性物質(zhì)均不相同，相對(duì)于各種藻類有效生物活性物質(zhì)的提取方法也就有所不同，如巨藻在提取前因?yàn)槠潴w積龐大，故應(yīng)先進(jìn)行切碎的步驟，而微藻由于其體積微小，因此，不需經(jīng)過任何切碎的動(dòng)作，但提取的困難度在于打破細(xì)胞壁以及去除胞壁外面的膠質(zhì)衣，并且在提取步驟操作同時(shí)仍保有提取物中生物活性物質(zhì)的活性。微藻是存在于地球數(shù)十億年的光合生物，可利用二氧化碳作為其生物燃料，并由于富含與人類本身相當(dāng)相似的胺基酸、維生素、礦物質(zhì)、鈣、磷、鐵等礦物元素、-胡蘿卜素、 泛酸、葉酸、生物素以及含有藻膽素(是藻紅素、藻藍(lán)素和別藻藍(lán)素的總稱)等，可被制造成營養(yǎng)價(jià)值極高的膳食補(bǔ)充品、食品、飲料或動(dòng)物飼料的添加物。而藍(lán)藻屬于微藻中的一種，除了具有前述微藻所具備的物質(zhì)或元素，目前有研究成果指出藍(lán)藻提取液對(duì)微小病毒科(Picornaviridae)及副黏液病毒科 (Paramyxoviridae)的麻疹病毒、腮腺炎病毒、人類皰診病毒及HIV病毒具有抑制效果。 再者，螺旋藻又為藍(lán)藻中的一種藻類，亦富含蛋白質(zhì)(占干重60 70%)、維生素出12和β-胡蘿卜素含量高)、礦物質(zhì)、必需胺基酸和脂肪酸，特別是Y-次亞麻油酸(GLA)含量豐富。因此，螺旋藻將成為重要的營養(yǎng)來源以及抑制病毒復(fù)制的藥物組合物原料來源。流行性感冒為濾過性病毒所引起的病癥，分類上屬于正黏液病毒科 (Orthomyxoviridae)，依引起的血清免疫反應(yīng)區(qū)分為A型、B型及C型流感，其中A型流感再以病毒表面的血球凝集素(hemagglutinin，HA)及神經(jīng)胺酶(neuroaminidase，NA)分類， 常見會(huì)在人群中造成傳染流行的血清型為H1N1及H#2。入侵宿主細(xì)胞為病毒生活史開始的重要步驟，以流感病毒(influenza virus)為例，負(fù)責(zé)此步驟的蛋白質(zhì)即為血球凝集素(hemagglutinin)，當(dāng)血球凝集素辨識(shí)了呼吸道內(nèi)皮細(xì)胞表面的的唾液酸(sialic acid)，并且兩者結(jié)合后，就會(huì)引發(fā)胞飲作用將病毒吞噬進(jìn)去，之后病毒外鞘被酵素作用破裂，釋放出RNA組成的病毒基因物質(zhì)及蛋白質(zhì)，最后這些物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，開始病毒的復(fù)制過程。由此可見，血球凝集素應(yīng)是抗流感病毒藥物開發(fā)上很重要的一個(gè)標(biāo)的物，然而目前尚無抑制血球凝集素相關(guān)之藥物。近年來引起恐慌的H1N1新型流感即是屬于會(huì)造成大流行及嚴(yán)重并發(fā)癥的A型流感，雖然可以克流感或樂瑞沙等藥物治療或施打疫苗預(yù)防，但現(xiàn)有藥物屬于神經(jīng)胺酶抑制齊U，目前臨床上已出現(xiàn)具克流感抗藥性的突變A型流行性感冒病毒株，研究報(bào)告指出其中該突變的A型流行性感冒病毒是神經(jīng)胺酶蛋白質(zhì)序列第274位置的組胺酸(HiStidine，H) 產(chǎn)生變異。此外，B型流感病毒所引起的癥狀包括全身酸痛、發(fā)燒、喉嚨痛、咳嗽、全身無力和倦怠感等，甚至?xí)鹬夤苎?、肺炎及腦炎等并發(fā)癥。B型流感雖會(huì)引起地區(qū)性流行，但癥狀通常較A型病毒溫和，但仍不可不慎。雖然臨床上多以治療A型流感的藥物治療B型流感，但研發(fā)對(duì)B型流感病毒專一的藥物將有助于抑制B型流感爆發(fā)。美國專利公告號(hào)US7220417揭露一種褐指藻，其褐指藻屬于巨藻，提取方法為在室溫加溶劑浸軟藻類，再于-20°C -40°C冷凍1 7天，最后再加入溶劑并加熱，此篇專利主要應(yīng)用于巨藻的提取方法，雖然有使用冷凍技術(shù)，但仍無法有效提取出有效打破細(xì)胞璧， 提取出活性成分，因此再加入有機(jī)溶劑且加熱，此與本發(fā)明的低溫崩解技術(shù)并不相同。美國專利公告號(hào)US200900^801揭露一種含C-藻藍(lán)蛋白、異藻藍(lán)蛋白、藍(lán)藻精及其混合物所制成的藥物組合物，此專利為發(fā)明人先前技術(shù)，該藍(lán)藻提取物所制造的藥物組合物是透過下列制備方法所取得(a)混合有機(jī)藍(lán)藻粉及低張緩沖液；(b)于室溫以下溫度靜置過夜；(c)以分離機(jī)分離純化；(d)測定上層液的光譜及成分含量；以及(e)噴霧干燥。 其特征在于使用0°C至18°C的低溫制備法。此為發(fā)明人透過較繁復(fù)的藍(lán)藻制備步驟，需長時(shí)間進(jìn)行才能提取得到少量的有效活性物質(zhì)，由于操作系統(tǒng)繁復(fù)耗時(shí)費(fèi)力，所取得的有效活性物質(zhì)產(chǎn)量不大，因此發(fā)明人再次針對(duì)制備步驟進(jìn)行改良，針對(duì)制備步驟的低溫崩解技術(shù)進(jìn)行開發(fā)，不但簡化過去繁復(fù)的制備過程，且大大提高所提取的活性物質(zhì)活性、濃度也較以往要高。因此，藍(lán)藻中具有許多可以抑制病毒的活性物質(zhì)，目前，雖然已有許多藻類的提取技術(shù)提出，但是受限于藍(lán)藻的生物特性，由于其細(xì)胞壁的構(gòu)造，故若要取得細(xì)胞內(nèi)部的有效活性物質(zhì)必須要破壞細(xì)胞壁，傳統(tǒng)的破壞細(xì)胞壁方法包括煮沸、珠磨、超音波震蕩等，然而這些方法都會(huì)產(chǎn)熱，相對(duì)的會(huì)使高活性物質(zhì)失去活性，此外，亦有其它發(fā)明人選擇使用有機(jī)溶劑將細(xì)胞壁去除，但所取得的提取物質(zhì)與本發(fā)明所提取的物質(zhì)活性特性完全不同，生物活性及功效亦不相同。因此，要能有效打破細(xì)胞壁并提取藍(lán)藻內(nèi)物質(zhì)的活性一直是該領(lǐng)域極欲克服的難題，因此在極為具有挑戰(zhàn)性的技術(shù)瓶頸中，本發(fā)明研發(fā)具有能提取出更多樣性、更完整高生物活性物質(zhì)的藍(lán)藻提取物，并且該藍(lán)藻提取物具有抑制突變的A型流行性感冒病毒與B型流感病毒感染與復(fù)制的藥物，對(duì)于現(xiàn)在大環(huán)境具有非常急迫的需求，因?yàn)榇税l(fā)明的藍(lán)藻提取物可制造成有效藥物，將有助于全球治療與預(yù)防流行性感冒病毒擴(kuò)散與傳染。本案申請(qǐng)人鑒于已知技術(shù)中的不足，經(jīng)過悉心試驗(yàn)與研究，并一本鍥而不舍的精神，終構(gòu)思出本案“可抑制流感病毒血球凝集素(Hemagglutinin)的藥物組合物及其制備方法”，能有效，且能夠克服先前技術(shù)的不足，以下為本案的簡要說明。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服先前技術(shù)中提取具有高活性物質(zhì)的藍(lán)藻提取液的困難，尤其要避免高溫的加熱使得提取液中的高活性物質(zhì)尚失功能，并且全程不使用有機(jī)溶劑以避免毒性溶劑的殘留，確保提取物質(zhì)具有高度食用安全性；因此，本發(fā)明以新穎的低溫崩解提取方法制備出藍(lán)藻(或螺旋藻)提取物，可有效抑制A型流行性感冒病毒、A型流行性感冒病毒抗藥性突變種、及B型流感病毒的感染與復(fù)制。本發(fā)明提出一種低溫崩解藍(lán)藻的制備方法，包括下列步驟(a)將藍(lán)藻與非有機(jī)溶液混合形成含藍(lán)藻的懸浮溶液；(b)將含藍(lán)藻的懸浮溶液以低于0°C以下的溫度冷凍，形成冷凍塊，再于低溫中融解冷凍塊，重復(fù)此步驟兩次以上；(c)分離冷凍塊融解后的藍(lán)藻渣和藍(lán)藻提取液；以及(d)收集分離后的提取液，其中，所收集的提取液為包含生物活性物質(zhì)的藍(lán)藻提取液。優(yōu)選地，藍(lán)藻可為螺旋藻。優(yōu)選地，所述非有機(jī)溶液的重量與所述藍(lán)藻的重量之比> 2 1，優(yōu)選為2 1 10 1。優(yōu)選地，所述非有機(jī)溶液為水、低張溶液、緩沖液或生理食鹽水。優(yōu)選地，步驟(b)中所述冷凍溫度低于-10°C，進(jìn)一步優(yōu)選為-10°C _30°C ；步驟 (b)中所述的融解溫度介于0°C 4°C。優(yōu)選地，所述的生物活性物質(zhì)選自異藻藍(lán)蛋白、含硫多糖體、C-藻藍(lán)蛋白中的一種或多種。優(yōu)選地，上述方法還包括濃縮步驟，將藍(lán)藻提取液進(jìn)行濃縮，獲得濃縮藍(lán)藻提取液。優(yōu)選地，上述方法還包括干燥步驟，將藍(lán)藻提取液形成粉末狀。本發(fā)明另一方面提出一種抑制A型和B型流行性感冒病毒感染與復(fù)制的藥物組合物，該藥物組合物由上述低溫崩解的制備方法所得到的藍(lán)藻提取液。優(yōu)選地，所述有效量的藥物組合物選自異藻藍(lán)蛋白、含硫多糖體、C-藻藍(lán)蛋白中的一種或多種。優(yōu)選地，所述A型流行性感冒病毒進(jìn)一步包含突變的A型流行性感冒病毒，所述突變的A型流行性感冒病毒是指對(duì)克流感產(chǎn)生抗藥性的病毒。優(yōu)選地，該藥物組合物適用于預(yù)防或治療流行性感冒。
優(yōu)選地，上述藥物組合物還包含一種醫(yī)藥可接受載體。優(yōu)選地，該載體為賦形劑、稀釋劑、增稠劑、填充劑、結(jié)合劑、崩解劑、潤滑劑、油脂或非油脂的基劑、界面活性劑、懸浮劑、膠凝劑、輔助劑、防腐劑、抗氧化劑、穩(wěn)定劑、著色劑或香料。優(yōu)選地，所述藥物組合物為粉末、顆粒、液體、膠體或膏體。優(yōu)選地，所述藥物組合物被制造為藥品、食品、飲料、膳食補(bǔ)充品或動(dòng)物飼料的添加物。優(yōu)選地，所述藥物組合物是通過口服、經(jīng)皮吸收、注射或吸入的方式進(jìn)行傳輸。優(yōu)選地，所述藥物組合物是傳輸至哺乳動(dòng)物。優(yōu)選地，該哺乳動(dòng)物為人類。本發(fā)明又一方面提出一種抑制A型和B型流行性感冒病毒感染與復(fù)制的方法，包括下列步驟提供藍(lán)藻提取液；及將藍(lán)藻萃取液與所述A型和B型流行性感冒病毒接觸；其中，所述藍(lán)藻提取液是按照如權(quán)利要求1所述制備方法所得到的藍(lán)藻提取液。優(yōu)選地，其中所述藍(lán)藻提取液選自異藻藍(lán)蛋白、含硫多糖體、C-藻藍(lán)蛋白中的一種或多種。


圖1為以本發(fā)明螺旋藻提取物治療受A型流感病毒感染BALB/c小鼠后的小鼠體重變化示意圖。圖2為以本發(fā)明螺旋藻提取物治療受B型流感病毒感染BALB/c小鼠后的小鼠體重變化示意圖。圖3為以本發(fā)明螺旋藻提取物進(jìn)行血球凝集抑制試驗(yàn)HAI的示意圖。圖如為預(yù)先口服lOOmg/kg/day螺旋藻提取物的BALB/c小鼠受A型流感病毒感染后的小鼠體重變化示意圖。圖4b為預(yù)先口服lOOmg/kg/day螺旋藻提取物的BALB/c小鼠受A型流感病毒感染后的臨床癥狀示意圖。圖5為本發(fā)明的螺旋藻提取物對(duì)克流感抗藥性的A型流感病毒株的抑制示意圖。圖6為不同濃度的螺旋藻提取物抑制不同種流感病毒的病毒斑形成量示意圖。圖7為螺旋藻提取物及其不同成分抑制不同流感病毒株的示意圖。圖8為低溫崩解藍(lán)藻的制備方法流程圖。圖9a為低溫崩解法制備的螺旋藻提取物有效成分HPLC分析圖。圖9b為低溫超音波震蕩法制備的螺旋藻提取物有效成分HPLC分析圖。圖9c為熱水煮沸法制備螺旋藻提取物有效成分HPLC分析圖。圖IOa為它牌螺旋藻粉-1的螺旋藻提取物有效成分HPLC分析。圖IOb為它牌螺旋藻粉-2的螺旋藻提取物有效成分HPLC分析及抑制病毒能力的相關(guān)性。
具體實(shí)施例方式本案所提出之“可抑制流感病毒血球凝集素(Hemagglutinin)的藥物組合物及其制備方法”將可由以下的實(shí)施例說明而得到充分了解，使得熟習(xí)本技藝的人士可以據(jù)以完成，然而本案的實(shí)施并非可由下列實(shí)施例而被限制其實(shí)施型態(tài)，熟習(xí)本技藝之人士仍可依據(jù)除既揭露的實(shí)施例的精神推演出其它實(shí)施例，該等實(shí)施例皆當(dāng)屬于本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1 低溫崩解藍(lán)藻的制備方法實(shí)施例1以藍(lán)藻中的螺旋藻粉作為實(shí)驗(yàn)材料。參閱圖8的步驟流程，步驟101 在改良式的藻類制備方法中，首先將螺旋藻粉加入非有機(jī)溶液中如純水、低張溶液、緩沖液或生理食鹽水至螺旋藻粉與純水重量比為1 2 1 10，充分?jǐn)嚢杈鶆颉２襟E102:接著， 將此螺旋藻懸浮溶液分裝置適當(dāng)容積的離心瓶中，并將螺旋藻懸浮溶液置于0°C以下的冷凍庫或是利用干冰使其螺旋藻懸浮液快速結(jié)成凍塊狀，其中最好的溫度為-10°C -30°C， 在冷凍8 M小時(shí)之后，在低溫下緩緩解凍該冷凍塊，回融的溫度可控制在0°C 4°C緩慢回溫，進(jìn)一步可利用振動(dòng)、攪拌…等方式協(xié)助凍塊回融。依序重復(fù)前述的冷凍崩解步驟，將螺旋藻懸浮溶液冷凍及低溫解凍步驟重復(fù)2次或2次以上，步驟103 將回融后的懸浮液置于離心瓶中高速離心1小時(shí)；分離藻渣及螺旋藻提取液。步驟104 收集分離后的提取液， 其中，所收集的提取液為包含生物活性物質(zhì)的螺旋藻提取液。依據(jù)提取液未來產(chǎn)品使用的需求，如欲制高濃度的濃縮液，可使用多種濃縮方式進(jìn)行濃縮，如旋轉(zhuǎn)濃縮儀或使用減壓濃縮法，以低溫低壓方式進(jìn)行。將溫度范圍設(shè)定在 20 40°C，壓力范圍設(shè)定為15000 50000毫米汞柱，當(dāng)持續(xù)至少8小時(shí)，可得到濃縮液。 如產(chǎn)品型態(tài)為錠劑、粉狀，可再進(jìn)一步進(jìn)行將所獲得的濃縮液再進(jìn)行冷凍干燥，最后會(huì)形成粉末狀產(chǎn)物，任何型態(tài)的產(chǎn)物中均含有高濃度、高活性的C-藻藍(lán)蛋白、異藻藍(lán)蛋白及含硫多糖體等成分。將所收集的提取物進(jìn)行(1)成分純度的測定、(2)活菌數(shù)及( 含水量的測定，以作為產(chǎn)品質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格。所獲得的提取物質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格為(1)成分純度A620/ A280>0. 6、A651/A620 = 0. 3 0. 5及A670/A620<0. 12 (以紫外光-可見光分光光譜儀偵測吸光光譜200 700nm)，(2)活菌數(shù)為<lX105cfu/g, (3)含水量<7%0所屬技術(shù)領(lǐng)域中具有通常知識(shí)者亦可使用微藻或藍(lán)藻，并應(yīng)用前述的低溫低壓方法制備出提取物。實(shí)施例2 不同制備方法的藍(lán)藻提取物及不同來源的藍(lán)藻提取物其有效成分抑制流感病毒能力的比較實(shí)施例2以藍(lán)藻中的螺旋藻作為實(shí)驗(yàn)材料。由于欲了解不同制備方法產(chǎn)出的螺旋藻提取物及不同來源的螺旋藻提取物，其中成份組成與抑制流感病毒能力的相關(guān)性將以高效液相層析儀(HPLC)分析及病毒中和試驗(yàn)來進(jìn)行。高效液相層析儀(HPLC)分析，以分析管柱選用Gel filtration(ShodexKff-803)， 以 IXPBS buffer 為流動(dòng)相，流速為 lml/min。HPLC 儀器規(guī)格為 Detector :EC0MLCD2083 ； Pump :EC0MLCP4100 ；Fixed Syringe :SLC-1F_25。將螺旋藻提取物以 1 XPBS buffer 回溶成濃度50mg/ml，取200 μ 1進(jìn)行HPLC分析，觀測波長為220nm。另外利用病毒中和試驗(yàn)分析抑制病毒能力。在96孔盤的每個(gè)孔(well)中加入 130 μ 1的PBS。在第一排的上四孔(Al Dl)中加入130 μ 1的螺旋藻提取物，接著取130 μ 1 往右依序做2倍的序列稀釋至第10排(Α10 D10)，再由第一排的下四排(Ε13 Η13)接著做序列稀釋至Ε22 Η22。取150μ 1的稀釋病毒液至MDCKcell的96孔盤；而All Hll 為細(xì)胞控制(cell control)的位置，則加入150 μ 1不含F(xiàn)BS的DMEM ；Al AlO及Η13 H22為藥物控制(drug control)的位置，亦加入150 μ 1不含F(xiàn)BS的DMEM。置于5% CO2的 35°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1小時(shí)。由藥物稀釋平板(drug dilution plate)中取50 μ 1混合液至相對(duì)應(yīng)的well中，再置回培養(yǎng)箱培養(yǎng)64小時(shí)。最后用100 μ 1的10%福爾馬林固定細(xì)胞1 小時(shí)，再以0. 結(jié)晶紫染色15分鐘。以酵素免疫微盤分析儀(ELISA Reader)在570nm讀取吸光值。再利用公式求IC5Q。利用低溫崩解法(圖9a)和一般藻類提取較常使用的方法比較，如低溫超聲波震蕩法(圖9b)和熱水煮沸法(圖9c)制備的螺旋藻提取物以HPLC分析后，可以看出本發(fā)明制程(低溫崩解)所產(chǎn)出的螺旋藻提取物大致分為3個(gè)主要波峰，而其它兩種制備方法產(chǎn)出的螺旋藻提取物則成份復(fù)雜，因此由HPLC分析的結(jié)果明顯可以看到所萃取出來的藍(lán)藻提取液成份明顯不同。進(jìn)一步將這些混合物進(jìn)行病毒中和試驗(yàn)測定，由IC5tl的數(shù)據(jù)顯示，本發(fā)明低溫崩解制程所制造產(chǎn)出的螺旋藻提取液具有最好的抑制流感病毒的效果(如表1)。表1不同提取方法制備的螺旋藻提取液抑制流感病毒試驗(yàn)
權(quán)利要求
1.一種低溫崩解藍(lán)藻的制備方法，包括下列步驟(a)將藍(lán)藻與非有機(jī)溶液混合形成含藍(lán)藻的懸浮溶液；(b)將該含藍(lán)藻的懸浮溶液以低于0°C以下的溫度冷凍，形成冷凍塊，再于低溫中融解該冷凍塊，重復(fù)此步驟兩次以上；(c)分離該冷凍塊融解后的藍(lán)藻渣和藍(lán)藻提取液；以及(d)收集分離后的提取液其中，所收集的提取液為包含生物活性物質(zhì)的藍(lán)藻提取液。
2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是步驟(a)中所述的非有機(jī)溶液的重量與所述藍(lán)藻的重量之比彡2。
3.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是步驟(a)中所述的非有機(jī)溶液為水、低張溶液、緩沖液或生理食鹽水。
4.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是步驟(b)中所述冷凍溫度低于-10°C。
5.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是步驟(b)中所述冷凍溫度為-10°c -30°c。
6.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是步驟(b)中所述融解溫度為0°C 4°C。
7.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是所述生物活性物質(zhì)選自由異藻藍(lán)蛋白、含硫多糖體、C-藻藍(lán)蛋白中的一種或多種。
8.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是還包括濃縮步驟，將所述藍(lán)藻提取液進(jìn)行濃縮，獲得濃縮藍(lán)藻提取液。
9.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是還包括干燥步驟，將所述藍(lán)藻提取液形成粉末狀。
10.一種抑制A型和B型流行性感冒病毒感染與復(fù)制的藥物組合物，該藥物組合物是選自如權(quán)利要求1所述制備方法所得到的藍(lán)藻提取液。
11.如權(quán)利要求10所述的藥物組合物，其特征是所述抑制A型和B型流行性感冒病毒感染與復(fù)制的藥物組合物，是通過抑制病毒的血球凝集素與唾液酸結(jié)合的機(jī)制達(dá)成。
12.如權(quán)利要求10所述的藥物組合物，其特征是所述藍(lán)藻提取液選自異藻藍(lán)蛋白、含硫多糖體、C-藻藍(lán)蛋白中的一種或多種。
13.如權(quán)利要求10所述的藥物組合物，其特征是所述A型流行性感冒病毒包含對(duì)克流感神經(jīng)胺酶抑制劑產(chǎn)生抗藥性的突變的A型流行性感冒病毒。
14.如權(quán)利要求10所述的藥物組合物，其特征是所述A型流行性感冒病毒包含2009年 A型Hmi新型流行性感冒病毒。
15.如權(quán)利要求10所述的藥物組合物，其特征是還包含一種醫(yī)藥可接受載體。
16.如權(quán)利要求15所述的藥物組合物，其特征是所述載體為賦形劑、稀釋劑、增稠劑、 填充劑、結(jié)合劑、崩解劑、潤滑劑、油脂或非油脂的基劑、界面活性劑、懸浮劑、膠凝劑、輔助齊 、防腐劑、抗氧化劑、穩(wěn)定劑、著色劑或香料。
17.如權(quán)利要求10所述的藥物組合物，其特征是所述藥物組合物為粉末、顆粒、液體、 膠體或膏體。
18.如權(quán)利要求10所述的藥物組合物，其特征是所述藥物組合物被制造為藥品、食品、 飲料、膳食補(bǔ)充品或動(dòng)物飼料的添加物。
19.如權(quán)利要求10所述的藥物組合物，其特征是所述藥物組合物是通過口服、經(jīng)皮吸收、注射或吸入的方式進(jìn)行傳輸。
20.一種抑制A型和B型流行性感冒病毒感染與復(fù)制的方法，包括下列步驟 提供藍(lán)藻提取液；及將藍(lán)藻萃取液與A型和B型流行性感冒病毒接觸；其中，所述的藍(lán)藻提取液是按照如權(quán)利要求1所述制備方法所得到的藍(lán)藻提取液。
21.如權(quán)利要求20所述的方法，其特征是所述藍(lán)藻提取液選自異藻藍(lán)蛋白、含硫多糖體、C-藻藍(lán)蛋白中的一種或多種。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種可抑制流行性感冒病毒表面抗原蛋白質(zhì)血球凝集素(Hemagglutinin，HA)活性的藥物組合物及其制備方法，該藥物組合物利用低溫崩解藍(lán)藻的制備方法包括下列步驟(a)將藍(lán)藻與非有機(jī)溶液混合形成含藍(lán)藻的懸浮溶液；(b)將該含藍(lán)藻的懸浮溶液以低于0℃以下的溫度冷凍，形成冷凍塊，再于低溫中融解該冷凍塊，重復(fù)此步驟兩次以上；(c)分離該冷凍塊融解后的藍(lán)藻渣和藍(lán)藻提取液；以及(d)收集分離后的提取液，其中，所收集的提取液為包含生物活性物質(zhì)的藥物組合物。此藥物組合物可有效抑制A型及/或B型流行性感冒病毒的血球凝集素與唾液酸(sialic acid)結(jié)合，進(jìn)而達(dá)到抑制流行性感冒病毒感染與復(fù)制的目的。對(duì)于具有神經(jīng)胺酶(Neuraminidase)抑制劑抗藥性的突變A型流行性感冒病毒，此藥物組合物也能抑制其感染能力。
文檔編號(hào)A23L2/38GK102462702SQ201010548488
公開日2012年5月23日 申請(qǐng)日期2010年11月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月17日
發(fā)明者張秀鳳, 施信如, 胡宜忱, 闕壯群, 陳亦翔 申請(qǐng)人:遠(yuǎn)東生物科技股份有限公司