專利名稱：免疫調(diào)節(jié)及對涉及血清素家族受體及血腦屏障的細(xì)胞過程的作用的制作方法
免疫調(diào)節(jié)及對涉及血清素家族受體及血腦屏障的細(xì)胞過程的作用
本申請是申請日為2003年6月17日、發(fā)明名稱為“免疫調(diào)節(jié)及對涉及血清素家 族受體及血腦屏障的細(xì)胞過程的作用”以及申請?zhí)枮?38195291的分案申請。
與相關(guān)申請的交叉引用
本申請根據(jù)35U.S.C.§ 119(e)要求以下優(yōu)先權(quán)2002年6月17日提交的美國臨 時(shí)申請60/389,577和2002年9月27日美國臨時(shí)申請60/414,831，其在此均全文引用。
發(fā)明背景
血清素(又名5-羥色胺或5-HT)是一種神經(jīng)遞質(zhì)，在病理生理學(xué)上應(yīng)用廣泛， 常用于治療多種神經(jīng)精神性障礙。血清素通過多種血清素家族受體分子(此處引用為“5-HT受體” or “5-HTR”)發(fā)揮功效。傳統(tǒng)概念中，血清素受體家族成員根據(jù)對不 同血清素拮抗劑的特異性等藥理學(xué)特征分為7種亞型。因此，盡管所有這些5-HT受體 都特異性地與血清素結(jié)合，它們卻由不同的基因編碼，并在藥理學(xué)上有顯著的不同。迄 今為止，已經(jīng)鑒定出14種哺乳動(dòng)物的血清素受體并對其進(jìn)行了序列分析。具體來說， 已將這14種不同的5-HT受體劃分到7種藥理學(xué)亞型，分別表示為5-HT1、5-HT2、 5-HT3、5-HT4、5-HT5、5-HT6和5-HT7.根據(jù)藥理學(xué)特征這7種亞型又被進(jìn)一步細(xì)分為 如下幾種類型5-HT1A、5-HT1B、5-HT1D、5-HT1E、5-HT1F、5-HT2A、5-HT2B、 5-HT2C、5-HT3A、5-HT3B、5-HT4、5-HT5A、5-HT6 及 5-HT7。然而，當(dāng)比較這些 受體的核酸和氨基酸序列時(shí)，這些亞型的相同序列百分比卻與其藥理學(xué)分型不相關(guān)。
在已被克隆的14種不同哺乳動(dòng)物血清素受體中，除一個(gè)以外其余全部是G-蛋白 偶聯(lián)受體超家族的成員；也即，它們通常偶聯(lián)不同的第二信使通路而連接到鳥嘌呤核苷 酸調(diào)節(jié)蛋白(G-蛋白)。例如，血清素受體5-HT1A、5-HT1B、和5-HT1D抑制腺苷酸 環(huán)化酶；而5-HT2受體能激活磷脂酶C通路，引起多磷酸肌醇的降解。5-HT2受體屬 于視紫質(zhì)樣信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白家族，其顯著特征為7個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)及其與G-蛋白偶聯(lián)的功能。
—直以來血清素受體亞型的區(qū)分建立于其藥理學(xué)結(jié)合特點(diǎn)、第二信使偶聯(lián)、且 對于更好表征的血清素受體而言基于其生理學(xué)功效。該領(lǐng)域大多數(shù)用于表征5-HT受體 的數(shù)據(jù)是建立在對組織模型的實(shí)驗(yàn)觀察上，而不是建立在某一純化的受體蛋白或基因的 性質(zhì)上。
如前所述，14種血清素受體依據(jù)結(jié)構(gòu)同源性、第二信使系統(tǒng)活化、和對特定 配基的藥物親和性及其他特征被歸類為7種亞型。分子克隆的方法證明5-HT受體至 少屬于2個(gè)蛋白超家族一個(gè)是有7個(gè)推定的跨膜結(jié)構(gòu)域(TMD)的G-蛋白結(jié)合受 體(5-HT1A、IB、ID、IE、5-HT2)；另一個(gè)是有4個(gè)推定的TMD的配基門控離子通 道受體(5-HT3)。其中5-HT2亞類又被進(jìn)一步劃分為3個(gè)類別5-HT2A、5-HT2B及 5-HT2C。據(jù)信5-HT2A和5-HT2C受體拮抗劑有助于治療抑郁、焦慮、精神病及飲食障 礙。5-HT2A同5-HT2C受體整體上有約51%的氨基酸同源性，而在跨膜區(qū)同源性約有 80%。在重組哺乳動(dòng)物細(xì)胞系中對5-HT2A受體的研究表明該受體有一高一低兩個(gè)親和 區(qū)。
5-HT2A和5-HT2C受體都與磷脂酶C偶聯(lián)并通過磷脂酰肌醇介導(dǎo)應(yīng)答。以激 動(dòng)劑及拮抗劑研究顯示出廣泛的受體應(yīng)答，這表明有多種調(diào)節(jié)機(jī)制操縱受體活性。同時(shí) 5-HT2A和5-HT2C受體也是致幻藥的作用位點(diǎn)。
在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中，認(rèn)為血清素與學(xué)習(xí)、記憶、睡眠、溫度調(diào)節(jié)、運(yùn) 動(dòng)、疼痛、性欲和攻擊行為、食欲、神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)及生物節(jié)律有關(guān)。此外血清素還與 一些病理生理狀況相關(guān)，例如焦慮、抑郁、強(qiáng)迫癥、精神分裂癥、自殺、自閉、偏頭 痛、嘔吐、酒精中毒及神經(jīng)退化性障礙。
在哺乳動(dòng)物CNS中血清素調(diào)節(jié)多種感覺、運(yùn)動(dòng)及行為功能。此生物胺神經(jīng) 遞質(zhì)是由投射于CNS的腦干神經(jīng)元合成，在基底核和邊緣結(jié)構(gòu)密度最高M(jìn)teinbusch， 1984, In: Handbook of Chemical Neuroanatomy 3 68-125, Bjorklund 等，Eds.，Elsevier SciencePublishers, B.V.)。認(rèn)為5-羥色胺能的傳遞與多種行為及精神病癥相關(guān)，如焦 慮、睡眠調(diào)節(jié)、攻擊性、喂食及抑郁(Cowen，1991，British J.Psych., 159 7-14 ；和 Lucki, 1992，Neurosci.&Biobehav.Rev.，16:83-93)。要理解 5-HT 如何介導(dǎo)多種生理 活性需鑒定及分離相應(yīng)的5-HT受體。
最近，研究表明血清素可能在免疫系統(tǒng)中起到一定作用，因?yàn)橛袛?shù)據(jù)表明血清 素受體出現(xiàn)在免疫系統(tǒng)的多種細(xì)胞中?！熬?實(shí)體”問題已經(jīng)困擾不同學(xué)科的研究者 幾個(gè)世紀(jì)了。一直以來都認(rèn)為劇烈的情感或壓力與免疫系統(tǒng)間有某種聯(lián)系。血清素是種 廣泛分布的神經(jīng)遞質(zhì)，并在情緒障礙及抑郁癥中起主要作用。然而其在調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答上 的功用從未受到重視，其原理更不清楚。
胎兒在子宮中的存活一直以來都是免疫學(xué)上的矛盾現(xiàn)象。理論上胎兒應(yīng)該患有 母體的異源排斥反應(yīng)。然而大多數(shù)情況下胎兒并不被排斥，這是與免疫學(xué)相矛盾的。解 釋為何母體免疫系統(tǒng)選擇性的抑制對胎兒的異源排斥而保留其他所有免疫應(yīng)答完好無損 已經(jīng)是免疫學(xué)的“圣杯”。如果人們能明白這個(gè)過程并將其運(yùn)用于治療中，將會(huì)為自身 免疫疾病的潛在療法打開一扇基礎(chǔ)性的新大門，并將為治療移植術(shù)的排斥癥狀開創(chuàng)一個(gè) 非凡的新方法。然而直到本發(fā)明為止，一直未能達(dá)到改性自身免疫疾病及異源排斥反應(yīng) 療法所需的要求。本發(fā)明達(dá)到了這些要求。
1998年Munn等(1998，Science 281 1191-1193)解決了這個(gè)難題的主要部分。 這一研究小組證明“當(dāng)用吲哚胺2，3—雙加氧酶(IDO，一種由滋養(yǎng)母細(xì)胞和巨噬細(xì)胞表 達(dá)的色氨酸分解代謝酶)的藥理抑制劑處理懷孕小鼠時(shí)，發(fā)生了所有異源妊娠的急劇的T 細(xì)胞誘導(dǎo)的排斥反應(yīng)。因此，通過色氨酸分解代謝哺乳動(dòng)物孕體抑制T細(xì)胞活性并保護(hù) 自身抵制排斥反應(yīng)。，，換而言之，雌性懷孕不久就產(chǎn)生一種酶(IDO)，此酶能在代謝反 應(yīng)的第一步就將色氨酸轉(zhuǎn)向煙酸生成。這明顯意味著色氨酸必定在啟動(dòng)和維持免疫應(yīng)答 中起著重要的作用，并且/或者犬尿素生成(煙酸通路的第一步)有抑制效應(yīng)。盡管已 經(jīng)明白IDO的攝入會(huì)抑制T細(xì)胞增殖并可能在異源接受現(xiàn)象中起作用(Alberati-Giani等， 1998，AminoAcids 14 251-255; Munn 等，1999，J.Exp.Med.189 1362-1373; Widner 等，2000，Immunol.Today20 469-473 ； Pan 等，2000，Transpl.Immunol.8 189-194 ； Mellor等，2001，Nature Immunol.2 64-68)，但仍不清楚為什么色氨酸代謝會(huì)抑制免疫 應(yīng)答。
色氨酸是細(xì)胞合成新蛋白所需的10種必須氨基酸之一。盡管不很確定，但色氨酸分解代謝可能導(dǎo)致饑餓，且因此解釋了T細(xì)胞抑制現(xiàn)象。不過其他9個(gè)必須氨基酸并 不參與控制T細(xì)胞應(yīng)答。但在色氨酸水平的局部耗盡及T細(xì)胞功能抑制間卻有明顯的相 關(guān)性(Munn 等，1999，J.Exp.Med.189 1362-1373 ； Widner 等，2000，ImmunoLToday 20: 469-473 ； Frumento 等，2001，Transplant.Proc.33 428-430)。
色氨酸是目前所知生成5-羥色胺(又名血清素)的唯一來源。如果局部色氨酸 水平的調(diào)節(jié)與在T細(xì)胞反應(yīng)中觀測到的調(diào)節(jié)經(jīng)由5-羥色胺能通路相關(guān)，那么很明顯血清 素在T細(xì)胞活性中起著關(guān)鍵性作用。然而，盡管在生化史上血清素是研究最廣的生物活 性分子，但直到本發(fā)明為止，血清素在T細(xì)胞活性通路中的作用一直未被確認(rèn)及研究。
曾有向有絲分裂原刺激的淋巴細(xì)胞培養(yǎng)物中加入外源血清素可起免疫調(diào)節(jié)功效 的報(bào)道。在某些環(huán)境中，血清素刺激活化的T細(xì)胞(Foon等，1976，J.Immunol. 117 1545-1552 ； Kut 等，1992, Immunopharmacol.Immunotoxicol. 14 783-796 ； Young 等， 1993，Immunology 80 395-400)，然而大多數(shù)實(shí)驗(yàn)報(bào)道卻是加入高濃度的血清素可 抑制增殖(Slauson 等，1984，Cell.Immunol.84 240-252 ； Khan 等，1986，Int.Arch. Allergy Appl.I mmunol.81 378-380; Mossner & Lesch，1998，Brain, Behavior, and Immunity 12 249-271)。因此，如果血清素在調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答中起任何作用的話，它到底 起什么功效？現(xiàn)有技術(shù)仍無法解答。
近幾年，有報(bào)道證明在14種藥理學(xué)特性不同的血清素受體中，淋巴細(xì)胞表達(dá)靜 息細(xì)胞上的 &、2b、2c、6 和 7 型受體(Ameisen 等，1989，J.Immunol. 142 3171-3179 ； Stefolj 等，2000，Brain, Behavior, and Immunity 14 219-224)，而細(xì)胞活化時(shí) la 型和 3 型受體的活性上調(diào)(Aune 等，1993，J.Immunol. 151 1175-1183 ； Meyniel 等，1997， Immunol.Lett.55 151-160 ； Stefulj 等，2000，Brain, Behavior, and Immunity 14 219-224)。盡管這些受體在淋巴細(xì)胞中的功能還不清楚，普遍認(rèn)為除3型離子通道受體 外其他血清素受體都是有7個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域的G-偶聯(lián)受體(所述參見Barnes和Sharp， 1999，NeuroPharm.38 1083-1152)。具體言之，1型受體作用于腺苷酸環(huán)化酶使cAMP 下調(diào)(De Vivo & Maayani，1986，J.Pharmacol.Exp.Ther.238 248-252)。例如，弗司扣 林，一種腺苷酸環(huán)化酶的激動(dòng)劑，可使cAMP上調(diào)從而可作為T細(xì)胞活化的抑制劑。另 一方面加入血清素可緩解弗司扣林對T細(xì)胞的抑制(Aune等，1990，J.Immunol. 145 1826-1831 ； Aune 等，1993，J.Immunol. 151 1175-1183)。
與Ia型受體相反，6型和7型受體存在于靜息T細(xì)胞上，在對血清素應(yīng)答時(shí)經(jīng) 由上調(diào) cAMP 起作用(Ruat 等，1993，Biochem.Biophys.Res.Commun.193 268-276 ； Ruat 等，1993，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90 8547-8551)。來看違反直覺，在靜息細(xì)胞 上存在的6型和7型受體應(yīng)該起減緩T細(xì)胞應(yīng)答的功能而Ia型受體應(yīng)對抗來自于6型 和7型受體的信號。&和北型受體都與磷脂酶C正偶聯(lián)，且導(dǎo)致環(huán)己六醇磷酸鹽及胞 內(nèi)Ca2+的聚集，從而開啟蛋白激酶C信號傳導(dǎo)級聯(lián)(所述參見Boess和Martin，1994， Neuropharmacology 33 275-317)。
關(guān)于免疫應(yīng)答的功能控制，Gershon等(1975，J.Exp.Med.142 732-738)推測血 清素對于引發(fā)小鼠T細(xì)胞介導(dǎo)的遲發(fā)型超敏(DTH)反應(yīng)是必需的。然而此研究作者將 DTH反應(yīng)對血清素的依賴性歸因于該生物胺的血管特性。
在康納迪克外丨West Haven的Miles Research Center所進(jìn)行的系列研究表明5-HT Ia受體出現(xiàn)在人與鼠的T細(xì)胞中并參與其活動(dòng)(Aune等，1990，J.Immunol. 145 1826-1831 ； Aune 等，1993，J.Immunol.151 1175-1 183; Aune 等，1994， J.Immunol. 153 1826-1831)。這些研究確定了可以通過阻斷色氨酸羥化酶(即參與色氨 酸轉(zhuǎn)化到血清素的第一個(gè)酶)來抑制IL-2刺激的人T細(xì)胞的增殖；而此抑制可通過加入 5-羥色氨酸(受抑制酶的代謝產(chǎn)物)被逆轉(zhuǎn)。此外，他們還在體外用5-HT Ia特異性受 體拮抗劑阻斷了人T細(xì)胞增殖。在鼠模型中他們證明是Ia型受體拮抗劑而不是2型受體 拮抗劑能在體內(nèi)抑制對羥扎封(oxazalone)的接觸性過敏反應(yīng)而不是抗體反應(yīng)。
Laberge 等(1996，J.Immunol. 156 310-315)證明同時(shí)用 Ia 型和 2 型受體拮抗 劑，則血清素能從CD8+T細(xì)胞中誘導(dǎo)趨化因子IL-16，而且這種活性在加入2型受體抑制 劑后能被特異性的抑制，但I(xiàn)a受體拮抗劑卻不能抑制此活性。因此盡管現(xiàn)有技術(shù)指出血 清素在免疫系統(tǒng)中起到一定作用，然而到底是什么樣的作用卻并不清楚，也沒有任何現(xiàn) 象表明使用受體拮抗劑能調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)。
少數(shù)文獻(xiàn)指出血清素在免疫應(yīng)答中起一定作用。1989年著名免疫學(xué)家Philip Askenase和其同事證明，在小鼠中5-HTR2拮抗劑能抑制遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH) (Amiesen等，1989，J.Immunol. 142 3171-3179)。Amiesen等解釋為“后期作用的 DTH 效應(yīng)T細(xì)胞可能表達(dá)功能5-HT2R，而這些受體需體內(nèi)活化以使T細(xì)胞局部產(chǎn)生DTH的 炎癥淋巴因子依賴型現(xiàn)象”。可能因?yàn)閲X類動(dòng)物肥大細(xì)胞中含血清素而人類中不含， 致使此結(jié)論不能用于人類免疫應(yīng)答，所以這些結(jié)果后來被孤立。后來Aune等(1994， J.Immunol. 153 489-498)證明5-HTR Ia拮抗劑能在體內(nèi)抑制鼠DTH反應(yīng)，并證明抑制 色氨酸羥化酶(參與色氨酸向血清素轉(zhuǎn)化的第一個(gè)酶)能抑制T細(xì)胞增殖。這些作者再 次提供了重要的信息，但仍不能識別血清素在引發(fā)T細(xì)胞依賴型應(yīng)答中的重要作用。
巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞表達(dá)的受體可對血清素起反應(yīng)的第一個(gè)證據(jù)出現(xiàn)在1984 年(Roszman等，1984，Soc.Neurosci.10 726) 其間，已證明在14個(gè)已知藥理學(xué)特 異性的血清素受體中，靜息淋巴細(xì)胞表達(dá)5-HT2A、2B、2C、6、和7型受體(Ameisen 等，1989，J.Immunol. 142 3171-3179; Stefulj 等，2000，Brain, Behavior, and Immunityl4 219-224)，而 5-HT1A 和 5-HT3 受體在活化時(shí)上調(diào)(Aune 等，1993， J.Immunol. 151 1175-1183; Meyniel 等，1997，Immunol丄ett.55 151-160; Stefulj 等， 2000，Brain, Behavior, and Immunityl4 219-224)。
盡管還未確定血清素受體在淋巴細(xì)胞及免疫調(diào)控中的功能(如果有的話)，普遍 認(rèn)為，除3型離子通道受體外，其他血清素受體都是G-偶聯(lián)受體，都含有7個(gè)跨膜結(jié)構(gòu) 域(所述參見 Barnes 和 Sharp，1999，NeuroPharm.38 1083-1152)。具體來說，1 型受 體作用于腺苷酸環(huán)化酶，導(dǎo)致cAMP下調(diào)(De Vivo & Maayani，1986，J.Pharmacol.Exp. Ther.238 248-252)。
與5-HT1A受體相反，5-HT6和5-HT7受體出現(xiàn)在靜息T細(xì)胞中，在對血清 素應(yīng)答時(shí)經(jīng)由上調(diào) cAMP 起作用(Ruat 等，I"3，Biochem.Biophys.Res.Commun.193 268-276 ； Ruat 等，1993，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90 8547-8551)。違反直覺地，在靜 息細(xì)胞中表達(dá)的5-HT6和5-HT7受體應(yīng)該起減緩T細(xì)胞應(yīng)答的功能，而Ia型受體應(yīng)對抗 來自于5-HT6和5-HT7受體的信號。5-HT2A和5-HT2C受體都與磷脂酶C正偶聯(lián)，導(dǎo) 致環(huán)己六醇磷酸鹽及胞內(nèi)Ca2+的聚集，從而開啟蛋白激酶C的信號信號傳遞級聯(lián)(綜述參見 Boess 和 Martin, 1994，Neuropharmacology 33 275-317)。
以前曾推測血清素是引發(fā)小鼠T細(xì)胞介導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH)所必需的 (Gershon等，1975，J.Exp.Med.142 732-738)，并推論DTH反應(yīng)對血清素的依賴性源于 該生物胺的血管特性。有多種文獻(xiàn)交相報(bào)道血清素的免疫調(diào)節(jié)功效。在某些環(huán)境中，外 源5-HT表現(xiàn)為刺激活化的T細(xì)胞(Foon等，1976，J.Immunol. 117 1545-1552 ； Kut等， 1992，Immunopharmacol.Immunotoxicol. 14 783-796 ； Young 等，1993，Immunology 80: 395-400)，然而大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室的報(bào)道為高濃度的外源5-HT抑制活化T細(xì)胞的增殖 (Slauson 等，1984，Cell. Immunol.84 240-252 ； Khan 等，1986，Int.Arch.Allergy Appl. Immunol.81 378-380 ； Mossner & Lesch, 1998，Brain, Behavior, and Immunity 12 249-271).因此，既然研究表明該神經(jīng)遞質(zhì)即上調(diào)又下調(diào)免疫應(yīng)答，那么如果血清素在免 疫系統(tǒng)中起任何作用的話，它到底是什么功用？這仍然不清楚。
發(fā)展用來調(diào)整免疫應(yīng)答的療法，尤其是那種可調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答特定方面而不影響 其他方面的療法，是長期以來的需求。因此急需識別用于調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的潛在治療靶 點(diǎn)。本發(fā)明滿足了這些要求。此外還需要優(yōu)選不引起神經(jīng)精神功效而調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的方 法。本發(fā)明也滿足了這些要求。
發(fā)明_既述
本發(fā)明包含在哺乳動(dòng)物中調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的方法。此方法包括給哺乳動(dòng)物施用有 效量的抑制劑，該抑制劑抑制血清素與血清素受體的相互作用，從而調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物中的 免疫應(yīng)答。
一方面，血清素受體選自IB型血清素受體、2A型血清素受體、2B型血清素受 體、2C型血清素受體、4型血清素受體和6型血清素受體。
另一方面，抑制劑選自選擇性的IB型血清素受體拮抗劑、選擇性的2A型血清 素受體拮抗劑、選擇性的2B型血清素受體拮抗劑、選擇性的2C型血清素受體拮抗劑、 選擇性的4型血清素受體拮抗劑和選擇性的6型血清素受體拮抗劑。
另一方面，抑制劑為血清素受體拮抗劑，其選自利哌酮、氟奮乃靜、酮色林、 米安色林、LY53857、SB 206553、SB 242084, MDL 11939、SB 216641 和美賽西平。
一方面，抑制劑為氟奮乃靜；且另一方面，抑制劑實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障。
另一方面，抑制劑經(jīng)改性使之實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障。
另一方面，改性的抑制劑為該抑制劑的酚噻嗪衍生物。
另一方面，抑制劑為氟奮乃靜且其酚噻嗪衍生物選自QSS-5和QSS-12。
本發(fā)明包括抑制哺乳動(dòng)物免疫應(yīng)答的方法。該方法包括給哺乳動(dòng)物施用免疫應(yīng) 答抑制量的抑制劑，該抑制劑抑制血清素與血清素受體的相互作用，從而抑制哺乳動(dòng)物 中的免疫應(yīng)答。
一方面，血清素受體選自IB型血清素受體、2A型血清素受體、2B型血清素受 體、2C型血清素受體、4型血清素受體和6型血清素受體。
另一方面，抑制劑選自選擇性的IB型血清素受體拮抗劑、選擇性的2A型血清 素受體拮抗劑、選擇性的2B型血清素受體拮抗劑、選擇性的2C型血清素受體拮抗劑、 選擇性的4型血清素受體拮抗劑和選擇性的6型血清素受體拮抗劑。
另一方面，抑制劑為血清素受體拮抗劑，其選自利哌酮、氟奮乃靜、酮色林、米安色林、LY53857、SB 206553、SB 242084, MDL 11939、SB 216641 和美賽西平。
另一方面，抑制劑可為氟奮乃靜。
另一方面，抑制劑實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障。
另一方面，抑制劑可經(jīng)改性使之實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障。
另一方面，改性的抑制劑為酚噻嗪的衍生物。
另一方面，抑制劑為氟奮乃靜且其酚噻嗪衍生物選自QSS-5和QSS-12。
本發(fā)明包括抑制免疫細(xì)胞產(chǎn)生免疫反應(yīng)的方法。該方法包括抑制細(xì)胞上血清素 受體傳遞的血清素信號，其中抑制信號也就抑制了細(xì)胞的活化，而且其中抑制血清素信 號包括用有效劑量的抑制劑(可抑制血清素與血清素受體的相互作用)接觸免疫細(xì)胞，由 此抑制細(xì)胞的免疫反應(yīng)。
一方面，免疫細(xì)胞選自T細(xì)胞和B細(xì)胞。
一方面，血清素受體選自IB型血清素受體、2A型血清素受體、2B型血清素受 體、2C型血清素受體、4型血清素受體和6型血清素受體。
另一方面，抑制劑選自選擇性的IB型血清素受體拮抗劑、選擇性的2A型血清 素受體拮抗劑、選擇性的2B型血清素受體拮抗劑、選擇性的2C型血清素受體拮抗劑、 選擇性的4型血清素受體拮抗劑和選擇性的6型血清素受體拮抗劑。
另一方面，抑制劑為血清素受體拮抗劑，其選自利哌酮、氟奮乃靜、酮色林、 米安色林、LY 53857、SB 206553、SB 242084, MDL 11939、SB 216641 和美賽西平。
另一方面，抑制劑為氟奮乃靜。
另一方面，抑制劑實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障。
另一方面，抑制劑可經(jīng)改性使之實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障。
另一方面，改性的抑制劑為酚噻嗪的衍生物。
另一方面，抑制劑為氟奮乃靜且其酚噻嗪衍生物選自QSS-5和QSS-12。
本發(fā)明還包括調(diào)節(jié)患自身免疫疾病的哺乳動(dòng)物中免疫應(yīng)答的方法，這些疾病由 被血清素信號活化的免疫細(xì)胞介導(dǎo)。該方法包括給哺乳動(dòng)物施用有效量的抑制劑，該抑 制劑可抑制血清素與血清素受體的相互作用，從而調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物中的免疫應(yīng)答。
一方面，抑制劑實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障。
另一方面，血清素受體選自IB型血清素受體、2A型血清素受體、2B型血清素 受體和2C型血清素受體。
另一方面，抑制劑選自選擇性的IB型血清素受體拮抗劑、選擇性的2A型血清 素受體拮抗劑、選擇性的2B型血清素受體拮抗劑和選擇性的2C型血清素受體拮抗劑。
另一方面，該抑制劑為血清素受體拮抗劑，其選自利哌酮、氟奮乃靜、酮色 林、米安色林、LY53857、SB 206553、SB M2084 和 MDL 11939。
另一方面，抑制劑為一種特異性結(jié)合血清素受體的抗體。另一方面，血清素受 體選自IB型血清素受體、2A型血清素受體、2B型血清素受體及2C型血清素受體。
另一方面，自身免疫疾病選自重癥肌無力、特發(fā)性炎癥肌病、慢性中性粒細(xì) 胞減少癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、特發(fā)性血小板減少性紫癜、自身免疫溶血綜合癥、抗磷脂 抗體綜合癥、炎性腸病、克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、心肌炎、Gillian-Barre綜合癥、血管 炎、多發(fā)性硬化癥、視神經(jīng)脊髓炎(Devic綜合癥)、淋巴細(xì)胞性垂體炎、格雷夫斯病、愛迪生病、甲狀旁腺功能減退癥、一型糖尿病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、尋常性天皰瘡、大皰性 類天皰瘡、牛皮癬、銀屑病關(guān)節(jié)炎、子宮內(nèi)膜異位、自身免疫性睪丸炎、自身免疫性勃 起障礙、結(jié)節(jié)病、韋格納肉芽腫病、自身免疫性耳聾、斯耶格倫病、自身免疫色素成視 網(wǎng)膜炎(autoimmuneuveoretinitis)、間質(zhì)性膀胱炎、肺出血腎炎綜合癥及纖維肌痛。
另一方面，該調(diào)節(jié)作用為抑制作用。.
本發(fā)明包括抑制哺乳動(dòng)物免疫應(yīng)答的方法，此處免疫應(yīng)答是被T細(xì)胞上血清素 受體活化所介導(dǎo)的。本方法包括用有效量的抑制劑接觸T細(xì)胞，該抑制劑可抑制血清素 與血清素受體間的相互作用，從而抑制哺乳動(dòng)物的免疫應(yīng)答。
一方面，該方法進(jìn)一步包括通過快速注射給藥抑制劑。
另一方面，血清素受體選自IB型血清素受體、2A型血清素受體、2B型血清素 受體和2C型血清素受體。
另一方面，抑制劑選自選擇性的IB型血清素受體拮抗劑、選擇性的2A型血清 素受體拮抗劑、選擇性的2B型血清素受體拮抗劑和選擇性的2C型血清素受體拮抗劑。
另一方面，抑制劑為血清素受體拮抗劑，其選自利哌酮、氟奮乃靜、酮色林、 米安色林、LY53857、SB 206553、SB M2084 和 MDL 11939。
另一方面，抑制劑實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障。
本發(fā)明包括抑制哺乳動(dòng)物免疫細(xì)胞活化的方法，其中該活化由免疫細(xì)胞上血清 素受體的活化所介導(dǎo)。該方法包括給哺乳動(dòng)物施用有效量的抑制劑，該抑制劑可抑制血 清素與血清素受體間的相互作用，且其中用抑制劑接觸免疫細(xì)胞，進(jìn)而抑制免疫細(xì)胞的 活化。
一方面，該血清素受體選自IB型血清素受體、2A型血清素受體、2B型血清素 受體和2C型血清素受體。
另一方面，該抑制劑選自選擇性的IB型血清素受體拮抗劑、選擇性的2A型 血清素受體拮抗劑、選擇性的2B型血清素受體拮抗劑和選擇性的2C型血清素受體拮抗 劑。
另一方面，抑制劑為血清素受體拮抗劑，其選自利哌酮、氟奮乃靜、酮色林、 米安色林、LY 53857、SB 206553、SB M2084 和 MDL 11939。
另一方面，抑制劑實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障。
本發(fā)明還包括抑制哺乳動(dòng)物二級免疫應(yīng)答的方法。該方法包括給哺乳動(dòng)物施用 有效量的抑制劑，該抑制劑可抑制血清素與血清素受體間的相互作用，從而抑制哺乳動(dòng) 物的二級免疫應(yīng)答。
一方面，血清素受體選自IB型血清素受體、2A型血清素受體、2B型血清素受 體、和2C型血清素受體。
另一方面，抑制劑選自選擇性的IB型血清素受體拮抗劑、選擇性的2A型血清 素受體拮抗劑、選擇性的2B型血清素受體拮抗劑和選擇性的2C型血清素受體拮抗劑。
另一方面，該抑制劑為血清素受體拮抗劑，其選自利哌酮、氟奮乃靜、酮色 林、米安色林、LY 53857、SB 206553、SB M2084 和 MDL 11939。
另一方面，抑制劑實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障。
本發(fā)明包括治療哺乳動(dòng)物中由細(xì)胞介導(dǎo)的疾病的方法，此處的細(xì)胞需經(jīng)由血清素受體傳遞血清素信號。該方法包括抑制細(xì)胞中血清素與血清素受體的相互作用，其中 該抑制對細(xì)胞是有害的使得該細(xì)胞不介導(dǎo)此疾病。
一方面，對血清素相互作用的抑制是通過使細(xì)胞接觸抑制血清素與血清素受體 相互作用的抑制劑來實(shí)現(xiàn)的。
另一方面，該血清素受體選自1型血清素受體、2型血清素受體、4型血清素受 體及6型血清素受體。
再有，疾病選自多發(fā)性骨髓瘤、重癥肌無力、特發(fā)性炎癥肌病、慢性嗜中性白 血球減少癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、特發(fā)性血小板減少性紫癜、自身免疫性溶血綜合癥、抗 磷脂抗體綜合癥、炎性腸病、克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、心肌炎、Gillian-Barre綜合癥、 血管炎、多發(fā)性硬化癥、視神經(jīng)脊髓炎(Devic綜合癥)、淋巴細(xì)胞性垂體炎、格雷夫斯 病、愛迪生病、甲狀旁腺功能減退癥、一型糖尿病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、尋常性天皰瘡、 大皰性類天皰瘡、牛皮癬、銀屑病關(guān)節(jié)炎、子宮內(nèi)膜異位、自身免疫性睪丸炎、自身免 疫性勃起障礙、結(jié)節(jié)病、韋格納肉芽腫病、自身免疫性耳聾、斯耶格倫病、自身免疫性 色素層視網(wǎng)膜炎、間質(zhì)性膀胱炎、肺出血腎炎綜合癥及纖維肌痛。
一方面，血清素受體是IB型血清素受體，而且其中疾病是多發(fā)性骨髓瘤。
另一方面，抑制劑實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障。
本發(fā)明包括誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的方法。該方法包括抑制經(jīng)由細(xì)胞上的血清素受體傳 遞血清素信號，其中抑制作用誘導(dǎo)凋亡；而且其中抑制細(xì)胞上血清素與血清素受體的相 互作用包括用有效量的抑制此相互作用的抑制劑接觸細(xì)胞，進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
一方面，抑制劑實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障。
本發(fā)明還包括誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的方法。本方法包括抑制經(jīng)由細(xì)胞上的血清素受體 傳遞血清素信號，其中抑制誘導(dǎo)細(xì)胞死亡；而且其中該抑制包括用有效量的抑制劑接觸 該細(xì)胞，該抑制劑可抑制血清素與血清素受體的相互作用，由此誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。
另一方面，抑制劑實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障。
本發(fā)明包括鑒別用于治療哺乳動(dòng)物自身免疫疾病的化合物的方法。該方法包括 用待測化合物接觸血清素受體，并比較接觸此化合物的血清素受體及未接觸此化合物的 血清素受體與血清素的結(jié)合水平，當(dāng)前者的血清素結(jié)合水平低于后者時(shí)表示此化合物可 用于治療哺乳動(dòng)物自身免疫疾病。一方面，該哺乳動(dòng)物是人。
本發(fā)明包括用該方法鑒定出的化合物。
一方面，血清素受體選自IB型血清素受體、2A型血清素受體、2B型血清素受 體、2C型血清素受體、4型血清素受體及6型血清素受體。
另一方面，該方法進(jìn)一步包括評估化合物穿透血腦屏障的能力并選擇實(shí)質(zhì)上不 穿透血腦屏障的化合物。本發(fā)明包括用該方法鑒定的化合物。另一方面，該化合物選自 QSS-5 和 QSS-12。
本發(fā)明包括鑒別用于治療哺乳動(dòng)物異源移植反應(yīng)的化合物的方法。該方法包括 用待測化合物接觸血清素受體，并比較接觸此化合物的血清素受體及未接觸此化合物的 血清素受體與血清素的結(jié)合水平，當(dāng)前者的血清素結(jié)合水平低于后者時(shí)表示此化合物可 用于治療哺乳動(dòng)物異源移植反應(yīng)。
本發(fā)明包括用該方法鑒別出的化合物。
另一方面，該方法進(jìn)一步包括評定此化合物穿透血腦屏障的能力，從而選取實(shí) 質(zhì)上不穿透血腦屏障的化合物。本發(fā)明包括用此方法鑒定的化合物。
一方面，血清素受體選自IB型血清素受體、2A型血清素受體、2B型血清素受 體、2C型血清素受體、4型血清素受體及6型血清素受體。
本發(fā)明包括用于抑制T細(xì)胞活化的化合物的方法，其中活化是由T細(xì)胞上血清素 受體與血清素相結(jié)合而介導(dǎo)的。該方法包括用待測化合物接觸T細(xì)胞并比較與此化合物 接觸的T細(xì)胞及未與此化合物接觸的T細(xì)胞的活化水平，當(dāng)前者的活性水平低于后者時(shí)表 示此化合物可用于抑制T細(xì)胞活化，其中該活化指由T細(xì)胞上2型血清素受體與血清素結(jié) 合而介導(dǎo)的活化。
另一方面，該方法進(jìn)一步包括評估此化合物穿透血腦屏障的能力，并選取實(shí)質(zhì) 上不穿透血腦屏障的化合物。本發(fā)明包括用此方法鑒定的化合物。
另一方面，該方法進(jìn)一步包括改性化合物使之實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障。
本發(fā)明還包括鑒別經(jīng)由細(xì)胞上血清素受體影響信號傳遞的化合物的方法。本方 法包括用化合物接觸細(xì)胞，并與接觸該化合物前的細(xì)胞進(jìn)行比較，評估任何細(xì)胞形態(tài)學(xué) 上的變化。當(dāng)接觸過該化合物的細(xì)胞與接觸該化合物前的細(xì)胞相比較，細(xì)胞形態(tài)學(xué)發(fā)生 變化時(shí)表明該化合物影響經(jīng)由細(xì)胞上血清素受體的信號傳遞，由此鑒別出影響經(jīng)由細(xì)胞 上血清素受體信號傳遞的化合物。
本發(fā)明包括用此方法鑒別出的化合物。
另一方面，本方法進(jìn)一步包括改性該化合物使之實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障。本發(fā) 明包括用此方法鑒別出的化合物。
本發(fā)明包括影響細(xì)胞周期過程的方法。本方法包括抑制經(jīng)由細(xì)胞上血清素受體 的信號傳遞，而且其中抑制經(jīng)由細(xì)胞上血清素受體的信號傳遞包括用有效量的抑制劑接 觸細(xì)胞，該抑制劑可抑制血清素與其受體的相互作用，從而影響細(xì)胞周期過程。
一方面，抑制劑實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障。
本發(fā)明包括影響表達(dá)血清素受體的細(xì)胞的凋亡的方法。本方法包括抑制經(jīng)由受 體的信號傳遞，且其中該抑制包括用有效量的抑制劑接觸細(xì)胞，該抑制劑可抑制血清素 與其受體的相互作用，從而影響細(xì)胞凋亡。
一方面，抑制劑實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障。
本發(fā)明包括一種方法，該方法可誘導(dǎo)表達(dá)血清素受體的細(xì)胞凋亡，本方法包括 抑制經(jīng)由受體的信號傳遞，進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
本發(fā)明包括調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物免疫應(yīng)答的試劑盒。該試劑盒包括有效量的抑制劑， 該抑制劑可抑制血清素與其受體間的相互作用。本試劑盒還包括用藥器和使用說明材 料。
一方面，血清素受體選自IB型血清素受體、2A型血清素受體、2B型血清素受 體、2C型血清素受體、4型血清素受體及6型血清素受體。
一方面，抑制劑實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障。
本發(fā)明包括影響表達(dá)血清素受體的細(xì)胞的細(xì)胞周期過程的試劑盒。該試劑盒包 括有效量的抑制劑，該抑制劑可抑制血清素與其受體間的相互作用。本試劑盒還包括用 藥器和使用說明材料。
一方面，抑制劑實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障。
本發(fā)明包括誘導(dǎo)表達(dá)血清素受體的細(xì)胞的凋亡的試劑盒。該試劑盒包括有效量 的抑制劑，該抑制劑可抑制血清素與其受體間的相互作用。本試劑盒還包括用藥器和使 用說明材料。
—方面，抑制劑實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障。
附圖簡述
為闡明本發(fā)明，此處列解出用于本發(fā)明實(shí)施方案的圖例。然而，本發(fā)明并不局 限于圖例所述實(shí)施方案的確實(shí)順序和實(shí)施方法。
圖一是描述巨噬細(xì)胞條件培養(yǎng)基對淋巴細(xì)胞應(yīng)有絲分裂原活化信號的增殖應(yīng)答 的影響的圖表。
圖二描述血清素合成及降解的主要代謝通路?；衔锏拿至性诮Y(jié)構(gòu)圖的左 側(cè)，催化單步反應(yīng)的酶列于右側(cè)。
圖三描述色氨酸水解酶抑制劑(對氯苯丙氨酸，PCPA)對人淋巴細(xì)胞有絲分裂 刺激作用的影響。也即，通過加入1 μ g/ml ConA刺激人外周血淋巴細(xì)胞(PBL)。
圖四描述血清素、色氨酸及苯乙胼對用ConA刺激的人PBL活化的影響。在圖 示時(shí)間點(diǎn)收集測定。所加試劑濃度為400 μ Μ。
圖五包括3個(gè)小圖，描述色氨酸(trp)，血清素(5_HT)，及苯乙胼( )在不同 ConA濃度下對人T細(xì)胞有絲分裂刺激的影響。也即，圖5A描述0.1 μ g/ml ConA的作 用；圖5B描述1 μ g/ml ConA的作用；圖5C描述10 μ g/ml ConA的作用。每幅圖中的 虛線為不加任何試劑時(shí)ConA的基線刺激水平。
圖六描述色氨酸、血清素的添加對苯乙胼對活化淋巴細(xì)胞的抑制作用。所加各 試劑CPz、Trp、和5-HT)濃度都為100 μ M。
圖7Α描述滴定已知的選擇性5-HTR 1受體激動(dòng)劑和拮抗劑對ConA (5 μ g/ml) 刺激的人淋巴細(xì)胞活化的劑量反應(yīng)作用。在引發(fā)ConA刺激后72小時(shí)收集細(xì)胞并測 定。用于此實(shí)驗(yàn)的藥物詳細(xì)定義如下(R)S-OH DPAT 選擇性5-HTR IA受體激動(dòng) 劑；WAY 100635 選擇性5-HTR IA受體拮抗劑；普萘洛爾常用5HT 1受體拮抗劑 同時(shí)也是beta-腎上腺素能拮抗劑；L 694247 選擇性1B/1D激動(dòng)劑；GR 55562 選擇 性1B/1D拮抗劑；SB 216641 選擇性IB拮抗劑；和BRL 15522 選擇性ID拮抗劑； BRL 54443 選擇性1E/1F激動(dòng)劑。
圖7B描述滴定已知的選擇性5-HTR 1受體激動(dòng)劑和拮抗劑對人淋巴細(xì)胞異源 刺激(也作混合淋巴細(xì)胞反應(yīng))的劑量反應(yīng)作用。在引發(fā)刺激后120小時(shí)收集細(xì)胞并測 定。用于此實(shí)驗(yàn)的藥物詳細(xì)定義如下(R)S-OHDPAT:選擇性5-HTR1A受體激動(dòng)劑； WAY 100635 選擇性5-HTR IA受體拮抗劑；普萘洛爾常用5HT 1受體拮抗劑，同 時(shí)也是beta-腎上腺素能拮抗劑；L 694247 選擇性1B/1D激動(dòng)劑；GR 55562 選擇性 1B/1D拮抗劑；SB 216641 選擇性IB拮抗劑；BRL 15522 選擇性ID拮抗劑；BRL 54443 選擇性1E/1F激動(dòng)劑。
圖8A描述滴定已知靶向5-HTR2受體的激動(dòng)劑和拮抗劑對ConA (5 μ g/ml)刺激 的人淋巴細(xì)胞活化的劑量反應(yīng)作用。在引發(fā)ConA刺激后72小時(shí)收集細(xì)胞并測定。用 于此實(shí)驗(yàn)的藥物詳細(xì)定義如下DOI: 5HT2激動(dòng)劑(受體對此化合物的延長暴露可導(dǎo)致它們的下調(diào))；LY 53857 選擇性5HT2A/2B/2C拮抗劑；MDL 11939 選擇性5HT 2A 拮抗劑；SB206553 選擇性5HT2B/2C拮抗劑;SB 242084 選擇性5HT2C拮抗劑;美 西麥角部分1型激動(dòng)劑/2型拮抗劑；美賽西平通用1、2、6及7型拮抗劑。
圖8B描述滴定靶向5-HTR2受體的激動(dòng)劑和拮抗劑對人淋巴細(xì)胞異源刺激(也 作混合淋巴細(xì)胞反應(yīng))的劑量反應(yīng)作用。在引發(fā)刺激后120小時(shí)收集細(xì)胞并測定。用于 此實(shí)驗(yàn)的藥物詳細(xì)定義如下DOI: 5HT2激動(dòng)劑(受體對此化合物的延長暴露可導(dǎo)致它 們的下調(diào))；LY 53857 選擇性5HT2A/2B/2C拮抗劑；MDL 11939 選擇性5HT 2A拮 抗劑；SB206553 選擇性5HT2B/2C拮抗劑；SB 242084 選擇性5HT 2C拮抗劑；美西 麥角部分1型激動(dòng)劑/2型拮抗劑；美賽西平通用1、2、6和7型拮抗劑。
圖9A描述滴定已知靶定或者5-HTR 3、4、6或者7受體的激動(dòng)劑和拮抗劑對 ConA(5 μ g/ml)刺激的人淋巴細(xì)胞活化的劑量反應(yīng)影響。在引發(fā)ConA刺激后72小時(shí)收 集細(xì)胞并測定。用于此實(shí)驗(yàn)的藥物詳細(xì)定義如下SR 57222A 選擇性5HT 3激動(dòng)劑； 托泊西隆(Troposetran)選擇性5HT 3拮抗劑(臨床驗(yàn)證的抗催吐劑)；RS67333 選 擇性5HT4激動(dòng)劑(延長接觸時(shí)下調(diào)受體)；SB 204070 選擇性5HT 4受體拮抗劑；Ro 047690 ；選擇性5HT 6拮抗劑；SB 269970 選擇性5HT 7拮抗劑。
圖9B描述滴定已知靶定或者5-HTR 3、4、6或者7受體的激動(dòng)劑和拮抗劑對人 淋巴細(xì)胞異源刺激(也作混合淋巴細(xì)胞反應(yīng))的劑量反應(yīng)作用。在引發(fā)刺激后120小時(shí)收 集細(xì)胞并測定。用于此實(shí)驗(yàn)的藥物詳細(xì)定義如下SR 57222A 選擇性5HT 3激動(dòng)劑； 托泊西隆選擇性5HT 3拮抗劑(臨床驗(yàn)證的抗催吐劑)；RS 67333:選擇性5HT4激動(dòng) 劑(延遲接觸時(shí)下調(diào)該受體)；SB 204070:選擇性5HT 4受體拮抗劑；Ro 047690 ；選擇 性5HT 6拮抗劑；SB 269970 選擇性5HT 7拮抗劑。


圖10描述鼠混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)試驗(yàn)(BALB/c相對于C57BL6)，檢測5HT 3R激 動(dòng)劑和選擇性5HT6R拮抗劑相對于5HT1R激動(dòng)劑作用的效用。
圖11描述當(dāng)有絲分裂刺激人淋巴細(xì)胞活化時(shí)1型5HT受體拮抗劑和2型5HT受 體拮抗劑對細(xì)胞數(shù)目的影響。用10 μ g/ml ConA刺激細(xì)胞。加入抑制劑前用Ficoll梯度重提純細(xì)胞。用錐蟲藍(lán)排除計(jì)數(shù)活細(xì)胞量。
圖12A描述高效選擇性2型5HT受體拮抗劑，LY 53857，對人淋巴細(xì)胞有絲分 裂原刺激(用1 μ g/mlConA刺激，且72小時(shí)后收集細(xì)胞)的影響。結(jié)果描述的是在O 時(shí)或測定開始后48小時(shí)時(shí)加入抑制劑的效用。
圖12B描述高效選擇性2型5HT受體拮抗劑，SB 206553，對人淋巴細(xì)胞有絲分 裂原刺激(用1 μ g/mlConA刺激，且72小時(shí)后收集細(xì)胞)的影響。結(jié)果描述的是在0 時(shí)或測定開始后48小時(shí)時(shí)加入抑制劑的效用。
圖12C描述高效選擇性2型5HT受體拮抗劑，MDL 11939，對人淋巴細(xì)胞有絲 分裂原刺激(用1 μ g/ml ConA刺激，且72小時(shí)后收集細(xì)胞)的影響。結(jié)果描述的是在 O時(shí)或測定開始后48小時(shí)時(shí)加入抑制劑的效用。
圖12D描述高效選擇性2型5HT受體拮抗劑，SB M2084，對人淋巴細(xì)胞有絲分 裂原刺激(用ι μ g/ml ConA刺激，且72小時(shí)后收集細(xì)胞)的影響。結(jié)果描述的是在O 時(shí)或測定開始后48小時(shí)時(shí)加入抑制劑的效用。
圖13描述用于研究血清素受體拮抗劑對抗環(huán)孢菌素A效用的鼠異體移植模型的結(jié)果。本文公開數(shù)據(jù)源于細(xì)胞毒性T細(xì)胞的殺傷試驗(yàn)，其中用處理鼠的脾細(xì)胞相對于 p815靶細(xì)胞。
圖14描述5HT2R選擇性拮抗劑，SB 206553，在鼠異源移植模型中的效用。3 只用SB 206553處理的小鼠標(biāo)記為SB#M6h、SB#226i,和SB#22^。其中2只處理的小 鼠的異源反應(yīng)被全部抑制。只有一只小鼠顯示出治療后沒有免疫效應(yīng)。然 而，為對SB#22f5j給藥需重復(fù)進(jìn)行尾靜脈注射。即使注射時(shí)很小心，尾靜脈注射仍有很 大的技術(shù)難度，并不總能一次性成功。
圖15為擴(kuò)增靜息和活化的淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞的RT PCR引發(fā)的膠圖象。(+) 道表示建cDNA文庫前用有絲分裂原ConA刺激48小時(shí)的細(xì)胞。(-)道表示靜息細(xì)胞。
圖16是用來顯示14種不同血清素受體表達(dá)水平的DNA印記，印記用適當(dāng)?shù)膬?nèi) 源寡核苷酸探測，其序列如下IA ctgcagaacgtggccaattatcttattggctcttt (SEQ ID NO: 1) ； IB gtggagtactcagctaaaaggactcccaagaggg (SEQ ID NO 2) ； ID ctctctttttcaaccacg tgaaaatcaagcttgct (SEQ ID NO 3) ； IE atctagatcacccaggagaacgtcagcagatctcta (SEQ ID NO 4) ； IF gagcagcaaagacattataccacaagagacaagcaa (SEQ ID NO 5) ； 2A tcggctctttt gtgtcatttttcattcccttaacca (SEQ ID NO 6) ； 2B ctcaacgcctaacatggttgactgtgtctacagttt (SEQ ID NO 7) ； 2C taactgacattttcaatacctccgatggtggacgct (SEQ ID NO 8) ； 3A gggagtt cagcatggaaagcagtaactactatgcag (SEQ ID NO 9) ； 3B ttcaatctatcagcaactacctccaaactcagga cc (SEQ ID NO 10) ； 4 caccattctttgtcaccaatattgtggatcctttc (SEQ ID NO: 11) ； 5 c tttttggctggggagagacgtactctgagg (SEQ ID NO 12) ； 6 atcctcaacctctgcctcatcagcctggac (SEQ ID NO 13) ； 7 tgaaaggaaaaacatctccatctttaagcgagaaca (SEQ ID NO 14).
圖17描述多種1類5-HT選擇性藥物的功能行為。8-OH DPAT是選擇性IA激 動(dòng)劑；WAY 100635是選擇性IA拮抗劑；普萘洛爾是通用1型受體拮抗劑(也是beta-腎 上腺能拮抗劑)；SB 216641是選擇性IB拮抗劑;L694247是選擇性1B/1D激動(dòng)劑;GR 55562是選擇性IB/ID拮抗劑；BRL 54443是選擇性IE/IF激動(dòng)劑。如本發(fā)明其他部分 所述，在5mg/ml ConA刺激人淋巴細(xì)胞的O時(shí)加入藥物。
圖18A是用描述于本發(fā)明其他部分的鼠異體移植模型獲得的數(shù)據(jù)。簡而述之， 本圖描述的數(shù)據(jù)源自單一典型性研究。2個(gè)陽性對照表示觀測到的誘導(dǎo)的細(xì)胞毒殺傷活 性，反之原初的對照從未接觸P815細(xì)胞，因而提供了此種測定方法的背景測量。用美西 麥角(MS)處理的小鼠顯示出對這種誘導(dǎo)的殺傷效應(yīng)的完全抑制。
圖18B是用描述于本發(fā)明其他部分的鼠異體移植模型獲得的數(shù)據(jù)。此處的數(shù)據(jù) 顯示多種測定的匯合結(jié)果，此處用效應(yīng)物靶位點(diǎn)為100 1的比率來計(jì)量抑制的百分 數(shù)。每單一柱形圖表示數(shù)據(jù)收集于一只小鼠。
圖19A描述5-HT2A/B/C受體拮抗劑LY5;3587在16小時(shí)時(shí)對RPMI82^細(xì)胞存活能力的影響。
圖19B描述5-HT2A/B/C受體拮抗劑LY53587在48小時(shí)時(shí)對RPMI82^細(xì)胞存活能力的影響。
圖20A描述5HT-2A/B/C受體拮抗劑在16小時(shí)時(shí)對RPMI 8226細(xì)胞線粒體活 性的影響。
圖20B描述5HT-2A/B/C受體拮抗劑在48小時(shí)時(shí)對RPMI 8226細(xì)胞線粒體活性的影響。
圖20C描述5HT-2A/B/C受體拮抗劑在16小時(shí)時(shí)對RPMI 8226細(xì)胞DNA合成 的影響。
圖20D描述5HT-2A/B/C受體拮抗劑在48小時(shí)時(shí)對RPMI 8226細(xì)胞DNA合成 的影響。
圖21描述5HT-2A/B/C受體拮抗劑對RPMI 8226細(xì)胞DNA合成的影響。
圖22描述多種5-HT受體激動(dòng)劑和拮抗劑對RPMI 8226細(xì)胞增殖的影響。
圖23描述多種靶向1型5-HTR受體的5_HT受體激動(dòng)劑及拮抗劑的效用。試 驗(yàn)讀數(shù)為多發(fā)性骨髓瘤RPMI 8226細(xì)胞的增殖。
圖M描述多種靶向2型5-HTR受體的5_HT受體激動(dòng)劑及拮抗劑的效用。試 驗(yàn)讀數(shù)為多發(fā)性骨髓瘤RPMI 8226細(xì)胞的增殖。
圖25描述多種靶向3、4、6或7型5-HTR受體的5-HT受體激動(dòng)劑及拮抗劑的效用。試驗(yàn)讀數(shù)為多發(fā)性骨髓瘤RPMI 8226細(xì)胞的增殖。
圖沈是一個(gè)膠圖，描述在用多種試劑(包括5-HTR 2A/2B/2C)處理的RPMI 8226細(xì)胞中與凋亡相關(guān)的典型DNA片斷化。
圖27，包括A到F的6幅小圖，描述了 RPMI 82 細(xì)胞的FACS特征，這些細(xì)胞或是用多種濃度的喜樹堿、選擇性1B/D型5-HTR拮抗劑處理過的，或是用膜聯(lián)蛋白 (Annexin)(沿縱坐標(biāo)方向)及碘化丙啶(PI)(橫坐標(biāo)方向)染色的所有未處理細(xì)胞。
圖觀含4幅小圖，描述對應(yīng)的用蘇木精和伊紅(上)及雙苯甲酰胺(下)染色 的RPMI_82^細(xì)胞圖象，這些是用2 μ M喜樹堿(左)處理及用50 μ M SB 216641處理 以抑制IB型5-ΗΤ受體信號(右)9小時(shí)后的細(xì)胞。在2個(gè)處理組中都可見大量染色質(zhì) 凝聚及核片斷化，顯示出廣泛的細(xì)胞凋亡現(xiàn)象。
圖四描述對應(yīng)的用蘇木精和伊紅(上)及雙苯甲酰胺(下)染色的RPMI_82^細(xì) 胞圖象，這些是用50 μ M SB242084處理9小時(shí)以抑制2C型5-ΗΤ受體信號(右)的細(xì)胞 及載體對照(左)。對照樣品可見均一染色質(zhì)染色，表明生存細(xì)胞；然而在用SBM2084 處理過的細(xì)胞中卻可見聚集及片段化的染色質(zhì)，表明發(fā)生細(xì)胞凋亡。
圖30包括A-D小圖，是顯微照片，顯示在5-羥色胺能信號傳遞被抑制的情況 下細(xì)胞的可見變化。細(xì)胞在有選擇性的IB型拮抗劑6Β216641)的條件下孵育，且對小 時(shí)后可見細(xì)胞形態(tài)學(xué)上發(fā)生變化。
圖31描述RPMI-82^細(xì)胞對氟奮乃靜及馬來酸甲基麥角新堿的劑量依賴性細(xì) 胞增殖反應(yīng)。試驗(yàn)讀數(shù)是氚標(biāo)記的脫氧胸腺嘧啶核苷結(jié)合到細(xì)胞DNA中的每分鐘計(jì)數(shù) (CPM)。
圖32描述RPMI-82^細(xì)胞對多種5_HT受體激動(dòng)劑和拮抗劑的劑量依賴性細(xì) 胞增殖反應(yīng)。試驗(yàn)讀數(shù)是氚標(biāo)記的脫氧胸腺嘧啶核苷結(jié)合到細(xì)胞DNA中的每分鐘計(jì)數(shù) (CPM)。
圖33描述有絲分裂原誘導(dǎo)的T-細(xì)胞增殖試驗(yàn)中，多種5-HT受體激動(dòng)劑和拮抗 劑的劑量依賴性功能行為。按本文其他部分所述，用5yg/mlConA刺激細(xì)胞，并在72 小時(shí)后收集計(jì)數(shù)。
圖34包括圖34A至341，是一系列源于流式細(xì)胞分析的FACS圖，這些細(xì)胞是用多種濃度的氟奮乃靜處理并用P I及膜聯(lián)蛋白-V染色的RPMI 8226細(xì)胞。該FACS圖是 控制流式細(xì)胞分析使之只包括PI陰性細(xì)胞(非壞死細(xì)胞)的情況下產(chǎn)生的。膜聯(lián)蛋白-ν 染色級別作為測量細(xì)胞凋亡的度量。圖的黑色區(qū)域表示沒經(jīng)處理的對照細(xì)胞，亮的區(qū)域 表示氟奮乃靜處理的細(xì)胞。
圖35包括圖35A到35D，是一系列膠圖象，描述細(xì)胞DNA核小體 間(intemuclesomal)斷裂，這是細(xì)胞凋亡的一個(gè)標(biāo)志。用標(biāo)示濃度的氟奮乃靜、 SB216641(5HT_1BR拮抗劑)、喜樹堿(拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑，細(xì)胞凋亡對照)處理 RPMI-8226細(xì)胞，并在所示時(shí)間點(diǎn)抽提基因組DNA。
圖36，不希望受任何理論限制，描述由于T細(xì)胞和瘤B細(xì)胞上血清素和IB型 5-HT受體相互作用引起的信號通路。其中IB型5-HT受體的信號傳遞特性與AKT (又 名蛋白激酶B)相結(jié)合。IB型5-HT受體的激活導(dǎo)致AKT蛋白的磷酸化。而后此磷酸 化形式的蛋白又使半胱天冬酶9磷酸化，從而抑制細(xì)胞凋亡反應(yīng)。撤除IB型5-HT信 號，如(但不限于)使用氟奮乃靜，會(huì)關(guān)閉AKT從而使半胱天冬酶系統(tǒng)得以活化，進(jìn)而 導(dǎo)致程序性細(xì)胞死亡。
圖37包括圖37A和37B是2個(gè)跑膠圖，表示所示滴定已知的1型5_HT選擇性 拮抗劑6B 216641)的效應(yīng)。如本文其他部分所述，數(shù)據(jù)表明阻遏IB型5-HT信號會(huì)下 調(diào)AKT活性，進(jìn)而誘導(dǎo)程序性細(xì)胞死亡。
圖38表明氟奮乃靜引起的對細(xì)胞增殖的典型抑制。氟奮乃靜為常用抗精神病 藥，它是HEK-293細(xì)胞表達(dá)的人5HT2C_INI受體同工型的有效反激動(dòng)劑。圖示結(jié)果源于重 復(fù)3次的實(shí)驗(yàn)，該實(shí)驗(yàn)用于測定氟奮乃靜對HEK-293細(xì)胞表達(dá)的人5HT2CHNI受體的組成 型PI水解活性的抑制能力。數(shù)據(jù)顯示為3次測定的均值dpm士S.E.M.，并獲自Rauser等 (2001, J.Pharmacol.Exp.Ther.299 83-89)。
圖39顯示氟奮乃靜及其2個(gè)帶正電的酚噻嗪衍生物，名為QSS-5和QSS-13的 結(jié)構(gòu)式。與親本化合物氟奮乃靜相比，QSS-5和QSS-12上的額外氨基都可減少化合物 的親脂性。
圖40顯示氟奮乃靜、QSS-5、和QSS-12對細(xì)胞毒性T細(xì)胞的相對的細(xì)胞殺傷 功效。在此測定中，用P815刺激BALB/c小鼠脾細(xì)胞，顯示了完全MHC不匹配。根 據(jù)標(biāo)準(zhǔn)程序，將待測的細(xì)胞放在一起孵育7天，并用CTL測定它們裂解P815靶細(xì)胞的能 力。所示數(shù)據(jù)以用未經(jīng)處理的細(xì)胞群檢測的殺傷率為參照。
圖41，包括圖41A和41B，描述多種化合物減弱細(xì)胞增殖的功效，這些細(xì)胞源 于人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系。圖41A描述梯度濃度氟奮乃靜QSS衍生物對RPMI-82^細(xì) 胞生長的功效。圖41B描述氟奮乃靜及其QSS衍生物對于減弱U266細(xì)胞增殖的功效。2個(gè)細(xì)胞系都源于人多發(fā)性骨髓瘤。多種化合物的不同劑量按μM提供。細(xì)胞增殖用攝 入的氚標(biāo)記的脫氧胸腺嘧啶核苷的吸收(計(jì)量DNA合成)表示。
圖42描述多種氟奮乃靜酚噻嗪衍生物的結(jié)構(gòu)式，例如QSS-1、QSS-3、QSS-5 和 QSS-6。
圖43描述不同濃度的氟奮乃靜、QSS-1、QSS-3、QSS-5和QSS-6對細(xì)胞增殖 的影響。測定了所示不同濃度的化合物對人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系A(chǔ)RH-77的細(xì)胞增殖的 影響(用測定攝入氚標(biāo)記的脫氧胸腺嘧啶核苷測量DNA合成)。
圖44為描述血清素，多巴胺及QSS-5的分子模型。分子以CPK模式顯示，表 示出不同化合物相應(yīng)的范德華原子半徑及位置。
發(fā)明詳述
血清素家族受體在神經(jīng)系統(tǒng)中起重要作用，同時(shí)正如本發(fā)明所揭示的，其在免 疫系統(tǒng)中也起重要作用。本文公開的數(shù)據(jù)顯示影響2型血清素受體活化能調(diào)節(jié)免疫應(yīng) 答。具體來說，抑制血清素與2B/2C型或與較少量的2A受體結(jié)合可以介導(dǎo)T細(xì)胞活化 的減低或抑制，也可抑制哺乳動(dòng)物中初級及二級T細(xì)胞應(yīng)答。這種對T細(xì)胞應(yīng)答的抑制 為自身免疫疾病、異源移植排斥反應(yīng)及其他疾病提供了一個(gè)有效的治療方法，這些疾病 目前都還未見有效療法。
^JL
本發(fā)明中，下列每一術(shù)語有本部分所述相應(yīng)含義。
本發(fā)明中的非特指名詞指一個(gè)或多個(gè)(即至少一個(gè))文中所述物質(zhì)。例如“元素”指一個(gè)或多于一個(gè)元素。
本發(fā)明所用T細(xì)胞“活化”指T細(xì)胞與化合物，分子，或能產(chǎn)生免疫應(yīng)答的細(xì) 胞(如促細(xì)胞分裂素ConA或PHA)接觸時(shí)表面標(biāo)記發(fā)生可測性上調(diào)，例如CD25，艮口 I L2受體，引發(fā)包括p561ck的磷酸化級聯(lián)，引起細(xì)胞因子及白介素的釋放，增加DNA合 成(可通過檢測嵌入原始DNA鏈的3H-胸腺嘧啶水平或通過其他方法測定)并引發(fā)細(xì)胞增殖。
本發(fā)明所用血清素“激動(dòng)劑”指當(dāng)對哺乳動(dòng)物給藥時(shí)可增強(qiáng)、提高或擴(kuò)展血清 素存在或水平的生物學(xué)活性的物質(zhì)成份，此處指與不加該物質(zhì)時(shí)的血清素生物學(xué)活性相 比。
血清素“拮抗劑”是指當(dāng)對哺乳動(dòng)物，如人，給藥時(shí)在可測水平抑制血清素存 在或其水平的生物學(xué)活性的物質(zhì)成份。
血清素“反向激動(dòng)劑”是一種物質(zhì)成份，該成份在對哺乳動(dòng)物給藥時(shí)可檢測到 將血清素能受體介導(dǎo)的信號抑制到其基線水平以下。例如，拮抗劑能阻止配基發(fā)揮其對 受體的陽性信號效應(yīng)，而反向激動(dòng)劑(在本領(lǐng)域也叫做“陰性拮抗劑”)會(huì)將受體介導(dǎo)的 信號抑制到低于平衡水平。也即，在配基不存在的情況下經(jīng)由血清素能受體的信號也可 顯現(xiàn)某一特定可測基線水平，而反向激動(dòng)劑能將此水平減低到基線以下。
本發(fā)明所用術(shù)語“選擇性的激動(dòng)劑”或“選擇性的拮抗劑”指一種化學(xué)制劑， 該制劑與靶血清素受體的親和力至少比與血清素家族受體的其他成員的親和力強(qiáng)5倍以 上。
本發(fā)明所用術(shù)語“緩解”疾病指減輕該疾病一種或多種癥狀的嚴(yán)重程度。
本發(fā)明所用術(shù)語“異源移植”指種內(nèi)任何組織的移植，其中含有免疫標(biāo)記的不 匹配，例如(但不限于)主要組織相容性復(fù)合物(MHC)和/或次要抗原。
本發(fā)明所用術(shù)語“異源移植反應(yīng)”指針對移入受體的非自身組織的任何免疫反 應(yīng)。移植程序包括(但不限于)在諸如骨髓移植及器官移植之類操作中施用非自身細(xì)胞、 組織或器官。
“反義”特指編碼蛋白的雙鏈DNA分子中非編碼的核酸序列，或指與非編碼鏈 完全同源的序列。如本發(fā)明定義的，反義序列與編碼蛋白的雙鏈DNA分子的序列是互補(bǔ)的。反義序列不必獨(dú)與DNA分子編碼鏈的編碼區(qū)互補(bǔ)，反義序列可以與編碼蛋白的DNA 分子的編碼鏈中特定的調(diào)節(jié)序列互補(bǔ)，該調(diào)節(jié)序列控制編碼序列的表達(dá)。
“擴(kuò)增”指任何拷貝多核苷酸序列的方法，從而可使該多核苷酸分子擴(kuò)增到更 多數(shù)目，例如，反轉(zhuǎn)錄、聚合酶鏈反應(yīng)及連接酶鏈反應(yīng)。
本發(fā)明所用術(shù)語“凋亡”指一種活性過程，包括由細(xì)胞外或細(xì)胞內(nèi)信號誘導(dǎo)的 預(yù)成細(xì)胞通路的活化，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。具體來說，細(xì)胞死亡包括在細(xì)胞膜完整的細(xì)胞中 細(xì)胞核片斷化、染色質(zhì)凝聚等現(xiàn)象。
本發(fā)明所用術(shù)語“用藥器”指任何包括(但不限于)皮下注射、吸管之類的儀 器，用于給哺乳動(dòng)物施用本發(fā)明的抑制劑，該抑制劑可抑制血清素與2型血清素受體的 相互作用，如2型血清素受體拮抗劑。
本發(fā)明所用術(shù)語“細(xì)胞周期過程”指任何與細(xì)胞周期及其各種時(shí)期相關(guān)的細(xì)胞 功能或過程。因此細(xì)胞周期過程是指通過細(xì)胞周期任何時(shí)期的，介導(dǎo)或參與細(xì)胞進(jìn)程或 與其相關(guān)的一個(gè)過程。
本發(fā)明所指抑制血清素信號傳遞對細(xì)胞“有害”是指該抑制使細(xì)胞生存力發(fā)生 有害的降低。細(xì)胞生存力可通過本領(lǐng)域熟知的標(biāo)準(zhǔn)方法測定，包括(但不限于)測定生 物分子合成的水平(例如蛋白合成、核酸合成等)、錐蟲藍(lán)排斥水平、MTT還原水平、碘 化丙啶(propidiumiodide)吸收水平、細(xì)胞表面磷脂酰絲氨酸的暴露水平、DNA片斷化和 /或DNA梯形成水平等等。
“疾病”指動(dòng)物的某種健康狀況，其中如動(dòng)物不能維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定且其中若疾 病不能得到改善則動(dòng)物的健康就會(huì)持續(xù)惡化。反之“障礙”指另一種健康狀況，即動(dòng)物 可以維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，但動(dòng)物的健康狀況比不存在該障礙時(shí)略差。如不治療障礙不會(huì)引 起動(dòng)物健康狀況的進(jìn)一步降低。
本發(fā)明所用“實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障”指用標(biāo)準(zhǔn)測定方法檢測(如本發(fā)明所 述、本領(lǐng)域所知或?qū)戆l(fā)展的測定化合物穿透血腦屏障參透性的方法)抑制劑不可在可 測水平穿透血腦屏障。這些測定方法包括(但不限于)測定給動(dòng)物服藥時(shí)的神經(jīng)精神效 應(yīng)。進(jìn)一步，試驗(yàn)法包括測定一定時(shí)間后越過屏障的化合物濃度或穿過本領(lǐng)域所知的血 腦屏障模型的化合物濃度(及其他方法)，從而測定化合物對屏障的參透性。
可以理解用現(xiàn)有技術(shù)可使抑制劑不在可測水平滲透及穿過血腦屏障。進(jìn)一步 說，目標(biāo)抑制劑可用本領(lǐng)域現(xiàn)有技術(shù)進(jìn)行改性而使之不能在可測水平穿透血腦屏障，或 是與未改性前相比以更低的水平穿透血腦屏障。在兩種情況下，不論是化合物喪失在可 測水平穿透血腦屏障的能力或是與改性前相比失掉在較低水平穿透血腦屏障的能力，都 認(rèn)為該化合物已達(dá)到本部分“實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障”的目的。
本文所用術(shù)語“有效量”指抑制劑的量，該量足以調(diào)節(jié)細(xì)胞中經(jīng)由血清素受體 的血清素信號傳遞，使之發(fā)生可測的降低。可用本領(lǐng)域眾所周知的方法檢測血清素信號 的傳遞，例如(但不限于)本發(fā)明其他部分所述方法，包括測定血清素與受體結(jié)合水平和 /或測定細(xì)胞活化水平。
技術(shù)人員應(yīng)理解該量是可變的，實(shí)際上可被眾多因素調(diào)節(jié)，如待治疾病或狀 況、待治哺乳動(dòng)物的年齡、健康及精神狀況等等。一般來說，劑量變動(dòng)于lmg/kg和 25mg/kg之間。在一種實(shí)施方案中，通過靜脈快速注射法給藥。這種給藥方式可確保所有免疫相關(guān)細(xì)胞接觸足夠量的藥，進(jìn)而阻斷它們受體介導(dǎo)的信號。然而，本發(fā)明不局限 于此種給藥方式。
本發(fā)明所用“同源的”指兩個(gè)多聚分子間亞序列的相似度，例如兩個(gè)核酸分子 間，兩個(gè)DNA分子或兩個(gè)RNA分子間或兩個(gè)多肽分子間的相似度。當(dāng)兩個(gè)分子的亞單 位都由相同的單體亞單位組成時(shí)，例如如果兩個(gè)DNA分子在位點(diǎn)都是腺嘌呤，則它們在 該位點(diǎn)是同源的。兩個(gè)序列間的同源性是由匹配或同源位點(diǎn)的數(shù)目直接決定的，例如， 如果兩個(gè)化合物一半位點(diǎn)(如10個(gè)亞單位長的聚合物中的5個(gè)位點(diǎn))是同源的，那么這 兩個(gè)序列是50%同源；如果90%的位點(diǎn)(如10個(gè)亞單位長的聚合物中的9個(gè)位點(diǎn)匹配或 同源)相同，則這兩個(gè)序列分享90%的同源性。例如3，ATTGCC5，和3’ TATGGC 這兩個(gè)DNA序列有50 %的同源性。
本發(fā)明所用術(shù)語“免疫反應(yīng)”指刺激和/或激活免疫細(xì)胞后的可檢測結(jié)果。
本發(fā)明所用術(shù)語“免疫應(yīng)答”指在T細(xì)胞、B細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞(MK)、和/ 或抗原遞呈細(xì)胞中導(dǎo)致效應(yīng)器功能活化和/或啟動(dòng)的過程。因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理 解免疫應(yīng)答包括(但不限于)任何可檢測的輔助性T細(xì)胞或細(xì)胞毒性T細(xì)胞應(yīng)答的抗原特 異活化或異源活化、抗體的產(chǎn)生、過敏反應(yīng)的T細(xì)胞介導(dǎo)活化等。
本發(fā)明所用術(shù)語“免疫細(xì)胞”指任何參與激發(fā)免疫應(yīng)答的細(xì)胞。這些細(xì)胞包括 (但不限于)T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞和抗原遞呈細(xì)胞等。
本發(fā)明所用術(shù)語“抑制血清素與2型血清素受體相互作用的抑制劑”指任何在 可測水平抑制經(jīng)由2型受體信號傳遞的化合物或分子。這些化合物包括血清素受體拮抗 劑、反向激動(dòng)劑等
本發(fā)明所用術(shù)語“說明材料”包括刷品、碟片、圖表或任何表達(dá)媒介，可用于 指示本發(fā)明試劑盒中核酸、多肽和/或化合物的使用方法，使之可有效地緩解或治療多 種本發(fā)明所述疾病或障礙。指導(dǎo)材料可任意或選擇性地描述緩解哺乳動(dòng)物細(xì)胞或組織中 疾病或障礙的一種或多種方法。試劑盒的指導(dǎo)材料可貼附于盛核酸、多肽和/或本發(fā)明 的化合物的容器上或與盛核酸、多肽和/或化合物的容器一起包裝運(yùn)輸。又或者，指導(dǎo) 材料可以與容器分開運(yùn)輸，令使用者可結(jié)合該指導(dǎo)材料使用化合物。
“分離的核酸”指核酸片斷或片段，它們是從原來自然相連部分分離出來的， 例如從正常相連部分(如自然狀況下與片斷相連的基因組序列)脫離下來的DNA片斷。 此術(shù)語也用于指從其他成份上純化下來的核酸，這些成份與該核酸自然結(jié)合，例如細(xì)胞 中與之結(jié)合的RNA、DNA或蛋白質(zhì)。因此本術(shù)語包括結(jié)合入載體、自發(fā)復(fù)制質(zhì)粒、 原核或真核基因組DNA上的重組DNA ；或是以單個(gè)分子存在(如cDNA或是由PCR或 限制酶消化產(chǎn)生的基因組或cDNA片斷)不依賴于其他序列的重組DNA。還包括屬于編 碼其他多肽序列的雜和基因一部分的重組DNA。
本發(fā)明所用術(shù)語“調(diào)節(jié)”免疫應(yīng)答指與不被治療或接觸化合物的哺乳動(dòng)物免疫 應(yīng)答水平相比，和/或與除不接受治療其他方面都相同的哺乳動(dòng)物的免疫應(yīng)答相比，使 免疫應(yīng)答水平發(fā)生可測的升高或降低。本術(shù)語包括擾亂和/或影響天然信號或應(yīng)答，從 而在哺乳動(dòng)物，優(yōu)選人中介導(dǎo)了有益的治療反應(yīng)。
“引物”指可特異性結(jié)合到指定的多核苷酸模板上，從而為合成互補(bǔ)多核苷酸 提供起始點(diǎn)的多核苷酸。當(dāng)將多核苷酸引物置于可誘導(dǎo)合成的環(huán)境中，即存在核苷酸、互補(bǔ)多核苷酸鏈、起聚合作用的試劑(如DNA聚合酶)中時(shí)，此合成反應(yīng)發(fā)生。引物一 般為單鏈，但也可以為雙鏈。引物一般為脫氧核糖核酸，但大量合成及天然形成的引物 被用于多種方案中。引物與模板互補(bǔ)，設(shè)計(jì)引物使之與模板雜交，作為引發(fā)合成的起始 位點(diǎn)，但引物不必反映模板的全部序列。在此情況中，引物與模板的特異性雜交依賴于 雜交條件的嚴(yán)格性?？捎萌绨l(fā)光、放射或熒光部分等標(biāo)記引物并用作可檢測的部分。
“重組多核苷酸”指含非天然相結(jié)合序列的多核苷酸。擴(kuò)增的或組合的重組多 核苷酸可包括于適當(dāng)?shù)妮d體中，且該載體可用于轉(zhuǎn)化合適的宿主細(xì)胞。
重組多核苷酸也可起非編碼功能(如啟動(dòng)子、復(fù)制起點(diǎn)、核糖體結(jié)合位點(diǎn)等)。
包含重組多核苷酸的宿主細(xì)胞為“重組宿主細(xì)胞”。在重組宿主細(xì)胞中包含的 重組多核苷酸的基因表達(dá)產(chǎn)生“重組多肽”。
“重組多肽”是由重組多核苷酸的表達(dá)產(chǎn)生。
“載體”是包含分離的核酸的物質(zhì)成份，可用于將分離的核酸傳遞到細(xì)胞內(nèi) 部。本領(lǐng)域很多已知載體包括(但不限于)線性多核苷酸、與離子或兩親化合物結(jié)合的 多核苷酸、質(zhì)粒及病毒。因此該術(shù)語“載體”包括自主復(fù)制的質(zhì)?；虿《?。該術(shù)語也可 理解為包括有助于將核酸轉(zhuǎn)移到細(xì)胞中的非質(zhì)粒及非病毒化合物，如聚賴氨酸化合物、 脂質(zhì)體等。病毒載體包括(但不限于)腺病毒載體、腺伴隨病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體寸。
“表達(dá)載體”指包含重組多核苷酸，也包含與表達(dá)核酸序列相連的表達(dá)控制序 列的載體。表達(dá)載體包含足夠的用于表達(dá)的順式作用元件；其他表達(dá)所需元素可由宿 主細(xì)胞提供或存在于載體表達(dá)系統(tǒng)。本領(lǐng)域表達(dá)載體包括所有已知載體，如粘粒、質(zhì)粒 (裸露于或包含在脂質(zhì)體中)及結(jié)合重組多核苷酸的病毒。
術(shù)語“血清素家族受體”指可被分類于血清素、腎上腺素能、組胺、褪黑激素 或多巴胺能受體的受體。也即，該受體特異性的與這些分子中的任一成員結(jié)合且不與樣 品中其他分子結(jié)合。
“血清素受體”包括特異性與血清素結(jié)合的多肽。
本發(fā)明所用術(shù)語“血清素信號”指作為受體介導(dǎo)的與血清素相互作用結(jié)果的任 何細(xì)胞內(nèi)生化通路平衡的改變，或是特異性藥物與任何血清素特異性受體相互作用的結(jié) 果，或是兩者一起引起的結(jié)果。
相似地，本發(fā)明所用“血清素的活化”受體指細(xì)胞中血清素與血清素受體的結(jié) 合誘導(dǎo)了細(xì)胞內(nèi)外與此結(jié)合有關(guān)的特定級聯(lián)。
“受體”是與配基特異性結(jié)合的化合物。
本發(fā)明所用術(shù)語“特異性結(jié)合”指受體識別并結(jié)合樣品中的血清素家族蛋白 (即多巴胺能蛋白、腎上腺素能蛋白、組胺、褪黑激素及血清素)，而實(shí)質(zhì)上不識別及結(jié) 合樣品中的其他分子。
本發(fā)明所用術(shù)語“治療”疾病指減少疾病或障礙的頻率，減低動(dòng)物患有的一種 或多種疾病或障礙癥狀的頻率。
璧
本發(fā)明涉及用于調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物免疫應(yīng)答的新方法。本發(fā)明涉及一個(gè)發(fā)現(xiàn)，即用 特異性拮抗劑抑制細(xì)胞中血清素與細(xì)胞上的2型血清素受體相互作用，和/或用反向激動(dòng)劑抑制經(jīng)由2型血清素受體的信號轉(zhuǎn)化可以抑制T細(xì)胞活化。本發(fā)明揭示了抑制多種免 疫疾病、障礙或狀況的方法，即通過使用已知或開發(fā)的2型血清素受體拮抗劑抑制血清 素與2型血清素受體的相互作用，并通過抑制血清素與受體的相互作用阻止或抑制T細(xì)胞 的活化，進(jìn)而可抑制由該相互作用介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。
I.方法
A.調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明包括調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物免疫應(yīng)答的方法。本方法包括因治療需要給哺乳動(dòng)物 施用可抑制血清素與血清素受體間相互作用的抑制劑。因?yàn)楸绢I(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解本發(fā) 明所述教導(dǎo)表明抑制血清素與5-HT受體相互作用會(huì)抑制或阻止含該受體的T細(xì)胞活化。 而后，如本文公開數(shù)據(jù)所詳細(xì)闡述的，T細(xì)胞的抑制會(huì)阻止免疫應(yīng)答的產(chǎn)生。
具體來說，本發(fā)明涉及可用多種抑制血清素與IB型、2型、4型和6型血清素受 體相互作用的抑制劑來抑制此相互作用。也即，基于本文公開數(shù)據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理 解，抑制血清素與IB、2(A、B和/或C)、4和6型受體結(jié)合的化合物包括，但不局限 于，抗體、反義核酸、核酶、小分子、肽模擬物(peptidomimetic)和藥物化合物，或是已 知或是開發(fā)中的抑制血清素與血清素受體相互作用的物質(zhì)。
基于本文公開數(shù)據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，本發(fā)明的抑制劑包括阻止或抑制細(xì) 胞表面上血清素受體結(jié)合血清素的分子和化合物。即，本發(fā)明認(rèn)為，阻止受體表達(dá)使之 不會(huì)呈現(xiàn)在細(xì)胞表面的反義和/或反義分子可作為本發(fā)明的抑制劑。
抑制血清素與1B、2、4或6型血清素受體間相互作用的抑制劑優(yōu)選1、2、4和6 型受體的拮抗劑，如利哌酮、氟奮乃靜、酮色林、米安色林、LY 53857、SB 206553、SB 242084, MDL 11939、SB 216641、美賽西平及其他。此外，基于本文公開數(shù)據(jù)本領(lǐng)域技 術(shù)人員應(yīng)理解，1B、2、4和6型受體拮抗劑包括那些將來發(fā)現(xiàn)的拮抗劑，因?yàn)榧夹g(shù)人員 應(yīng)理解根據(jù)本領(lǐng)域眾所周知的藥理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)鑒別出的任何1B、2、4或6型受體拮抗劑，因 其對血清素與血清素受體相互作用的抑制性可抑制T細(xì)胞活性，進(jìn)而可抑制免疫應(yīng)答， 如其他部分所例證說明的。因此，本發(fā)明不僅局限于在此所述特定的IB、2(A/B/C)、4 和6型受體拮抗劑，而是包括那些本領(lǐng)域所知或?qū)㈤_發(fā)出的拮抗劑。
2型血清素受體拮抗劑可特異于任何一種2A、2B和2C型受體或其任何組合。另 外，本發(fā)明包括不特異的2型受體拮抗劑，其可影響血清素與任何2型受體的結(jié)合。特異 及非特異的2型血清素受體拮抗劑包括(但不限于)利哌酮、米安色林、利坦色林、酮色 林、美西麥角、甲氧禾胺(methoxygamine)、賽庚啶、氯氮平、SB 206553、LY 53857、 MDL 11939、SB 242084,甲麥角林、N_去甲氯氮平、匹侖哌隆、氯氮平N_氧化物、氯 替平、洛沙平、美舒麥角等及其任何組合。
基于本文公開數(shù)據(jù)技術(shù)人員也應(yīng)理解，本發(fā)明包括使用實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障 的化合物。因?yàn)楸绢I(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解由于血清素受體存在于神經(jīng)細(xì)胞而且如本發(fā)明所 揭示的也出現(xiàn)于免疫系統(tǒng)細(xì)胞，包括源于這些細(xì)胞的腫瘤(如多發(fā)性骨髓瘤等)，最好 (但不必)抑制經(jīng)由免疫細(xì)胞上血清素受體的信號傳遞而不影響經(jīng)由神經(jīng)細(xì)胞上血清素受 體的信號傳遞。在這種情況下，最好能使用可抑制信號傳遞但不可穿透血腦屏障進(jìn)而影 響神經(jīng)細(xì)胞上血清素信號傳遞的化合物。
相應(yīng)地，本發(fā)明包括包括使用一種化合物，其抑制經(jīng)由細(xì)胞血清素受體的血清素信號傳遞但不會(huì)大量穿透血腦屏障。這樣的化合物為一種新的化合物，它自始在實(shí)質(zhì) 上不穿透血腦屏障的同時(shí)擁有本發(fā)明所述的其他期望的特性(如影響血清素信號傳遞、 特異性抑制某些類型的血清素受體、誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡、調(diào)節(jié)細(xì)胞的免疫應(yīng)答等)?；蛘?， 基于本文提供的技術(shù)，技術(shù)人員應(yīng)該理解本發(fā)明包括這樣的化合物可抑制血清素信號 傳遞但穿透血腦屏障，而后經(jīng)過改性使其穿透屏障的能力減低或優(yōu)選消失的化合物。
基于本文公開數(shù)據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，改性化合物影響其穿透血腦屏障的 方法是本領(lǐng)域所熟知的，同時(shí)本領(lǐng)域教導(dǎo)了用于測定物質(zhì)穿透屏障能力的多種方法。本 文公開了這樣一種方法，即將多種側(cè)基加入化合物(如氟奮乃靜)，從而使改性后的氟奮 乃靜穿透血腦屏障的能力降低。本文公開了改性后的氟奮乃靜化合物，命名為如QSS-5 和QSS-12，但此應(yīng)用決不局限于這些或任何其他已知血清素抑制劑的特殊衍生物。反 之，本發(fā)明包括任何有本發(fā)明抑制劑所期望的免疫調(diào)節(jié)特性且同時(shí)有期望的較低的穿透 血腦屏障能力的化合物。生產(chǎn)和鑒定有這些特性的化合物是本領(lǐng)域的常規(guī)方法，如用于 評估化合物穿透血腦屏障的滲透的測定法。同產(chǎn)生有期望特性的目標(biāo)化合物的方法一 樣，這些測定法例舉于本發(fā)明。但是，本發(fā)明決不局限于這些或任何其他方法；而是包 括產(chǎn)生和鑒定實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障但仍然抑制經(jīng)由血清素受體的血清素信號傳遞的化 合物的方法，如那些本發(fā)明所公開的、本領(lǐng)域所熟知的或?qū)頃?huì)發(fā)展出的方法。
此外，基于本文公開數(shù)據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員能容易的生產(chǎn)及鑒定新的化合物，該 化合物可抑制血清素信號傳遞但實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障，而鑒定這些新化合物的方法在 本發(fā)明其他部分有述，且通過鑒別及生成這樣的化合物，如(但不限于)改性后的氟奮乃 靜酚噻嗪衍生物QSS-5和QSS-12，例舉了實(shí)行這些方法的成功簡化例證?；诒疚牡?公開，本領(lǐng)域技術(shù)人員能鑒定本發(fā)明的其他化合物，而且技術(shù)典型的涉及這些實(shí)驗(yàn)，不 需要?jiǎng)?chuàng)造性勞動(dòng)。
總之，本發(fā)明包括使用及鑒別可抑制血清素信號傳遞并且實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏 障的化合物。因此，下述方法都包括使用這樣的抑制劑。
此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解本發(fā)明包括抑制經(jīng)由任何已知或?qū)頃?huì)被鑒定的 血清素受體的血清素介導(dǎo)的信號傳遞，其中抑制血清素信號會(huì)影響細(xì)胞生長、分裂、存 活力、凋亡等，以及其中細(xì)胞參與或介導(dǎo)免疫應(yīng)答。因此，本發(fā)明不局限于對經(jīng)由1B、 2、4和6型血清素受體信號傳遞的抑制；而是包括(但不限于)抑制經(jīng)由血清素受體的 信號傳遞，其中該抑制作用抑制免疫應(yīng)答。
基于本文公開數(shù)據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，可通過使用已知或?qū)l(fā)展出的抗 體、反義核酸、核酶、小分子、肽模擬物和藥物化合物等介導(dǎo)這樣的抑制，該作用可抑 制血清素與1型血清素受體的相互作用。也即，本發(fā)明包括使用1型受體抑制化合物， 如(但不限于)SB-216641，其抑制IB型受體，和BRL-15572，其選擇性抑制ID型受體 (參見 Price 等，1997，Naunyn-Schmiedeberg‘ s Arch.Pharmacol.356 312-320)。因?yàn)椋?如本發(fā)明其他部分公開數(shù)據(jù)所證實(shí)的，對經(jīng)由IB型受體介導(dǎo)的血清素信號傳遞的抑制可 抑制細(xì)胞生長，且更優(yōu)選如DNA-梯所證實(shí)的凋亡，其與細(xì)胞大小的可測增加相關(guān)。
然而，本發(fā)明并不局限于這些或任何其他血清素受體抑制劑。具體來說，如本 發(fā)明前面其他部分所論述的，這些化合物包括已知化合物及將來開發(fā)的可抑制血清素與 血清素受體相互作用的化合物。已知血清素受體激動(dòng)劑及拮抗劑的列表可在英國Tocris 商業(yè)公共網(wǎng)站獲得，該網(wǎng)站包括大量GAXeraiet對多種血清素受體已知特性的評論， 討論多種影響它們生物學(xué)活性的化合物(Kennet，發(fā)表于1997年5月，universal resource locator at Tocris company website, UnitedKingdom)。
—旦結(jié)合本文公開知識，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，本發(fā)明包含使用特異性結(jié)合 某受體的抗體來抑制血清素與該血清素受體的結(jié)合。特異性與血清素受體結(jié)合的抗體， 包括那些與每種類型的受體結(jié)合的抗體，是本領(lǐng)域眾所周知的和/或可由技術(shù)人員通過 標(biāo)準(zhǔn)方法生產(chǎn)。
技術(shù)人員應(yīng)進(jìn)一步理解抗體可作為蛋白、編碼蛋白的核酸或兩者同時(shí)給藥。 即，本領(lǐng)域有許多眾所周知的載體，可以使蛋白(包括抗體)進(jìn)入細(xì)胞或組織。因此， 本發(fā)明包括施用特異性與血清素受體結(jié)合的抗體從而抑制血清素與該受體的結(jié)合，并且 該抗體可直接給藥進(jìn)入細(xì)胞或是通過對細(xì)胞施用編碼該抗體的核酸使該抗體進(jìn)入細(xì)胞， 本發(fā)明也包括抗體的這些給藥方法。
一般來說，抗體不易穿透血腦屏障。因此技術(shù)人員應(yīng)理解使用抗體也提供了這 樣一種優(yōu)勢，即在抑制免疫細(xì)胞血清素信號傳遞的同時(shí)，由于血腦屏障使抗體無法接近 神經(jīng)細(xì)胞，因而抗體不會(huì)在可測水平影響神經(jīng)細(xì)胞中的信號傳遞。
此外，基于本文公開數(shù)據(jù)技術(shù)人員應(yīng)理解，本發(fā)明包括通過阻止細(xì)胞中血清素 受體的表達(dá)(如不阻止，該細(xì)胞會(huì)表達(dá)受體)來抑制血清素信號的傳遞，否則該信號會(huì)經(jīng) 由血清素受體傳遞。例如，技術(shù)人員應(yīng)理解本發(fā)明包括對細(xì)胞施用核酶或反義核酸，從 而抑制細(xì)胞中的血清素受體表達(dá)，如下簡述，其中設(shè)計(jì)和使用這些分子來抑制細(xì)胞中目 標(biāo)蛋白表達(dá)的方法是本領(lǐng)域眾所周知的。
反義分子及其在抑制基因表達(dá)方面的應(yīng)用是本領(lǐng)域眾所周知的(參見， Cohen, 1989, In Oligodeoxyribonucleotides， AntisenseInhibitors of Gene Expression, CRC Press)。 反義核酸為至少與特定mRNA分子的一部分互補(bǔ)的DNA或RNA分子 (Weintraub, 1990，Scientific American 262 40)。細(xì)胞中，反義核酸雜交到相應(yīng)的 mRNA上形成雙鏈分子，從而抑制基因的轉(zhuǎn)錄。
用反義方法抑制基因轉(zhuǎn)錄是本領(lǐng)域所熟知，如Marcus-Sakura曾有所描述 (1988，Anal.Biochem.172 觀9)。這些反義分子可如:Inoue所述的，用編碼反義分子的 DNA的遺傳表達(dá)來提供給細(xì)胞(1993，美國專利5,190,931)。
或者，可合成反義分子而后提供給細(xì)胞。優(yōu)選的反義寡聚體為10至100，且優(yōu) 選是15至50個(gè)核苷酸，因?yàn)樗鼈內(nèi)菀缀铣汕乙子趯?dǎo)入靶細(xì)胞。本發(fā)明所用的合成反義 分子包括本領(lǐng)域熟知的寡核苷酸衍生物，其與未改性的寡核苷酸相比它們的生物學(xué)活性 得以提高(參見Cohen，見上；Tullis，1991，美國專利5,023,M3，在此全文引用)。
核酶及它們在抑制基因表達(dá)方面的應(yīng)用也是本領(lǐng)域所熟知的(參見，Cech 等，1992，J.Biol.Chem.267 17479-17482 ； Hampel 等，1989，Biochemistry 28 4929-4933 ； Ecksteta 等，國際公開文本 W092/07065 ； Altman 等，美國專利 5,168,053， 在此全文引用)。核酶是RNA分子，可以類似于DNA限制性內(nèi)切酶的特性特異性剪切 其他單連RNA。通過改造編碼這些RNA的核酸序列，可將分子設(shè)計(jì)成識別RNA分子中 特異核酸序列并能將其剪切(Cech，1988，J.Amer.Med.Assn.260 3030)。此方法的主要 優(yōu)勢在于其序列特異性，只有含特殊序列的mRNAs才會(huì)失活。
核酶有兩種基本類型，即，四膜蟲型(Hasselhoff，1988，Nature334 585)及錘 頭型。四膜蟲型核酶識別的序列為四堿基長，而錘頭型核酶識別11-18堿基長的序列。 序列越長，靶mRNA種類中序列專一性發(fā)生的可能就越大。因此，錘頭型核酶比四膜蟲 型核酶更適用于使特殊mRNA種類失活，而且18堿基識別序列比短些的識別序列更優(yōu) 選，因?yàn)槎绦蛄锌赡軙?huì)在多種不相關(guān)的mRNA分子中隨機(jī)存在。除對細(xì)胞施用抗體抑制血清素與細(xì)胞表面血清素受體的相互作用外，本發(fā)明包 括施用特異性與目標(biāo)血清素受體結(jié)合的抗體或編碼該抗體的核酸，其中該分子進(jìn)一步包 含細(xì)胞內(nèi)保留序列，因此抗體可與血清素受體結(jié)合并阻止其在細(xì)胞表面的表達(dá)。這些抗 體，通常表示為“細(xì)胞內(nèi)抗體”是本領(lǐng)域所熟知的，如Marasco(美國專利6,004,490)和 Beerli 等所描述的(1996，Breast Cancer Research and Treatment38 11-17)。因此，本發(fā) 明包括含抑制血清素與目的受體結(jié)合的方法，其中受體呈現(xiàn)在細(xì)胞表面(如抗體、化學(xué) 化合物、小分子、肽模擬物、藥物等)，本發(fā)明也包括抑制結(jié)合的方法，包括抑制受體呈 現(xiàn)在細(xì)胞表面(如核酶、反義分子、細(xì)胞內(nèi)抗體等)，并且包括諸如將來發(fā)展的抑制細(xì)胞 表面上血清素與血清素受體間配基受體相互作用的方法。基于本文公開的數(shù)據(jù)技術(shù)人員應(yīng)理解，抑制血清素與(1B、2、4或6型)血清素 受體相互作用的抑制劑可與任何其他抑制劑一起給藥。另外，本發(fā)明包括用至少一種血 清素抑制劑(如抗體、反義核酸、核酶、肽模擬物、血清素受體拮抗劑等)與其他免疫調(diào) 節(jié)劑一起給藥(其之前及之后或同時(shí)給藥)，免疫調(diào)節(jié)劑為(但不限于)基因表達(dá)調(diào)節(jié)劑 (如抑制白介素2表達(dá)的糖皮質(zhì)素等)、為已知誘變素的烷化劑(如環(huán)磷酰胺)、作用于神 經(jīng)鈣蛋白和JNK/p38激酶通路和細(xì)胞周期蛋白激酶級聯(lián)的激酶及磷酸酶的抑制劑(如環(huán) 孢霉素A、他克莫絲[FK506]及雷怕霉素)、作為鳥嘌呤核苷酸合成的抑制劑并用于阻止 異源排斥及治療進(jìn)行性排斥的嘌呤從頭合成抑制劑(如麥考酚酯motefil)、用于治療風(fēng)濕 性關(guān)節(jié)炎患者的嘧啶從頭合成的抑制劑(如雷抑素)等。 因此，本發(fā)明包括至少用一種 可抑制血清素與(1B、2、4或6型)血清素受體相互作用的抑制劑與傳統(tǒng)免疫調(diào)節(jié)物和化 合物一同給藥。此外，實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障的抑制劑可與穿透屏障的抑制劑一同給藥，并且 本發(fā)明決不局限于穿透或不可穿透血腦屏障抑制劑的結(jié)合。一旦結(jié)合本發(fā)明所授知識，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，既然免疫細(xì)胞(如淋巴細(xì) 胞，更具體來說如T細(xì)胞、或抗原遞呈細(xì)胞，如B細(xì)胞或巨噬細(xì)胞)上血清素與2型血 清素受體的結(jié)合是受體活化所必需的，而后受體活化介導(dǎo)T細(xì)胞活化，那么抑制血清素 與受體的相互作用可調(diào)節(jié)這些免疫細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。此外，本文公開數(shù)據(jù)表明抑制 經(jīng)由1B、4或6型血清素受體的血清素信號的傳遞可抑制表達(dá)這些受體的免疫細(xì)胞的活 化，抑制血清素與這些受體的結(jié)合可抑制細(xì)胞活化，因此也抑制了細(xì)胞的免疫反應(yīng)，進(jìn) 而抑制由該細(xì)胞產(chǎn)生的免疫應(yīng)答。也即，抑制免疫細(xì)胞上由血清素受體介導(dǎo)的相互作用 會(huì)影響由所影響的免疫細(xì)胞產(chǎn)生的免疫應(yīng)答(即免疫反應(yīng))(如由受體/配基結(jié)合介導(dǎo)的 有絲分裂應(yīng)答受抑制，從而T細(xì)胞增殖不發(fā)生，并且/或者發(fā)生凋亡等)，因此相對于拮 抗劑不存在而其他方面相同的細(xì)胞所產(chǎn)生的免疫應(yīng)答，該細(xì)胞的應(yīng)答、免疫或其他方面 發(fā)生可測的增加或減少。本文公開數(shù)據(jù)清楚表明不論在活化反應(yīng)的任何階段，不論是由 異源刺激或是有絲分裂刺激引發(fā)，抑制由1B、2、4和6型5HT受體介導(dǎo)的信號可導(dǎo)致應(yīng)答的立即停止。因此，本文公開數(shù)據(jù)充分證實(shí)了一種抑制哺乳動(dòng)物(優(yōu)選人)中免疫應(yīng)答的方法，因?yàn)橐种蒲逅嘏c(IB、2A、2B、2C、4和/或6型)血清素受體的結(jié)合可抑制免疫 細(xì)胞活性，因此抑制該細(xì)胞引起的免疫反應(yīng)，進(jìn)而抑制該細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。相似地，本發(fā)明包括一種可抑制由免疫細(xì)胞引起的免疫反應(yīng)的方法。因?yàn)?，?本文其他部分詳細(xì)說明的，抑制免疫細(xì)胞上血清素與血清素受體的結(jié)合可抑制該細(xì)胞活 化，進(jìn)而與不抑制細(xì)胞血清素結(jié)合時(shí)相比其免疫反應(yīng)受抑制，和/或與其中除血清素與 血清素受體的結(jié)合不被抑制外其他方面都相同的細(xì)胞相比其免疫反應(yīng)受抑制。相同的，基于本文公開數(shù)據(jù)技術(shù)人員應(yīng)理解，本發(fā)明包括調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物免疫應(yīng) 答的方法，此處免疫應(yīng)答是由血清素信號活化的免疫細(xì)胞所介導(dǎo)的。因?yàn)?，如本文前?其他部分所述，免疫細(xì)胞活化需要血清素與其相關(guān)IB、2A、2B、2C、4和/或6型受體 結(jié)合，因此抑制該結(jié)合就抑制了活化，進(jìn)而阻止了細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。因此，本領(lǐng)域 技術(shù)人員應(yīng)理解抑制血清素信號(可由本文其他部分詳述的多種方法實(shí)現(xiàn))可抑制需要該 信號的免疫應(yīng)答的產(chǎn)生。此外，如本文前面其他部分所揭示的，該方法包括使用實(shí)質(zhì)上 不穿透血腦屏障的抑制劑。此外，基于本文公開數(shù)據(jù)技術(shù)人員應(yīng)理解，本發(fā)明包括抑制T細(xì)胞上血清素受 體活化介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的方法。即，如本文前面其他部分所述，抑制免疫細(xì)胞(優(yōu)選T 細(xì)胞)上血清素與血清素受體(如IB、2A、2B、2C、4和6型受體)的結(jié)合可抑制該細(xì) 胞活化，并進(jìn)而抑制該細(xì)胞引起的免疫反應(yīng)及該細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。因此基于本文公 開數(shù)據(jù)技術(shù)人員應(yīng)理解，本發(fā)明包括這樣的方法。本發(fā)明也包括抑制哺乳動(dòng)物(優(yōu)選人)的免疫細(xì)胞活化的方法，其中該活化由 細(xì)胞上的血清素受體活化所介導(dǎo)。再次，正如本文其他部分詳細(xì)敘述的，本文公開數(shù)據(jù) 首次證明抑制經(jīng)由免疫細(xì)胞上IB、2(A/B/C/)、4或6型血清素受體的血清素信號傳遞 抑制該細(xì)胞活化，并因此也抑制了該細(xì)胞本應(yīng)產(chǎn)生的免疫應(yīng)答。如本文其他部分所詳述 的，抑制血清素信號的方法或是本文所描述的或是本領(lǐng)域熟知的，且包含在本發(fā)明中。 再次，本文公開的每種方法都包括使用實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障的抑制劑?；诒疚墓_數(shù)據(jù)技術(shù)人員應(yīng)理解，此處公開的方法用于抑制任何對哺乳動(dòng)物 不利的免疫應(yīng)答。這些多余的免疫應(yīng)答包括(但不限于)與疾病、障礙或狀況相關(guān)的免 疫應(yīng)答，包括二級免疫應(yīng)答、自身免疫應(yīng)答、異源移植排斥應(yīng)答等。因此，本發(fā)明包括抑制哺乳動(dòng)物二級免疫應(yīng)答的方法。即當(dāng)此二級免疫應(yīng)答 由需血清素信號活化的細(xì)胞所介導(dǎo)時(shí)，可如此文它處所述通過抑制細(xì)胞上血清素與1B、 2、4和6型血清素受體的結(jié)合來抑制血清素信號。該抑制進(jìn)而抑制細(xì)胞活化，然后抑制 該細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，如(但不限于)二級免疫應(yīng)答、CD8+細(xì)胞介導(dǎo)的應(yīng)答和/或 CD4+細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。抑制血清素受體介導(dǎo)信號的化合物或分子(如，像血清素受體拮抗劑或反向激 動(dòng)劑之類的藥物化合物)可給藥于細(xì)胞、組織或動(dòng)物，或是用于抑制細(xì)胞上血清素與 1B、2、4和/或6型血清素受體的相互作用。不論該抑制劑為抗體或1B、2、4和/或 6型血清素受體拮抗劑，此處所描述的安全有效的抑制劑給藥方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟 知的。例如，血清素拮抗劑的給藥法參照標(biāo)準(zhǔn)文獻(xiàn)描述。即，許多影響血清素的制劑的給藥法在 Physician，s Desk Reference (1996 版，Medical Economics Co., Montvale, NJ)
中都有詳述，其公開內(nèi)容在此全文引用。 此外，血清素受體抑制劑的給藥參數(shù)是藥學(xué)領(lǐng)域所熟知的且在此不必重復(fù)。組合物也可用于治療由于受體表達(dá)改變所介導(dǎo)的疾病、障礙或狀況，因此減低 或增加受體表達(dá)，或改變細(xì)胞、組織及動(dòng)物中的蛋白水平對動(dòng)物是有益的。即，當(dāng)動(dòng)物 的疾病、障礙或狀況是由血清素表達(dá)水平或蛋白水平改變所介導(dǎo)或與之相關(guān)時(shí)，可用該 組合物調(diào)節(jié)受體的表達(dá)或蛋白水平。為對哺乳動(dòng)物給藥，可將化合物、抑制血清素與1B、2、4和/或6型血清素受 體結(jié)合的抑制劑、多肽、或是編碼多肽的核酸、和/或與其全部或部分互補(bǔ)的反義核酸 混懸在任何可藥用載體中，如HEPES緩沖的pH約7.8的鹽水中。其他可藥用載體包括(但不限于)甘油、水、鹽水、乙醇和其他可藥用的鹽 溶液，如磷酸鹽及有機(jī)酸鹽。這些及其他可藥用載體在Remington’ s Pharmaceutical Sciences中有所描述(1991，MackPublication Co., New Jersey)，其公開內(nèi)容在此全文引 用。藥學(xué)組合物可以無菌注射液、油懸浮液或溶液的形式制備、包裝或出售。此懸 浮液或溶液可根據(jù)已知技術(shù)制備，除活性成份外還可包括附加成份，如分散劑、濕潤劑 或本文所述懸浮劑。這些無菌注射制劑可通過合適的非毒性腸道外可用的稀釋劑或溶劑 制備，如水或1，3-丁二醇。其他適宜的稀釋劑及溶劑包括(但不限于)Ringer溶液、等 滲氯化鈉溶液和合成的單/雙甘油酯之類的脂肪油。本發(fā)明所用藥物組合物可以適于經(jīng)口、直腸、陰道、腸胃外、局部、肺部、鼻 內(nèi)、頰、眼部或其他給藥途徑的制劑形式施用、制備、包裝和/或銷售。其他制劑包括 投射的毫微粒、脂質(zhì)體制劑、含活性成份的再封紅細(xì)胞及免疫學(xué)基礎(chǔ)的制劑。本發(fā)明組合物可由多種途徑給藥，包括(但不限于)經(jīng)口、直腸、陰道、腸胃 夕卜、局部、肺部、鼻內(nèi)、頰、或眼部給藥。這些給藥方法技術(shù)人員是易于理解的，并取 決于多種因素，包括待治疾病類型及程度、待治動(dòng)物或人的類型及年齡等。本發(fā)明方法所用藥物組合物可通過口服固體制劑、眼部用藥、栓劑、氣霧劑、 局部用藥或其他類似制劑給藥。除如硫酸乙酰肝素或其生物學(xué)等效物之類的化合物，這 些藥物組合物可包括可藥用載體及其他已知可用于提高或促進(jìn)藥物施用的成份。其他可 能的制劑，如毫微粒、脂質(zhì)體、再封紅細(xì)胞及免疫學(xué)基礎(chǔ)的系統(tǒng)也可根據(jù)本發(fā)明的方法 用于受體蛋白和/或編碼該蛋白的核酸的施用。如現(xiàn)在所述，用本文所述任何方法鑒別的化合物都可制成制劑并給哺乳動(dòng)物施 用以治療免疫系統(tǒng)狀況(即自身免疫疾病及異源排斥)。本發(fā)明包括制備和使用藥學(xué)組合物，其包括用于治療多種病癥，如T細(xì)胞淋巴 瘤、自身免疫病癥(見下文)、由實(shí)體器官移植引起的并發(fā)癥、皮膚移植排斥反應(yīng)、骨髓 移植中的移植物抗宿主病等。此種藥物組合物可以適于對目標(biāo)個(gè)體給藥的形式只包含活性成份，或者該藥物 組合物可包括活性成份及一種或多種可藥用載體、一種或多種附加成份或一些以上物質(zhì) 的組合。活性成份可以以生理適宜的酯或鹽的形式存在于藥物組合物中，如結(jié)合以本領(lǐng) 域熟知的生理適宜的陽離子或陰離子。
本文所用術(shù)語“可藥用載體”是指一種化學(xué)組分，活性成份可與之結(jié)合，且這 種結(jié)合可將該活性成份給藥于目標(biāo)個(gè)體。本文所用術(shù)語“生理適宜的”酯或鹽，指活性成份的酯或鹽形式，其與該藥物組合物中其他任何成份相容，其對該組合物給藥的目標(biāo)個(gè)體無毒害作用。本文所述藥物組合物制劑可由任何藥學(xué)領(lǐng)域已知或今后開發(fā)的方法制備。一般 來說，這樣的制備方法包括將活性成份與載體或一種/多種其他附加成份結(jié)合，然后如 需要，可將產(chǎn)品制?；虬b成所需的單或多劑量單位。盡管此處提供的藥物組合物的說明主要針對那些適于對人給藥的藥物組合物， 技術(shù)人員應(yīng)理解這些組合物通常也適于對各種動(dòng)物給藥。改性可用于對人給藥的藥物組 合物以適于對多種動(dòng)物給藥是眾所周知的，如需要，獸醫(yī)藥理學(xué)家可用很常規(guī)的實(shí)驗(yàn)設(shè) 計(jì)并實(shí)行此種改性。本發(fā)明中藥物組合物的給藥目標(biāo)個(gè)體預(yù)期包括(但不限于)人和其 他靈長類、哺乳動(dòng)物(包括如牛、豬、馬、羊、貓和狗等商業(yè)相關(guān)的哺乳動(dòng)物)。本發(fā)明方法中使用的藥物組合物可以以適宜于經(jīng)口、直腸、陰道、腸胃外、局 部、肺部、鼻內(nèi)、頰部、眼部或其他給藥途徑的制劑形式制備、包裝或銷售。其他制劑 包括投射的毫微粒、脂質(zhì)體制劑、含活性成份的再封紅細(xì)胞及免疫學(xué)基礎(chǔ)的制劑。本發(fā)明的藥物組合物可以以單劑量單位或以多個(gè)單劑量單位形式制備、包裝或 銷售。本文所用“單位劑量”指含預(yù)定量活性成份的不連續(xù)量的藥物組合物?；钚猿?份量通常等于給目標(biāo)個(gè)體施用的活性成份劑量或此劑量的一個(gè)合適的部分量，例如此劑 量的一半或三分之一。本發(fā)明藥物組合物中的活性成份、可藥用載體及任何附加成份的相關(guān)量會(huì)根據(jù) 被治療個(gè)體的特性、大小及狀況變動(dòng)，且根據(jù)該組合物的給藥方式變動(dòng)。例如，組合物 可含0.1%至100% (w/w)的活性成份。除活性成份外，本發(fā)明的藥物組合物可進(jìn)一步包括一或多種附加藥物活性劑。 特殊預(yù)期的附加物包括抗吐藥及清除劑，如氰化物和氰酸鹽清除劑。本發(fā)明藥物組合物的控制或緩釋制劑可由傳統(tǒng)技術(shù)制得。本發(fā)明適于口服給藥的藥物組合物制劑可以以單個(gè)固體劑量單位的形式制備、 包裝或出售，包括(但不限于)片劑、硬或軟膠囊、扁囊劑、含片或錠劑，每種形式都包 括預(yù)定量的活性成份。其他適宜口服給藥的制劑包括(但不限于)粉或粒劑、水或油懸 浮液、水或油溶液或乳劑。本文所用“油”液，指由含碳液體分子組成且與水相比極性較弱的液體。包含活性成份的片劑可由活性成份任選與一種或多種附加成份一起壓制或模制 而得。壓制片劑可用適當(dāng)?shù)脑O(shè)備壓制存在于流動(dòng)粉狀或粒狀制品中的活性成份(任選與 一種或多種粘合劑、潤滑劑、賦形劑、表面活性劑及分散劑混和)而制備。模制片可 在適當(dāng)?shù)脑O(shè)備中將活性成份、藥學(xué)適宜溶媒及至少足以濕潤該混合物的液體一起灌模制 得。用于生成片劑的可藥用賦形劑包括(但不限于)惰性稀釋劑、?；氨澜鈩?、粘合 齊U、和潤滑劑。已知的分散劑包括(但不限于)馬鈴薯淀粉和鈉淀粉乙交酯。已知表面 活性劑包括(但不限于)十二烷基硫酸鈉。已知的稀釋劑包括(但不限于)碳酸鈣、碳酸 鈉、乳糖、微晶纖維素、磷酸鈣、磷酸氫鈣、和磷酸鈉。已知的?；氨澜鈩┌?但 不限于)玉米淀粉和海藻酸。已知的粘合劑包括(但不限于)明膠、阿拉伯膠、預(yù)膠化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和羥丙基甲基纖維素。已知潤滑劑包括(但不限于)硬脂 酸鎂、硬脂酸、硅石及滑石。片劑可不被包衣或可用已知方法包衣以延遲在目標(biāo)個(gè)體腸胃道中的裂解，從而 使活性成份得以緩釋并延緩吸收。例如可用單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯包衣片 齊U。此外，可用美國專利4,256,108; 4,160,452中描述的方法包衣片劑以形成控制滲透的 釋放片劑。為使藥物精美可口，片劑可進(jìn)一步包含甜味劑、調(diào)味劑、著色劑、防腐劑或 它們的混合物。含活性成份的硬膠囊可用生理可降解的組分制得，如明膠。這些硬膠囊包含活 性成份，且可進(jìn)一步包含附加劑，如惰性固體稀釋劑，如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土。含活性成份的軟明膠膠囊可用生理可降解的組分制得，如明膠。這些軟膠囊包 含的活性成份可與一些水或油介質(zhì)混合在一起，如花生油、液體石蠟或橄欖油。適于口服的含本發(fā)明藥物組合物的液體制劑可以液體或干產(chǎn)品形式(使用時(shí)用 水或其他適宜溶劑重構(gòu))制備、包裝及銷售。液體懸浮液可用傳統(tǒng)方法制備，使活性成份懸浮于水或油溶媒中。水溶媒包 括，水和等滲鹽水。油溶媒包括例如杏仁油、油脂、乙醇、如花生、橄欖、芝麻或椰子 油等的植物油、分餾的植物油及如液體石蠟之類的礦物油。液體懸浮液可進(jìn)一步包括一 種或多種附加成份，包括(但不限于)懸浮劑、分散劑或濕潤劑、乳化劑、粘滑劑、防 腐劑、緩沖液、鹽、調(diào)味劑、著色劑及甜味劑。油懸浮液可進(jìn)一步包括增厚劑。已知 的懸浮劑包括(但不限于)山梨醇糖漿、氫化的可食脂、海藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、 黃蓍樹膠、阿拉伯樹膠及纖維素衍生物，如羥甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基 纖維素。已知的分散或濕潤劑包括(但不限于)天然磷脂(如卵磷脂)、烯基氧化物與 脂肪酸的縮合物、與長鏈脂肪醇的縮合物、與脂肪酸和己糖醇衍生的偏酯的縮合物、與 脂肪酸和己糖醇酐衍生的偏酯的縮合物(分別例如，聚氧乙烯硬脂酸酯、heptadecaethyl eneoxycetanok聚氧乙烯山梨醇單油酸酯及聚氧乙烯山梨聚糖單油酸酯)。已知的乳化劑 包括(但不限于)卵磷脂及阿拉伯膠。已知的防腐劑包括(但不限于)甲基、乙基或正 丙基-對羥基苯甲酸鹽、抗壞血酸及山梨酸。已知的甜味劑包括(但不限于)甘油、丙 二醇、山梨醇、蔗糖及糖精。用于油懸浮液的已知增稠劑包括(但不限于)蜂蠟、硬石 蠟及鯨蠟醇。含活性物質(zhì)的水或油液體溶液可用與液體懸浮液相同的方式制備，它們的主要 區(qū)別在于活性物質(zhì)是溶解而不是懸浮于其中。本發(fā)明藥物組合物的液體溶液可包括在液 體懸浮液部分所述的任何成份，可理解不必加懸浮劑幫助活性物質(zhì)溶解在溶劑中。水溶 劑包括水和等滲鹽等。油溶劑包括杏仁油、油酯、乙醇、植物油，如花生油、橄欖油、 芝麻油或椰子油，分餾的植物油及礦物油，如液體石蠟。本發(fā)明藥物制品的粉末及粒狀制劑可用已知方法制得。這些制劑可直接對目標(biāo) 個(gè)體給藥，它們可用于制得，例如，片劑、填充膠囊或通過加入水或油溶媒制成水或油 懸浮液或溶液。這些制劑每個(gè)都可進(jìn)一步包含一或多種分散劑或濕潤劑、懸浮劑及防腐 齊 。這些制劑中也可包括其他賦形劑，如填料及甜味劑、調(diào)味劑或著色劑。 本發(fā)明藥物組合物也可以水包油乳劑或油包水乳劑的形式制備、包裝或銷售。 油相可為植物油，如橄欖油或花生油、礦物油，如液體石蠟或這些物質(zhì)的混合物。這些組分可進(jìn)一步包括一或多種乳化劑，如阿拉伯膠或黃蓍樹膠之類的天然樹膠、大豆或卵 磷脂之類的天然磷脂、酯或由脂肪酸及己糖醇酐的結(jié)合物衍生的偏酯，如山梨聚糖單油 酸酯及這些偏酯與環(huán)氧乙烷的縮合物，如聚氧乙烯山梨聚糖單油酸酯。這些乳劑也可包 含附加成份，如甜味劑或調(diào)味劑。本發(fā)明藥物組合物可在適于直腸給藥的制劑中制備、包裝或出售。該組合物可 制成栓劑、保留灌腸劑及直腸或結(jié)腸沖洗液的形式。栓劑可通過將活性成份與非刺激性藥物適宜賦形劑混合而制得，該賦形劑在常 溫(即約20°C )，為固體，在直腸溫度時(shí)(即健康人的約為37°C )是液體。適當(dāng)?shù)乃幬?適宜賦形劑包括(但不限于)可可脂、聚乙二醇及多種甘油酯。栓劑可進(jìn)一步包括多種 附加成份，包括(但不限于)抗氧化劑和防腐劑。用于直腸或結(jié)腸沖洗的保留灌腸劑或溶液可通過將活性成份及藥物適宜的液體 溶媒混合制得。如本領(lǐng)域所熟知，灌腸劑可用于給藥并可包裝在適合于目標(biāo)個(gè)體直腸結(jié) 構(gòu)的傳送設(shè)備上。灌腸劑可進(jìn)一步包含多種附加劑，包括(但不限于)抗氧化劑及防腐 劑。本發(fā)明藥物組合物可以在適于陰道給藥的制劑中制備、包裝或銷售。這些組分 可以栓劑、或浸漬或包衣的可插入陰道的物質(zhì)的形式，如衛(wèi)生栓、灌洗劑、用于陰道沖 洗的膠、乳液或溶液。

用化學(xué)組分浸漬或包被物質(zhì)的方法是本領(lǐng)域所熟知的，包括(但不限于)將化 學(xué)組分沉淀或結(jié)合到材料表面的方法、在材料合成時(shí)將化學(xué)物質(zhì)結(jié)合到其結(jié)構(gòu)中的方法 (如結(jié)合到生理可降解的物質(zhì)上)，及用吸收性材料吸收水或油溶液，再將其干燥/或不 用將其干燥。用于陰道沖洗的灌洗劑或溶液可通過將活性成份及藥物適宜液體溶媒混合制 得。如本領(lǐng)域所熟知的，灌洗劑可用在適合于目標(biāo)個(gè)體陰道結(jié)構(gòu)的的傳送設(shè)備給藥并可 包裝其中。灌洗劑可進(jìn)一步包含多種附加劑，包括(但不限于)抗氧化劑、抗生素、抗 真菌劑及防腐劑。如本文所用，藥物組合物的“腸胃外給藥”包括任何以目標(biāo)個(gè)體組織的物理刺 口為特點(diǎn)，并將藥物組合物經(jīng)由該刺口給藥的給藥途徑。因此，腸胃外給藥包括(但不 限于)通過注射該組合物給藥、通過手術(shù)切口給藥、通過組織穿透非手術(shù)傷口給藥等。 具體來說，腸胃外給藥預(yù)期包括(但不限于)皮下、腹腔內(nèi)、肌內(nèi)、胸內(nèi)注射，及腎透析 輸液術(shù)。適于腸胃外給藥的藥物組合物制劑包括與藥物適宜性溶媒(如無菌水或無菌等 滲生理鹽水)結(jié)合的活性成份。這些制劑可以適合快速注射給藥或持續(xù)給藥的形式制 備、包裝或銷售。可注射制劑可以以單位劑量的形式制備、包裝或銷售，如裝于安瓶或 含防腐劑的多劑量容器中。腸胃外給藥制劑包括(但不限于)懸浮液、溶液、油或水載 體的乳劑、糊劑及可植入的緩釋劑或可生物降解的制劑。這些制劑可進(jìn)一步包含一種或 多種附加成份，包括(但不限于)用于懸浮、穩(wěn)定或分散的物質(zhì)。在一種腸胃外給藥制 劑的實(shí)施方案中，所提供活性成份為干燥形式(即粉末或顆粒)，腸胃外給藥之前可在合 適的媒介中重構(gòu)(如無菌無熱源水)。藥物組合物可以以無菌注射水/油懸浮液/溶液的形式制備、包裝或銷售。該懸浮液或溶液可根據(jù)已知技術(shù)制備，除活性成份外還可包含附加成份，如本文所述分散 齊 、濕潤劑或懸浮劑。這些無菌注射制劑可用非毒性、腸胃外適宜的稀釋劑或溶劑制 得，如水或1，3-丁烷二醇。其他適宜的稀釋劑和溶劑包括(但不限于)林格溶劑、等 滲氯化鈉溶劑、和脂肪油，如合成的單甘油酯或甘油二酯。其他可用的腸胃外給藥制劑 包括那些含微晶形活性成份的脂質(zhì)體制劑或作為生物可降解聚合物系統(tǒng)的成份。用于緩 釋或植入的組合物可包含藥物適宜多聚或疏水物質(zhì)，如乳劑、離子交換樹脂、微溶聚合 物或微溶鹽。適于局部給藥的制劑包括(但不限于)液體或半液體制劑，如搽劑、洗液、油包 水或水包油乳劑(如乳脂、軟膏或糊劑)、溶液或懸浮液。局部給藥制劑可例如包含約
到10% (w/w)的活性成份，盡管活性成份的濃度可能高達(dá)活性物質(zhì)在溶媒中的溶解 極限。局部給藥制劑可進(jìn)一步包含一個(gè)或多個(gè)本文所述的附加成份。本發(fā)明的藥物組合物可以適于經(jīng)由口腔的肺部給藥制劑中制備、包裝或銷售。 此制劑可包括含活性成份的干燥顆粒，其直徑范圍在約0.5到約7納米且優(yōu)選在約1到6 納米間。這些組合物便于使用含干粉儲(chǔ)器的設(shè)備以干粉的形式給藥，其中推進(jìn)流可直接 分散這些粉末，或是使用自推溶劑/粉末分散器，例如，其中活性成份溶解或懸浮于低 沸點(diǎn)推進(jìn)劑并密封于容器中的設(shè)備。這些粉末優(yōu)選包含這樣的顆粒至少98%重量的顆 粒直徑大于0.5納米且至少95%數(shù)量的顆粒直徑小于7納米。更優(yōu)選，至少95%重量的 顆粒直徑大于1納米且至少90%數(shù)量的顆粒直徑小于6納米。干粉組合物優(yōu)選包括固體 細(xì)粉稀釋劑(如糖)，且方便地以單位計(jì)量的形式提供。低沸點(diǎn)推進(jìn)劑通常包括在大氣壓下沸點(diǎn)低于65F的液體推進(jìn)劑。一般來說，推 進(jìn)劑可占組合物的50到99.9% (w/w)，且活性成分可占組分的0.1到20% (w/w)。推進(jìn) 劑可進(jìn)一步包含附加成份，如液態(tài)非離子或固體陰離子型表面活性劑或固體稀釋劑(優(yōu) 選與所含活性成份相同大小的粒子)。本發(fā)明中配制的用于肺部輸送的藥物組合物也可以溶液或懸浮液小滴的形式提 供活性成份。這些制劑可以含活性物質(zhì)的水或稀釋的醇溶液或懸浮液的形式制備、包裝 或銷售、可選消毒且可方便地通過用噴霧或霧化設(shè)備給藥。這些制劑可進(jìn)一步包括一種 或多種附加劑，包括(但不限于)調(diào)味劑，如糖精鈉、揮發(fā)油、緩沖劑、表面活性劑或防 腐劑，如甲基羥基苯甲酸脂。此給藥途徑提供的小滴優(yōu)選平均直徑在約0.1到200納米 間。本文所述用于肺部遞送的制劑也可用于本發(fā)明藥物組合物的鼻部遞送。另一適于鼻部給藥的制劑為粗粉末，含活性成份且平均顆粒直徑約在0.2到500 微米之間。此制劑通過吸入給藥，即從貼近鼻孔的盛藥容器經(jīng)鼻腔快速吸入。適于經(jīng)鼻給藥的制劑可含少至0.1% (w/w),且多至100% (w/w)的活性成份， 且可進(jìn)一步含一種或多種此處描述的附加成份。本發(fā)明藥物組合物可以適于頰部給藥的制劑形式制備、包裝或出售。此制劑可 為用傳統(tǒng)方法制成的片劑或錠劑，還可含例如0.1到20% (w/w)的活性成份，其平衡含 有口腔溶解或降解組分及可選的含一或多種本文所述附加成份。或者，適于頰部給藥的 制劑可包括含活性成份的粉末/霧化/原子化的溶液或懸浮液。當(dāng)分散時(shí)，此粉末或氣 霧制劑粒子或小滴大小最好在約0.1到200納米之間，且該制劑可進(jìn)一步包括一種或多種本文所述附加成份。本發(fā)明的藥物組合物可以適于眼部給藥的制劑制備、包裝或銷售。此制劑可為眼藥水，包括如在水或油液體溶媒中含0.1-1.0% (w/w)活性成份的溶液或懸浮液。此藥 滴可進(jìn)一步包括緩沖液、鹽或一或多種本文所述附加劑。其他有用的眼部用藥制劑包括 那些含活性成份的微晶形或脂質(zhì)體制劑。本文所用，“附加劑”包括(但不限于)一種或多種如下物質(zhì)賦形劑；表面 活性劑；分散劑；惰性稀釋劑；粒化及崩解劑；粘合劑；潤滑劑；甜味劑；調(diào)味劑； 著色劑；防腐劑；如明膠之類的生理可降解組分；水載體及溶劑；油載體及溶劑；懸浮 劑；分散或濕潤劑；乳化劑；粘滑劑；緩沖劑；鹽；增稠劑；填料；乳化劑；抗氧化 齊IJ;抗生素；抗真菌劑；穩(wěn)定劑；及藥物適宜聚合或疏水材料。其他包含于本發(fā)明藥 物組合物中的“附加劑”為本領(lǐng)域所熟知的，如Genaro等所述(1985，Remington' s Pharmaceutical Sciences, MackPublishingCo., Easton, ΡΑ),此處引用作為參考。一般來說，本發(fā)明用于對動(dòng)物(優(yōu)選人)給藥的化合物劑量隨眾多因素變動(dòng)，包 括(但不限于)動(dòng)物類型及待治疾病狀態(tài)類型、動(dòng)物年齡及給藥途徑?？山o動(dòng)物施用化合物頻繁至每天數(shù)次，或以較少的頻率給藥，如一天一次、一 周一次、兩周一次、一月一次或甚至更低的頻率，如數(shù)月一次或甚至一年一次或更少。 技術(shù)人員應(yīng)易掌握劑量頻率，且給藥頻率取決于多種因素，如(但不限于)待治疾病類型 及嚴(yán)重程度、動(dòng)物類型及年齡等。優(yōu)選，化合物以(但不必須)快速注射給藥，這可提 供注射后至少一天的持久效用。可以腹膜內(nèi)進(jìn)行快速注射。技術(shù)人員應(yīng)理解通過阻止T細(xì)胞應(yīng)答的建立，本發(fā)明還提供了一種抑制二級應(yīng) 答的方法，因?yàn)橥ㄟ^取消和減弱起始應(yīng)答，可抑制二級應(yīng)答產(chǎn)物。同樣，技術(shù)人員應(yīng)理解，本發(fā)明包括治療細(xì)胞介導(dǎo)的疾病的方法，其中該細(xì)胞 需經(jīng)由其表面血清素受體的血清素信號傳遞。因?yàn)?，如本發(fā)明他處所詳細(xì)闡述的，某 些細(xì)胞需血清素信號，因此抑制信號會(huì)抑制其他情況下該細(xì)胞介導(dǎo)的特定過程。當(dāng)細(xì)胞 需接受血清素信號來參與或介導(dǎo)疾病、障礙或狀況時(shí)，抑制信號會(huì)抑制細(xì)胞參與這些疾 病、障礙或狀況。這些狀況、障礙和疾病在本發(fā)明其他部分詳細(xì)敘述?；旧希坏┯帽绢I(lǐng)域熟知方法(和/或這些方法在本發(fā)明其他部分描述和/或 例證)確定疾病、障礙或狀況是由需血清素信號的細(xì)胞所介導(dǎo)的，且信號需經(jīng)1Β、2、4 或6型血清素受體傳遞，則可用多種方法抑制這些信號，且從而治療和/或緩解該疾病、 障礙或狀況。一旦抑制了所需的血清素信號，則細(xì)胞不會(huì)再介導(dǎo)該疾病、障礙或狀況， 從而治療并/緩解該疾病、障礙或狀況?？筛鶕?jù)本發(fā)明所述方法治療的疾病包括(但不 限于)重癥肌無力、特發(fā)性炎癥肌病、慢性嗜中性白血球減少癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、特 發(fā)性血小板減少性紫癜、自身免疫性溶血綜合癥、抗磷脂抗體綜合癥、炎性腸病、克羅 恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、心肌炎、Gillian-Barre綜合癥、血管炎、多發(fā)性硬化癥、視神經(jīng)脊 髓炎(Devic綜合癥)、淋巴細(xì)胞性垂體炎、格雷夫斯病、愛迪生病、甲狀旁腺功能減退 癥、一型糖尿病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、尋常性天皰瘡、大皰性類天皰瘡、牛皮癬、銀屑病 關(guān)節(jié)炎、子宮內(nèi)膜異位、自身免疫性睪丸炎、自身免疫性勃起障礙、結(jié)節(jié)病、韋格納肉 芽腫病、自身免疫性耳聾、斯耶格倫病、自身免疫性色素層視網(wǎng)膜炎、間質(zhì)性膀胱、肺 出血腎炎綜合癥及纖維肌痛。
因此，本發(fā)明包括治療或預(yù)防自身免疫疾病及異源移植排斥反應(yīng)的方法，這些 疾病是由針對自身抗原和/或呈現(xiàn)于移植的細(xì)胞或組織上的非自身抗原的異?；蛟黾拥?免疫應(yīng)答所介導(dǎo)的。進(jìn)一步，通過阻止起始免疫應(yīng)答，例如抑制介導(dǎo)應(yīng)答的細(xì)胞中的血 清素信號傳遞，本發(fā)明也消除了可能發(fā)生的二級應(yīng)答。因此，一旦結(jié)合本文提供的知識，技術(shù)人員應(yīng)理解，本發(fā)明包括含抑制劑的快 速注射給藥，該抑制劑可抑制血清素與血清素受體的相互作用。優(yōu)選，受體為5HT1B 受體且抑制劑為氟奮乃靜。不希望受任何理論的限制，快速注射給藥可介導(dǎo)特定細(xì)胞凋 亡，如活化的T細(xì)胞或癌性B細(xì)胞(如多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞)，因此不必重復(fù)給藥抑制劑， 因?yàn)榭焖僮⑸浣閷?dǎo)細(xì)胞的死亡記憶或其他，否則此處的細(xì)胞會(huì)介導(dǎo)免疫應(yīng)答，而該應(yīng)答 可引起移植細(xì)胞或組織排斥反應(yīng)。氟奮乃靜在5HTR1B受體上的局部濃度可介導(dǎo)該效 用，此濃度足以抑制血清素信號傳遞，從而介導(dǎo)細(xì)胞死亡和/或抑制該細(xì)胞引起的免疫 應(yīng)答。 此外，本發(fā)明包括治療其中已建立二級免疫應(yīng)答的疾病。這是因?yàn)榧幢悴皇侨?部，大部分自身免疫疾病為慢性狀況。盡管大多數(shù)自身免疫疾病的病因還不清楚，但已 了解CD4+記憶輔助T細(xì)胞和/或CD8+記憶細(xì)胞毒性T細(xì)胞參與其中。這些二級T細(xì)胞 有不同的細(xì)胞標(biāo)記且以與初級T細(xì)胞不同的方式發(fā)揮作用(綜述參見，Dutton等，1998， Ann.Rev.Immunol. 16 201-223)。 因此，本發(fā)明包括抑制哺乳動(dòng)物免疫細(xì)胞活化的方 法，其中活化是由細(xì)胞上2型血清素受體所介導(dǎo)。本方法包括施用有效量的抑制劑，該 抑制劑可抑制血清素與2型血清素受體的相互作用。這是因?yàn)椋缯f明書所論證的，抑 制免疫細(xì)胞(如T細(xì)胞)上血清素與2型血清素受體的相互作用可阻止免疫細(xì)胞活化，從 而抑制該細(xì)胞引起的免疫應(yīng)答?？捎帽景l(fā)明方法治療的自身免疫疾病包括(但不限于)重癥肌無力、特發(fā)性炎癥 肌病、慢性嗜中性白血球減少癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、特發(fā)性血小板減少性紫癜、自身免 疫性溶血綜合癥、抗磷脂抗體綜合癥、炎性腸病、克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、心肌炎、 Gillian-Barre綜合癥、血管炎、多發(fā)性硬化癥、視神經(jīng)脊髓炎(Devic綜合癥)、淋巴細(xì)胞 性垂體炎、格雷夫斯病、愛迪生病、甲狀旁腺功能減退癥、一型糖尿病、系統(tǒng)性紅斑狼 瘡、尋常性天皰瘡、大皰性類天皰瘡、牛皮癬、銀屑病關(guān)節(jié)炎、子宮內(nèi)膜異位、自身免 疫性睪丸炎、自身免疫性勃起障礙、結(jié)節(jié)病、韋格納肉芽腫病、自身免疫性耳聾、斯耶 格倫病、自身免疫性色素層視網(wǎng)膜炎、間質(zhì)性膀胱、肺出血腎炎綜合癥及纖維肌痛。本發(fā)明進(jìn)一步包括抑制哺乳動(dòng)物二級免疫應(yīng)答的方法。該方法包括施用有效量 的抑制劑，該抑制劑可抑制血清素與2型血清素受體的相互作用。因?yàn)槿绫景l(fā)明其他部 分所述，當(dāng)用2型血清素受體拮抗劑及其他抑制血清素與2型血清素受體的相互作用時(shí)， 可抑制初級及二級免疫應(yīng)答。即，本發(fā)明首次論證了抑制免疫細(xì)胞上血清素與2型血清 素受體的相互作用可阻止或抑制免疫應(yīng)答。因此，本發(fā)明為治療多種自身免疫疾病及異 源抑制排斥反應(yīng)提供了新的特異性免疫調(diào)節(jié)療法，這些疾病和反應(yīng)都是由血清素與2型 血清素受體相互作用引起的T細(xì)胞活化所介導(dǎo)的?；诒疚墓_的數(shù)據(jù)，技術(shù)人員應(yīng)理解本發(fā)明包括治療突發(fā)性艾滋病患者的方 法。因?yàn)?，在此疾病的最終階段病人的CD4細(xì)胞計(jì)數(shù)很低，而且病人通常死于偶發(fā)性感 染。如果檢測遺留的CD4細(xì)胞，人們可發(fā)現(xiàn)很異常的事件，也即，大約50%的遺留CD4細(xì)胞有活性。這是 因?yàn)槿嗣庖呷毕莶《?HIV)需要T細(xì)胞的活性增殖來進(jìn)行其自身復(fù) 制?；诒疚墓_數(shù)據(jù)且不希望受任何理論的限制，即使在AIDS末期的增值可能也需要 由2型血清素受體介導(dǎo)的血清素信號。因?yàn)槿缂?xì)胞計(jì)數(shù)及本文其他公開數(shù)據(jù)所證實(shí)的， 阻斷2C型5HT信號顯然會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞死亡，所以如馬來酸二甲麥角新堿之類的快速注射可 給末期病人施用。因此通過誘導(dǎo)活化CD4細(xì)胞凋亡，可有效的消除病毒庫，因此病人也 許可再生非感染的CD4細(xì)胞，進(jìn)而康復(fù)。B.鑒別有用化合物的方法本發(fā)明包括鑒別可抑制血清素與其家族受體相互作用的化合物的方法?；诒?文所公開數(shù)據(jù)，技術(shù)人員應(yīng)理解可通過評估T細(xì)胞活化及其他方法來檢測血清素與其家 族受體的相互作用，可通過比較接觸化合物的細(xì)胞與其他方面相同只是不接觸該化合物 的細(xì)胞中相同的參數(shù)來測定T細(xì)胞活化。技術(shù)人員應(yīng)理解此種化合物可用于抑制由血清 素與血清素受體相互作用所介導(dǎo)和/或與其相關(guān)的疾病、障礙或狀況?；诒疚乃_ 內(nèi)容技術(shù)人員應(yīng)進(jìn)一步理解，其用于在減低血清素與其特異性亞型受體相互作用的同時(shí) 不影響血清素與其他類型血清素受體的作用?；诒疚乃_內(nèi)容技術(shù)人員應(yīng)理解，本發(fā)明包括鑒別可用于治療哺乳動(dòng)物自 身免疫疾病或異源移植反應(yīng)的化合物的方法。方法包括鑒別抑制血清素與IB、2A、2B、 2C、4及6型血清素受體相互作用的物質(zhì)或化合物。因?yàn)?，如本文其他地方所述，已發(fā) 現(xiàn)抑制血清素與IB、2A、2B、2C、4及6型血清素受體的相互作用可抑制免疫細(xì)胞活 化，從而抑制免疫應(yīng)答。因此，根據(jù)本發(fā)明所授知識技術(shù)人員應(yīng)理解，抑制此種相互作 用的化合物是治療由血清素/受體相互作用介導(dǎo)的自身免疫疾病或異源移植反應(yīng)的潛在 療法。本方法包括將待測化合物與IB、2A、2B、2C、4及6型血清素受體接觸，并將 血清素與IB、2A、2B、2C、4及6型血清素受體的結(jié)合水平與除不與此化合物接觸其他 方面全一樣的IB、2A、2B、2C、4及6型血清素受體與血清素的結(jié)合水平相比較。技術(shù) 人員應(yīng)理解，如接觸化合物的血清素受體與血清素的結(jié)合水平與其他方面全一樣只是不 與此化合物接觸的IB、2A、2B、2C、4及6型血清素受體與血清素的結(jié)合水平相比結(jié)合 水平降低，則表明該化合物抑制血清素/受體的相互作用，并因而可用于治療哺乳動(dòng)物 中的自身免疫疾病或異源移植反應(yīng)?；诒疚乃_內(nèi)容，技術(shù)人員也應(yīng)理解，本領(lǐng)域 所熟知的標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合測定法或?qū)沓霈F(xiàn)的方法都可用于測定在缺少或存在待測化合物的情 況下血清素與IB、2A、2B、2C、4及6型血清素受體的結(jié)合水平，進(jìn)而鑒別出有用的化 合物。因此，本發(fā)明包括任何用此方法鑒定出的化合物。本發(fā)明還包括鑒定可抑制血清素信號傳遞的化合物，如本文前面其他部分所 述，其中也需考慮該化合物相對于血腦屏障的滲透性。具體來說，本發(fā)明包括將用本發(fā) 明方法鑒別出的任何化合物進(jìn)行對血腦屏障滲透性的測定。測定化合物通過血腦屏障 能力的方法或是本文所公開的，或是本領(lǐng)域所熟知的，還包括將來出現(xiàn)的方法。因此， 本發(fā)明包括測定目標(biāo)化合物穿透血腦屏障的能力，且選擇實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障的化合 物。如本文前面其他部分更詳細(xì)說明的，該化合物是有用的，因?yàn)橛袝r(shí)期望化合物可抑 制非神經(jīng)細(xì)胞的血清素信號傳遞，而在可檢測水平內(nèi)不會(huì)影響神經(jīng)細(xì)胞中的血清素信號 傳遞。既然血腦屏障阻止了進(jìn)入神經(jīng)細(xì)胞的通路，不可穿透血腦屏障的抑制劑可用于抑制目標(biāo)細(xì)胞中的血清素信號傳遞，而不會(huì)影響(至少部分不被影響)神經(jīng)細(xì)胞中的血清素 信號傳遞。
此外，本發(fā)明包括改性用本文其他部分所述方法鑒別出的有用化合物，從而減 低該化合物穿透血腦屏障的能力。再次，這是有用的，因?yàn)閷?shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障的化 合物可用于抑制，如免疫細(xì)胞中的血清素信號傳遞，而不會(huì)影響神經(jīng)細(xì)胞中的血清素信 號傳遞，因其被血腦屏障所保護(hù)。一旦結(jié)合本文公開的知識本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，改 造化合物影響其血腦屏障滲透性的方法是本領(lǐng)域所熟知的或是本文所例證的、也包括將 來發(fā)展起來的方法。本發(fā)明也包括鑒別用于抑制T細(xì)胞活化的化合物的方法，其中該活化是由血清 素與IB、2A、2B、2C、4及6型血清素受體結(jié)合所介導(dǎo)的。具體來說，該方法包括評 估接觸待側(cè)化合物的T細(xì)胞的活化水平，并將此活化水平與除不接觸該化合物外其他部 分都一樣的T細(xì)胞的水平相比較。與除不接觸該化合物外其他部分都一樣的T細(xì)胞的活 化水平相比，如果接觸該化合物的T細(xì)胞活化水平較低則表明該化合物可用于抑制T細(xì)胞 活化。因?yàn)楸景l(fā)明首次公開了 T細(xì)胞活化需要血清素與T細(xì)胞表面IB、2A、2B、2C、 4及6型血清素受體的相互作用，因此當(dāng)血清素/受體相互作用被抑制時(shí)，活化被抑制， 進(jìn)而可抑制該細(xì)胞引起的免疫應(yīng)答。很清楚，如本文其他部分所說明的，抑制血清素與 T細(xì)胞表面IB、2A、2B、2C、4及6型血清素受體相互作用的化合物是用于治療自身免 疫疾病及異源移植排斥反應(yīng)的潛在治療化合物。再次，本發(fā)明包括進(jìn)一步評估化合物穿透血腦屏障能力的方法，因此可鑒別和 /或生產(chǎn)具備期望的抑制效應(yīng)且實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障的化合物。拮抗血清素家族受體的化合物(即阻斷受體結(jié)合的化合物)中，SB 206553可作 為一個(gè)例子，其結(jié)構(gòu)示于Forbes等，1993，J.Med.Chem.36 1104-1107。如本文數(shù)據(jù)所 示，將此拮抗劑施用于表達(dá)受體的淋巴細(xì)胞可有效地抑制免疫應(yīng)答。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng) 理解如SB 206553之類的拮抗劑可通過阻斷血清素家族受體結(jié)合來幫助調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答，從
而治療自身免疫疾病或其他增強(qiáng)的免疫應(yīng)答對患者有害的疾病
權(quán)利要求
1.有效量氟奮乃靜的酚噻嗪衍生物在制備用于治療哺乳動(dòng)物由細(xì)胞介導(dǎo)的疾病的藥 物中的應(yīng)用，其中所述細(xì)胞需要經(jīng)由血清素受體的血清素信號傳遞，其中所述藥物接觸 細(xì)胞后抑制血清素與所述細(xì)胞上的血清素受體的相互作用，其中所述抑制對所述細(xì)胞是 有害的使得所述細(xì)胞不介導(dǎo)所述疾病，其中所述酚噻嗪衍生物相對氟奮乃靜具有升高的 極化。
2.權(quán)利要求1所述的用途，其中所述的酚噻嗪衍生物是QSS-1、QSS-3、QSS-5、 QSS-6、QSS-12 或 QSS-13。
3.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中所述自身免疫疾病選自重癥肌無力、特發(fā)性炎癥肌 病、慢性嗜中性白血球減少癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、特發(fā)性血小板減少性紫癜、自身免疫 性溶血綜合癥、抗磷脂抗體綜合癥、炎性腸病、克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、心肌炎、 Gillian-Barre綜合癥、血管炎、多發(fā)性硬化癥、視神經(jīng)脊髓炎(Devic綜合癥)、淋巴細(xì)胞 性垂體炎、格雷夫斯病、愛迪生病、甲狀旁腺功能減退癥、一型糖尿病、系統(tǒng)性紅斑狼 瘡、尋常性天皰瘡、大皰性類天皰瘡、牛皮癬、銀屑病關(guān)節(jié)炎、子宮內(nèi)膜異位、自身免 疫性睪丸炎、結(jié)節(jié)病、韋格納肉芽腫病、自身免疫性耳聾、斯耶格倫病、自身免疫性色 素層視網(wǎng)膜炎、間質(zhì)性膀胱炎、肺出血腎炎綜合癥及纖維肌痛。
4.權(quán)利要求1所述的用途，其中所述的疾病是多發(fā)性骨髓瘤。
5.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述拮抗劑實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障。
6.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述藥物適于經(jīng)口施用。
7.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述藥物適于腸胃外施用。
8.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述藥物適于快速注射施用。
9.用于治療由細(xì)胞介導(dǎo)的疾病的試劑盒，其中所述細(xì)胞需要經(jīng)由血清素受體的血清 素信號傳遞，所述試劑盒包括有效量的氟奮乃靜的酚噻嗪衍生物，所述酚噻嗪衍生物相 對氟奮乃靜而言具有升高的極化，所述試劑盒進(jìn)一步包括用藥器及其使用說明材料。
10.權(quán)利要求9所述的試劑盒，其中所述的酚噻嗪衍生物是QSS-1、QSS-3、 QSS-5、QSS-6、QSS-12 或 QSS-13。
全文摘要
本發(fā)明涉及免疫調(diào)節(jié)及對涉及血清素家族受體及血腦屏障的細(xì)胞過程的作用。具體地，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了經(jīng)由1B、2、4和6型血清素受體的信號傳遞對T細(xì)胞活化的重要性，因此抑制這些信號傳遞，如用氟奮乃靜抑制，可用于調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答、細(xì)胞增殖、和凋亡、及其他細(xì)胞進(jìn)程。此免疫調(diào)節(jié)用于治療免疫疾病或病癥，且用于這些疾病或病癥的潛在療法的發(fā)展。本發(fā)明進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)在發(fā)生細(xì)胞周期進(jìn)程的細(xì)胞中，抑制血清素信號傳遞可抑制細(xì)胞的該進(jìn)程并誘導(dǎo)凋亡和形態(tài)學(xué)變化。這些抑制血清素能信號傳遞的效用可用于實(shí)施選擇性的細(xì)胞殺傷和用于鑒定抑制該信號傳遞的化合物。此外，提供了使用方法，也提供了鑒別及生產(chǎn)實(shí)質(zhì)上不穿透血腦屏障的抑制劑的方法。
文檔編號C12Q1/02GK102018715SQ201010166738
公開日2011年4月20日 申請日期2003年6月17日 優(yōu)先權(quán)日2002年6月17日
發(fā)明者A·A·特雷蒂亞科瓦, B·A·詹姆森, H·C·戴維森 申請人:費(fèi)城健康與教育公司