專利名稱：一種利用竹葉黃酮生產(chǎn)的新型天然食品防腐劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是一種用竹葉黃酮作為抑菌劑添加入食品中進(jìn)行抑菌防腐的方法。
背景技術(shù)：
竹子是未本科(Poaceae)竹亞科(Bambuaoideae)多年生常綠植物。全世界竹子已記載的有 60個(gè)屬1200多種。我國(guó)是竹子中心產(chǎn)區(qū)之一，現(xiàn)有竹類植物48個(gè)屬、500余種、面積約600 萬公頃。竹葉中含有大量的維生素、氨基酸、葉綠素和豐富的具有活化細(xì)胞功能的鍺、硅等 元素以及糖類、黃酮類等物質(zhì)。竹葉在我國(guó)具有悠久的食用歷史，是一味傳統(tǒng)的清熱解毒藥 物。竹葉涼心緩脾、清痰止咳、為治上焦風(fēng)邪煩熱、咳逆喘足、嘔穢吐血、 一切中風(fēng)驚癇等 癥。
近年來人們利用現(xiàn)代化學(xué)分析手段對(duì)竹葉有效成分及其生物活性進(jìn)行了進(jìn)一歩的研究開 發(fā)，發(fā)現(xiàn)竹葉中黃酮類化合物是主要的功能成分。CN1228968A公丌/從竹葉中提取黃酮類 化合物浸*或粉劑的生產(chǎn)方法，竹葉所含的黃酮類化合物基本上是黃酮糖苷，如牡荊苷 (vitexin)、苜蓿素(tricin)、葒草苷、異葒草苷、洋芹苷、木犀草苷等。
現(xiàn)有的食品抑菌防腐劑主要有化學(xué)抑菌防腐劑和大然抑菌防腐劑兩大類，其中，化學(xué)抑 菌防腐劑效果較好，但存在不同程度的毒副作用。如苯甲酸有抑菌譜窄，味道不佳，對(duì)人體 能造成不同程度的損害。大然防腐劑+:要來源動(dòng)、植物以及微生物。冃前國(guó)內(nèi)外已丌發(fā)出一 些替代化學(xué)抑菌劑的牛:物制劑，如乳酸鏈球菌素、那他霉素等產(chǎn)品；從植物中提取的抑菌劑 如黃連素、大蒜素等產(chǎn)品，這些生物抑菌劑雖然抑菌效果較好，避免了化學(xué)抑菌劑有毒化學(xué) 物質(zhì)的殘留對(duì)人體的危害，但其使用成本高出化學(xué)抑菌劑數(shù)倍，因此限制了生物抑菌劑在廣 泛領(lǐng)域的使用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是利用具有藥食功能的竹子為原料制作一種沒有毒副作用，具 有廣譜抗菌，應(yīng)用范圍廣的竹卟黃酮抑菌防腐劑。
本發(fā)明的技術(shù)方案包括如F歩驟
1. 竹葉黃酮的提取制備
a. 將竹葉干燥粉碎，按料液比1:15-1:25的比例加入50-70%乙醇，超聲波作用20-40分鐘。
b. 將得到的漿狀物離心(5000轉(zhuǎn)/秒)離心處理10-15分鐘至漿狀物分層明顯，棄下層 粉水層。將提取液用石油醚萃取去除葉綠素，去掉石油醚層，得到提取液。提取液冷凍干燥 得到竹葉黃酮粗品。
2. 竹葉黃酮抑菌劑的純化
a. AB-8大孔吸附樹脂在乙醇屮浸泡24h，除去樹脂中的雜質(zhì)，然后裝柱,活化。b. 將竹葉黃酮粗品用蒸餾水溶解，上AB-8大孔樹脂，調(diào)pH值為4-6，上柱的吸附速率 為0.7-1.8 mL/min，然后水洗柱，再用50-70%乙醇以1.0-2.0 mL/min洗脫速率洗脫，冷凍干 燥得到竹葉黃酮提純產(chǎn)品。
c. 將純度較高的竹葉黃酮抑菌活性物質(zhì)進(jìn)行抑菌活性測(cè)定。
此抑菌活性物質(zhì)經(jīng)抑菌試驗(yàn)表明，對(duì)食品中常見污染菌及致病菌具有明顯的抑制及殺滅 作用，在中性條件下，其效果明顯強(qiáng)于傳統(tǒng)的化學(xué)合成防腐劑如山梨酸鉀、苯甲酸鈉等。 下列表1、表2為抑菌情況表。
表l不同濃度竹葉黃酮對(duì)供試齒的抑齒效來
竹葉黃酮濃
抑菌圈直徑(mm)
貞(mg/mL)大腸桿菌金黃色葡 萄球菌枯草芽孢 桿菌啤酵母菌 黑曲霉毛霉
0.0 0.000.000.000.00 0.000.00
0.1 11.5010.0010.208.00 7.058.30
1.0 13.7012.002.609.00 8.109.30
1.5 15.3014.5015.9010.50 8.5011.30
2.0 )8.2015.8016.7011.90 9.5012.50
表1為不同濃度竹葉黃酮對(duì)供試菌抑菌效果，竹葉黃酮水溶液在一定濃度下(》1.5
mg/mL),對(duì)細(xì)菌和霉菌都有較強(qiáng)的抑菌作用，尤其對(duì)細(xì)菌抑制效果明顯。同時(shí)，隨著提取物
濃度的減小，對(duì)各種菌的抑菌效果也有不同程度的降低，尤以啤酒酵母、黑曲霉和毛霉抑菌
效果下降顯著。
表2竹葉黃酮對(duì)細(xì)齒、酵母③、霉齒的最低仰l油濃度
、、\廁,(g/L) 供試兇' 、、"~~~~\、 1005025 2.5 6.253.125 1.56
人腸桿但+■ + + ++ +畫1-11 + +一 -
金炎色葡萄球齒+ + + ++ + ++ ++ +一 -
枯草芽孢桿齒+ + ++ ++ + -- -
啤酒酵母+ ++_ _ _- -
黑曲霉+ +++ - -- -
毛霄+ +++ + -- -
注"十"標(biāo)示抑^效果的人小，"-"表示無抑齒效X
表2為竹葉黃酮對(duì)細(xì)菌、酵母菌、霉菌的最低抑菌濃度情況，表中"+"標(biāo)示抑菌效果 的大小，"-"表示無抑菌效果。在一定濃度范圍內(nèi)竹葉黃酮才有抑菌活性，低丁-某濃度，竹
葉黃酮就沒有抑菌活性。竹葉黃酮對(duì)大腸桿菌、枯草芽孢桿菌的MIC》6.25g/L,對(duì)枯草芽孢 桿菌和毛霉MIC^12.5 g/L，對(duì)黑曲霉MIC》25 g/L，對(duì)啤酒酵母MIC》25 g/L?？偟内厔?shì)是 細(xì)菌MIC〈酵母MICX霉菌MIC。
d.熱處理溫度對(duì)竹葉黃酮抑菌劑的抑菌活性影響。在IO(TC以下處理10 min，竹葉黃酮抑菌活性未受影響；在12(VC溫度條件下處理10 min,雖然抑菌活性受到影響，但影響很 小。因此，竹葉黃酮可作為一種耐高溫的天然抑菌防腐劑。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1
按照常規(guī)的香腸配方和生產(chǎn)工藝進(jìn)行三組產(chǎn)品制作，防腐劑添加量分別為未添加(對(duì) 照)、0.5%竹葉黃酮、0.75%山梨酸鉀(所有樣品未經(jīng)殺菌處理)，加工出來的產(chǎn)品分別在0、 24、 48、 72h取樣，結(jié)果表明未處理樣的菌落總數(shù)隨著保藏時(shí)間的延長(zhǎng)而迅速增多；0.5% 竹葉黃酮提取物的抑菌效果要高于0.75%山梨酸鉀處理的產(chǎn)品。竹葉黃酮的添加未影響香腸 的口味。山此可見，竹葉黃酮抑菌劑可用在肉制品中防腐抑菌。
實(shí)施例2
鮮牛奶在存放過程中由于微生物的活動(dòng)使得牛奶總酸度升高。鮮牛奶在普通條件下總酸 度隨著時(shí)間的增長(zhǎng)而較快的上升。取純化的竹葉黃酮分別按0.1%和0.5%的添加量加入鮮牛 奶中，鮮牛奶在加入竹葉黃酮后總酸度的增長(zhǎng)明顯減弱，起到抑制微生物的作用。隨著竹葉 黃酮濃度的增加，抑菌效果也相應(yīng)的增強(qiáng)，但增強(qiáng)的幅度相對(duì)減弱。竹葉黃酮的添加未影響 鮮牛奶的口味。因此，竹葉黃酮抑菌劑可在乳制品中防腐抑菌。
權(quán)利要求
1、一種竹葉黃酮抑菌防腐劑，其特征在于以竹葉為原料，經(jīng)過烘干、粉碎、提取、純化、濃縮、凍干所得的產(chǎn)品，該產(chǎn)品主要含有黃酮類化合物。
2、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種竹葉黃酮抑菌防腐劑的生產(chǎn)方法，其特征在于采用超聲波輔助乙醉提取竹葉黃酮，提取溶劑乙醇濃度(體積分?jǐn)?shù))50-70%、料液比為1:15-1:25 (g/mL)、 提取時(shí)間20- 40 min。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種竹葉黃酮抑菌防腐劑的生產(chǎn)方法，其特征在于利用AB-8 型大孔樹脂對(duì)竹葉黃酮抑菌防腐劑粗提物純化分離；上柱溶液凋pH值為4-6，上柱的吸附速 率為0.7-1.8 mL/min，然后水洗柱，再用50-70%乙醇以1.0-2.0 mL/min洗脫速率洗脫，冷凍 干燥得到竹葉黃酮提純產(chǎn)品。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種竹葉黃酮抑菌防腐劑，其特征在于食品基質(zhì)pH對(duì)竹葉黃酮 抑菌防腐劑的抑菌活性影響比較大，隨著基質(zhì)pH的酸性增強(qiáng)而抑菌活性增強(qiáng)。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種竹葉黃酮抑菌防腐劑，其特征在于熱處理溫度對(duì)提取物的抑 菌活性影響不大，在IO(TC以下處理10min，抑菌活性沒有受到溫度的影響；在12(TC溫度條 件下處理10min，雖然抑菌活性有一定降低，但影響較小。
全文摘要
本發(fā)明涉及的是一種用竹葉黃酮作為天然抑菌劑添加入食品中進(jìn)行抑菌防腐的方法。是將竹葉按下列工藝提取竹葉黃酮將竹葉干燥粉碎，采用超聲波輔助乙醇提取竹葉黃酮，用石油醚進(jìn)行萃取，干燥得到竹葉黃酮粗品；將竹葉黃酮粗品用蒸餾水溶解，上AB-8大孔樹脂吸附，用乙醇進(jìn)行解吸，冷凍干燥得到竹葉黃酮提純產(chǎn)品；由純品得到的竹葉黃酮水溶液在一定濃度下(≥1.5mg/mL)，對(duì)細(xì)菌和霉菌都有較強(qiáng)的抑菌作用，尤其對(duì)細(xì)菌抑制效果明顯。熱處理溫度對(duì)竹葉黃酮抑菌劑的抑菌活性影響較小，竹葉黃酮可作為一種耐高溫的天然抑菌防腐劑。該竹葉黃酮抑菌防腐劑對(duì)食品中常見污染菌及致病菌有明顯的抑制及殺滅作用，并且本身具有較好的穩(wěn)定性，生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單，可用于食品、藥品之中。
文檔編號(hào)A23L3/3463GK101611917SQ20091015735
公開日2009年12月30日 申請(qǐng)日期2009年7月28日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月28日
發(fā)明者孫愛東, 孫紅男, 輝 游, 娜 潘, 胡曉丹, 建 陳 申請(qǐng)人:孫愛東