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一種檢測(cè)犬細(xì)小病毒的lamp試劑盒的制作方法

文檔序號(hào):573869閱讀:326來源:國知局
專利名稱:一種檢測(cè)犬細(xì)小病毒的lamp試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域,具體的說涉及一種檢測(cè)犬細(xì)小病毒的 環(huán)介導(dǎo)等溫核酸擴(kuò)增技術(shù)(LAMP)試劑盒。
背景技術(shù)
犬細(xì)小病毒(Canine Parvovirus, CPV )是美國Eugster于1978年
從患出血性腸炎的犬糞便中發(fā)現(xiàn)的病毒,該病毒為細(xì)小病毒科細(xì)小病 毒屬,單股線狀DNA病毒。犬細(xì)小病毒以導(dǎo)致犬發(fā)病率高,傳染性 強(qiáng)、死亡率高等特點(diǎn)已成為犬科動(dòng)物臨床發(fā)病的重要致病病毒。犬細(xì) 小病毒病已成為我國養(yǎng)犬業(yè)最為嚴(yán)重的傳染病之一,該病既影響著家 養(yǎng)寵物的生命健康,又危害著我國養(yǎng)犬業(yè)、毛皮動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)及野生動(dòng) 物保護(hù)業(yè)的發(fā)展。
目前,犬細(xì)小病毒的傳統(tǒng)檢測(cè)方法有血清學(xué)檢測(cè)方法和病原學(xué)檢 測(cè)方法。血清學(xué)檢測(cè)方法主要為血凝試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和免疫 膠體金檢測(cè)方法,但都因靈敏度不高、特異性不強(qiáng)等原因一直沒有在 臨床上普及應(yīng)用。病原學(xué)檢測(cè)方法目前常用F81、 MDCK等傳代細(xì)胞 系分離培養(yǎng)病毒,病毒分離方法雖然在理論上可以檢出一個(gè)感染性的 病毒粒子,確診犬細(xì)小病毒的感染,但也因分離病毒的操作繁瑣、代 價(jià)高及確診緩慢等因素同樣沒有投入臨床應(yīng)用。
隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,目前已有多種PCR方法用于犬細(xì)小病毒 的檢測(cè),雖在靈敏度方面有所改進(jìn),但由于需要精密儀器的配套使用, 同樣也無法滿足基層和現(xiàn)地檢測(cè)的需求。上述的方法探索雖有一定的 研究意義,但終究不能真正應(yīng)用于臨床上細(xì)小病毒的早期快速診斷。
環(huán)介導(dǎo)等溫核酸擴(kuò)增技術(shù)(LAMP)是由Notomi于2000年開發(fā)的 一種新型的恒溫核酸擴(kuò)增方法,該技術(shù)利用4種不同的特異性引物識(shí)
4別乾基因的6個(gè)特定區(qū)域,借助具有鏈置換作用&MDNA polymerase 的幫助從而可在等溫條件下進(jìn)行靶序列高效快速擴(kuò)增。
近年來,國外已將該技術(shù)廣泛應(yīng)用于病原體檢測(cè)。HongTC等人 (2004 )根據(jù)LAMP的原理設(shè)計(jì)了實(shí)時(shí)定量RT-LAMP方法,以快速檢 測(cè)SARS-CoV,結(jié)果RT-LAMP的靈敏度是RT-PCR的100倍;Masaki Imai等人(2007)建立了快速診斷H5N1禽流感病毒的RT-LAMP檢測(cè) 體系。
LAMP還可以檢測(cè)細(xì)菌、真菌等病原微生物,其靈敏度和特異性 都有很好的體驗(yàn)。但目前尚未見該方法在犬細(xì)小病毒檢測(cè)中的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供用于檢測(cè)犬細(xì)小病毒的特異性LAMP引物組。
本發(fā)明的目的在于提供一種具有高靈敏度、高特異性、可見化的、 操作方法簡(jiǎn)單的LAMP檢測(cè)試劑盒。
本發(fā)明所述的LAMP引物組包括以下四條引物 F3: 5'-TGCATCATTGATGGTTGC-3, B3: 5'-TGGCACAGAATTTTCGATAG國3' 5,- GGTATGGTTGGTTTCCATGGATA
FIP:
AATATGCC ATTTACTCC AGC AG-3' 5,- CCATCTCATACTGGAACTAGTG
BIP:
GCGCATCATCTGGATCTGTACC-3'
本發(fā)明的LAMP引物組還包括以下兩條引物 LF: 5'-CCCAATGTCTCAGATCTCAT-3,
LB: 5'-CACCAGCAGATATATACCAT-3'
本發(fā)明所述的用于檢測(cè)犬細(xì)小病毒的LAMP檢測(cè)試劑盒,包含有 以下四條LAMP引物FIP:
BIP:
18 bp
20 bp
45 bp 44 bp
F3: 5,-TGCATCATTGATGGTTGC-3' B3: 5'-TGGCACAGAATTTTCGATAG-3, 5,- GGTATGGTTGGTTTCCATGGATA AATATGCC ATTTACTCCAGC AG-3' 5,- CCATCTCATACTGGAACTAGTG GCGCATCATCTGGATCTGTACC-3'
本發(fā)明所述的用于檢測(cè)犬細(xì)小病毒的LAMP檢測(cè)試劑盒,還包含
有以下兩條LAMP引物
LF: 5,-CCCAATGTCTCAGATCTCAT-3' 20 bp
LB: 5,-CACCAGCAGATATATACCAT-3' 20 bp
本發(fā)明所述的用于檢測(cè)犬細(xì)小病毒的LAMP檢測(cè)試劑盒,還包括 LAMP反應(yīng)液,共同構(gòu)成LAMP檢測(cè)體系;25 LAMP反應(yīng)液的具體
配置為 F3、 B3
FIP、 BIP
LF、 LB
dNTP
Mg2+
各0.08 (aM~0.12 各0.64 nM~0.% , 各0.32 pM~0.48 |xM 0.6 mM~1.2 mM; 4mM 10mM;
8U;
0.2mM 1.0mM 。
反應(yīng)緩沖液lOxThermoPol Reaction Buffer 鏈置換DNA聚合酶^y/ DNA polymerase 甜菜堿betaine
實(shí)驗(yàn)證明,本發(fā)明用于檢測(cè)犬細(xì)小病毒的LAMP檢測(cè)試劑盒,其 25 pLLAMP反應(yīng)液的具體配置優(yōu)選為
F3、 B3 各0.1拜;
FIP、 BIP 各0.8nM;
LF、 LB 各0.4,;
dNTP 1.0 mM;
■2+
Mg'
反應(yīng)緩沖液1 OxThermoPol Reaction Buffer
8 mM;鏈置換DNA聚合酶Sw DNApolymerase 8 U;
甜菜堿betaine 0.3 mM 。
本發(fā)明所述LAMP試劑盒的檢測(cè)反應(yīng)條件為65'C恒溫1 h, 80°C 2min,然后終止反應(yīng)。
本發(fā)明的犬細(xì)小病毒的LAMP檢測(cè)試劑盒利用疫苗株犬細(xì)小病 毒構(gòu)建的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒DNA為模板,對(duì)LAMP反應(yīng)條件進(jìn)行了優(yōu)化,最低 檢測(cè)限達(dá)到2-3個(gè)拷貝,整個(gè)試驗(yàn)只需要l h左右即可,相對(duì)于常規(guī) PCR反應(yīng)要4 5h才能完成檢測(cè),大大縮短了檢測(cè)時(shí)間;在特異性和 重復(fù)性檢驗(yàn)中,該方法有很高的可靠性,并且操作簡(jiǎn)單。
由于LAMP的擴(kuò)增效率非常高,可產(chǎn)生大量的焦磷酸鎂而使反 應(yīng)液呈現(xiàn)混濁,在LAMP擴(kuò)增結(jié)東后無須電泳就可直接肉眼觀察反應(yīng) 是否有混濁現(xiàn)象來判斷是否有擴(kuò)增。當(dāng)反應(yīng)液稍微混濁,肉眼難以觀 察時(shí),可直接加入染料后在紫外光下進(jìn)行觀察。若有擴(kuò)增,染料嵌入 雙鏈中導(dǎo)致反應(yīng)液顏色發(fā)出綠色熒光,可更加直觀的判斷出是否為陽 性;若無擴(kuò)增則保持原有的染料著色不變,這樣就可以更好于基層檢 測(cè)和現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。
利用發(fā)明的犬細(xì)小病毒LAMP快速檢測(cè)試劑盒對(duì)臨床上的犬細(xì) 小病毒強(qiáng)毒株進(jìn)行了檢測(cè),檢測(cè)陽性率達(dá)到100%,在設(shè)計(jì)引物時(shí)候 特別選取了細(xì)小病毒VP2基因上對(duì)于CPV-2a、 CPV2b和CPV2c的保守 區(qū),所以該試劑盒可快速、靈敏地檢測(cè)出目前流行的犬細(xì)小病毒毒株, 其搡作簡(jiǎn)單、成本低廉,反應(yīng)結(jié)果易于觀察,特異性好,非常適用于 出口檢疫、食品衛(wèi)生以及畜牧飼養(yǎng)場(chǎng)的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè),易于大范圍推廣應(yīng) 用。


圖1為L(zhǎng)AMP體系優(yōu)化過程,A為不同MgS04濃度與電泳亮度關(guān)系 圖;B為不同dNTP濃度與電泳亮度關(guān)系圖;C為不同Betaine濃度比例
7與電泳亮度的關(guān)系圖;D為內(nèi)外引物濃度比例與電泳亮度關(guān)系其中,圖A中1-6泳道MgS04濃度分別為2 mM, 4 mM, 6 mM, 8 mM, 10 mM, 12 mM;泳道7為陰性對(duì)照,M為DL2000 plus marker; 圖B中1 ~ 6泳道dNTP濃度分別為0.2 mM, 0.4 mM, 0.6 mM, 0.8 mM, 1.0 mM, 1.2 mM; 7為陰性對(duì)照,M為DL2000 plus marker;圖C中1 ~ 4 泳道Betaine濃度分別為O mM, 0.3 mM, 0.5 mM, 1.0 mM; 5為陰性對(duì)照: M為DL2000 plus marker;圖D中泳道1~6,內(nèi)外引物濃度之比分別為 2:1,4:1,6:1,8:1,10:1,12:1;7為陰性對(duì)照;M為DL2000-plus marker;
圖2為AluI酶切結(jié)果;其中1為L(zhǎng)AMP產(chǎn)物,2為酶切結(jié)果,3為陰 性對(duì)照,M為DL2000 plus Marker;
圖3為特異性檢驗(yàn)結(jié)果;其中l(wèi)為犬細(xì)小病毒,2為小鵝瘟病毒,3 為豬細(xì)小病毒,4為犬輪狀病毒cDNA, 5為犬瘟熱病毒cDNA, 6為陰 性對(duì)照,M為DL2000plus;
圖4為L(zhǎng)AMP (圖4-A)和PCR (圖4-B)檢測(cè)結(jié)果的靈敏度比 較;其中l(wèi)-7泳道質(zhì)??截悢?shù)分別為2.0x 106 ,2.0 xl05, 2.0 x 104, 2.0 x 103,2,0 x io2, 2.0 x io1, 2.0; 8為陰性對(duì)照;M為DL2000 plus;
圖5為臨床樣品的LAMP擴(kuò)增產(chǎn)物加入EvaGreen染料后紫外照射 結(jié)果;其中1 6為臨床檢測(cè)樣品,7為陰性對(duì)照;
圖6為L(zhǎng)AMP加入環(huán)引物(圖6-A)和未加入環(huán)引物(圖6-B)影 響反應(yīng)靈敏度比較;其中l(wèi) 7泳道質(zhì)粒拷貝數(shù)分別為2.0x 106, 2.0 x 105, 2.0 x 104, 2.0 x 103,2.0 x 102, 2.0 x io1, 2.0; 8為陰性對(duì)照;M 為DL2000 plus。
具體實(shí)施例方式
以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明,但不用來限制本發(fā)明的范圍。 如無特別指明,實(shí)驗(yàn)所用的引物由上海英駿生物技術(shù)有限公司合
成;DNA聚合酶(大片段購自New England公司;甜菜堿(Betaine )、
Mg2 +購自Sigma公司。實(shí)施例l
一、 特異性DNA序列查找
從美國基因數(shù)據(jù)庫一一GenBank檢索獲得多株犬細(xì)小病毒基因 組序列,登錄號(hào)分別為EU697385、 FJ869139-FJ86913922、 FJ222822、 FJ005265-FJ005200、 EU659120、 EU483515、 EF666063、 DQ35楊8、 AY742955 、 DG182617 、 DQ340405 、 AB120728 、 AB437433 、 EU483516 , 通過BLAST軟件進(jìn)行序列同源性分析即找到特異性的保守靶序列進(jìn) 行LAMP引物設(shè)計(jì),該特異性保守靶序列為
TGC ATC ATT GAT GGT TGC ATT AGA TAG TAA TAA TAC TAT GCC ATT TAC TCC AGC AGC TAT GAG ATC TGA GAC ATT GGG TTT TTA TCC ATG GAA ACC AAC CAT ACC AAC TCC
ATC TCA TAC TGG AAC TAG TGG CAC ACC AAC AAA TAT ATA CCA TGG TAC AGA TCC AGA TGA TGC TCA ATT TTA TAC TAT CGA AAA TTC TGT GCC A
二、 引物的設(shè)計(jì)
使用Primer 4.0 (http:〃primerexlorer.jp; Eiken Chemical Co. Ltd, Japan),針對(duì)乾序列設(shè)計(jì)六條引物,包括兩條內(nèi)引物(FIP和BIP)和 兩條外引物(F3和B3)和兩條環(huán)引物(LF和LB)
三、 LAMP
1、 犬細(xì)小病毒的擴(kuò)增、病毒基因組提取犬細(xì)小病毒弱毒疫苗 同步接種F81細(xì)胞,48 h后細(xì)胞產(chǎn)生明顯病變,病變細(xì)胞反復(fù)凍融三 次后取l mL參照TRANS GEN公司的基因組提取試劑盒提取細(xì)小病 毒基因組,并構(gòu)建陽性質(zhì)粒,為檢測(cè)體系提供模板,-80 °C冰箱中 儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?br> 2、 LAMP檢測(cè)體系的建立
通過設(shè)置不同終濃度的Mg S04: 2 mM, 4 mM, 6 mM, 8 mM,10 mM, 12 mM;不同終濃度的dNTP: 0.2 mM, 0.4 mM, 0.6 mM, 0.8 mM, 1.0 mM, 1.2 mM;不同終濃度的Betaine: 0 mM, 0.3 mM, 0.5mM, lmM;以及內(nèi)外引物濃度比例2:1, 4:1, 6:1, 8:1, 10:1, 12:1 (此時(shí)內(nèi)外引物的濃度0.2pM: 0.1 ^M, 0.4pM: 0.1 pM, 0.6pM: 0.1 (iM, 0.8jiM: 0.1 fiM, l.O(aM: 0.1 1.2|iM: 0.1 ^M),其它條件選 擇實(shí)驗(yàn)過程的優(yōu)選試驗(yàn)條件。
分別在不同的溫度(6rC至65。C)反應(yīng)lh, 80°C 2min終止反 應(yīng),最終通過產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳獲得最佳反應(yīng)參數(shù)。由于在 65 'C反應(yīng)lh,80'C 2min的條件下擴(kuò)增最快,優(yōu)選在此條件下進(jìn)行反應(yīng)。
在65。C反應(yīng)1 h, 80°C 2 min對(duì)不同濃度的MgS04、 dNTP、 Betaine 和內(nèi)外引物濃度比例的反應(yīng)體系進(jìn)行優(yōu)化反應(yīng),通過凝膠電泳選擇較 亮的條帶作為反應(yīng)的最終濃度,結(jié)果參見圖l。
顯然,當(dāng)MgSO4的濃度為4 10mM時(shí),條帶清晰;當(dāng)dNTP的濃度 為0.6 1.2mM,條帶清晰;當(dāng)甜菜堿Betaine的濃度為0.3、 0.5、 l.OmM 時(shí),條帶清晰;當(dāng)內(nèi)外引物濃度為6:1, 8:1, 10:1, 12:1時(shí),特別是8:1, 10:1, 12:1,條帶清晰。
因此,得到優(yōu)化的檢測(cè)體系(25pL)如下
1 xThermoPol Reaction Buffer, 8 mM Mg2+, 0.3 mM Betaine, 1.0 mMdNTP, 0.1 (iM外引物(F3和B3), 0.8pM內(nèi)引物(FIP和BIP), 0.4 (iM環(huán)引物(LF和LB ), 8 UDNA polymerase, 1 pL模板。
檢測(cè)反應(yīng)條件65"C恒溫lh, 80°C 2 min終止反應(yīng)。
3、 LAMP擴(kuò)增特異性確認(rèn)
用A"I內(nèi)切酶判定產(chǎn)物結(jié)構(gòu),確定其為特異性擴(kuò)增產(chǎn)物。經(jīng)內(nèi) 切酶消化,出現(xiàn)188bp和56bp兩條電泳條帶(泳道2),與理論與其值 相符合,說明是特異性擴(kuò)增,參見圖2。
4、 檢測(cè)體系特異性、靈敏性分析
以小鵝瘟病毒、豬細(xì)小病毒、犬輪狀病毒、犬瘟熱病毒等四種病毒核酸為模板檢測(cè)體系的特異性。LAMP檢測(cè)體系的特異性測(cè)試良
好,可特異性的檢測(cè)到犬細(xì)小病毒。參見圖3。
以10 —、 10 —2……10 — 7稀釋度的犬細(xì)小病毒陽性質(zhì)粒為模板分別 進(jìn)行LAMP和PCR,比較兩種方法的靈敏度LAMP方法的最低檢測(cè)限 能達(dá)到2 3拷貝,而PCR方法只能達(dá)到2.0xlO"拷貝。LAMP靈敏度比 RT-PCR法高100倍。參見圖4。
5、 檢測(cè)體系的結(jié)果鑒定
一方面,由于LAMP在DNA擴(kuò)增過程中產(chǎn)生大量的焦磷酸鎂沉 淀使反應(yīng)液呈現(xiàn)渾濁,可通過觀察終反應(yīng)液是否渾濁確認(rèn)是否進(jìn)行了 擴(kuò)增反應(yīng),是否為陽性。
也可以在LAMP檢測(cè)體系中加入熒光染料EvaGreen (或SYBR Greenl),紫外燈下肉眼觀察若反應(yīng)液變?yōu)榫G色,則說明反應(yīng)呈陽性, 若無色則說明反應(yīng)為陰性,參見圖5。
6、 根據(jù)優(yōu)化結(jié)果,確定了最佳的LAMP檢測(cè)體系,在實(shí)際操作 中可以存在一定的浮動(dòng)范圍,具體保持在lxThermoPol Reaction Buffer, 4 mM 10 mM Mg2+ , 0.2 mM 1.0 mM Betaine, 0.6 mM~1.2 mM dNTP, 0.08 juM~0.12 ^M外引物(F3和B3 ), 0.64 jiM 0.96 pM內(nèi)引物
(FIP和BIP), 0.32 pM~0.48 ^M環(huán)引物(LF和LB), 8 U DNA polymerase, 1 (iL模板。 實(shí)施例2
增加環(huán)引物(LF、 LB)可以增加LAMP反應(yīng)的靈敏度。 對(duì)此進(jìn)行了對(duì)比試驗(yàn),兩組試驗(yàn), 一組加入環(huán)引物, 一組未加入 環(huán)引物,結(jié)果參見圖6。
圖6為L(zhǎng)AMP加入環(huán)引物(圖6-A)和未加入環(huán)引物(圖6-B)影 響反應(yīng)靈敏度比較;其中l(wèi) 7泳道質(zhì)??截悢?shù)分別為2.0x 106, 2.0x lo5,2.0x lo4,2.0x l03,2.0 x 102,2.0x 1oi,2.0; 8為陰性對(duì)照;M 為DL2000 plus,顯然加入環(huán)引物的擴(kuò)增反應(yīng)明顯要強(qiáng)于未加入環(huán)引 物的一組。序列表
<110>中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所
<120> —種檢測(cè)犬細(xì)小病毒的LAMP試劑盒
<130> KHP09112534.5
<160> 7
< 170> Patentln version 3.5
<210> 1
<211> 244
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
tgcatcattg atggttgcat tagatagtaa taatactatg ccatttactc cagcagctat 60
gagatctgag acattgggtt tttatccatg gaaaccaacc ataccaactc catggagata 120
ttattttcaa tgggatagaa cattaatacc atctcatact ggaactagtg gcacaccaac 180
aaatatatac catggtacag atccagatga tgctcaattt tatactatcg aaaattctgt 240
gcca 244
12<210> 2
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2 tgcatcattg atggttgc
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
tggcacagaa ttttcgatag
<210> 4
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
ggtatggttg gtttccatgg ataaatatgc catttactcc agcag<210> 5
<211> 44
<212> DNA <213>人工序列
<權(quán)> 5
ccatctcata ctggaactag tggcgeatca tctggatctg tacc
<210> 6
<211> 20
<212> DNA <213>人工序列
<400> 6
cccaatgtct cagatctcat
<210> 7
<211> 20
<212> DNA <213>人工序列
<400> 7
caccagcaga tatataccat
權(quán)利要求
1、一種用于檢測(cè)犬細(xì)小病毒的特異性LAMP引物組,包括以下四條引物F35’-TGCATCATTGATGGTTGC-3’;B35’-TGGCACAGAATTTTCGATAG-3’;FIP5’-GGTATGGTTGGTTTCCATGGATAAATATGCCATTTACTCCAGCAG-3’;BIP5’-CCATCTCATACTGGAACTAGTGGCGCATCATCTGGATCTGTACC-3’。
2、 如權(quán)利要求1所述的LAMP引物組,其特征在于,還包括以下兩條LAMP引物EF: 5,-CCCAATGTCTCAGATCTCAT隱3,;LB: 5'國CACCAGCAGATATATACCAT-3,。
3、 一種包括如權(quán)利要求1所述的四條LAMP引物的檢測(cè)犬細(xì)小 病毒的LAMP檢測(cè)試劑盒。
4、 如權(quán)利要求3所述的試劑盒,其特征在于,還包括如權(quán)利要 求2所述的兩條LAMP引物。
5、 如權(quán)利要求4所述的試劑盒,其特征在于,還包含LAMP反應(yīng) 液,與四條LAMP引物共同構(gòu)成LAMP檢測(cè)體系;25(xLLAMP檢測(cè)體系的具體配置為F3、 B3 各0.08岸 0.12岸FIP、 BIP 各0.64 (xM 0.96LF、 LB 各0.32 一~0.48岸dNTP 0.6mM 1.2mM;Mg2+ 4mM 10mM;反應(yīng)緩沖液lOxThermoPol Reaction Buffer 1 x;鏈置換DNA聚合酶DNApolymerase 8 U;甜菜堿betaine 0.2mM 1.0mM 。
6、如權(quán)利要求5所述的試劑盒,其特征在于,所述25pLLAMP檢測(cè)體系的具體配置為F3、 B3 各O.l nMFIP、 BIP 各0.8一LF、 LB 各0.4^MdNTP 1.0 mM;Mg2+ 8 mM;反應(yīng)緩沖液lOxThermoPol Reaction Buffer 1 x;鏈置換DNA聚合酶DNApolymerase 8 U;甜菜堿betaine 0.3 mM 。
7、如權(quán)利要求3-6任一所述的試劑盒,其特征在于,所述試劑 盒的檢測(cè)反應(yīng)條件為65。C恒溫lh, 80°C 2 min,然后終止反應(yīng)。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域,特別是涉及一種檢測(cè)犬細(xì)小病毒的LAMP試劑盒,所述試劑盒包含有六條LAMP引物,與LAMP反應(yīng)液一起構(gòu)成檢測(cè)體系。該試劑盒可快速、靈敏地檢測(cè)目前流行的各種犬細(xì)小病毒毒株,其操作簡(jiǎn)單、成本低廉,反應(yīng)結(jié)果易于觀察,特異性好,非常適用于出口檢疫、食品衛(wèi)生以及畜牧飼養(yǎng)場(chǎng)的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè),易于大范圍推廣應(yīng)用。
文檔編號(hào)C12Q1/70GK101624635SQ20091009001
公開日2010年1月13日 申請(qǐng)日期2009年7月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月24日
發(fā)明者坤 張, 剛 李, 范曉娟 申請(qǐng)人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所
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