專(zhuān)利名稱(chēng)：高活性酪蛋白抗氧化肽的兩步法制備技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及高活性酪蛋白抗氧化肽的兩步法制備技術(shù)，涉及以酪蛋白為主要原 料，利用木瓜蛋白酶為催化劑，通過(guò)第一步酪蛋白水解制備酪蛋白抗氧化肽和第二步酪蛋 白抗氧化肽的進(jìn)一步處理，兩步法制備高活性酪蛋白抗氧化肽。所制備的高活性酪蛋白抗 氧化肽可以應(yīng)用于食品加工和保健品的生產(chǎn)。
背景技術(shù)：
抗氧化肽是通過(guò)天然蛋白質(zhì)的酶水解處理，從而制備出的具有抗氧化活性的蛋白 質(zhì)水解物。酪蛋白是抗氧化肽制備中蛋白質(zhì)的主要來(lái)源之一。由于抗氧化肽具有分子量 小、易消化吸收、安全可靠、不引起過(guò)敏反應(yīng)等特點(diǎn)，因此抗氧化肽在食品加工、保健品生產(chǎn) 等許多領(lǐng)域具有良好的前景?？寡趸牡囊话阒苽渲饕峭ㄟ^(guò)蛋白質(zhì)的直接酶水解而達(dá)到，抗氧化肽的活性可 以通過(guò)肽的分離、提純等處理進(jìn)一步提高，但處理技術(shù)復(fù)雜、操作困難。本發(fā)明以酪蛋白、木 瓜蛋白酶為基本原料，兩步法制備高活性酪蛋白抗氧化肽。第一步采用木瓜蛋白酶催化酪 蛋白水解，制備酪蛋白抗氧化肽；第二步再次利用木瓜蛋白酶對(duì)酪蛋白抗氧化肽進(jìn)行處理， 制備高活性酪蛋白抗氧化肽。兩步法制備出的高活性酪蛋白抗氧化肽，不需要肽的分離或 純化處理，并且產(chǎn)物的活性提高。因此，高活性酪蛋白抗氧化肽的兩步法制備技術(shù)，可以作 為一種新的技術(shù)手段應(yīng)用于高活性酪蛋白抗氧化肽的生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是以酪蛋白和木瓜蛋白酶為基本原料，第一步通過(guò)木瓜蛋白酶催化 酪蛋白的水解制備出酪蛋白抗氧化肽，第二步再次利用木瓜蛋白酶對(duì)酪蛋白抗氧化肽進(jìn)行 處理，從而制備出一種高活性酪蛋白抗氧化肽。本發(fā)明的目的通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)(一 )酪蛋白抗氧化肽的制備方法(1)將酪蛋白用蒸餾水進(jìn)行溶脹，同時(shí)不斷攪拌直到酪蛋白完全溶解，配制質(zhì)量體 積比為4% 6% (W/V)的酪蛋白溶液；(2)用Imol · L—1的NaOH溶液將酪蛋白溶液的pH值調(diào)至5. 0 8. 0 ；(3)向上述調(diào)節(jié)完pH值的酪蛋白溶液中加入木瓜蛋白酶，木瓜蛋白酶的添加量為 每克酪蛋白300U 600U酶活力單位；(4)將上述加入木瓜蛋白酶的酪蛋白溶液放入40°C 50°C水浴中進(jìn)行加熱、水 解，攪拌器攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為每分鐘30轉(zhuǎn) 90轉(zhuǎn)，水解進(jìn)行1小時(shí) 5小時(shí)；(5)用Imol · I^1HCl溶液將水解的酪蛋白溶液pH值調(diào)至4. 6，然后升溫至100°C 加熱20分鐘進(jìn)行酶滅活；(6)將上述水解的酪蛋白溶液以每分鐘5000轉(zhuǎn)離心處理20分鐘，棄去殘?jiān)?，收?br> 上清液；
(7)把所得到的上清液冷凍干燥或者噴霧干燥。冷凍干燥時(shí)冷凍干燥機(jī)的擱板加 熱溫度為20°C，干燥箱壓力降至6帕 8帕?xí)r取出冷凍干燥物，得到酪蛋白抗氧化肽。噴霧 干燥時(shí)，流量為每小時(shí)150千克、進(jìn)口溫度為160°C 200°C、出口溫度為70°C 80°C，得到 酪蛋白抗氧化肽。在第一步制備中，酪蛋白溶液的質(zhì)量體積比最好是5 % (W/V)，溶液的PH值最好調(diào) 節(jié)至6. 5，木瓜蛋白酶添加量最好是每克酪蛋白500U酶活力單位，反應(yīng)溫度最好是45°C，攪 拌轉(zhuǎn)速最好是每分鐘60轉(zhuǎn)，水解時(shí)間最好是2小時(shí)。( 二)高活性酪蛋白抗氧化肽的制備方法(1)將得到的酪蛋白抗氧化肽用蒸餾水溶解，配制質(zhì)量體積比為30 7 0% (W/V) 的酪蛋白抗氧化肽溶液；(2)向上述酪蛋白抗氧化肽溶液中加入木瓜蛋白酶，木瓜蛋白酶的添加量為每克 酪蛋白抗氧化肽300U 600酶活力單位；(3)將上述加入木瓜蛋白酶的酪蛋白抗氧化肽溶液在13°C 47°C的條件下攪拌 進(jìn)行處理，攪拌速度為每分鐘60轉(zhuǎn) 100轉(zhuǎn)，處理時(shí)間為1小時(shí) 10小時(shí)；然后升溫至 100°C加熱20分鐘進(jìn)行酶滅活；(4)將處理后的酪蛋白抗氧化肽溶液冷凍干燥或者噴霧干燥。冷凍干燥時(shí)冷凍干 燥機(jī)的擱板加熱溫度為20°C，干燥箱壓力降至6帕 8帕?xí)r，取出冷凍干燥物，得到高活性 酪蛋白抗氧化肽。噴霧干燥時(shí)，流量為每小時(shí)150千克、進(jìn)口溫度為160°C 200°C、出口溫 度為70°C 80°C，得到高活性酪蛋白抗氧化肽。在第二步制備中，酪蛋白抗氧化肽的質(zhì)量體積比最好是50% (W/V)，木瓜蛋白酶 添加量最好是每克酪蛋白抗氧化肽500U酶活力單位，處理溫度最好是30°C，攪拌轉(zhuǎn)速最好 是每分鐘80轉(zhuǎn)，處理時(shí)間最好是5. 6小時(shí)。本發(fā)明以酪蛋白、木瓜蛋白酶為基本原料，兩步法制備出高活性酪蛋白抗氧化肽。 本發(fā)明制備的抗氧化肽活性更高，具有對(duì)清除2，2-二苯基-1-苦胼基(DPPH)自由基能力 有顯著提高的優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式為更好地理解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，但是本發(fā)明要求保護(hù)的范 圍并不局限于實(shí)施例表示的范圍。實(shí)施例1(1)將酪蛋白用蒸餾水進(jìn)行溶脹，同時(shí)不斷攪拌直到酪蛋白完全溶解，配制質(zhì)量體 積比為5% (W/V)的酪蛋白溶液；(2)用Imol · L—1的NaOH溶液將酪蛋白溶液的pH值調(diào)至6. 5 ；(3)向上述調(diào)節(jié)完pH值的酪蛋白溶液中加入木瓜蛋白酶，木瓜蛋白酶的添加量為 每克酪蛋白500U酶活力單位；(4)將上述加入木瓜蛋白酶的酪蛋白溶液放入45°C水浴中進(jìn)行加熱、水解，攪拌 器攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為每分鐘60轉(zhuǎn)，水解進(jìn)行2小時(shí)；(5)用Imol · L—1 HCl溶液將水解的酪蛋白溶液pH值調(diào)至4. 6，然后升溫至100°C 加熱20分鐘進(jìn)行酶滅活；
(6)將上述水解的酪蛋白溶液以每分鐘5000轉(zhuǎn)離心處理20分鐘，棄去殘?jiān)?，收?br> 上清液；(7)把所得到的上清液冷凍干燥或者噴霧干燥。冷凍干燥時(shí)冷凍干燥機(jī)的擱板加 熱溫度為20°C，干燥箱壓力降至6帕 8帕?xí)r取出冷凍干燥物，得到酪蛋白抗氧化肽。噴霧 干燥時(shí)，流量為每小時(shí)150千克、進(jìn)口溫度為160°C 200°C、出口溫度為70°C 80°C，得到 酪蛋白抗氧化肽。(8)將得到的酪蛋白抗氧化肽用蒸餾水溶解，配制質(zhì)量體積比為50% (W/V)的酪 蛋白抗氧化肽溶液；(9)向上述酪蛋白抗氧化肽溶液中加入木瓜蛋白酶，木瓜蛋白酶的添加量為每克 酪蛋白抗氧化肽500U酶活力單位；(10)將上述加入木瓜蛋白酶的酪蛋白抗氧化肽溶液在30°C的條件下攪拌進(jìn)行處 理，攪拌速度為每分鐘80轉(zhuǎn)，處理時(shí)間為5. 6小時(shí)；然后升溫至10(TC加熱20分鐘進(jìn)行酶 滅活；(11)將處理后的酪蛋白抗氧化肽溶液冷凍干燥或者噴霧干燥。冷凍干燥時(shí)冷凍 干燥機(jī)的擱板加熱溫度為20°C，干燥箱壓力降至6帕 8帕?xí)r，取出冷凍干燥物，噴霧干燥 時(shí)，流量為每小時(shí)150千克、進(jìn)口溫度為160°C 200°C、出口溫度為70°C 80°C，得到高活 性酪蛋白抗氧化肽。采用本發(fā)明的兩步法制備出的高活性酪蛋白抗氧化肽，采用Nsimba等的方法 (NsimbaRY， Kikuzaki H， Konishi Y.Antioxidant activity of various extracts and fractions of Chenopodiumquinoa and Amaranthus spp.seeds.Food Chemistry，2008， 106(2) 760-766)進(jìn)行抗氧化活性測(cè)定，得到其清除2，2-二苯基-1-苦胼基(DPPH)自由基 能力的結(jié)果為T(mén)EAC(Tr0l0X等價(jià)抗氧化力)為90mmol 'g—1，DPPH自由基的半抑率(IC5tl)為 0. 2mg · mL—1。而在相同的條件下，一步酶水解法制備出的酪蛋白抗氧化肽，采用Nsimba等 的方法進(jìn)行抗氧化活性測(cè)定，得到其清除DPPH自由基能力的結(jié)果為T(mén)EAC為IOmmol · DPPH自由基的半抑率(IC5tl)為1. Smg · mL—1。高活性酪蛋白抗氧化肽的活性提高8倍。
權(quán)利要求
高活性酪蛋白抗氧化肽的兩步法制備技術(shù)，其特征在于利用酪蛋白和木瓜蛋白酶兩步法制備出高活性酪蛋白抗氧化肽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高活性酪蛋白抗氧化肽的第一步制備方法，其特征在于(1)將酪蛋白用蒸餾水進(jìn)行溶脹，同時(shí)不斷攪拌直到酪蛋白完全溶解，配制質(zhì)量體積比 為4% 6% (W/V)的酪蛋白溶液；(2)用Imol· L—1的NaOH溶液將酪蛋白溶液的pH值調(diào)至5. O 8. O ；(3)向上述調(diào)節(jié)完pH值的酪蛋白溶液中加入木瓜蛋白酶，木瓜蛋白酶的添加量為每克 酪蛋白300U 600U酶活力單位；(4)將上述加入木瓜蛋白酶的酪蛋白溶液放入40°C 50°C水浴中進(jìn)行加熱、水解，攪 拌器攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為每分鐘30轉(zhuǎn) 90轉(zhuǎn)，水解進(jìn)行1小時(shí) 5小時(shí)；(5)用Imol· L-1HCl溶液將水解的酪蛋白溶液pH值調(diào)至4. 6，然后升溫至100°C加熱 20分鐘進(jìn)行酶滅活；(6)將上述水解的酪蛋白溶液以每分鐘5000轉(zhuǎn)離心處理20分鐘，棄去殘?jiān)?，收集上?液；(7)把所得到的上清液冷凍干燥或者噴霧干燥。冷凍干燥時(shí)冷凍干燥機(jī)的擱板加熱溫 度為20°C，干燥箱壓力降至6帕 8帕?xí)r取出冷凍干燥物，得到酪蛋白抗氧化肽。噴霧干燥 時(shí)，流量為每小時(shí)150千克、進(jìn)口溫度為160°C 200°C、出口溫度為70V 80°C，得到酪蛋 白抗氧化肽。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的第一步制備方法，其特征在于所述酪蛋白溶液的質(zhì)量體積 比最好是5% (W/V)，所述木瓜蛋白酶的添加量最好是每克酪蛋白500U酶活力單位。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的第一步制備方法，其特征在于所述溶液的pH值最好調(diào)節(jié)至 6. 5，所述反應(yīng)溫度最好是45°C，所述水解時(shí)間最好是2小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高活性酪蛋白抗氧化肽的第二步制備方法，其特征在于(1)將得到的酪蛋白抗氧化肽用蒸餾水溶解，配制質(zhì)量體積比為30% 70%(W/V)的 酪蛋白抗氧化肽溶液；(2)向上述酪蛋白抗氧化肽溶液中加入木瓜蛋白酶，木瓜蛋白酶的添加量為每克酪蛋 白抗氧化肽300U 600酶活力單位；(3)將上述加入木瓜蛋白酶的酪蛋白抗氧化肽溶液在13°C 47°C的條件下攪拌進(jìn)行 處理，攪拌速度為每分鐘60轉(zhuǎn) 100轉(zhuǎn)，處理時(shí)間為1小時(shí) 10小時(shí)；然后升溫至100°C 加熱20分鐘進(jìn)行酶滅活；(4)將處理后的酪蛋白抗氧化肽溶液冷凍干燥或者噴霧干燥。冷凍干燥時(shí)冷凍干燥機(jī) 的擱板加熱溫度為20°C，干燥箱壓力降至6帕 8帕?xí)r，取出冷凍干燥物，得到高活性酪蛋 白抗氧化肽。噴霧干燥時(shí)，流量為每小時(shí)150千克、進(jìn)口溫度為160°C 200°C、出口溫度為 70°C 80°C，得到高活性酪蛋白抗氧化肽。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的第二步制備方法，其特征在于所述酪蛋白抗氧化肽的質(zhì)量 體積比最好是50% (W/V)，所述木瓜蛋白酶的添加量最好是每克酪蛋白500U酶活力單位。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的第二步制備方法，其特征在于所述處理溫度最好是30°C，所 述處理時(shí)間最好是5. 6小時(shí)。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)的是高活性酪蛋白抗氧化肽的兩步法制備技術(shù)。第一步，按照質(zhì)量體積比為4％～6％(W/V)配制酪蛋白的水溶液，調(diào)節(jié)溶液pH值至5.0～8.0，加入木瓜蛋白酶；溶液保持在40℃～50℃下反應(yīng)1小時(shí)～5小時(shí)，然后100℃加熱20分鐘對(duì)酶滅活，離心后將上清液冷凍干燥或噴霧干燥得到酪蛋白抗氧化肽。第二步，按照質(zhì)量體積比為30％～70％(W/V)配制酪蛋白抗氧化肽的水溶液，加入木瓜蛋白酶后在13℃～47下反應(yīng)1小時(shí)～10小時(shí)，然后100℃加熱20分鐘對(duì)酶滅活，溶液冷凍干燥或噴霧干燥得到高活性酪蛋白抗氧化肽。本發(fā)明方法制備的高活性酪蛋白抗氧化肽的活性提高8倍，可用于食品加工和保健品的生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C12P21/06GK101824453SQ20091007149
公開(kāi)日2010年9月8日 申請(qǐng)日期2009年3月5日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月5日
發(fā)明者吳丹, 趙新淮 申請(qǐng)人:東北農(nóng)業(yè)大學(xué)