專利名稱：酪蛋白衍生的肽及其治療用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及衍生于乳酪蛋白或與乳酪蛋白αS1部分N末端序列相似的生物活性肽。這些肽能夠刺激并增強免疫應答，保護避免病毒感染，使血清膽固醇水平正常化，并能刺激造血。酪蛋白衍生的肽無毒，可以用來治療、預防免疫病、高膽固醇血癥、血液系統(tǒng)疾病和病毒相關性疾病。
背景技術：
營養(yǎng)物質(zhì)中的生物活性分子很多食物除了營養(yǎng)價值外，消化過程中產(chǎn)生的某些部分和產(chǎn)物還具有影響生理過程的作用。這些“外營養(yǎng)”組分中的一部分以其活性形式存在于完整的營養(yǎng)品中，如母乳和初乳中的免疫球蛋白，豆制品中的植物雌激素，水果和維生素中的多酚抗氧化物。其他組分則包含于營養(yǎng)分子中，在消化或食物分解過程中以活性形式釋放，如來自乳球蛋白的抗高血壓肽[Kitts，D.D.(1999)，Can.J.Physiol.Pharmacol.724；423-434]。
乳蛋白中的生物活性乳蛋白中的主要成分酪蛋白，根據(jù)其電泳遷移性習慣上被定義為含有三個部分，α、β和γ[N.J.Hipp，et al.(1952)，Dairy Sci.，35272]。如今，根據(jù)每一亞組的氨基酸序列定義酪蛋白，包括αS1，αS2，β和κ[W.N.Engel et al.(1984)，J.Dairy Sci.671599]。
在消化過程中，酪蛋白主要在酸性蛋白酶，如凝乳酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶的作用下進行蛋白裂解，產(chǎn)生更短的肽，并且通過得到的蛋白片段導致凝化和鈣的螯合。針對乳化合物的幾項研究顯示了酪蛋白相關性殺菌活性。美國專利3,764,670公開，酪蛋白的蛋白水解消化產(chǎn)物具有針對微生物的抗生素特性。以色列專利42863描述了一種由酪蛋白N末端23個氨基酸組成的酪蛋白衍生的肽，該肽具有抗菌活性。此外，酪蛋白或其衍生物還具有其他生理活性，如阿片樣和生長因子樣活性[Kitts，D.D.，(1999)，ibid.]。
在酪蛋白肽中還觀察到免疫調(diào)節(jié)活性。Coste et al.(1992，Immun.Lett.3341-46)觀察到，在應用β酪蛋白C末端衍生的肽處理大鼠后，淋巴細胞增殖能力增強。但是，這些研究中沒有一項研究確定了這些酪蛋白肽中決定“補充營養(yǎng)”特性的特異序列。
癌癥治療中的造血作用大劑量化療后，特別是采用自體骨髓或外周血干細胞移植(ASCT)或異體骨髓移植(BMT)支持的大劑量清髓性放化療后，患者由于全血細胞減少癥而面臨高度危險。在移植后，粒細胞減少癥可以導致嚴重的、有時甚至是致命性感染并發(fā)癥的發(fā)生，這些感染可以是常見細菌、病毒、真菌和寄生蟲引起的。同樣，血小板減少癥通常導致出血傾向，有時甚至需要長期依賴血小板。一旦發(fā)生血小板抵抗，出血事件就可能威脅生命，出血性并發(fā)癥通常是致命的。由于粒細胞減少癥引起的危險可以通過支持性治療手段得到部分緩解，最有效的方法是給予能夠增強粒細胞重建的重組人細胞因子，特別是粒細胞集落刺激因子(G-CSF)和粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)。這些藥物非常昂貴(大約每名患者每天需要200-400美圓)，由于過敏反應、發(fā)熱、骨痛可以導致少見不良反應，偶爾發(fā)生血管滲漏綜合征，包括心包炎和胸膜炎。有些副作用也可能是由于這些造血生長因子可能內(nèi)在釋放的其他細胞因子導致的。而且，這些造血生長因子在某些腫瘤細胞攜帶G-CSF或GM-CSF受體的患者中還可能禁止應用，如急性和慢性髓細胞白血病以及骨髓增生異常綜合征。盡管通過應用造血細胞因子在治療具有全血細胞減少癥危險的患者的治療中取得了長足進展，但是在血小板減少癥的治療方面卻毫無進展。在大劑量化療特別是ASCT后，患者面臨血小板減少癥的危險可能持續(xù)數(shù)月，甚至長達3年，一些血小板減少癥患者可能終生無法恢復。很多患者由于以前應用多種血液制品治療而產(chǎn)生血小板抵抗，因此即使應用單一供體的血小板進行頻繁密集輸注，也可能使血小板減少癥變得無法克服，甚至只是暫時緩解也不可能。血小板抵抗和血小板減少癥的長時間持續(xù)，是世界范圍內(nèi)ASCT中心死亡的常見原因。
目前，正在研究幾種新的重組細胞因子，如重組人白細胞介素-3(rhIL3)和重組人白細胞介素-6(rhIL6)，作為增強巨核細胞生成和血小板重建的潛在藥劑。不幸的是，初步臨床試驗顯示，盡管rhIL3和rhIL6可以增強血小板重建，但是這些作用不顯著，而且費時很長。
很明顯，血小板減少癥的長時間持續(xù)是目前臨床骨髓移植中心的一個主要問題，對于這一問題，迄今為止尚無滿意的解決方案。
因此，存在這樣一種具有共識的需求，就是在避免上述限制的情況下，開發(fā)一種安全、便宜、療效迅速、明確的造血細胞刺激因子，特別是巨核細胞生成刺激因子將是非常有利的。
調(diào)節(jié)造血和血小板功能的血小板生成素(TPO)盡管在血小板缺陷中腎和肝衍生的生長因子的增加不是由于這些器官中TPO生物合成的適應而導致的，TOP似乎是體內(nèi)血小板產(chǎn)生的主要調(diào)節(jié)劑。似乎存在“反饋環(huán)”，其中循環(huán)的血小板數(shù)目決定骨髓可以獲得多少循環(huán)的TPO用于產(chǎn)生血小板。此外，已經(jīng)證明TPO是具有重要的多細胞系作用的早期作用的細胞因子單獨的TPO或其與其它早期作用細胞因子的組合可以(I)促進祖細胞的存活力和抑制祖細胞凋亡；(ii)調(diào)節(jié)造血干細胞產(chǎn)生和功能；(iii)觸發(fā)靜息的多能細胞的細胞分裂；(iv)誘導多細胞系分化和(v)增強包括粒細胞、紅細胞、巨噬細胞和巨核細胞(MK，CFU-GEMM)的多細胞系集落的形成。而且，TPO刺激更有限的粒細胞/單核細胞、巨核細胞和紅細胞系集落的祖細胞的產(chǎn)生，并且刺激原始的人骨髓和巨核細胞與纖連蛋白和纖維蛋白原的粘附。因此，TPO對于臨床血液學家/移植者來說是重要的細胞因子用于動員、擴增和離體擴增用于自體和異體移植的干細胞和定型的前體細胞[von demBorne，A.E.G.Kr.，et al.，(1998)Thrombopoietinit’s role inplatelet disorders and as a new drug in clinical medicine.InBailliers Clin.Hematol.June11(2)，427-45]。
TPO除了影響造血外，該強效的生長因子為各種激動劑激發(fā)血小板并且調(diào)節(jié)血小板-細胞外基質(zhì)相互作用。盡管其自身不導致血小板聚集，TPO上調(diào)ADP誘導的聚集，特別是第二輪的聚集，上調(diào)顆粒(ADP、ATP、5-羥色胺等)釋放并且產(chǎn)生血栓烷B2，增加血小板附著于膠原，并且加強剪切誘導的血小板聚集。TPO也刺激PMN激活，誘導IL-8釋放并且激發(fā)氧代謝物產(chǎn)生，很可能增強抗微生物防御。
臨床研究提示了TPO在理解和治療多種造血狀況中的價值。在患有特發(fā)性再生障礙性貧血(AA)的患者中，甚至在免疫抑制治療后的緩解中也持續(xù)存在升高的TPO水平，表明造血缺陷。TPO在其它形式的再生障礙性血小板減少癥中也升高，但在血小板破壞增加的狀況中不升高。很顯然，TPO產(chǎn)生的反應性增加在破壞性的血小板減少癥中是足夠的。因此，TPO不僅僅是再生障礙性血小板減少癥的治療選擇，也是破壞性血小板減少癥的治療選擇。
血小板生成劑受到廣泛的臨床關注，用于預防和/或治療病理學或治療誘導的血小板減少癥，并且作為血小板輸注的替代。在評價的細胞因子中，除了臨界有效的IL-11外，都被認為是不能用于臨床用途。TPO被廣泛認為是血小板減少癥治療的細胞因子選擇。最近可以獲得重組人TPO(Genentech)，使得能夠進行準確的藥代動力學測定和臨床試驗。因此，TPO的潛在用途包括支持性護理的領域(化療/放療、骨髓和干細胞移植后)、血液病(AA，骨髓發(fā)育不良、先天性和獲得性血小板減少癥)、肝臟疾病、輸血(擴增、獲得、動員和儲存血小板)和手術(包括肝移植)。特別關注的是用于骨髓發(fā)育不良的TPO/EPO/G-CSF混合物的潛在用途，用于外周干細胞動員的G-CSF和TPO組合，和用于良好血小板重建的收獲CD 34+細胞中的TPO以及巨核細胞的離體擴增。但是，與正在考慮用于臨床用途的其它造血劑相似，TPO非常昂貴并且在治療有效水平可能是抗原性的。因此，開發(fā)安全、便宜和容易獲得的能夠增加TPO活性的血小板生成刺激劑將是有利的。
酪蛋白的αS1部分可以通過多種方法從乳蛋白中獲得酪蛋白的αS1部分[D.G.Schmidth and T.A.J.Paynes(1963)，Biochim.，Biophys.Acta，78492；M.P.Thompson and C.A.Kiddy(1964)，J.Diary Sci.，47626；J.C.Mercier，et al.(1968)，Bull.Soc.Chim.Biol.50521]，還測定了酪蛋白的αS1部分的完整氨基酸序列J.C.Mercier，etal(1968)(Eur.J.Biochem.2341)。通過重組DNA技術，還克隆了牛酪蛋白αS1部分的基因組和編碼序列，并進行了測序[D.Koczan，et al.(1991)，Nucl.Acids Res.19(20)5591；McKnight，R.A.，et al(1989)，J.Dairy Sci.722464-73]。文獻記載了酪蛋白的αS1部分N末端片段的蛋白水解和鑒定[J.C.Mercier，et al(1970)Eur.J.Biochem.16439；P.L.H.McSweeney et al.(1993)，J.DiaryRes.，60401]，在攝入完整的乳蛋白后，經(jīng)小腸吸收，哺乳動物血漿中出現(xiàn)該片段[Fiat，A.M.，et al.(1998)Biochimie，80(2)2155-65]。Meisel，H and Bockelmann，W.[(1999)，Antonie VanLeeuwenhoek，76207-15]在乳酸菌消化酪蛋白α和β部分釋放的肽中檢測了免疫肽、casokinin和casomorphins的氨基酸序列。特別令人關注的是，α和κ酪蛋白部分的C末端部分顯示了抗聚集和溶血活性[Chabance，B.et al.(1997)，Biochem.Mol.Biol.Int.42(1)77-84；Caen J.Et al.(1993)，J.Dairy Sci.76(1)301-310]。
以前的研究記載了存在于N末端αS1氨基酸序列的潛在生物活性肽，但是沒有提及應用這些蛋白片段、特異性序列或確定的合成肽來增強造血，預防病毒感染或調(diào)節(jié)自身免疫病的發(fā)生。
發(fā)明概述根據(jù)本發(fā)明，提供了一種預防或治療自身免疫病的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療病毒性疾病的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導造血的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導造血干細胞增殖的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導造血干細胞增殖和分化的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導巨核細胞生成的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導紅細胞生成的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導白細胞生成的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導血小板生成的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導血漿細胞增殖的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導樹突細胞增殖的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導巨噬細胞增殖的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療血小板減少癥的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療全血細胞減少癥的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療粒細胞減少癥的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療高脂血癥的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療高膽固醇血癥的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療葡萄糖尿(glucosuria)的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療糖尿病的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療艾滋病的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療HIV感染的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療與清髓性劑量的放化療相關的狀況的方法，所述清髓性放化療采用自體骨髓或外周血干細胞移植(ASCT)或異體骨髓移植(BMT)支持，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種治療紅細胞生成素可治療的狀況的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種增加紅細胞生成素的作用的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種治療血小板生成素可治療的狀況的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種增加血小板生成素的作用的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種增強外周干細胞動員的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療自身免疫病的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療病毒性疾病的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防病毒感染的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導造血的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導造血干細胞增殖的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導造血干細胞增殖和分化的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導巨核細胞生成的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導紅細胞生成的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導白細胞生成的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導血小板生成的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導漿細胞增殖的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導樹突細胞增殖的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
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根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療葡萄糖尿的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
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根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療艾滋病的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療HIV感染的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療與清髓性劑量的放化療相關的狀況的藥物組合物，所述清髓性放化療采用自體骨髓或外周血干細胞移植(ASCT)或異體骨髓移植(BMT)支持，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種治療紅細胞生成素可治療的狀況的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種增加紅細胞生成素的作用的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種治療血小板生成素可治療的狀況的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種增加血小板生成素的作用的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種增強外周干細胞動員的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導造血的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
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根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導造血干細胞增殖和分化的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導巨核細胞生成的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導紅細胞生成的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導白細胞生成的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導血小板生成的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療血小板減少癥的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療全血細胞減少癥的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療粒細胞減少癥的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種治療或預防選自下組的適應癥的藥物組合物自身免疫病或狀況、病毒性疾病、病毒感染、血液病、血液系統(tǒng)缺陷、血小板減少癥、全血細胞減少癥、粒細胞減少癥、高脂血癥、高膽固醇血癥、葡萄糖尿、高血糖癥、糖尿病、艾滋病、HIV-1、輔助T細胞障礙、樹突細胞缺陷、巨噬細胞缺陷、造血干細胞障礙包括血小板、淋巴細胞、漿細胞和中性粒細胞障礙、白血病前狀況、白血病狀況、由化療或放療導致的免疫系統(tǒng)障礙、由免疫缺陷和細菌感染的疾病治療導致的人免疫系統(tǒng)障礙，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種治療或預防選自下組的適應癥的藥物組合物血液病、血液系統(tǒng)缺陷、血小板減少癥、全血細胞減少癥、粒細胞減少癥、樹突細胞缺陷、巨噬細胞缺陷、造血干細胞障礙包括血小板、淋巴細胞、漿細胞和中性粒細胞障礙、白血病前狀況、白血病狀況、骨髓發(fā)育不良綜合征、再生障礙性貧血和骨髓不足，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種在清髓性受體體內(nèi)增強所提供的血液干細胞定殖的方法，該方法是通過在受體中提供和植入所提供的血液干細胞前用αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽處理所提供的血液干細胞的供體實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種在清髓性受體體內(nèi)增強所提供的血液干細胞定殖的方法，該方法是通過在受體中植入所提供的血液干細胞前用αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽處理所提供的血液干細胞實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種在清髓性受體體內(nèi)增強血液干細胞定殖的方法，該方法是通過在受體中植入血液干細胞前用αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽處理所述血液干細胞實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種在清髓性受體體內(nèi)增強所提供的血液干細胞定殖的方法，該方法是通過在受體中提供和植入所提供的血液干細胞前用αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和血小板生成素處理所提供的血液干細胞的供體實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種在清髓性受體體內(nèi)增強所提供的血液干細胞定殖的方法，該方法是通過在受體中植入所提供的血液干細胞前用αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和血小板生成素處理所提供的血液干細胞實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種在清髓性受體體內(nèi)增強血液干細胞定殖的方法，該方法是通過在受體中植入血液干細胞前用αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和血小板生成素處理所述血液干細胞實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于預防或治療自身免疫病的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于預防或治療病毒性疾病的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于預防病毒感染的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于誘導造血的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于誘導造血干細胞增殖的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于誘導造血干細胞增殖和分化的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于誘導巨核細胞生成的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于誘導紅細胞生成的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于誘導白細胞生成的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于誘導血小板生成的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于誘導漿細胞增殖的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于誘導樹突細胞增殖的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于誘導巨噬細胞增殖的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于預防或治療血小板減少癥的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于預防或治療全血細胞減少癥的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于預防或治療粒細胞減少癥的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于預防或治療高脂血癥的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于預防或治療高膽固醇血癥的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于預防或治療葡萄糖尿的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于預防或治療糖尿病的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于預防或治療艾滋病的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于預防或治療HIV感染的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于預防或治療與清髓性劑量的放化療相關的狀況的藥物中的用途，所述清髓性放化療采用自體骨髓或外周血干細胞移植(ASCT)或異體骨髓移植(BMT)支持。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于治療血小板生成素可治療的狀況的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于增加血小板生成素的作用的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于增強外周干細胞動員的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于在清髓性受體體內(nèi)增強所提供的血液干細胞定殖的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于在清髓性受體體內(nèi)增強血液干細胞定殖的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療自身免疫病的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療病毒性疾病的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療病毒感染的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于誘導造血的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于誘導造血干細胞增殖的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于誘導造血干細胞增殖和分化的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于誘導巨核細胞生成的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于誘導紅細胞生成的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于誘導白細胞生成的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于誘導血小板生成的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于誘導漿細胞增殖的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于誘導樹突細胞增殖的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于誘導巨噬細胞增殖的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療血小板減少癥的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療全血細胞減少癥的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療粒細胞減少癥的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療高脂血癥的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療高膽固醇血癥的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療葡萄糖尿的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療糖尿病的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療艾滋病的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療HIV感染的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療與清髓性劑量的放化療相關的狀況的用途，所述清髓性放化療采用自體骨髓或外周血干細胞移植(ASCT)或異體骨髓移植(BMT)支持。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于治療血小板生成素可治療的狀況的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于增加血小板生成素的作用的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于在清髓性受體體內(nèi)增強所提供的血液干細胞定殖的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于在清髓性受體體內(nèi)增強血液干細胞定殖的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于增強外周干細胞動員的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于誘導造血的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于誘導造血干細胞增殖的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于誘導造血干細胞增殖和分化的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于誘導巨核細胞生成的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于誘導紅細胞生成的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于誘導白細胞生成的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于誘導血小板生成的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于預防或治療血小板減少癥的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于預防或治療全血細胞減少癥的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于預防或治療粒細胞減少癥的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療選自下組的適應癥的用途自身免疫病或狀況、病毒性疾病、病毒感染、血液病、血液系統(tǒng)缺陷、血小板減少癥、全血細胞減少癥、粒細胞減少癥、高脂血癥、高膽固醇血癥、葡萄糖尿、高血糖癥、糖尿病、艾滋病、HIV-1、輔助T細胞障礙、樹突細胞缺陷、巨噬細胞缺陷、造血干細胞障礙包括血小板、淋巴細胞、漿細胞和中性粒細胞障礙、白血病前狀況、白血病狀況、由化療或放療導致的免疫系統(tǒng)障礙、由免疫缺陷和細菌感染的疾病治療導致的人免疫系統(tǒng)障礙。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于預防或治療選自下組的適應癥的用途血液病、血液系統(tǒng)缺陷、血小板減少癥、全血細胞減少癥、粒細胞減少癥、樹突細胞缺陷、巨噬細胞缺陷、造血干細胞障礙包括血小板、淋巴細胞、漿細胞和中性粒細胞障礙、白血病前狀況、白血病狀況、骨髓發(fā)育不良綜合征、再生障礙性貧血和骨髓不足。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于在清髓性受體體內(nèi)增強所提供的血液干細胞定殖的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于在清髓性受體體內(nèi)增強血液干細胞定殖的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于增強外周干細胞動員的用途。
根據(jù)下述本發(fā)明優(yōu)選實施方案的進一步特征，該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選實施方案的進一步特征所述，該肽是合成肽。
根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選實施方案的進一步特征所述，該肽具有序列1-25之一所示的序列。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種純化的肽，該肽具有選自序列1-25的氨基酸序列。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種藥物組合物，該藥物組合物包括一種純化的肽和藥用載體，所述純化的肽具有選自序列1-25的氨基酸序列。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種藥物組合物，該藥物組合物包括血小板生成素和一種純化的肽以及藥用載體，所述純化的肽具有選自序列1-25的氨基酸序列。
本發(fā)明通過提供肽治療人類疾病，成功克服了目前已知處置的不足，所述肽衍生于αS1酪蛋白N末端部分，沒有能檢測到毒性，具有高度治療效果。
附圖簡述本發(fā)明僅通過示例的方式參考附圖進行描述。關于圖中細節(jié)，應該強調(diào)的是，具體顯示的部分僅是通過示例的方式，為了更好地闡釋本發(fā)明優(yōu)選實施方案，而且它的表現(xiàn)方式是為了提供據(jù)信是最有效而且最容易理解的方式，來描述本發(fā)明的原理和概念方面。就此方面而言，我們并未試圖顯示比基本理解本發(fā)明所需更為詳細的本發(fā)明結構細節(jié)，結合附圖，我們的描述會使本領域技術人員明了，在具體實踐過程中，如何采取本發(fā)明的幾種形式。
圖中

圖1描述了在培養(yǎng)的鼠骨髓細胞中，應用天然酪蛋白衍生的肽刺激自然殺傷(NK)細胞活性。在有或沒有100μg/ml天然酪蛋白衍生的肽存在的情況下，培養(yǎng)的鼠骨髓細胞對35S標記的YAC靶細胞的裂解作用，用YAC細胞釋放到培養(yǎng)上清液中的總放射活性比例(％釋放的35S)來表示。圖1代表的NK活性為效應細胞∶靶細胞比率為25∶1和50∶1。
圖2a和2b描述了在培養(yǎng)的人外周血干細胞(PBSC)中，應用天然酪蛋白衍生的肽刺激自然殺傷(NK)細胞活性。在沒有(0μg)或漸增濃度的(5-500μg/ml)天然酪蛋白衍生的肽存在的條件下孵育的，來自粒細胞集落刺激因子(G-CSF)處理的供體的培養(yǎng)的人PBSC對35S標記的K562靶細胞的裂解作用，用K562細胞釋放到培養(yǎng)上清液中的總放射活性比例(％釋放的35S)來表示。圖2a表示來自于同一患者，用不同效應細胞∶靶細胞比率(1∶25和1∶50)孵育的兩個血樣的NK活性。圖2b表示來自于以相同效應細胞靶細胞比率孵育的正常和受影響的供體的血樣的NK活性。正方形表示100∶1的效應細胞∶靶細胞比率，菱形表示50∶1的效應細胞∶靶細胞比率。
圖3a-3c描述了天然酪蛋白衍生的肽刺激由培養(yǎng)的人外周血干細胞(PBSC)增殖自然殺傷(NK)細胞和T淋巴(T)細胞。在有或沒有天然酪蛋白衍生的肽存在的條件下孵育的來自粒細胞集落刺激因子處理的供體的培養(yǎng)的PBSC中NK和T細胞增殖表示為結合抗-CD3/FITC熒光抗T細胞抗體UCHT1或抗CD56/RPE熒光抗NK細胞抗體MOC-1(DAKO A/SDenmark)的細胞的百分比(％)。對照是FITC和RPE偶聯(lián)的抗小鼠IgG抗體。圖3a表示在有(肽)或無(對照)100μg/ml天然酪蛋白衍生的肽的條件下孵育10天后結合熒光抗體CD56的培養(yǎng)的人PBSC細胞百分比(5個獨立的樣品)。圖3b表示在有(肽)或無(對照)100μg/ml天然酪蛋白衍生的肽的條件下孵育14天后結合熒光抗-CD3(T細胞)抗體的培養(yǎng)的人PBSC細胞百分比。圖3c表示在有(肽)或無(對照)100μg/ml天然酪蛋白衍生的肽的條件下孵育28天后結合熒光抗-CD3(T細胞)抗體的培養(yǎng)的人PBSC細胞和結合CD3以及CD56(T和NK樣細胞)抗體兩者的細胞百分比。
圖4描述了在培養(yǎng)的人外周血干細胞(PBSC)中，應用酪蛋白衍生的合成肽刺激自然殺傷(NK)細胞活性。培養(yǎng)的人PBSC(來自一名乳腺癌患者)對35S標記的K562靶細胞的裂解作用，用K562細胞釋放到培養(yǎng)上清液中的總放射活性比例(％釋放)來表示，其中，培養(yǎng)的人PBSC(來自乳腺癌患者)應用漸增濃度的酪蛋白衍生的合成肽(10-500μg/ml)或不應用(0μg)酪蛋白衍生的合成肽孵育。肽代表αS1酪蛋白N末端部分起始氨基酸的1-10(1a，菱形)，1-11(2a，正方形)和1-12(3a，三角形)(合成肽序列見下表3)。
圖5a-c描述了應用天然酪蛋白衍生的肽刺激多種來源的培養(yǎng)的人細胞的增殖。培養(yǎng)的人細胞用漸增濃度的天然酪蛋白衍生的肽孵育14-21天后，其增殖情況用每個樣品中摻入的[3H]胸苷的量來表示。圖5a代表人外周血干細胞的兩個樣品(PBSC1，孵育15天；PBSC2，孵育20天)的標記的摻入，所述人外周血干細胞應用或不應用(對照)50-600μg/ml天然酪蛋白衍生的肽孵育。圖5b代表應用或不應用(對照)50-600μg/ml天然酪蛋白衍生的肽孵育培養(yǎng)的人骨髓細胞21天后，[3H]胸苷的摻入情況。骨髓來自緩解期癌癥患者(BMAuto，實心正方形，BM1，三角形和BM2，空心三角形)或健康志愿者(正常BM，菱形)。圖5c代表應用或不應用(對照)50-1000μg/ml天然酪蛋白衍生的肽孵育培養(yǎng)的人臍帶血細胞14天后，[3H]胸苷的摻入情況。臍帶血細胞由兩名獨立的供者提供(C.B.1，三角形，C.B.2，正方形)。
圖6顯示了一張表，該表描述了來自人骨髓和臍帶血的血液祖細胞反應于天然酪蛋白衍生的肽孵育的增殖情況。反映培養(yǎng)細胞增殖情況的相對細胞數(shù)×104/ml，是通過下面實施例部分所述的計數(shù)細胞法測定的。來自健康志愿者的骨髓(骨髓)和來自正常分娩的臍帶血(臍帶血)在生長因子和AB血清存在的情況下分別孵育13(臍帶血)或14(骨髓)天，孵育期間，添加或不添加漸增濃度的天然酪蛋白衍生的肽(25-500μg/ml)。
圖7顯示了一張表，該表描述了用酪蛋白衍生的合成肽進行體外孵育，對來自鼠骨髓祖細胞的CFU-GEMM集落中巨核細胞、紅細胞、漿細胞和樹突細胞的相對分布的影響(示差計數(shù))。在肉眼可見的集落中對細胞進行評分，所述集落由按照以前對CFU-GEMM集落描述的相似方法制備的鼠骨髓細胞生長。用造血因子和25μg或更多酪蛋白衍生的合成肽孵育細胞14天。示差計數(shù)表示為各個細胞類型總細胞的百分比。圖8表示反應于天然酪蛋白衍生的肽處理，清髓的、骨髓移植小鼠中外周血白細胞重建的刺激。細胞計數(shù)表示白細胞數(shù)目(×104/ml，如血細胞計數(shù)器中所計數(shù))。小鼠(n＝6/組)在第二天接受亞致死放射和同源骨髓移植(106個細胞/小鼠)，1天后靜脈給予1mg天然酪蛋白衍生的肽/受體(肽正方形)或給予1mg人血清白蛋白/受體(對照菱形)。
圖9描述了反應于天然酪蛋白衍生的肽處理，清髓的、骨髓移植小鼠中血小板重建的刺激。血小板(PLT)計數(shù)代表血小板的數(shù)量(×106/ml，如血細胞計數(shù)器中所計數(shù))。小鼠(每組60只)接受致死放射，并在第1天進行同基因骨髓移植(106個細胞/小鼠)，以及靜脈給予1mg天然酪蛋白衍生的肽/受體(肽，菱形)或1mg人血清白蛋白/受體(對照，正方形)。
圖10a-10f描述了應用熒光顯微鏡記錄的培養(yǎng)的人T淋巴細胞對FITC-偶聯(lián)的天然酪蛋白衍生的肽的穿透和核攝取。F1和F2是FITC-偶聯(lián)的天然酪蛋白衍生的肽的相同部分。如下述實施例部分所述，用100μg/ml FITC-偶聯(lián)的天然酪蛋白衍生的肽孵育Sup-T1細胞。孵育期間，清洗細胞，去除游離的標記物質(zhì)，應用福爾馬林固定，準備應用激光掃描共焦顯微鏡觀察、記錄。圖10a-10f是在連續(xù)的孵育期間選擇的細胞圖象，顯示FITC-偶聯(lián)的天然酪蛋白衍生的肽穿透Sup-T1細胞膜(圖10a，10b)，并集中在細胞核(圖10c-10f)。
圖11顯示了一張表，該表描述了反應于天然酪蛋白衍生的肽孵育，Sup-T1淋巴細胞增殖的刺激。用漸增濃度(50-1000μg/ml)的天然酪蛋白衍生的肽孵育Sup-T1細胞(每孔5000)，培養(yǎng)后在指定時間在其孔中計數(shù)，并用[3H]胸苷脈沖18小時。增殖指數(shù)是用天然酪蛋白衍生的肽培養(yǎng)的細胞中[3H]胸苷的平均摻入量(三份樣品)與未用天然酪蛋白衍生的肽培養(yǎng)的細胞(對照)的摻入量的比率。
圖12顯示了一張表，該表描述了天然酪蛋白衍生的肽對HIV-1感染CEM淋巴細胞的抑制。如下文實施例部分所述，CEM細胞或者與用天然酪蛋白衍生的肽預孵育3小時的HIV-1病毒接觸(3小時)，或者在接觸HIV-1病毒之前，用漸增濃度(50-1000μg/ml)的天然酪蛋白衍生的肽預孵育其自身指定的小時數(shù)目(24和48小時)。如下文實施例部分所描述，在感染后第15天，對細胞數(shù)目進行計數(shù)，并且通過P24抗原測定分析HIV-1感染的嚴重程度。對照培養(yǎng)物是接觸未用天然酪蛋白衍生的肽預處理的HIV-1病毒的IF:CEM細胞，和在沒有天然酪蛋白衍生的肽和不接觸HIV-1的相同條件下培養(yǎng)的UIF:CEM細胞。
圖13顯示了一張表，該表描述了酪蛋白衍生的合成肽對HIV-1感染CEM淋巴細胞的抑制。如下文實施例部分所述，CEM細胞與用各種濃度(10-500μg/ml)的天然酪蛋白衍生的合成肽(1P，3P和4P)預孵育3小時的HIV-1病毒接觸(3小時)。如下文實施例部分所描述，在感染后第7天，對細胞數(shù)目進行計數(shù)，并且通過P24抗原測定分析HIV-1感染的嚴重程度。對照培養(yǎng)物(IF)是接觸未用天然酪蛋白衍生的肽預處理的HIV-1病毒的CEM細胞。
圖14描述了通過天然酪蛋白衍生的肽預防雌性非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠中的I型(IDDM)糖尿病。在接受一周一次(三角形和正方形)或兩次100μg天然酪蛋白衍生的肽注射共5周(總共5或10次注射)的雌性NOD小鼠和未處理的對照中，在處理后365天的時間段中監(jiān)測葡萄糖尿。所有對照都發(fā)生了葡萄糖尿和隨后的死亡。
圖15描述了酪蛋白衍生的合成肽減少雌性C57 B1/6小鼠中飲食誘導的高膽固醇/高脂血癥。在接受(IP)酪蛋白衍生的肽B，C，2a或3P，或未處理(對照)小鼠的合并的血樣(每個樣品2只小鼠)中測定總膽固醇(TC)、高密度(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)?！罢！睒悠反韺φ諞]有喂養(yǎng)導致動脈粥樣硬化飲食的對照小鼠。
圖16顯示了一張表，描述了癌癥患者反應于天然酪蛋白衍生的肽的注射而刺激造血的情況。對5名正在接受化療或已經(jīng)接受化療的女性癌癥患者的外周血，如上所述，在肌內(nèi)注射天然酪蛋白衍生的肽前(n)后(n+…)，分別計數(shù)白細胞總數(shù)(WBC，×103)，血小板總數(shù)(PLT，×103)，紅細胞總數(shù)(RBC，×103)和血紅蛋白量(g/dl)?；颊?是G.T.；患者2是E.C.；患者3是E.S.；患者4是J.R.；患者5是D.M.。
圖17描述了天然酪蛋白衍生的肽在急性髓細胞白血病(M-1)的血小板抵抗患者中刺激血小板生成的情況。血小板重建情況用外周血血小板(PLT，×106/ml)的含量變化來表示，血小板計數(shù)如上所述，在肌內(nèi)注射(如下實施例部分所述)100μg天然酪蛋白衍生的肽后的指定時間間隔進行。
圖18描述了天然酪蛋白衍生的肽在急性髓細胞白血病(M-2)的血小板抵抗患者中刺激血小板生成的情況。血小板重建情況用外周血血小板(PLT，×106/ml)的含量變化來表示，血小板計數(shù)如上所述，在肌內(nèi)注射(如下實施例部分所述)100μg天然酪蛋白衍生的肽后的指定時間間隔進行。
優(yōu)選實施方案說明本發(fā)明涉及衍生于乳酪蛋白或與乳酪蛋白αS1部分N末端相似的生物活性肽，含有該生物活性肽的組合物，以及在下述方面應用該生物活性肽的方法，如刺激并增強免疫應答，保護避免病毒感染，使血清膽固醇水平正?；?，并刺激造血。該酪蛋白衍生的肽無毒，可以用來治療、預防，例如，免疫病、高膽固醇血癥、血液病和病毒相關性疾病。
參考附圖和伴隨的描述文字，可以更好地理解本發(fā)明的原理和操作。
在詳細闡述本發(fā)明至少一個實施方案前，應該理解，本發(fā)明在應用方面并不限于下列描述或實施例闡述的細節(jié)。本發(fā)明可以包括其他實施方案，也可以用其他多種方式進行實踐或操作。同樣，應該理解，本文應用的短語或術語目的在于闡述的方便，而不應該理解為是對本發(fā)明的限制。
本文所用術語“治療”包括對疾病進展的基本抑制、延緩或逆轉，對疾病臨床癥狀的基本改善。
本文所用術語“預防”包括基本防止一種疾病臨床癥狀的出現(xiàn)。
本文所用術語“肽”包括天然肽(或者降解產(chǎn)物、合成肽或重組肽)和肽模擬物(典型的，合成肽)，如類肽和半類肽，它們是肽類似物，可能具有，例如，在機體中使肽更加穩(wěn)定的修飾。這些修飾包括但不限于環(huán)化，N末端修飾，C末端修飾，肽鍵修飾，包括但不限于CH2-NH，CH2-S，CH2-S＝O，O＝C-NH，CH2-O，CH2-CH2，S＝C-NH，CH＝CH或CF＝CH，主干修飾和殘基修飾。制備肽模擬化合物的方法是本領域眾所周知的，并在例如，Quantitative Drug Design，C.A.Ramsden Gd.，Chapter 17.2，F(xiàn).Choplin Pergamon Press(1992)中有詳細描述，該文獻在此引入，作為參考。這方面更細節(jié)的內(nèi)容將在下文提供。
因此，根據(jù)本發(fā)明，肽可以是環(huán)化肽。環(huán)化可以通過，例如氨基鍵形成達到，如，通過在鏈的不同位點(-CO-NH或-NH-CO鍵)摻入谷氨酸、天門冬氨酸、賴氨酸、鳥氨酸、二氨基丁酸(Dab)、二氨基丙酸(Dap)達到。主鏈與主鏈的環(huán)化可以通過摻入修飾的氨基酸達到，所述修飾的氨基酸化學式為H-N((CH2)n-COOH)-CH-COOH或H-N((CH2)n-COOH)-CH-NH2，其中n＝1-4，R可以是氨基酸的任意天然或非天然側鏈。
還可以通過摻入兩個半胱氨酸殘基形成S-S鍵，達到環(huán)化。其他側鏈與側鏈的環(huán)化可以通過在化學式為-(-CH2-)n-S-CH2-C-的分子間形成相互作用鍵而獲得，其中n＝1或2，這可以通過，例如摻入半胱氨酸或同型半胱氨酸，使其游離的巰基與，例如溴乙酰賴氨酸、Orn、Dab或Dap反應而達成。
肽內(nèi)的肽鍵(-CO-NH-)可以采用下述鍵來取代，例如N-甲基鍵(-N(CH3)-CO)、酯鍵(-CH-C-O-O-C-N-)、酮亞甲基鍵(-CO-CH2-)、α-aza鍵(-NH-N-CO-)，其中R是任意烷基，如甲基，carba鍵(-CH2-NH)、羥乙基鍵(-CH(OH)-CH2-)、硫代酰胺鍵(-CS-NH-)、烯雙鍵(-CH＝CH-)、反酰胺鍵(-NH-CO-)、肽衍生物(N- -CH2-CO)，其中R是天然存在于碳原子上的“正?！眰孺湣?br> 這些修飾可以在肽鏈上的任意鍵發(fā)生，甚至可以同時發(fā)生幾(2-3)處。
可以應用合成的非天然酸如TIC、naphthylelanine(Nol)、苯丙氨酸的環(huán)甲基衍生物、苯丙氨酸或o-甲基酪氨酸的鹵化衍生物來取代天然芳香氨基酸，色氨酸，酪氨酸和苯丙氨酸。
下面的表1-2列出了所有天然氨基酸(表1)和非傳統(tǒng)或修飾氨基酸(表2)。
表1
表2
本發(fā)明的肽可以以單獨的形式應用，也可以是一些成分，如蛋白質(zhì)的一部分，并且展示一些成分，如展示細菌和噬菌體。本發(fā)明的肽還可以在某一多肽鏈或共價交聯(lián)的側鏈中進行化學修飾，成為具有活性的二聚體或多聚體。
此外，本發(fā)明的肽可以包括至少2個，任選至少3個，任選至少4個、任選至少5個、任選至少6個、任選至少7個、任選至少8個、任選至少9個、任選至少10個、任選至少11個、任選至少12個、任選至少13個、任選至少14個、任選至少15個、任選至少16個、任選至少17個、任選至少18個、任選至少19個、任選至少20個、任選至少21個、任選至少22個、任選至少23個、任選至少24個、任選至少25個、任選至少26個、任選至少27和60個、或更多氨基酸殘基(在本文還可稱為氨基酸)。
因此，應該理解，本文所用術語“氨基酸”，包括20種天然氨基酸；這些氨基酸通常在體內(nèi)進行翻譯后修飾，包括，例如，羥脯氨酸、磷酸絲氨酸和磷酸蘇氨酸；以及其他少見氨基酸，包括但不限于2-氨基脂肪酸，羥賴氨酸，異鎖鏈賴氨素，正纈氨酸，正亮氨酸和鳥氨酸。而且，術語“氨基酸”還同時包括D型和L型氨基酸。
本文所用術語“衍生于αS1酪蛋白N末端部分”是指如本文該術語所定義的肽，例如，αS1酪蛋白的裂解產(chǎn)物(這里指天然酪蛋白衍生的肽)，經(jīng)化學合成而相應于αS1酪蛋白N末端部分的氨基酸序列的合成肽(這里指酪蛋白衍生的合成肽)，與αS1酪蛋白N末端部分相似(同源)的肽及其功能同源物，例如，特征在于一個或多個氨基酸發(fā)生取代的肽，例如但不限于可允許的取代，前提是維持至少70％、優(yōu)選至少80％、更優(yōu)選至少90％的相似性。本文所用術語“同源物”和“功能同源物”是指含有不會影響該肽的生物活性的插入、缺失和取代的肽。
本文所用術語“αS1酪蛋白”是指哺乳動物的αS1酪蛋白，哺乳動物包括但不限于家畜哺乳動物(如牛、綿羊、山羊、母馬、駱駝、鹿和水牛)、人和海洋哺乳動物。下面提供了一系列氨基酸序列已知的αS1酪蛋白，根據(jù)其GenBank(NCBI)編號和來源而鑒定CAA26982(Ovis aries(綿羊))，CAA51022(Capra hircus(山羊))，CAA42516(Bos taurus(牛))，CAA55185(人(Homo sapiens))，CAA38717(Susscrofa(豬))，P09115(兔)和097943(camelus dromedurius(駱駝))。
本文所用術語“N末端部分”是指從αS1酪蛋白的起始的60個氨基酸中衍生的αS1酪蛋白的M個氨基酸，其中M可以是5-60的任意整數(shù)(包括整數(shù)5和60)。優(yōu)選地，該術語指αS1酪蛋白的起始的M個氨基酸。
本發(fā)明的肽可以如前所述從乳中提取獲得，也可以通過固相肽合成法獲得，后者是一種本領域技術人員已知的標準方法。可以通過本領域技術人員已知的標準技術對本發(fā)明肽進行純化處理，如高效液相層析(HPLC)?？梢詰枚喾N酶和/或化學方法，進行乳酪蛋白裂解，獲得本發(fā)明肽。
如下面的進一步詳細描述和實施例部分中的舉例說明，本發(fā)明肽具有多種治療效果。在實施例部分中提供了多種測定方法，通過這些方法，按照本發(fā)明的教導，本領域普通技術人員可以測定某種特別設計的肽是否具有特定療效。本文描述的任意一種肽都可以單獨應用，也可以制備成藥物組合物，用來治療或預防疾病。這種組合物包括，例如本文描述肽的任意一種活性成分，以及藥用載體。
本文所用的“藥物組合物”是指這樣一種制劑，包括一種或多種本文描述的肽，以及其他化學組分，如適宜藥用的載體和賦形劑。藥物組合物的目的是能夠更加容易地將化合物用于生物體。
在下文中，術語“藥用載體”是指載體或稀釋劑，所述載體或稀釋劑不會導致生物體的顯著激惹，也不會影響所用化合物的生物活性和性質(zhì)。載體的實例如，但不限于丙二醇，鹽水，乳劑以及有機溶劑和水的混合物。本文所用術語“賦形劑”是指添加到藥物組合物中的惰性物質(zhì)，可以使化合物的給予更加容易。賦形劑的實例包括但不限于碳酸鈣，磷酸鈣，多種糖類和淀粉，纖維素衍生物，明膠，植物油和聚乙二醇。
藥物的制備和給藥技術可以在下述文獻中獲得，“Remington’sPharmaceutical Sciences”，Mack Publishing Co.，Easton，PA，最新版。
適宜的給藥途經(jīng)可以包括，例如口服，直腸給藥，經(jīng)粘膜給藥，經(jīng)皮給藥，腸給藥或腸胃外給藥，包括肌內(nèi)注射、皮下注射和髓內(nèi)注射以及鞘內(nèi)注射、直接心室內(nèi)注射、靜脈注射、腹膜內(nèi)注射、鼻腔內(nèi)注射或眼內(nèi)注射。
本發(fā)明藥物組合物可以通過本領域眾所周知的方法進行生產(chǎn)，例如，通過傳統(tǒng)的混合、溶解、制粒、包糖衣、研磨、乳化、制備膠囊、截留(entrapping)或凍干方法。
因此，為用于本發(fā)明，藥物組合物可以通過傳統(tǒng)方式進行制劑化，應用一種或多種藥用載體，包括賦形劑和佐劑，可以使活性肽更加容易地摻入到藥用制劑中。適宜的制劑有賴于所選的給藥途經(jīng)。
對于注射，本發(fā)明肽可以以水溶液的形式制劑化，優(yōu)選溶于生理可溶性緩沖液，如Hank’s液，Ringer’s液或含有或不含有機溶劑的生理鹽水緩沖液，所述有機溶劑如丙二醇，聚乙二醇。對于經(jīng)粘膜給藥制劑，制劑中應使用滲透劑。這些滲透劑在本領域眾所周知。
對于口服給藥，可以通過將活性肽與本領域眾所周知的藥物載體組合而方便地制劑化。這些載體可以將本發(fā)明肽制劑化為片劑、丸劑、糖丸、膠囊、液體、膠體、糖漿、漿、懸液等，用于患者口服?？诜玫乃幬镏苿┛梢詰霉腆w賦形劑來制備，如果需要，在加入適宜的佐劑后，任選研磨獲得的混合物，并將混合物制粒，獲得片劑或糖衣劑的核心。具體地說，適宜的賦形劑是，填充劑如糖類，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纖維素制劑，如玉米淀粉、小麥淀粉、水稻淀粉、馬鈴薯淀粉、明膠、黃芪膠、甲基纖維素、羥丙甲基纖維素、羰甲基纖維素鈉；和/或生理可接受聚合物如聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，還可以添加崩解劑，如交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮，瓊脂或褐藻酸或其鹽，如褐藻酸鈉。
應用適宜的包衣處理糖丸的核心。為了這一目的，可以應用濃縮的糖溶液，所述糖溶液可以任選含有阿拉伯樹膠，滑石粉，聚乙烯吡咯烷酮，聚羧乙烯凝膠，聚乙二醇，二氧化鈦，助溶劑和適宜的有機溶劑或溶劑混合物?？梢栽谄瑒┗蛱峭璋轮刑砑尤玖匣蛏兀瑏龛b別不同的活性成分劑量組合物，或賦予不同的活性成分劑量組合物以不同的特征。
可以口服的藥物組合物包括應用明膠制備的適于推進的(push-fit)膠囊，以及應用明膠和增塑劑如甘油或山梨醇制備的密封軟膠囊。適于推進的膠囊可以含有活性成分，所述活性成分與填充劑如乳糖，粘合劑如淀粉，潤滑劑如滑石粉或硬脂酸鎂混合，以及任選與穩(wěn)定劑混合。對于軟膠囊而言，活性肽可以溶解或懸浮于適宜的液體中，如脂肪油、液體石蠟或液體聚乙二醇。此外，還可添加穩(wěn)定劑。所有口服給藥的制劑的劑量都應適宜所選給藥途經(jīng)。
對于頰給藥，組合物的形式可以是以傳統(tǒng)方式制備的片劑或錠劑。
對于吸入給藥，本發(fā)明的肽可以以氣溶膠噴霧的形式方便地遞送，該氣溶膠噴霧是使用適當?shù)耐七M劑，如二氯二氟甲烷，三氯氟甲烷，二氯四氟乙烷或二氧化碳，從加壓包或噴霧器中呈遞的。對于加壓氣溶膠而言，劑量單位可以通過應用閥門遞送配備的量而確定。用于吸入器或吹藥器中的，例如明膠的膠囊和彈丸，可以經(jīng)制劑化而含有化合物和適宜粉基如乳糖或淀粉的粉劑混合物。
本文所述的肽還可以制劑化而用于腸胃外給藥，如通過團塊注射或連續(xù)輸注給藥。用于注射的制劑可以以單位劑型存在，如以安瓿或多劑量容器的形式存在，可以任選添加防腐劑。組合物可以是溶于油性或水性載體的懸液、溶液或乳液，可以含有配制試劑，如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑。
腸胃外給藥的藥物組合物包括以水溶性形式存在的活性制劑的水溶液。此外，活性肽的懸液可以制備成適宜的油性注射懸液。適宜的親脂性溶劑或載體包括脂肪油如芝麻油或合成的脂肪酸酯，如油酸乙酯，甘油三酯或脂質(zhì)體。水性注射懸液可以包括某些物質(zhì)，這些物質(zhì)能夠增加懸液的粘性，如羧甲基纖維素鈉，山梨醇或右旋糖苷。任選地，懸液可以含有適宜的穩(wěn)定劑或可以增加肽溶解性的試劑，可以制備高度濃縮的溶液。
此外，在應用前，活性成分還可以是粉劑，以便用適宜的載體，如滅菌的無致熱源水進行配制。
本發(fā)明的肽還可以制劑化成直腸應用的組合物，例如栓劑或保留灌腸劑，應用，例如傳統(tǒng)的栓劑基質(zhì)如可可油或其他甘油酯。
本文所述的藥物組合物還可以包括適宜的固體凝膠相載體或賦形劑。這些載體或賦形劑的示例包括但不限于碳酸鈣、磷酸鈣、多種糖、淀粉、纖維素衍生物、明膠和聚合物，如聚乙二醇。
本領域普通技術人員可以容易地確定本發(fā)明任意肽的最佳劑量以及定量方法。
根據(jù)本發(fā)明教義應用的任意肽，其治療有效量，也稱為治療有效劑量，開始可以通過細胞培養(yǎng)或體內(nèi)動物試驗的方法估計。例如，可以在動物模型中制定某一劑量，以便達到循環(huán)濃度范圍，所述范圍包括了在細胞培養(yǎng)中測定的IC50或IC100。這些信息可以用來更準確地確定人類的應用劑量。起始劑量也可以通過體內(nèi)數(shù)據(jù)來估計。根據(jù)這些原始指導，本領域普通技術人員能夠確定人類的有效劑量。
而且，本文所述肽的毒性和療效可以在細胞培養(yǎng)或實驗動物中通過標準藥學方法來確定，如通過測定LD50和ED50。毒性和療效的劑量比是治療指數(shù)，可以用LD50和ED50之間的比值來表示。優(yōu)選治療指數(shù)高的肽。應用來自細胞培養(yǎng)試驗和動物研究的數(shù)據(jù)，可以構成人類應用無毒性的劑量范圍。這些肽的劑量優(yōu)選位于包括ED50的循環(huán)濃度范圍，同時毒性很小或沒有毒性。劑量可以根據(jù)采用的劑型和給藥途經(jīng)在該范圍內(nèi)變化。具體的制劑化、給藥途經(jīng)和劑量可以由醫(yī)生根據(jù)患者的狀況進行選擇(見如Fingl et al.，1975，InThePharmacological Basis of Therapeutics，chapter 1，page 1)。
應該根據(jù)個體情況調(diào)整給藥劑量和間隔，使活性成分的血漿水平足以維持治療效果。一般患者口服給藥劑量范圍大約為1-1000mg/kg/次給藥，通常為大約10-500mg/kg/次給藥，優(yōu)選為大約20-300mg/kg/次給藥，最優(yōu)選為50-200mg/kg/次給藥。在某些情況下，治療有效血清水平可以通過每天多劑給藥達到。在局部給藥或選擇性攝取的情況下，藥物的有效局部濃度可能與血漿濃度無關。本領域技術人員在不進行過多實驗的情況下，可以優(yōu)化局部治療有效劑量。
根據(jù)所需治療的狀況的嚴重程度和治療反應情況，給藥可以是單次給予緩釋組合物，使療程持續(xù)數(shù)日至數(shù)周，或者直至達到疾病狀態(tài)治愈或減輕。
當然，給予的組合物的量應該依賴于受治療患者、疾病的嚴重程度、給藥方式以及處方醫(yī)生的判斷等。
如果需要，本發(fā)明組合物可以存在于包裝或分配裝置中，如FDA批準的試劑盒，該試劑盒可以包括含有活性成分的一個或多個單位劑型。包裝可以包括，例如金屬或塑料箔，如氣泡包裝。包裝或分配裝置可以和放置給藥說明書一起存在。包裝或分配裝置內(nèi)還可以與貼在容器上的通知一起存在，該通知是管理藥物生產(chǎn)、應用或銷售的政府機構規(guī)定的形式，反映政府機構業(yè)已批準該組合物形式或用于人類或牲畜。例如，該通知可以是美國食品與藥物監(jiān)督管理局批準的處方藥標簽或批準產(chǎn)品說明書。也可以制備含有在藥用載體中制劑化的本發(fā)明肽，置于適宜的容器中，并注明用于治療或預防某種適應癥或誘導某種所需事件。標簽上的適當適應癥可以包括治療和/或預防自身免疫病或狀況、病毒性疾病、病毒感染、血液病、血液系統(tǒng)缺陷、血小板減少癥、全血細胞減少癥、粒細胞減少癥、高脂血癥、高膽固醇血癥、葡萄糖尿、高血糖癥、糖尿病、艾滋病、HIV-1、輔助T細胞障礙、樹突細胞缺陷、巨噬細胞缺陷、造血干細胞障礙包括血小板、淋巴細胞、漿細胞和中性粒細胞障礙、白血病前狀況、白血病狀況、由化療或放療導致的免疫系統(tǒng)障礙、由免疫缺陷和細菌感染的疾病治療導致的人免疫系統(tǒng)障礙。
本發(fā)明的藥物組合物可以用于維持和/或恢復血液系統(tǒng)構建，平衡血細胞計數(shù)，平衡血液中各種代謝產(chǎn)物的水平，包括糖、膽固醇、鈣、尿酸、尿素和酶，如堿性磷酸酶。而且，本發(fā)明的藥物組合物還可以用于誘導血細胞增殖，調(diào)節(jié)白細胞和/或紅細胞計數(shù)，特別是增加白細胞和/或紅細胞計數(shù)，增加血液血紅蛋白水平，以及調(diào)節(jié)血小板計數(shù)。
本文所用與某些生理參數(shù)相關的術語“平衡”是指使所指的參數(shù)水平發(fā)生變化，使其更接近正常值。
本文所用與某些生理參數(shù)相關的術語“正常值”是指介于健康人或動物數(shù)值范圍內(nèi)的數(shù)值。
在特別優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明肽可以平衡紅細胞、白細胞、血小板和血紅蛋白水平。本發(fā)明藥物組合物可以用于激活血細胞增殖。
此外，藥物組合物可以用于治療和/或預防造血干細胞疾病，包括血小板、淋巴細胞、漿細胞和中性粒細胞疾病，以及白血病前和白細胞狀況中的缺陷和功能障礙以及血小板減少癥。
而且，藥物組合物可以用來治療和/或預防細胞增殖性疾病。在這方面，值得注意的是，本發(fā)明藥物組合物在化療或放療期間，在刺激免疫應答、減輕不良反應、減輕化療和放療導致的嘔吐和促進快速恢復方面是有利的。
而且，在治療免疫缺陷相關性疾病的過程中，例如HIV和自身免疫性疾病，本發(fā)明藥物組合物可以用來刺激人類免疫應答。
本發(fā)明組合物還可以用于獸醫(yī)領域。
本發(fā)明藥物組合物可以用來治療和/或預防，例如，涉及血細胞水平異常的疾病，涉及造血干細胞產(chǎn)生和分化異常的疾病，治療血小板、淋巴細胞和/或中性粒細胞性疾病，治療白血病前和白血病狀況，以及治療血小板減少癥。本發(fā)明的藥物組合物還可以用來治療細胞增殖性疾病和涉及免疫缺陷的疾病，如HIV，以及自身免疫性疾病。而且，本發(fā)明藥物組合物可以用來在化療或放療期間刺激免疫應答，例如，減輕化療相關性嘔吐。
在將本發(fā)明的肽用于實踐時，出乎意料地觀察到在添加其它造血生長因子時，本發(fā)明的肽對人造血干細胞增殖和分化施加協(xié)同作用。特別有意義是本發(fā)明的肽加強促紅細胞生成素介導的紅細胞集落形成的刺激和劑量依賴性增強血小板生成素(TPO)誘導巨核細胞增殖。目前已經(jīng)批準將重組人(rh)EPO用于腎性貧血、早產(chǎn)兒貧血、癌癥和艾滋病相關的貧血等適應癥的治療，以及用于在擇期手術前治療(Sowade，B etal Int J Mol Med 1998；1305)。
因此，根據(jù)本發(fā)明，提供了一種治療紅細胞生成素可治療的狀況的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種增加紅細胞生成素的作用的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
血小板生成素是一種具有重要的多細胞系作用的早期作用的細胞因子單獨的TPO或其與其它早期作用細胞因子的組合可以(I)促進祖細胞的存活力和抑制祖細胞凋亡；(ii)調(diào)節(jié)造血干細胞產(chǎn)生和功能；(iii)觸發(fā)靜息的多能細胞的細胞分裂；(iv)誘導多細胞系分化和(v)增強包括粒細胞、紅細胞、巨噬細胞和巨核細胞(MK，CFU-GEMM)的多細胞系集落的形成。而且，TPO刺激更有限的粒細胞/單核細胞、巨核細胞和紅細胞系集落的祖細胞的產(chǎn)生，并且刺激原始的人骨髓和巨核細胞與纖連蛋白和纖維蛋白原的粘附。因此，TPO對于臨床血液學家/移植者來說是重要的細胞因子用于動員、擴增和離體擴增用于自體和異體移植的干細胞和定型的前體細胞。此外，已經(jīng)采用了將TPO給予健康血小板供體以增強血漿除去法產(chǎn)率。然而，TPO治療的臨床應用由于其它考慮而變得復雜，例如，重組人細胞因子rhTPO的相對高價，以及TPO重復給藥的潛在抗原性。
TPO和本發(fā)明的肽的聯(lián)合治療，或者在包含兩者的藥物組合物中一起給藥，或者分開給藥，可以提供TPO對靶細胞增殖和功能的便宜的、證明無毒的增強。在所述組合中，除上述狀況之外，本發(fā)明的肽可以用于治療骨髓發(fā)育不良綜合征(MDS)、再生障礙性貧血和肝衰竭的合并癥等疾病。用本發(fā)明的肽，單獨或與TPO組合預處理血小板供體，甚至可以增強血漿除去法產(chǎn)率。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種治療血小板生成素可治療的狀況的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種增加血小板生成素的作用的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種增強外周干細胞動員的方法，該方法是通過給需要的受試者施用包括有效量的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽的藥物組合物實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種治療血小板生成素可治療的狀況的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種增加血小板生成素的作用的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種增強外周干細胞動員的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導造血的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導造血干細胞增殖的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導造血干細胞增殖和分化的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導巨核細胞生成的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導紅細胞生成的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導白細胞生成的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導血小板生成的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療血小板減少癥的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療全血細胞減少癥的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療粒細胞減少癥的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種治療或預防選自下組的適應癥的藥物組合物血液病、血液系統(tǒng)缺陷、血小板減少癥、全血細胞減少癥、粒細胞減少癥、樹突細胞缺陷、巨噬細胞缺陷、造血干細胞障礙包括血小板、淋巴細胞、漿細胞和中性粒細胞障礙、白血病前狀況、白血病狀況、骨髓發(fā)育不良綜合征、再生障礙性貧血和骨髓不足，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種藥物組合物，該藥物組合物包括血小板生成素和一種純化的肽和藥用載體，所述純化的肽具有選自序列1-25的氨基酸序列。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種在清髓性受體體內(nèi)增強所提供的血液干細胞定殖的方法，該方法是通過在受體中提供和植入所提供的血液干細胞前用αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和血小板生成素處理所提供的血液干細胞的供體實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種在清髓性受體體內(nèi)增強所提供的血液干細胞定殖的方法，該方法是通過在受體中植入所提供的血液干細胞前用αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和血小板生成素處理所提供的血液干細胞實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種在清髓性受體體內(nèi)增強血液干細胞定殖的方法，該方法是通過在受體中植入血液干細胞前用αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和血小板生成素處理所述血液干細胞實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種在清髓性受體體內(nèi)增強所提供的血液干細胞定殖的方法，該方法是通過在受體中植入所提供的血液干細胞前用αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和血小板生成素處理所提供的血液干細胞實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種在清髓性受體體內(nèi)增強血液干細胞定殖的方法，該方法是通過在受體中植入血液干細胞前用αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和血小板生成素處理所述血液干細胞實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于治療血小板生成素可治療的狀況的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于增加血小板生成素的作用的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于在清髓性受體體內(nèi)增強所提供的血液干細胞定殖的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于在清髓性受體體內(nèi)增強血液干細胞定殖的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于增強外周干細胞動員的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于誘導造血的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于誘導造血干細胞增殖的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于誘導造血干細胞增殖和分化的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于誘導巨核細胞生成的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于誘導紅細胞生成的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于誘導白細胞生成的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于誘導血小板生成的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于預防或治療血小板減少癥的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于預防或治療全血細胞減少癥的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于預防或治療粒細胞減少癥的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療選自下組的適應癥的用途自身免疫病或狀況、病毒性疾病、病毒感染、血液病、血液系統(tǒng)缺陷、血小板減少癥、全血細胞減少癥、粒細胞減少癥、高脂血癥、高膽固醇血癥、葡萄糖尿、高血糖癥、糖尿病、艾滋病、HIV-1、輔助T細胞障礙、樹突細胞缺陷、巨噬細胞缺陷、造血干細胞障礙包括血小板、淋巴細胞、漿細胞和中性粒細胞障礙、白血病前狀況、白血病狀況、由化療或放療導致的免疫系統(tǒng)障礙、由免疫缺陷和細菌感染的疾病治療導致的人免疫系統(tǒng)障礙。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于預防或治療選自下組的適應癥的用途血液病、血液系統(tǒng)缺陷、血小板減少癥、全血細胞減少癥、粒細胞減少癥、樹突細胞缺陷、巨噬細胞缺陷、造血干細胞障礙包括血小板、淋巴細胞、漿細胞和中性粒細胞障礙、白血病前狀況、白血病狀況、骨髓發(fā)育不良綜合征、再生障礙性貧血和骨髓不足。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于在清髓性受體體內(nèi)增強所提供的血液干細胞定殖的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于在清髓性受體體內(nèi)增強血液干細胞定殖的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于增強外周干細胞動員的用途。
本發(fā)明進一步涉及包括作為活性成分的至少一種本發(fā)明的肽的抗菌藥物組合物，以及本發(fā)明的肽作為抗菌劑的用途。
如下文實施例部分所詳細描述，本發(fā)明的肽和包括作為活性本發(fā)明的肽的藥物組合物可以用于治療和預防血細胞疾病，細胞增殖性疾病、涉及免疫缺陷的疾病和自身免疫病。
根據(jù)本發(fā)明，提供了一種預防或治療自身免疫病的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療病毒性疾病的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導造血的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導造血干細胞增殖的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導造血干細胞增殖和分化的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導巨核細胞生成的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導紅細胞生成的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導白細胞生成的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導血小板生成的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導血漿細胞增殖的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導樹突細胞增殖的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導巨噬細胞增殖的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療血小板減少癥的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療全血細胞減少癥的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療粒細胞減少癥的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療高脂血癥的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療高膽固醇血癥的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療葡萄糖尿的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療糖尿病的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療艾滋病的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療HIV感染的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療與清髓性劑量的放化療相關的狀況的方法，所述清髓性放化療采用自體骨髓或外周血干細胞移植(ASCT)或異體骨髓移植(BMT)支持，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種治療紅細胞生成素可治療的狀況的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種增加紅細胞生成素的作用的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種治療血小板生成素可治療的狀況的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種增加血小板生成素的作用的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種增強外周干細胞動員的方法，該方法是通過給需要的受試者施用治療有效量的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽實現(xiàn)的。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療自身免疫病的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療病毒性疾病的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防病毒感染的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導造血的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導造血干細胞增殖的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導造血干細胞增殖和分化的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導巨核細胞生成的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導紅細胞生成的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導白細胞生成的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導血小板生成的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導漿細胞增殖的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導樹突細胞增殖的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種誘導巨噬細胞增殖的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療血小板減少癥的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療全血細胞減少癥的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療粒細胞減少癥的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療高脂血癥的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療高膽固醇血癥的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療葡萄糖尿的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療糖尿病的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療艾滋病的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療HIV感染的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種預防或治療與清髓性劑量的放化療相關的狀況的藥物組合物，所述清髓性放化療采用自體骨髓或外周血干細胞移植(ASCT)或異體骨髓移植(BMT)支持，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽用于預防或治療自身免疫病的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽用于預防或治療病毒性疾病的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽用于預防病毒感染的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽用于誘導造血的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽用于誘導造血干細胞增殖的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽用于誘導造血干細胞增殖和分化的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽用于誘導巨核細胞生成的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽用于誘導紅細胞生成的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽用于誘導白細胞生成的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽用于誘導血小板生成的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽用于誘導漿細胞增殖的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽用于誘導樹突細胞增殖的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽用于誘導巨噬細胞增殖的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽用于預防或治療血小板減少癥的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽用于預防或治療全血細胞減少癥的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽用于預防或治療粒細胞減少癥的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽用于預防或治療高脂血癥的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽用于預防或治療高膽固醇血癥的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽用于預防或治療葡萄糖尿的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽用于預防或治療糖尿病的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽用于預防或治療艾滋病的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽用于預防或治療HIV感染的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽用于預防或治療與清髓性劑量的放化療相關的狀況的用途，所述清髓性放化療采用自體骨髓或外周血干細胞移植(ASCT)或異體骨髓移植(BMT)支持。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽用于治療血小板生成素可治療的狀況的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽用于增加血小板生成素的作用的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽用于增強外周干細胞動員的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽用于在清髓性受體體內(nèi)增強所提供的血液干細胞定殖的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽用于在清髓性受體體內(nèi)增強血液干細胞定殖的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療自身免疫病的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療病毒性疾病的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療病毒感染的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于誘導造血的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于誘導造血干細胞增殖的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于誘導造血干細胞增殖和分化的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于誘導巨核細胞生成的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于誘導紅細胞生成的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于誘導白細胞生成的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于誘導血小板生成的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于誘導漿細胞增殖的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于誘導樹突細胞增殖的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于誘導巨噬細胞增殖的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療血小板減少癥的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療全血細胞減少癥的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療粒細胞減少癥的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療高脂血癥的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療高膽固醇血癥的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療葡萄糖尿的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療糖尿病的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療艾滋病的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療HIV感染的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還公開了包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療與清髓性劑量的放化療相關的狀況的用途，所述清髓性放化療采用自體骨髓或外周血干細胞移植(ASCT)或異體骨髓移植(BMT)支持。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種具有選自序列1-25的氨基酸序列的純化肽。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種藥物組合物，該藥物組合物包括一種純化的肽和藥用載體，所述純化的肽具有選自序列1-25的氨基酸序列。
本發(fā)明通過提供肽治療人類疾病，成功克服了目前已知處置的不足，所述肽衍生于αS1酪蛋白N末端部分，沒有能檢測到毒性，具有高度治療效果。
在檢視下述實施例后，本領域普通技術人員可以清晰地明了本發(fā)明的其他目標、優(yōu)勢和新特征，但所述實施例并非為了限制本發(fā)明。此外，上面所述本發(fā)明多個實施方案和方面以及后面權利要求部分的權利要求，都可以在下面的實施例中找到實驗支持。
實施例參考下述實施例，與上面的描述文字一起，以非限制性舉例方式闡釋了本發(fā)明。
材料和實驗方法天然酪蛋白衍生的肽的制備如Hipp et al.(1952)，ibid.，所述，從牛乳中分離酪蛋白部分，并在30℃應用凝乳酶(20ng/ml)進行徹底蛋白水解消化。反應完成后，加熱溶液，使酶失活，然后應用有機酸、乙酸或三氯乙酸酸化，使消化液沉淀形成副酪蛋白酸鹽。通過離心分離副酪蛋白酸鹽，將含有感興趣肽片段的上清液部分用更高濃度的酸沉淀caseicidin。將獲得的caseicidin在再懸浮、透析和中和后凍干。如下所述，對獲得的粉末制劑進行生物活性試驗，并通過HPLC分離，進行肽分析。
對天然酪蛋白衍生的肽進行HPLC分析應用HPLC分兩階段分離如上所述獲得的天然酪蛋白衍生的肽。開始，應用C18反相分離凍干的酪蛋白消化產(chǎn)物，其中使用0.1％水三氟乙酸(w/w)-乙腈梯度。根據(jù)214nm處的UV吸收值進行檢測。然后，通過裝備有電子發(fā)射源的HPLC-質(zhì)譜(MS)法對樣品進行分析。質(zhì)量計算代表隨著保留時間得出的離子化肽樣品質(zhì)量。分離后，應用氣相微量測序儀(AppliedBiosystems 470A)測定肽的氨基酸組成。
下面是代表性數(shù)據(jù)觀察到8個典型肽峰，其中3個主峰的Rt值分別為17.79，19.7，23.02，另5個次要峰的Rt值為12.68，14.96，16.50，21.9和25.1，這些Rt值代表的分子量分別為2764，1697，1880，2616，3217，2333，1677和1669Da。Rt值為17.79(對應于2764Da)的23個氨基酸的肽主峰代表αS1酪蛋白的1-23個氨基酸，序列為RPKHPIKHQGLPQEVLNENLLRF(序列22，見McSweeny et al.，1993，ibid.，for the complete sequence of αS1 casein)。其他肽源于β酪蛋白的208-224位點，αS1酪蛋白的16-37位點和αS2樣酪蛋白前體的197-222位點。其他肽也是存在的。
酪蛋白衍生肽的合成通過NoVetide Ltd.，Haifa，Israel，合成對應于αS1酪蛋白N末端2-26個氨基酸的長度漸增的肽，純度＞95％(HPLC)。質(zhì)量控制包括HPLC，質(zhì)譜分析(EI)，氨基酸分析和肽含量。下表3提供了這些肽的序列。
表3名稱序列(N末端-C末端) 氨基酸數(shù)目 序列號74 RP 2 11P RPK3 22P RPKH 4 33P RPKHP 5 44P RPKHPI 6 55P RPKHPIK7 6Y RPKHPIKH 8 7X RPKHPIKHQ 9 81a RPKHPIKHQG 10 92a RPKHPIKHQGL11 103a RPKHPIKHQGLP 12 11A RPKHPIKHQGLPQ 13 12B RPKHPIKHQGLPQE 14 13C RPKHPIKHQGLPQEV15 14D RPKHPIKHQGLPQEVL 16 15E RPKHPIKHQGLPQEVLN 17 16F RPKHPIKHQGLPQEVLNE 18 17G RPKHPIKHQGLPQEVLNEN19 18H RPKHPIKHQGLPQEVLNENL 20 19I RPKHPIKHQGLPQEVLNENLL 21 20J RPKHPIKHQGLPQEVLNENLLR 22 21K RPKHPIKHQGLPQEVLNENLLR 23 22FL RPKHPIKHQGLPQEVLNENLLR 24 23FFM RPKHPIKHQGLPQEVLNENLLR 25 24FFVN RPKHPIKHQGLPQEVLNENLLR 26 25FFVA
非肥胖糖尿病(NOD)小鼠的少年型(I型，IDDM)糖尿病天然酪蛋白衍生的肽NOD小鼠是研究自身免疫病和人類少年型糖尿病的常用動物模型。6周齡雌性NOD小鼠每周注射100μg天然酪蛋白衍生的肽一次或兩次，共治療5次或10次。對照小鼠不接受治療。根據(jù)葡萄糖尿情況確定疾病的嚴重程度，葡萄糖尿應用Combi試紙進行檢測[Gross，D.J.et al.(1994)，Diabetology，371195]。結果用365天期間每個樣品組無葡萄糖尿小鼠的百分比來表示。
酪蛋白衍生的合成肽在另一個實驗中，6周齡雌性NOD小鼠每周注射100μg酪蛋白衍生的合成肽一次，共治療5次。對照小鼠不接受治療。結果表示為各治療組的健康小鼠數(shù)。
腹膜內(nèi)葡萄糖耐受試驗(IPGTT)葡萄糖耐受試驗是研究哺乳動物中葡萄糖代謝和糖尿病趨勢的確定方法。接受酪蛋白衍生的合成肽后25周，用腹膜內(nèi)葡萄糖耐受試驗評估對葡萄糖負荷的反應。注射1g/kg體重的葡萄糖。確定在試驗前(0分鐘)和負荷后60分鐘抽取的血液的葡萄糖值。用葡萄糖分析儀2(Beckman Instruments，F(xiàn)ullerton，CA)測定血漿葡萄糖水平，并且用mmol/L表示。正常值不超過140mmol/L。
刺激自然殺傷(NK)細胞增殖源于人外周血干細胞(PBSC)。應用FICOLL梯度離心分離G-CSF處理個體的PBSC，然后用RPMI-1640培養(yǎng)基清洗細胞兩次，接種于含有或不含指定天然酪蛋白衍生的肽或酪蛋白衍生的合成肽(0-500μg/ml)的1.5ml孔中。孵育2天后，通過檢測35S標記的K562靶細胞(NEG-709A，185.00MBq，2.00mCi EASYTAGth Methionine，L-[35S]43.48 TBq/mmol，1175.0Ci/mmol，0.488ml，Boston USA)釋放的放射活性，測定細胞的自然殺傷活性。在U型底96孔組織培養(yǎng)板中，每孔5×103靶細胞，與兩種濃度的效應細胞(每孔2.5×105和5個×105細胞)共同孵育(效應細胞∶靶細胞比率為50∶1和100∶1)。在37℃，5％ CO2，95％空氣的條件下孵育細胞5小時，然后1000rpm離心細胞5分鐘。在50μl樣品上清液液中測定35S的釋放量。
源于小鼠骨髓(BM)細胞從未經(jīng)處理的BALB/c和C57B1/6小鼠中收集骨髓。通過應用25號Gauge針頭，向小鼠前后肢長骨注射培養(yǎng)基收獲骨髓。應用RPMI 1640清洗吸出的細胞，然后用血球計計數(shù)，進行必需染色(20μl細胞溶于380μl乙酸/臺盼蘭)，然后以每毫升RPMI 16402-5×106個細胞的濃度將細胞接種于培養(yǎng)瓶中，所述RPMI 1640含有10％胎牛血清、抗生素和谷氨酰胺，含有或不含100μg/ml天然酪蛋白衍生的肽。在37℃，5％ CO2，95％空氣的條件下孵育細胞培養(yǎng)物12-15天，然后以1500rpm離心10分鐘收集細胞，計數(shù)，并接種于含有51Cr(鉻-51，740MBq，2.00mCi活性)或35S(NEG-709A，185.00MBq，2.00mCi EASYTAGth Methionine，L-[35S]43.48TBq/mmol，1175.0Ci/mmol，0.488ml，Boston USA))標記的鼠淋巴瘤(YAC)的U型底培養(yǎng)孔中，效應細胞∶靶細胞比率為25∶1或50∶1。NK活性以無細胞上清液中放射活性百分比來表示。
培養(yǎng)中人細胞的增殖從健康或罹病患者中收集外周血(PB)。在血漿除去法前，罹病患者除了應用G-CSF外，沒有進行任何治療。從知情同意的健康患者或化療后緩解的罹病患者中吸取骨髓(BM)細胞。在正常分娩過程中收集臍帶血。用FICOLL梯度離心分離各種來源的人類細胞，然后用RPMI-1640培養(yǎng)基清洗2次，并以指定濃度接種于0.2ml平底組織培養(yǎng)孔中，所述培養(yǎng)孔中指定含有或不含天然酪蛋白衍生的肽，或者含有或不含酪蛋白衍生的合成肽。包括對照組在內(nèi)，所有處理都重復3次。細胞增殖通過H3T摻入測定孵育指定天數(shù)后添加放射活性胸苷[胸苷(甲基-[3H]比活性5Ci/ml 37MBq/ml，ICN Corp.)]來檢測。然后細胞與標記物共同孵育16-20小時后收獲，應用培養(yǎng)基清洗。應用β閃爍計數(shù)器測定摻入的放射活性。
K562白血病和結腸癌細胞系的增殖結腸和K562是業(yè)已建立的能夠培養(yǎng)生長的腫瘤細胞系。兩種細胞系在培養(yǎng)瓶中，以37℃，5％CO2，95％空氣的條件培養(yǎng)生長，在以每孔4×105個細胞(K562)或3×103個細胞(結腸)接種到組織培養(yǎng)孔前，收獲并且應用培養(yǎng)基清洗2次。將天然酪蛋白衍生的肽以指定濃度加入孔中，孵育9天(K562)或3天(結腸)后，加入如上所述的標記胸苷。如上所述收獲細胞，測定放射活性攝取量。
在人外周血干細胞(PBSC)中應用熒光抗體測定NK和T細胞增殖通過血漿除去法從G-CSF處理的人類實驗對象中收集外周血干細胞(PBSC)，應用FICOLL梯度離心分離細胞，應用含有10％胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基清洗細胞2次，然后在培養(yǎng)瓶中以37℃，5％ CO2，95％空氣的條件孵育細胞，所述培養(yǎng)瓶中含有或不含指定濃度的天然酪蛋白衍生的肽。用天然酪蛋白衍生的肽孵育10，14或28天后，應用抗CD3熒光抗體(CD3/FITC克隆UHCT1)、抗CD56熒光抗體(CD56/RPE克隆MOC-1)(DAKO A/S，Denmark)和作為對照的小鼠IgG1/RPE和IgG1/FITC抗體，通過直接免疫熒光法檢測出現(xiàn)的T細胞(CD3表面抗原)和NK細胞(CD56表面抗原)。應用熒光激活細胞分選法(FACS)進行熒光標記細胞的檢測。
在培養(yǎng)的骨髓(BM)細胞中刺激造血鼠骨髓細胞多能集落(CFU-GEMM)中巨核細胞的增殖在無血清甲基纖維素IMDM培養(yǎng)基中，以37℃，5％ CO2，95％空氣的條件培養(yǎng)源于8-12周齡C3H/HeJ小鼠的原代骨髓細胞(1×105/ml)8-9天。所述培養(yǎng)基非常適宜多能集落(CFU-GEMM)的生長，含有1％ BSA(Sigma)，10-4M巰基甘油(Sigma)，2.8×10-4M人轉鐵蛋白(TF，Biological industries，Israel)，作為IL-3來源的10％ WEHI-CM，以及2單位/ml的促紅細胞生成素(rhEPO，R&D Systems，Minneapolis)。8-9天后，應用Olympus暗視野顯微鏡進行集落評分。應用微量移液器取出集落，進行細胞離心，然后應用May-Grunwald-Giemsa染色，進行分類計數(shù)。每次至少計數(shù)700個細胞。
CFU-GEMM中樹突細胞的增殖收集由用于上述巨核細胞增殖測定的如上所述的原代骨髓細胞生長的多能(CFU-GEMM)集落，染色并且對樹突細胞計數(shù)。對每種制備物計數(shù)至少700個細胞。
CFU-GEMM中漿細胞的增殖收集由用于上述巨核細胞增殖測定的如上所述的原代骨髓細胞生長的多能(CFU-GEMM)集落，染色并且對漿細胞計數(shù)。對每種制備物計數(shù)至少700個細胞。
CFU-GEMM中紅細胞的增殖收集由用于上述巨核細胞增殖測定的如上所述的原代骨髓細胞生長的多能(CFU-GEMM)集落，染色并且對紅細胞計數(shù)。對每種制備物計數(shù)至少700個細胞。
CFU-GEMM中多形核細胞(PMN)的增殖收集由用于上述巨核細胞增殖測定的如上所述的原代骨髓細胞生長的多能(CFU-GEMM)集落，染色并且對多形核細胞計數(shù)。對每種制備物計數(shù)至少700個細胞。
人骨髓和臍帶血中巨核細胞形成細胞和紅細胞形成細胞的增殖應用健康人骨髓樣品進行Histopaque-107(Sigma Diagnostics)密度梯度分離，獲得純化的單核細胞(MNC)群。在平板培養(yǎng)基中進行集落測定，所述培養(yǎng)基含有終濃度為0.92％的甲基纖維素(4000centripase粉劑，Sigma Diagnostics)，在Iscoves改良Dulbecco’s培養(yǎng)基中再水合，該培養(yǎng)基含有36mM碳酸氫鈉(Gibco)，30％胎牛血清(FBS)(Hyclone)，0.292mg/ml谷氨酰胺，100單位/ml青霉素和0.01mg/ml鏈霉素(Biological Industries，Beit Haemek)。收集正常分娩的臍帶血，如上所述進行處理。
將含有105MNC/ml的集落測定培養(yǎng)基鋪板于24孔組織培養(yǎng)板(Greiner)中，每孔0.33ml，重復3孔。在37℃，5％ CO2，95％空氣和55％相對濕度的條件下孵育培養(yǎng)物，每孔含有或不含指定濃度的天然酪蛋白衍生的肽或酪蛋白衍生的合成肽。14天后，對平板進行集落評分，所述集落含有50個以上的細胞。應用識別人類血小板糖蛋白的高度特異性兔抗體和FITC偶聯(lián)的山羊抗兔IgG，通過間接免疫熒光法，鑒定巨核細胞。添加的生長因子包括15ng/ml leucomax(GM-CSF)(Sandoz Pharmma)和5％ v/v人植物血凝素-m(Difco Lab)誘導的條件培養(yǎng)基(CM)，誘導粒細胞、單核細胞集落(CFU-GM)發(fā)生。應用2單位/ml的促紅細胞生成素(EPO)誘導紅細胞集落形成(爆發(fā)集落形成單位-紅細胞-BFU-E)。
此外，來自知情同意的志愿捐獻者或進行自體骨髓移植患者的人骨髓細胞在含有10-1000μg/ml天然酪蛋白衍生的肽的培養(yǎng)基中進行預培養(yǎng)，生長于半固體瓊脂中，處理7或14天后，進行粒細胞-巨噬細胞造血集落(GM-CFU)評分。
知情同意的健康捐獻者的正常骨髓細胞的巨核細胞生成情況可以通過下述兩種方法進行測定，一種是在含有或不含100μg/ml天然酪蛋白衍生的肽的液體培養(yǎng)基(RPMI-1640加10％人AB血清，谷氨酰胺和抗生素)中評價樣品的巨核細胞數(shù)量，另一種是應用甲基纖維素測定評估集落形成情況。將2×105個骨髓細胞接種于含有或不含天然酪蛋白衍生的肽的標準生長因子組合(培養(yǎng)基)中。在甲基纖維素測定中，巨核細胞在接種后12-14天，應用反向顯微鏡進行計數(shù)。
應用天然酪蛋白衍生的肽的臨床試驗在一系列試驗中，在2小時期間將含有50mg天然酪蛋白衍生的肽的單劑藥物肌內(nèi)注射用于人類受試者，共分3次注射。在指定間隔時間監(jiān)測臨床參數(shù)。在其他試驗中，癌癥和轉移性疾病治療和/或緩解的不同階段的患者應用天然酪蛋白衍生的肽治療一次或兩次，監(jiān)測外周血細胞計數(shù)的變化。
體外抑制HIV感染人淋巴細胞肽以凍干粉末形式提供的肽(可以是天然酪蛋白衍生的肽，也可以是酪蛋白衍生的合成肽(長度為2-26個氨基酸，見表3)在RPMI完全培養(yǎng)基中重懸浮，以終濃度為50-1000μg/ml加入細胞培養(yǎng)基中。
細胞幾種新鮮分離的人類細胞(原代細胞)和細胞系已知對HIV-1的體外感染易感，盡管幾乎任何CD4分子表面水平很低的細胞都可認為是HIV-1感染的潛在靶細胞。選擇對HIV-1感染高度敏感的兩種常用人類細胞系，CEM和Sup-T1。
CEM是人類T4淋巴母細胞樣細胞系，最初來源于G.E.Foley et al.[(1965)，Cancer 18522]描述的患有急性淋巴母細胞白血病的4歲白人女孩的外周血塊黃層。這些細胞在培養(yǎng)基中連續(xù)維持懸浮，并廣泛用于分析感染、抗病毒制劑和中和抗體。
Sup-T1是人類T淋巴母細胞樣細胞系，分離自一名患有非何杰金T細胞淋巴瘤的8歲男孩的胸水[Smith，S.D.et al.(1984)CancerResearch 445657]。該細胞表達高水平的表面CD4，在研究細胞融合、細胞病理效應和HIV-1感染中非常有用。Sup-T1細胞懸浮生長于富集培養(yǎng)基中。
培養(yǎng)基細胞生長于RPMI-1640完全培養(yǎng)基中，所述培養(yǎng)基還富集了10％胎牛血清，2mM谷氨酰胺和2mM青霉素-鏈霉素(GIBCO)。
病毒應用的HIV病毒株是HIV-1IIIB，開始被命名為HTLV-IIIB。源于幾名罹患艾滋病或相關疾病患者的外周血濃縮培養(yǎng)液被用來在H-9細胞中建立持久的生產(chǎn)性感染。該B亞型病毒在人類T細胞系中具有高度復制能力。儲存溶液的病毒滴度為5.38ng/ml。
FITC標記肽應用FITC F-1300(熒光素異硫腈酸酯，異構體1，Sigma(F25o-2)St.Louis，MI，USA)，其最大激發(fā)/發(fā)射分別在大約494/520nm。胺反應性熒光素衍生物可能是最常見的用于共價標記蛋白質(zhì)的熒光衍生試劑。通過將FITC與賴氨酸的氨基共價結合，制備FITC偶聯(lián)的天然酪蛋白衍生的肽。
HIV-1 P24抗原捕獲試驗采用的HIV-1 P24抗原捕獲測定試劑盒被設計用來定量HIV-1 P24核心抗原，該抗原與細胞內(nèi)病毒生產(chǎn)的程度成正相關。該試劑盒購自SAIC-NCI-Frederick腫瘤研究所，P.O.BoxB，F(xiàn)rederick，M.D21702，USA的艾滋病疫苗程序，包括包被了抗HIV-1P24單克隆抗體的96孔板，第一抗體-兔抗HIV P24血清，第二抗體-山羊抗兔IgG(H+L)過氧化物酶偶聯(lián)的抗體，TMB過氧化物酶底物系統(tǒng)和裂解的HIV-1 P24標準物。應用Organon-Technica ELISA讀數(shù)器在450nm處分析HIV-1 P24抗原捕獲測定，參考波長為650nm。
HIV-1 P24抗原捕獲ELISA在組織培養(yǎng)基中應用檢測HIV-1 P24核心抗原的間接酶免疫分析測定HIV感染。組織培養(yǎng)上清液與第一抗體兔抗HIV-1 P24抗原反應，然后應用過氧化物酶偶聯(lián)的山羊抗兔IgG觀察。通過加入4N H2SO4終止反應，其中，產(chǎn)生的顏色深淺程度與組織培養(yǎng)上清液中存在的HIV-1抗原量成正比。
實驗室生物危險水平(BL-3)所有的病毒生產(chǎn)、分離和感染，HIV-1感染細胞的組織培養(yǎng)，含有P24抗原上清液的收獲和P24抗原捕獲ELISA，都是在Hebrew大學Hadassah醫(yī)學院的BL-3實驗室進行的，并且符合NIH和CDC(USA)設定的生物安全實踐標準。
流式細胞術應用FACSort細胞分類儀(Becton & Dickinson，SanJose，CA.USA)(I)在HIV-1感染前，測定CD4陽性CEM和sup-T1細胞批量的百分比，以確認每個實驗中感染程度是相同的；以及(ii)檢測在細胞質(zhì)和細胞核中存在與FITC偶聯(lián)的天然酪蛋白衍生的肽的T細胞。
CO2孵育箱實驗期間，為了用HIV-1病毒培養(yǎng)產(chǎn)生的細胞，應用天然酪蛋白衍生的肽進行預處理的細胞和病毒，以及用HIV-1進行進一步孵育的細胞，都在濕潤的CO2孵育箱中保存。
HIV感染培養(yǎng)的人CD4細胞為了進行較長的孵育，用幾種漸增濃度的天然酪蛋白衍生的肽(50-1000μg/ml)或酪蛋白衍生的合成肽(10-500μg/ml)預孵育細胞(CEM，Sup-T1)24(合成和天然肽)和48(只有天然肽)小時，然后每孔加入HIV-1IIIB(終濃度為45pg/ml)。為了進行較短的孵育(3小時)，用肽預孵育HIV-1IIIB3小時，然后加入組織培養(yǎng)板中的細胞(5000細胞/孔)。對照組是IF(感染組，用HIV-1，但沒有肽的情況下培養(yǎng)的細胞)，UIF(未感染組，沒有HIV-1和沒有肽的情況下培養(yǎng)的細胞)和UIF+Ch(未感染+天然酪蛋白衍生的肽組，在天然酪蛋白衍生的肽存在的情況下{50-1000μg/ml}培養(yǎng)的細胞)，來檢測天然酪蛋白衍生的肽和酪蛋白衍生的合成肽對細胞存活力和生長的作用。在感染后7，10和14天(收獲P24抗原培養(yǎng)上清液的日子)計數(shù)細胞存活力和增殖率。收獲細胞和組織培養(yǎng)上清液(培養(yǎng)基)，并立即在1/10體積的10％ Triton X-100中裂解。這些樣品在37℃再孵育1小時，然后-80℃保存，直至進行p24抗原檢測。
共焦顯微鏡應用連接于TW Zeiss Axiovert 135M反向顯微鏡的Zeiss LSM 410共焦激光掃描系統(tǒng)探測與FITC偶聯(lián)的肽向細胞內(nèi)的穿透，所述掃描系統(tǒng)采用激光掃描共焦顯微鏡技術。在37℃，5％CO2，95％空氣的孵育箱中，用FITC偶聯(lián)的天然酪蛋白衍生的肽與T細胞共同孵育，孵育后，應用磷酸緩沖鹽水(PBS)清洗細胞3次，去除未結合的FITC肽。應用3.8％福爾馬林固定細胞10分鐘，用PBS清洗2次，在進行顯微鏡檢視前將細胞重懸浮于50-100μl PBS中。從不同孵育時間點(15分鐘，30分鐘，1小時，1.5小時和3小時)選擇的細胞圖象顯示了在其細胞質(zhì)和細胞核中存在不同數(shù)量的FITC-天然酪蛋白衍生的肽，這些圖象保存在3.5”Zip驅動器中(230MB)，并應用Photoshop軟件進行圖象處理。胸苷摻入實驗為了檢測天然酪蛋白衍生的肽對T細胞增殖的作用，在96孔平底微孔板中加入不同濃度的天然酪蛋白衍生的肽(10mg/ml，儲存于RPMI中)，所述培養(yǎng)板中含有培養(yǎng)的Sup-T1細胞(5000細胞/孔)，如HIV-1感染Sup-T1細胞部分所述。細胞進行計數(shù)，并通過臺盼蘭排出法檢測細胞活性。在每一時間點(3，7，10和14天)應用[3H]胸苷脈沖處理細胞18小時(過夜)，并用玻璃纖維濾器收獲，進行放射活性檢測(細胞DNA中摻入的[3H]胸苷量與細胞增殖程度成正比)。
在正常、清髓和移植受體小鼠和豚鼠中天然酪蛋白衍生的肽的毒性高達5000mg/kg動物體重的天然酪蛋白衍生的肽以單劑或分3劑的形式肌內(nèi)或靜脈注射給正常動物。使用多株小鼠，包括BALB/c，C3H/HeJ和非肥胖糖尿病(NOD)小鼠。小鼠在處死前監(jiān)測10個月、處死后進行尸檢(毒性測定)，或者觀察200天(生存率)。豚鼠每只接受單劑肌內(nèi)注射20mg天然酪蛋白衍生的肽。15天后處死豚鼠，進行病理檢查。
在骨髓移植受體小鼠中白細胞和血小板的重建BALB/c小鼠接受亞致死性放射，放射源距離皮膚70cm，放射劑量為50cGy/分鐘，總放射劑量600cGy。如上所述，接受放射的小鼠進行同基因骨髓重建，并遵循雙盲協(xié)議，在24小時后每只小鼠靜脈注射1mg天然酪蛋白衍生的肽，酪蛋白衍生的合成肽(13-26個氨基酸，見上表3)，或人血清白蛋白(對照)。根據(jù)處理后6-12天指定時間間隔收集的外周血細胞計數(shù)測定白細胞的重建情況。根據(jù)處理后6-15天指定時間間隔收集的眶后叢血的細胞計數(shù)測定血小板的重建情況，其中眼窩后叢血被吸入到肝素化毛細管中。
在另外的一系列實驗中，CBA小鼠接受致死性放射(900cGy)，然后如上所述應用BM細胞和天然酪蛋白衍生的肽或人血清白蛋白進行重建和處理。如上所述，進行血小板重建情況檢測。
在第三系列實驗中，小鼠接受放射(800cGy)，在移植后4，5，6和7天用100μg酪蛋白衍生的合成肽(肽3a和4P，分別代表αS1酪蛋白N末端的前6個12個氨基酸-見上表3)進行重建和腹膜內(nèi)注射。在移植后10和12天測定血小板重建。
骨髓移植受體小鼠的重建C57/B1/6小鼠接受致死性放射，放射源距離皮膚70cm，放射劑量為50cGy/分鐘，總放射劑量900cCy。在遵循雙盲協(xié)議的條件下，放射的小鼠進行同基因骨髓細胞重建，所述骨髓細胞來源于在骨髓收集前1天應用1mg/鼠的天然酪蛋白衍生的肽或鹽水(對照)處理的小鼠。在一個實驗中，監(jiān)測小鼠的存活18天。在另一個實驗中，小鼠在8天后處死，監(jiān)測脾定殖情況。
酪蛋白衍生的合成肽顯著降低膽固醇水平在喂食致動脈粥樣硬化飲食之后評估合成的酪蛋白衍生肽降低7周齡雌性C57B1/6j小鼠膽固醇水平的能力。將小鼠分成8組。一個對照組喂食正常飲食。第二對照組喂食含有巧克力的改良ThomasHartroft飲食(#TD 88051Teklad，Madison，WI)[Gerber，D.W.Et al.，Journal of Lipid Research.42，2001]。其余的實驗組全部喂食改良的Thomas Hartroft飲食。用該飲食喂食一周后，血清膽固醇水平顯著增加，腹膜內(nèi)注射1mg/小鼠的酪蛋白衍生的合成肽，然后一周后進行0.1mg的第二次注射。
根據(jù)基于Roeschlou & Allin酶促方法的Roche膽固醇測定(Roche，Inc.，Germany)測定血膽固醇水平。
實驗結果天然酪蛋白衍生的肽從凝乳有時不支持細菌生長這一觀察結果開始，從乳蛋白中分離出一種具有殺菌性質(zhì)的酪蛋白片段(Katairkatchalsky，et al.美國專利號3,764,670)。從天然酪蛋白蛋白裂解產(chǎn)物中得到的粗制肽可以通過下述方法制備，酸沉淀酪蛋白蛋白裂解消化產(chǎn)物的可溶性部分，透析并凍干。在長期儲存后檢測該粗制制劑的生物活性時，應該指出，在凍干并儲存于4℃的條件下，該粗制制劑保持活性(體外和體內(nèi))至少12個月。
如上所述，為了鑒定天然酪蛋白衍生的肽中包含的活性肽，應用高效液相層析(HPLC)對凍干粗制制劑進行分級分離。分析的所有凍干樣品顯示了相似的保留時間特征，與上述內(nèi)容一致。
因此，天然酪蛋白衍生的粗制肽制劑的一種主要組分為αS1酪蛋白N末端片段。
天然酪蛋白衍生的肽在嚙齒類動物和人類中無毒在小鼠、大鼠、豚鼠和人類志愿者中進行的大劑量天然酪蛋白衍生的肽的短期和長期效果研究證實，該制劑沒有毒性、致畸性或副作用。在一系列實驗中，將代表估計有效劑量7000倍的單劑量天然酪蛋白衍生的肽肌內(nèi)注射給小鼠。處理后14天進行小鼠的標準病理尸檢沒有發(fā)現(xiàn)對內(nèi)臟器官的毒性作用和任何異常。在豚鼠中進行的類似毒性實驗——單劑肌內(nèi)注射20mg天然酪蛋白衍生的肽后2周，也沒有發(fā)現(xiàn)異常。在另一系列實驗中，給健康小鼠應用大劑量天然酪蛋白衍生的肽，2周后檢測血液學參數(shù)，結果發(fā)現(xiàn)對這些參數(shù)沒有影響，這些參數(shù)包括白細胞(WBC)，紅細胞(RBC)，血紅蛋白(HGB)，電解質(zhì)，血糖等。第三系列實驗測試了在小鼠和大鼠中重復應用100mg/kg體重的大劑量2周，結果在尸檢中，沒有發(fā)現(xiàn)變態(tài)反應、遲發(fā)性皮膚或變態(tài)反應，也沒有病理改變。在測試天然酪蛋白衍生的肽對放射的、骨髓重建的BALB/c和C3H/HeJ小鼠長期存活的影響作用時發(fā)現(xiàn)，治療組小鼠的存活率(27只BALB/c和C3H/HeJ小鼠中18只存活，66％)明顯超過白蛋白處理的對照組的存活率(26只BALB/c和C3H/HeJ小鼠中4只存活，15％)。在應用天然酪蛋白衍生的肽處理的小鼠中進行的致畸性實驗[詳細內(nèi)容參見，例如Drug Safety in Pregnancy，F(xiàn)olb and Dakes，p.336，Elsevier；Amsterdam，NewYork，Oxford(1990)]發(fā)現(xiàn)，該肽對任何生長參數(shù)都沒有影響。
與在嚙齒類動物中測試發(fā)現(xiàn)其沒有毒性或副作用一樣，天然酪蛋白衍生的肽在用于人類時，也是安全的。比較7名健康志愿者在肌內(nèi)注射天然酪蛋白衍生的肽之前、期間、之后7天的血樣和尿樣發(fā)現(xiàn)，沒有任何臨床指標發(fā)生變化。也沒有觀察到其他不良反應。
因此，在嚙齒類動物中應用天然酪蛋白衍生的肽進行大劑量長期治療，沒有發(fā)現(xiàn)明顯的毒性、病理性、變態(tài)反應性、致畸性、血清學或其他任何不良反應。而且，對具有短期和長期并發(fā)癥危險的放射過的小鼠而言，應用天然酪蛋白衍生的肽在200-300天期間，具有明顯的存活優(yōu)勢。這些結果，以及在健康人類志愿者中通過注射應用天然酪蛋白衍生的肽沒有出現(xiàn)任何不良反應，清楚地表明，腸胃外給予該肽，非常安全。
骨髓移植重建的受體小鼠C57/B1/6小鼠接受致死性放射，然后應用同基因骨髓進行重建，所述骨髓來源在骨髓抽取前1天應用1mg/鼠的天然酪蛋白衍生的肽處理或未經(jīng)處理的小鼠，結果發(fā)現(xiàn)，接受處理組小鼠骨髓的放射小鼠存活率大大超過接受未處理小鼠骨髓的放射小鼠(放射10天后，18只接受處理組小鼠骨髓的放射小鼠中有15只存活；而放射10天后，17只接受鹽水處理的對照小鼠骨髓細胞的放射小鼠中只有4只存活)。與接受鹽水處理的對照小鼠骨髓細胞的放射小鼠脾臟相比，接受骨髓處理組小鼠骨髓的放射小鼠脾臟，每個脾臟包括的集落數(shù)大約是前者的2-3倍(1-5個集落比0-3個集落)。
天然酪蛋白衍生的肽刺激淋巴細胞增殖天然殺傷(NK)細胞和細胞毒T細胞對于免疫系統(tǒng)保護機體免受感染病原體和癌細胞侵襲至關重要，因為這兩種細胞均具有活性細胞毒作用，而且能夠分泌免疫調(diào)節(jié)淋巴因子。如在艾滋病或化療后出現(xiàn)的免疫受損，導致T或NK細胞活性異常減弱。當來自BALB/c和C57B1/6小鼠的正常鼠骨髓細胞在有100μg/ml天然酪蛋白衍生的肽存在的情況下培養(yǎng)時，在兩個效應細胞靶細胞比例組中都觀察到了NK活性的明確增加。而且，兩組之間的比較揭示了明確的劑量反應關系。在1∶25的效應細胞∶靶細胞比下，平均NK活性從13.93％增加至30.77％，在1∶50的效應細胞∶靶細胞比下，平均NK活性從13.68％增加至44.05％(圖1)。用來自粒細胞集落刺激因子處理的供體的人外周血干細胞進行類似實驗，證明了天然酪蛋白衍生的肽更加顯著的呈濃度依賴性的靶細胞溶解刺激作用。
在第一組實驗中(圖2a)，測量來自一名患者的血樣中的NK活性，并且以兩種效應細胞∶靶細胞比，用漸增濃度的天然酪蛋白衍生的肽孵育。在對照、未處理的PBSC培養(yǎng)物中僅僅測量4％35S釋放。在最低的肽濃度下(5μg/ml)發(fā)現(xiàn)了幾乎相同的百分放射活性(4％)。但是，在更高的肽濃度下，在10μg/ml-100μg/ml的范圍內(nèi)，對于100∶1的效應細胞∶靶細胞比，測量到10.8-14.9％35S的釋放，對于50∶1的效應細胞∶靶細胞比，測量到8.3-14.5％35S的釋放(圖2a)。
當用漸增濃度的天然酪蛋白衍生的肽孵育來自正常(患者1)和受影響的(患者2-6)人供體的PBS細胞時，可以測量到受影響的患者的NK活性的顯著增強。因此，盡管天然酪蛋白衍生的肽對正常患者NK活性具有最小作用(從13-15％35S釋放增加，患者1)，來自乳腺癌和非何杰金淋巴瘤患者(例如患者3和4)的PBS細胞表現(xiàn)出NK活性的顯著、劑量依賴性增加(分別為3.5-10.8％35S；12.2-19.1％35S)(圖2b)。
天然酪蛋白衍生的肽刺激CD56表面抗原陽性(NK)細胞增殖在另一系列實驗中，用天然酪蛋白衍生的肽孵育來自接受GCSF處理的5名人類供體的外周血干細胞(PBSC)10，14，或28天，然后測定CD56抗原的存在。在來自所有供體(除患者1外)的肽處理的細胞中觀察到了CD56抗原檢測中有時有顯著增加。在圖3a中描述了代表性反應在有或沒有天然酪蛋白衍生的肽存在下孵育10天后，通過直接免疫熒光染色檢測到了CD56表面抗原陽性(NK)細胞的存在。總體上，用天然酪蛋白衍生的肽孵育，使對CD56陽性染色的細胞的平均百分比從對照組的0.64％增加至治療后的2.0％(圖3a)。
天然酪蛋白衍生的肽刺激CD3表面抗原陽性(T)細胞增殖通過直接免疫熒光測定天然酪蛋白衍生的肽對來自5名受試者的PBS細胞中的CD3表面抗原陽性(T)細胞的增殖的作用。在所有供體(除患者4外)中，用天然酪蛋白衍生的肽孵育14天顯著增加了T細胞增殖，在一些病例中最多超過5倍?？傮w上，使對CD3陽性染色的細胞的平均百分比從對照組的19.45％增加至治療組的35.54％(圖3b)。
天然酪蛋白衍生的肽刺激CD56和CD3(NK/T細胞)陽性細胞增殖在另一實驗中，用天然酪蛋白衍生的肽孵育來自7名患者的PBSC 28天，然后通過直接免疫熒光檢測對NK/T細胞(CD56和CD3表面抗原陽性)增殖的作用。用天然酪蛋白衍生的肽孵育，在某些病例(患者6)中刺激T細胞增殖5倍以上，而CD3陽性(T-)細胞平均百分比從對照組的2.08％增加至治療組的6.49％。CD56和CD3表面抗原陽性(NK/T)都陽性的細胞從對照組的1.1％增加至治療組的4.3％(圖3c)。這樣，天然酪蛋白衍生的肽刺激來自于正常鼠和人血細胞祖細胞的T淋巴細胞和天然殺傷細胞增殖。有意義的是，在具有低的起始T和NK細胞水平的人供體中注意到了天然酪蛋白衍生的肽的最大免疫刺激作用(圖3a-c)。
酪蛋白衍生的合成肽刺激人淋巴細胞體外增殖當αS1酪蛋白前3-26個殘基的酪蛋白衍生的合成肽與健康和癌癥患者的PBSC共同孵育時(見下)，觀察到顯著增強的NK細胞活性。當非何杰金淋巴瘤和乳腺癌患者的PBSC與少到10μg/ml的肽共同孵育培養(yǎng)2天后，靶細胞溶解最多(是對照組的3->5倍)，所述肽含有αS1酪蛋白前9個或更多殘基(圖4)。在相同條件下，沒有一種測試肽對健康獻血者PBSC培養(yǎng)物中的NK細胞活性具有顯著影響。因此，含有αS1酪蛋白N末端序列至少前10個殘基的肽，即使該肽濃度很低，仍能選擇性刺激腫瘤患者細胞中淋巴細胞的體外增殖。
當代表αS1酪蛋白前3個殘基的酪蛋白衍生的合成肽與患造血疾病的人類供體的PBS細胞共同孵育時(見下)，觀察到相似的NK細胞活性。用肽孵育PBS細胞使靶細胞裂解從未治療對照的2倍增加至8倍以上。在所檢測的5名患者中，三(3)名患者反應于25μg/ml肽濃度，一(1)名反應于100μg/ml肽濃度，一(1)名反應于250μg/ml肽濃度。五(5)名患者中的三名在25μg/ml下有反應。沒有觀察到對來自于用代表αS1酪蛋白前3個氨基酸的合成肽治療的健康供體的PBSC培養(yǎng)物中的NK活性的顯著作用，證明酪蛋白衍生的肽的人淋巴細胞刺激特性的選擇性質(zhì)。
刺激人血液祖細胞造血血液祖細胞可以分化成多種血液細胞巨噬細胞、單核細胞、粒細胞、淋巴細胞、紅細胞和巨核細胞。祖細胞在骨髓中含量豐富，但在應用粒細胞集落刺激因子處理后的外周血(PBSC細胞)和新鮮的臍帶血中也存在。將漸增濃度(50-600μg/ml)的天然酪蛋白衍生的肽加入人骨髓、PBSC和臍帶血培養(yǎng)物中，可以通過測定[3H]胸苷摻入，觀察到細胞增殖的加強(圖5a-5c)。在濃度為300μg/ml，培養(yǎng)15天后，對人PBSC增殖作用最顯著(圖5a)。與天然酪蛋白衍生的肽(600μg/ml)孵育14天后(而不是7天后)，可以觀察到對臍帶血細胞更強的作用([3H]胸苷摻入增加3-4倍)(圖5c)。在4名捐獻者中，來自其中3名的培養(yǎng)骨髓細胞在孵育21天后，也對天然酪蛋白衍生的肽(300μg/ml)反應強烈(摻入增加3-5倍)(圖5b)。因此，天然酪蛋白衍生的肽可以刺激骨髓以及其他來源的人類血液祖細胞增殖。有趣的是，在類似條件下，將培養(yǎng)的人K562(慢性髓細胞白血病)和結腸(結腸癌)細胞系與高濃度(高達500μg/ml)天然酪蛋白衍生的肽共同孵育，結果對[3H]胸苷的摻入量沒有影響。因此，天然酪蛋白衍生的肽可以刺激人類血液祖細胞的增殖，但不刺激腫瘤細胞的體外生長。
酪蛋白衍生肽刺激巨核細胞生成天然酪蛋白衍生的肽在培養(yǎng)的鼠骨髓細胞中刺激巨核細胞祖細胞增殖骨髓中，多個核的巨核細胞源于原始干細胞，然后成熟成為巨細胞，每個巨核細胞都會產(chǎn)生數(shù)千個血小板細胞。血小板對于血凝塊的形成至關重要，而血小板減少癥則是清髓性狀態(tài)中(化療或放療后)一個令人關注的主要問題。
原代骨髓細胞培養(yǎng)物可以經(jīng)誘導形成CFU-GM(粒細胞和單核細胞)集落和CFU-GEMM(粒細胞、紅細胞、巨噬細胞和巨核細胞)集落，后者還包括更多血細胞類型。集落計數(shù)反映了特異性祖細胞的擴增，細胞數(shù)量反映增殖率，分化細胞計數(shù)反映哪個具體的細胞系得到發(fā)育[Patenkin，D.Et al.(1990)，Mol.Cel.Biol.10，6046-50]。在與促紅細胞生成素和IL-3共同孵育的鼠培養(yǎng)骨髓細胞中，添加25μg/ml天然酪蛋白衍生的肽8天，CFU-GEMM的數(shù)量較對照組增加2.5倍，CFU-GEMM中每集落的相對細胞數(shù)量增加3倍。在一系列類似實驗中，向與促紅細胞生成素和條件培養(yǎng)基(見材料和實驗方法)共同孵育的骨髓細胞中添加天然酪蛋白衍生的肽，可以刺激濃度依賴性早期和晚期巨核細胞百分比的增加(不添加肽，15％巨核細胞；添加500μg/ml天然酪蛋白衍生的肽，巨核細胞百分比達50％)。因此，應用天然酪蛋白衍生的肽處理8天，在鼠原代骨髓培養(yǎng)物中可以刺激顯著增加的巨核細胞形成和發(fā)育。
酪蛋白衍生的合成肽在培養(yǎng)的鼠骨髓細胞中刺激巨核細胞祖細胞增殖與上述實驗類似，在相似的實驗條件下，代表αS1酪蛋白前5-24個氨基酸的酪蛋白衍生的肽使早期和晚期巨核細胞的百分比從沒有合成肽的15％增加至25μg/ml合成肽存在下的40％以上(圖7)。因此，用代表前5，6，11，12，17，18，19，20，21和24個氨基酸的合成酪蛋白衍生肽處理8天后刺激巨核細胞形成的顯著增加和原代鼠骨髓培養(yǎng)物的發(fā)育。用其它酪蛋白衍生的合成肽觀察到有些溫和，但仍可感知的刺激作用。
天然酪蛋白衍生的肽在培養(yǎng)的人骨髓細胞中刺激巨核細胞生成在類似條件下，將100μg/ml天然酪蛋白衍生的肽加入健康捐獻者骨髓細胞培養(yǎng)物中，無論是否添加其他刺激因子(GM-CSF，CM)，CFU-GM集落形成均增加。在有促紅細胞生成素存在的條件下，天然酪蛋白衍生的肽還可以刺激紅細胞形成集落。應用促血小板生成素(TPO)處理人骨髓細胞，可以刺激巨核細胞(MK)集落形成。在TPO處理過的細胞中添加300μg/ml天然酪蛋白衍生的肽，可以在MK集落增殖方面使其增加2倍以上(不添加肽，每2×105個細胞形成16個集落，添加天然酪蛋白衍生的肽，每2×105個細胞形成35個集落)。
在其他造血因子存在的條件下，如促紅細胞生成素、人IL-3、hSCF和AB血清，與天然酪蛋白衍生的肽孵育14天，可以使人骨髓細胞中CFU-GEMM集落數(shù)增加近3倍(158個集落添加500μg/ml天然酪蛋白衍生的肽，68個集落只有造血因子)，但對培養(yǎng)的臍帶血CFU-GEMM集落形成的影響要小一些(1.5倍)。培養(yǎng)的人骨髓和臍帶血集落中的相對細胞計數(shù)反映了對添加25μg/ml天然酪蛋白衍生的肽的巨核細胞增殖情況(見圖6所示表)。因此，將培養(yǎng)的人原代骨髓和臍帶血細胞與天然酪蛋白衍生的肽共同孵育，可以刺激定向巨核細胞和紅細胞集落的發(fā)育和增殖。顯著地，在TPO和天然酪蛋白衍生的肽之間觀察到的在刺激巨核細胞生成方面的協(xié)同作用表明了該有效的造血生長因子在天然酪蛋白衍生肽的刺激特性的機制中的可能作用，并且進一步提示天然酪蛋白衍生的肽可能相似地增加許多TPO介導的作用。
天然酪蛋白衍生的肽和天然酪蛋白衍生的合成肽增強紅細胞生成素(EPO)在培養(yǎng)的人骨髓細胞中的作用在上述用于巨核細胞生成所述的相同條件下評估酪蛋白衍生的天然和合成肽對培養(yǎng)的人骨髓細胞中紅細胞增殖的作用。當在EPO存在下添加時，與單獨用EPO處理相比，50-300μg/ml天然酪蛋白衍生的肽，或100μg/ml酪蛋白衍生的合成肽(F，表3，SEQ ID NO18)，刺激紅細胞前體增殖1.5(合成肽)-4倍(出現(xiàn)BFU-E集落)。這樣，天然酪蛋白衍生的肽及其合成衍生物增強了EPO的紅細胞生成刺激作用，因此可以用于增強多種臨床上重要的EPO介導的作用。
酪蛋白衍生的合成肽刺激鼠CFU-GEMM中的樹突細胞增殖在上述用于刺激巨核細胞所述的相同條件下評估酪蛋白衍生的合成肽對鼠原代骨髓細胞中樹突細胞增殖的作用。代表αS1酪蛋白的前2，3，5，6，7，9，11，12，16，23，24和26個氨基酸的酪蛋白衍生的合成肽刺激樹突細胞增殖，從總細胞的2.2％至23％，而在沒有酪蛋白衍生的合成肽存在的條件下孵育時細胞樣品中含0.1-0.2％樹突細胞(圖7)。
酪蛋白衍生的合成肽刺激鼠CFU-GEMM中的漿細胞增殖在上述用于刺激巨核細胞所述的相同條件下評估酪蛋白衍生的合成肽對鼠原代骨髓細胞中漿細胞增殖的作用。代表αS1酪蛋白的前2，3，5，7，11，16，17，18，19，20，21，22，23和24以及26個氨基酸的酪蛋白衍生的合成肽刺激漿細胞增殖，從總細胞計數(shù)的1.5％至12.3％，而在沒有酪蛋白衍生的合成肽存在的條件下占0.3％(圖7)。
酪蛋白衍生的合成肽刺激CFU-GEMM中的巨噬細胞增殖在上述用于刺激巨核細胞所述的相同條件下評估酪蛋白衍生的合成肽對鼠原代骨髓細胞中巨噬細胞增殖的作用。用代表αS1酪蛋白的前7，9，16和23個氨基酸的酪蛋白衍生的合成肽孵育，顯著刺激巨噬細胞增殖，從對照組的總細胞計數(shù)的大約17％增加至用酪蛋白衍生的合成肽孵育組的總細胞數(shù)的接近30％(圖7)。
酪蛋白衍生的合成肽刺激CFU-CEMM中的紅細胞增殖在上述用于刺激巨核細胞所述的相同條件下評估酪蛋白衍生的合成肽對鼠原代骨髓細胞中紅細胞增殖的作用。用代表αS1酪蛋白的前4個氨基酸的酪蛋白衍生的合成肽孵育，顯著刺激紅細胞增殖，從對照組的總細胞計數(shù)的53％增加至用酪蛋白衍生的合成肽孵育組的總細胞數(shù)的71％(圖7)。
酪蛋白衍生的合成肽刺激CFU-GEMM中的多形核(PMN)細胞增殖在上述用于刺激巨核細胞所述的相同條件下證明了酪蛋白衍生的合成肽對鼠原代骨髓細胞中多形核(PMN)細胞增殖的作用。用代表αS1酪蛋白的前3，6，7，9，16和更多個氨基酸的酪蛋白衍生的合成肽孵育，顯著刺激了PMNs增殖，從未孵育的對照組的總細胞計數(shù)的1.6％增加至用酪蛋白衍生的合成肽孵育組的總細胞數(shù)的2.9％-14.9％(圖7)。
天然酪蛋白衍生的肽可以刺激放射和骨髓移植后的體內(nèi)造血清髓性治療可以導致威脅生命的血小板和白細胞數(shù)量降低，盡管給予血細胞和生長因子治療，這種情況仍可持續(xù)存在。下面的內(nèi)容顯示了放射和骨髓移植后天然酪蛋白衍生的肽的作用。
小鼠同基因骨髓移植后，天然酪蛋白衍生的肽可以增強白細胞和血小板的重建亞致死劑量放射后(600cGy)，骨髓細胞重建后一天，最低限度骨髓重建的BALB/c小鼠(n＝12)靜脈注射1mg/鼠天然酪蛋白衍生的肽。在處理后4，6和15天，與接受人血清白蛋白的對照組相比，觀察到外周血白細胞計數(shù)的顯著增加(圖8)。無論治療組還是對照組，放射后骨髓移植小鼠的外周血血小板計數(shù)在處理后長達8天的時間內(nèi)受到同等程度的抑制。但是，到第13天，應用天然酪蛋白衍生的肽處理的小鼠顯示了明顯優(yōu)勢，到第13天，較人血清白蛋白處理對照組(血小板計數(shù))具有顯著優(yōu)勢增加，這在15天后甚至更明顯(圖9)。因此，在應用有限數(shù)量的骨髓細胞移植后，天然酪蛋白衍生的肽可以增強血小板和白細胞的重建。預期在應用最佳數(shù)量而不是有限數(shù)量的骨髓細胞重建時，這種作用可能進一步增強。
小鼠同基因骨髓移植后，酪蛋白衍生的合成肽可以增強白細胞的重建亞致死劑量放射后(600cGy)，骨髓移植后一天，最低限度骨髓重建的BALB/c小鼠(每個合成肽組n＝5，對照組n＝10)腹膜內(nèi)注射1mg/鼠酪蛋白衍生的合成肽(長度為13-26個氨基酸，見表3)。在10-14天期間，與接受人血清白蛋白的對照組(第10天1.67×106細胞/ml；第12天4.64×106細胞/ml)相比，應用具有15個氨基酸(第10天1.72×106細胞/ml；第12天6.54×106細胞/ml)和17個氨基酸(第10天2.74×106細胞/ml；第12天5.20×106細胞/ml)的肽，觀察到外周血白細胞計數(shù)的顯著增加(見表3)。因此，在應用有限數(shù)量的骨髓細胞移植后，酪蛋白衍生的合成肽可以增強白細胞的重建。
小鼠同基因骨髓移植后，酪蛋白衍生的合成肽可以增強血小板的重建為了證實觀察到的酪蛋白衍生的合成肽增強造血干細胞培養(yǎng)物中的巨核細胞增殖(見圖6和7)，研究了肽對體外血小板重建的作用。當接受致死放射(800cGy)時，最低限度骨髓重建的小鼠(n＝5/組)接受100μg/小鼠合成肽4P和3a(長度分別為6和12個氨基酸-見表3)，以每日腹膜內(nèi)注射共4次給藥(移植后4-7天)，觀察到了與未處理對照相比血小板重建的明顯增強。對于兩種肽，在移植后10和12天血小板計數(shù)顯著增加。用肽4P處理，在移植后12天使計數(shù)增加29％(872×103/ml，而對照組為676×103/ml)，而用肽3a處理，在移植后第10天使計數(shù)增加多達35.5％(229×103/ml，而對照組為169×103/ml)，在移植后第12天增加多達13.5％(622×103/ml，而對照組為461×103/ml)。因此，同樣的酪蛋白衍生的合成肽增強了巨核細胞的體外增殖和骨髓移植后的血小板體內(nèi)重建。
天然酪蛋白衍生的肽抑制HIV-1病毒體外感染T淋巴細胞系天然酪蛋白衍生的肽穿透進入T淋巴細胞為了研究天然酪蛋白衍生的肽的免疫刺激機制和抗病毒作用，在HIV-1病毒體外感染前用天然酪蛋白衍生的肽處理易感的Sup-T1和培養(yǎng)的人T細胞。熒光顯微鏡發(fā)現(xiàn)，當按上文所述孵育時，F(xiàn)ITC偶聯(lián)的天然酪蛋白衍生的肽(100μg/ml)穿透Sup-T1細胞(圖10a-f)。15分鐘后，在細胞質(zhì)中觀察到了小量標記(圖10a-b)。在30分鐘時(圖10c-d)，在細胞質(zhì)中觀察到了更多標記，具有有限的核攝取。從1小時的孵育開始(圖10e-f)，在細胞質(zhì)中觀察到了FITC標記的天然酪蛋白衍生的肽，但它們大多數(shù)濃集在細胞核中。通過流式細胞術進行的Sup-T1細胞分析證實了從孵育后5分鐘開始標記的天然酪蛋白衍生的肽的攝取增加。
天然酪蛋白衍生的肽可以增強人淋巴細胞增殖在培養(yǎng)基中存在天然酪蛋白衍生的肽，在14天的培養(yǎng)期間，可以導致Sup-T1細胞計數(shù)的增加。孵育7天時，觀察到的細胞數(shù)量的最大增加是50μg/ml天然酪蛋白衍生的肽(42％)，10天時是1000μg/ml(30％)，14天時是600μg/ml(32％)。通過測定培養(yǎng)細胞[3H]的胸苷摻入量，提供了增殖指數(shù)，反映了細胞數(shù)量的增加，其中觀察到的最顯著的效應是應用600μg/ml天然酪蛋白衍生的肽第10天時和50μg/ml第14天時(圖11)。14天時下降的增殖指數(shù)可能反映了細胞的過度生長和營養(yǎng)物質(zhì)的耗竭。
酪蛋白衍生的合成肽可以增強人淋巴細胞增殖在培養(yǎng)基中存在酪蛋白衍生的合成肽(表3列出的所有肽)，在10天的培養(yǎng)期間，可以導致Sup-T1細胞計數(shù)的增加。這種增加作用在所有合成肽中類似。觀察到的感染細胞中淋巴細胞數(shù)量增加最大的是給予250μg和500μg/ml代表前9個氨基酸的肽(分別為80％和33％)(數(shù)據(jù)未示出)。
天然酪蛋白衍生的肽抑刺HIV-1感染人淋巴細胞在用HIV-1孵育之前用天然酪蛋白衍生的肽(50-1000μg/ml)預處理易感的CEM淋巴細胞24或48小時，或者暴露于用天然酪蛋白衍生的肽預處理3小時的HIV-1，表現(xiàn)出與未處理對照相比的細胞增殖增強和病毒感染水平降低。感染后15天進行細胞計數(shù)和HIV P24抗原實驗，結果發(fā)現(xiàn)，與600-1000μg/ml天然酪蛋白衍生的肽孵育3小時后，可以100％抑制病毒感染，與50和600μg/ml肽孵育24小時后，感染抑制率分別為98％和99％(比較未處理對照UIF的細胞數(shù)目)。未發(fā)現(xiàn)孵育時間延長更有效(圖12)。盡管漸增濃度的天然酪蛋白衍生的肽在感染后3和24小時可以增強細胞增殖，但在這些生長最快速的培養(yǎng)物中，病毒感染的抑制也最顯著。在HIV-1感染前，應用天然酪蛋白衍生的肽預處理Sup-T1細胞，觀察到更引人注目的細胞增殖增強和HIV-1感染抑制(病毒預處理3小時、預處理24小時和48小時，病毒感染的平均抑制率分別為96.7％，88.7％和95.7％)(未示出)。因此，天然酪蛋白衍生的肽穿透培養(yǎng)的人淋巴細胞及其細胞核，增強細胞生長，顯著降低CD4細胞對HIV-1感染的易感性。這樣，天然酪蛋白衍生的肽預期可以用于預防HIV感染，以及HIV感染和艾滋病患者的感染后治療。
酪蛋白衍生的合成肽抑制HIV-1感染人淋巴細胞在與上述相同的條件下，用CEM-淋巴細胞證明了酪蛋白衍生的合成肽抑制人淋巴細胞中HIV-1感染的能力。用代表αS1酪蛋白的前3個氨基酸的酪蛋白衍生的合成肽預處理CEM淋巴細胞3小時，達到了對HIV-1孵育后感染的顯著抗性。處理細胞中的淋巴細胞數(shù)目為1.29×106(100μg/ml)和2.01×106(500μg/ml)，而感染的HIV-1對照為1.06×106(圖13)。與未處理對照組相比(0.52ng P24Ag/ml)，在感染后7天HIV-P24分析所測量的相同細胞中的HIV-1感染水平在肽處理的細胞中顯著降低(100μg/ml和500μg/ml時分別為0.17和0.14ng P24抗原/ml)。
同樣，在暴露于代表αS1酪蛋白的前5個氨基酸的合成的酪蛋白衍生肽預處理的病毒(3小時)的CEM細胞中觀察到了HIV-1感染的顯著抑制。
與感染的HIV-1對照的1.06×106相比，用10和25μg肽3P/ml孵育的培養(yǎng)物中的細胞計數(shù)分別為1.17×106和1.26×106。
感染后第7天的HIV-P24抗原分析，發(fā)現(xiàn)處理的培養(yǎng)物中HIV-1感染水平的顯著降低(10和25μg/ml時分別為0.26和0.18ng P24Ag/ml，而對照組為0.52ng P24Agml)。
同樣，用代表αS1酪蛋白的前6個氨基酸的酪蛋白衍生的合成肽4P預孵育病毒3小時后，對CEM淋巴細胞感染HIV-1的易感性具有顯著影響。
在25和250μg/ml的濃度下最顯著影響了細胞數(shù)目(分別為1.26×106和1.59×106，而感染的對照值為1.06×106)。
感染后第7天的HIV-P24抗原分析，發(fā)現(xiàn)與未處理的感染的對照培養(yǎng)物相比，病毒顆粒的劑量依賴性減少(圖13)。因此，在代表少至αS-1酪蛋白的前5個N末端氨基酸的酪蛋白衍生的合成肽中保留了天然酪蛋白衍生的肽提供的抗HIV-1感染淋巴細胞的保護作用。
天然酪蛋白衍生的肽預防非肥胖糖尿病(NOD)小鼠發(fā)生葡萄糖尿非肥胖糖尿病(NOD)小鼠可以自發(fā)發(fā)生I型(IDDM)糖尿病，該病是一種自身免疫性疾病，可以導致胰島β細胞發(fā)生炎癥，最終導致患病、死亡。雌性NOD小鼠特別易感，顯示的證據(jù)是早在5周齡時，就要巨噬細胞侵襲胰島間質(zhì)。每周1次或2次注射100μg天然酪蛋白衍生的肽共5周(總計注射5或10次)，可以完全有效地預防與疾病發(fā)作和病程有關的葡萄糖尿。在200天時，100％未經(jīng)處理的對照小鼠(n＝5)成為糖尿病小鼠，并隨后死亡，而治療組小鼠(n＝5)100％保持正常血糖，在365天時，全部存活(圖14)。因此，天然酪蛋白衍生的肽可以有效保護遺傳易感小鼠免于該自身免疫性炎癥性疾病的發(fā)生。
酪蛋白衍生的合成肽預防非肥胖糖尿病(NOD)小鼠發(fā)生葡萄糖尿在上述相同的條件下證明酪蛋白衍生的合成肽對NOD小鼠發(fā)生葡萄糖尿的預防作用，但是小鼠只是每周一次注射100μg酪蛋白衍生的合成肽，共五(5)周。這些實驗的結果見下表4表4酪蛋白衍生的合成肽對NOD小鼠中IDMM的作用
在腹膜內(nèi)注射1g/kg體重的葡萄糖后0min和60min，從眶旁叢抽血。用葡萄糖分析儀2(Beckman Instruments，F(xiàn)ullerton，CA)測定血漿葡萄糖水平，表示為mmol/L。
*健康和良好＝在尿中未檢測到糖葡萄糖尿＝＞1000mg/dL.
用6只健康的雌性對照小鼠進行的IPGTT0min-110mmol/L；60min-106mmol/L血糖。
代表αS1酪蛋白的前9(X)，11(2a)和12(3a)個氨基酸和更長鏈的酪蛋白衍生的合成肽在防止與疾病的發(fā)病和過程有關的葡萄糖尿中高度有效。
25周后評估酪蛋白衍生的合成肽的作用。此時，未處理對照組中的所有5只小鼠(n＝5)都發(fā)生糖尿病，這是由明顯的葡萄糖尿(＞1000mg/dl)的存在表示的(表4)。
在用代表αS1酪蛋白N末端的前九(9)個氨基酸的合成肽處理的5只NOD小鼠中的3只(3/5)中沒有檢測到葡萄糖尿。在注射αS1酪蛋白N末端的十一(11)個氨基酸的合成肽的組中，在5只NOD小鼠中的4只(4/5)中沒有檢測到葡萄糖尿在檢測到葡萄糖尿的肽處理的小鼠組中，相對于未處理對照，發(fā)病一般顯著延遲(延遲3-5周)(數(shù)據(jù)未示出)，表明甚至不完整的肽的明確保護作用。
在NOD小鼠中也研究了更短的酪蛋白衍生的合成肽的保護作用。在與上述實驗相似的其它系列實驗中，代表αS1酪蛋白的前3個(1P)和4個(2P)N末端氨基酸的肽的給藥有效防止了未處理小鼠中葡萄糖尿的發(fā)病(在第16周時測定)，而未處理對照都發(fā)生了糖尿病(100％葡萄糖尿)(數(shù)據(jù)未示出)。
在注射代表前9個氨基酸的合成的酪蛋白衍生肽的組中，25周后用健康和良好的NOD小鼠進行葡萄糖耐受(IPGT)實驗，表明沒有異常葡萄糖代謝的跡象(葡萄糖負荷前和負荷后60分鐘血糖值正常)。
在用代表αS1酪蛋白N末端的前11個氨基酸的酪蛋白衍生的合成肽(2a)處理的組中，在5只小鼠中的兩只中靜息血漿葡萄糖水平有一定程度的升高(215和159mmol/L)，并且在負荷后60分鐘保持中度升高(183和04mmol/L)。另外兩只小鼠在整個實驗中保持正常的血糖范圍(表4)?？傊?，IPGTT的結果反應了在健康的，存活的肽處理的小鼠中不存在葡萄糖尿(表4)。因此，僅僅代表αS1酪蛋白的N末端的幾個氨基酸的合成肽和天然酪蛋白衍生的肽顯著減少具有遺傳傾向的NOD小鼠對自身免疫性糖尿病發(fā)病的易感性。
合成的酪蛋白衍生肽顯著降低血液的總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)水平腹膜內(nèi)給予酪蛋白衍生的合成肽導致實驗的高膽固醇小鼠中血脂(HDL，LDL和TC)的顯著降低。致動脈粥樣硬化的Thomas Hartroft飲食一周后，小鼠的血液膽固醇水平升高至318mg/dl的水平。
用每只小鼠1mg酪蛋白衍生的合成肽處理后1周，與對照組相比[TC分別為308和279mg/dl；HDL分別為42.5mg/dl和41mg/dl，LDL分別為247mg/dl和221mg/dl，飲食誘導的高膽固醇/高脂血癥對照組為393mg/dl(TC)，54.5mg/dl(HDL)和326mg/dl(LDL)]，用代表αS1酪蛋白的前5(3P)和11(2a)個氨基酸的酪蛋白衍生的合成肽處理的組中TC，HDL和LDL值顯著降低(圖15)。因此，在單次腹膜內(nèi)給藥后1周內(nèi)，代表αS1酪蛋白的前幾個N末端氨基酸的合成肽降低了實驗誘導的高脂血癥和高膽固醇血癥。
天然酪蛋白衍生的肽的臨床試驗按照指示，每次給患者肌內(nèi)注射50mg天然酪蛋白衍生的肽，分3次注射。
天然酪蛋白衍生的肽刺激腫瘤患者造血按照指示，在6名腫瘤患者接受天然酪蛋白衍生的肽給藥前和給藥后，檢測其血液學指標，這6名患者已經(jīng)化療或正在接受化療。要特別注意血小板(PLT)、白細胞(WBC)、紅細胞(RBC)和血紅蛋白(HGB)的變化，這些指標分別代表血小板、白細胞和紅細胞的生成情況。
G.T.，(女性患者.患者1)患者罹患卵巢癌，行子宮切除術，然后化療。在手術后兩個月和兩個半月時肌內(nèi)注射兩次天然酪蛋白衍生的肽。在第一次和第二次給予天然酪蛋白衍生的肽期間，沒有進行化療。第一次注射后6天，第二次注射后7和13天進行血液化驗，結果發(fā)現(xiàn)血小板和WBC組分均有相當可觀的增長，同樣，RBC也有增長(圖16)。
B.C，.(女性患者.患者2)患者由于小葉癌于1983年行乳房根治術，6年后罹患胃轉移癌。在開始化療前3天，她接受肌內(nèi)注射天然酪蛋白衍生的肽，化療后10天接受第二次(肽注射)。盡管在化療后10天和16天血液計數(shù)顯示血液學指標抑制減輕，而血液學指標抑制在化療后非常常見，但在第一次注射后3天，也就是化療前就觀察到了天然酪蛋白衍生的肽最顯著的效果(圖16)。
B.S.，(女性患者.患者3)患者患有廣泛轉移的播散性乳腺癌，于1987年首次發(fā)現(xiàn)。2年后，她接受了第一次肌內(nèi)注射天然酪蛋白衍生的肽，23天后，接受了第二次。在此期間，沒有給予其他治療。血液化驗提示，首次治療后7天，PLT數(shù)量顯著增加，第二次治療后7天，RBC和WBC數(shù)量顯著增加(圖16)。
J.R.，(女性患者.患者4)患者的診斷是乳腺癌伴骨轉移。她在開始化療前8天接受了一劑天然酪蛋白衍生的肽肌內(nèi)注射，14天后接受了另一次。清晰可見的最顯著的效果是在化療誘導的骨髓抑制后，WBC水平的迅速回升(圖16)。
D.M.，(女性患者.患者5)患者罹患肝癌，伴廣泛播散性轉移。在接受化療前10，8和6天，她接受了3次肌內(nèi)注射的天然酪蛋白衍生的肽。第二系列注射始于化療后10，12和14天。盡管在化療前第一系列注射后就觀察到該制劑對血液學指標的顯著作用，最引人注目的改善是在第二系列天然酪蛋白衍生的肽注射后，化療后受到抑制的指標迅速回升，達到正常細胞計數(shù)(圖16)。
因此，給腫瘤患者應用天然酪蛋白衍生的肽，可以導致血液學指標的改善，特別是增強紅細胞、白細胞和血小板的生成，并能調(diào)節(jié)并縮短化療誘導的血液組分抑制時段。
在合并抵抗性血小板減少癥的移植受體中，天然酪蛋白衍生的肽可以刺激血小板生成合并嚴重出血的長期輸血抵抗性血小板減少癥可能是骨髓移植的一個成脅生命的并發(fā)癥，特別是當傳統(tǒng)治療無效時。兩名罹患嚴重抵抗性血小板減少癥的患者應用天然酪蛋白衍生的肽進行了治療。
M-1(女性患者)32歲，患有急性髓細胞白血病，在自體干細胞移植后完全緩解。她曾經(jīng)歷兩次威脅生命的出血事件，包括肺出血以及軟腭巨大阻塞性血腫。在輸注后超過114天的時間內(nèi)，血小板計數(shù)對rhIL-3，rhIL-6，靜脈應用γ球蛋白和重組促紅細胞生成素治療完全沒有反應。應用50mg天然酪蛋白衍生的肽肌內(nèi)治療兩次后(每次治療分成3次注射)，她的狀況立即得到改善，所述天然酪蛋白衍生的肽是分3次注射的。在血小板計數(shù)迅速恢復正常的同時(圖17)，她肢體末梢用力時出血和patechyae的現(xiàn)象也減輕了，她能夠恢復行走，并且回到外國的家，沒有任何并發(fā)癥和不良反應。
M-2 (男性患者)30歲，患有急性髓細胞白細胞，在自體干細胞移植后第二次完全緩解，但存在完全的血小板計數(shù)抵抗以及胃腸道大出血。他需要每天輸注壓縮細胞，并且發(fā)生了低白蛋白血癥，對應用rhIL-3，rhIL-6和γ球蛋白的多種治療沒有反應。在輸注后86天，應用兩次(每次50mg)天然酪蛋白衍生的肽肌內(nèi)治療后，觀察到血小板的迅速重建(圖18)以及出血的逐漸停止，所述天然酪蛋白衍生的肽是分3次注射的。不再需要其他進一步治療，患者血小板計數(shù)正常，完全沒有癥狀。
因此，以0.7-1.0mg/kg體重的劑量分3次肌內(nèi)應用天然酪蛋白衍生的肽兩次為一個療程，在血小板計數(shù)迅速重建和消除由于長期輸注所致抵抗性血小板減少癥引起的伴致命性出血事件的臨床癥狀方面有效。
天然酪蛋白衍生的肽降低家族性高脂血癥患者甘油三酯和總膽固醇水平M.S.(女性患者)患者是有高脂血癥家族史的38歲女性。應用天然酪蛋白衍生的肽治療前，血液生化指標發(fā)現(xiàn)總膽固醇(321mg/dl)、甘油三酯(213mg/dl；正常范圍45-185mg/dl)和LDL-膽固醇(236.4mg/dl；正常范圍75-174mg/dl)水平升高。應用50μg天然酪蛋白衍生的肽分3次肌內(nèi)給藥后1個月，高脂血癥穩(wěn)定了；總膽固醇水平下降到270mg/dl，甘油三酯為165mg/dl，LDL-膽固醇為201mg/dl，雖然仍高于正常范圍，但較治療前水平已有顯著下降。沒有給予其他治療。因此，應用天然酪蛋白衍生的肽治療相較于不治療，可以顯著降低人高脂血癥。
天然酪蛋白衍生的肽在一例隱性出血患者中刺激正常球蛋白血癥形成D.C.(男性患者)患者是一名75歲男性，由于長期隱性出血導致貧血和低球蛋白血癥(RBC，HGB，HCT，MCH和MCHC均下降)。接受50μg天然酪蛋白衍生的肽分3次肌內(nèi)注射兩次后1個月，觀察到貧血的顯著減輕。2個月后，盡管還存在隱性出血，但RBC達到正常值(4.32而非3.44M/μl)，HGB增加(11.3而非8.9g/dl)，HCT，MCH和MCHC全部改善，接近正常值。因此，多次注射天然酪蛋白衍生的肽似乎能夠刺激人紅細胞生成，減輕由于失血導致的貧血。
應該指出，本發(fā)明的某些特征，為了表達清楚，是以不同實施方案的方式給出的，這些特征可以在單一實施方案中組合應用。相反，本發(fā)明的多種特征，為了表達簡便，是以單一實施方案的方式給出的，這些特征也可以分開應用或以任何適宜的亞組合方式應用。
盡管本發(fā)明是以結合特定實施方案的方式進行闡述的，但很顯然，本領域技術人員可以進行改變、修飾或變化。因此，本發(fā)明應該包括屬于后附權利要求宗旨和范圍之內(nèi)的所有這些改變、修飾和變化。本說明書提及的所有公開發(fā)表物、專利、專利申請和用編號確定的序列均在此全文引入，作為參考，其程度就象每篇單獨的公開發(fā)表物、專利、治療申請或序列特意、單獨指示在此引入，作為參考。此外，本申請中引用或提及任何參考文獻并不意味著認為這些參考文獻是本發(fā)明的現(xiàn)有技術。
序 列 表序列表<110>Sidelman，Zvi<120>酪蛋白衍生的肽及其治療用途<130>02/23922<160>25<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>2<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成肽<400>1Arg Pro1<210>2<211>3<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成肽<400>2Arg Pro Lys1<210>3<211>4<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成肽
<400>3Arg Pro Lys His1<210>4<211>5<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成肽<400>4Arg Pro Lys His Pro1 5<210>5<211>6<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成肽<400>5Arg Pro Lys His Pro Ile1 5<210>6<211>7<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成肽<400>6Arg Pro Lys His Pro Ile Lys15
<210>7<211>8<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成肽<400>7Arg Pro Lys His Pro Ile Lys His1 5<210>8<211>9<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成肽<400>8Arg Pro Lys His Pro Ile Lys His Gln1 5<210>9<211>10<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成肽<400>9Arg Pro Lys His Pro Ile Lys His Gln Gly1 5 10<210>10<211>11<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成肽<400>10Arg Pro Lys His Pro Ile Lys His Gln Gly Leu1 5 10<210>11<211>12<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成肽<400>11Arg Pro Lys His Pro Ile Lys His Gln Gly Leu Pro1 5 10<210>12<211>13<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成肽<400>12Arg Pro Lys His Pro Ile Lys His Gln Gly Leu Pro Gln1 5 10<210>13<211>14<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成肽<400>13Arg Pro Lys His Pro Ile Lys His Gln Gly Leu Pro Gln Glu1 5 10
<210>14<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>合成肽<400>15Arg Pro Lys His Pro Ile Lys His Gln Gly Leu Pro Gln Glu Val Leu1 5 10 15<210>16<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成肽<400>16Arg Pro Lys His Pro Ile Lys His Gln Gly Leu Pro Gln Glu Val Leu1 5 10 15Asn
<210>17<211>18<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成肽<400>17Arg Pro Lys His Pro Ile Lys His Gln Gly Leu Pro Gln Glu Val Leu1 5 10 15Asn Glu<210>18<211>19<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成肽<400>18Arg Pro Lys His Pro Ile Lys His Gln Gly Leu Pro Gln Glu Val Leu1 5 10 15Asn Glu Asn<210>19<211>20<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成肽<400>19Arg Pro Lys His Pro Ile Lys His Gln Gly Leu Pro Gln Glu Val Leu1 5 10 15
Asn Glu Asn Leu20<210>20<211>21<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成肽<400>20Arg Pro Lys His Pro Ile Lys His Gln Gly Leu Pro Gln Glu Val Leu1 5 10 15Asn Glu Asn Leu Leu20<210>21<211>22<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成肽<400>21Arg Pro Lys His Pro Ile Lys His Gln Gly Leu Pro Gln Glu Val Leu1 5 10 15Asn Glu Asn Leu Leu Arg20<210>22<211>23<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成肽<400>22Arg Pro Lys His Pro Ile Lys His Gln Gly Leu Pro Gln Glu Val Leu1 5 10 15Asn Glu Asn Leu Leu Arg Phe20<210>23<211>24<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成肽<400>23Arg Pro Lys His Pro Ile Lys His Gln Gly Leu Pro Gln Glu Val Leu1 5 10 15Asn Glu Asn Leu Leu Arg Phe Phe20<210>24<211>25<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成肽<400>24Arg Pro Lys His Pro Ile Lys His Gln Gly Leu Pro Gln Glu Val Leu1 5 10 15Asn Glu Asn Leu Leu Arg Phe Phe Val20 25
<210>25<211>26<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成肽<400>25Arg Pro Lys His Pro Ile Lys His Gln Gly Leu Pro Gln Glu Val Leu1 5 10 15Asn Glu Asn Leu Leu Arg Phe Phe Val Ala20 2權利要求
1.預防或治療自身免疫病的方法，該方法包括給予需要其的受試者治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽。
2.權利要求1的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
3.權利要求1的方法，其中該肽是合成肽。
4.權利要求1的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
5.預防或治療病毒性疾病的方法，該方法包括給予需要其的受試者治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽。
6.權利要求5的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
7.權利要求5的方法，其中該肽是合成肽。
8.權利要求5的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
9.預防病毒感染的方法，該方法包括給予需要其的受試者治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽。
10.權利要求9的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
11.權利要求9的方法，其中該肽是合成肽。
12.權利要求9的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
13.誘導造血的方法，該方法包括給予需要其的受試者治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽。
14.權利要求13的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
15.權利要求13的方法，其中該肽是合成肽。
16.權利要求13的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
17.誘導造血干細胞增殖的方法，該方法包括給予需要其的受試者治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽。
18.權利要求17的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
19.權利要求17的方法，其中該肽是合成肽。
20.權利要求17的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
21.誘導造血干細胞增殖和分化的方法，該方法包括給予需要其的受試者治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽。
22.權利要求21的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
23.權利要求21的方法，其中該肽是合成肽。
24.權利要求21的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
25.誘導巨核細胞生成的方法，該方法包括給予需要其的受試者治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽。
26.權利要求25的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
27.權利要求25的方法，其中該肽是合成肽。
28.權利要求25的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
29.誘導紅細胞生成的方法，該方法包括給予需要其的受試者治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽。
30.權利要求29的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
31.權利要求29的方法，其中該肽是合成肽。
32.權利要求29的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
33.誘導白細胞生成的方法，該方法包括給予需要其的受試者治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽。
34.權利要求33的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
35.權利要求33的方法，其中該肽是合成肽。
36.權利要求33的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
37.誘導血小板生成的方法，該方法包括給予需要其的受試者治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽。
38.權利要求37的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
39.權利要求37的方法，其中該肽是合成肽。
40.權利要求37的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
41.誘導漿細胞增殖的方法，該方法包括給予需要其的受試者治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽。
42.權利要求41的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
43.權利要求41的方法，其中該肽是合成肽。
44.權利要求41的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
45.誘導樹突細胞增殖的方法，該方法包括給予需要其的受試者治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽。
46.權利要求45的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
47.權利要求45的方法，其中該肽是合成肽。
48.權利要求45的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
49.誘導巨噬細胞增殖的方法，該方法包括給予需要其的受試者治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽。
50.權利要求49的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
51.權利要求49的方法，其中該肽是合成肽。
52.權利要求49的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
53.預防或治療血小板減少癥的方法，該方法包括給予需要其的受試者治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽。
54.權利要求53的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
55.權利要求53的方法，其中該肽是合成肽。
56.權利要求53的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
57.預防或治療全血細胞減少癥的方法，該方法包括給予需要其的受試者治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽。
58.權利要求57的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
59.權利要求57的方法，其中該肽是合成肽。
60.權利要求57的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
61.預防或治療粒細胞減少癥的方法，該方法包括給予需要其的受試者治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽。
62.權利要求61的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
63.權利要求61的方法，其中該肽是合成肽。
64.權利要求61的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
65.預防或治療高脂血癥的方法，該方法包括給予需要其的受試者治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽。
66.權利要求65的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
67.權利要求65的方法，其中該肽是合成肽。
68.權利要求65的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
69.預防或治療高膽固醇血癥的方法，該方法包括給予需要其的受試者治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽。
70.權利要求69的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
71.權利要求69的方法，其中該肽是合成肽。
72.權利要求69的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
73.預防或治療葡萄糖尿的方法，該方法包括給予需要其的受試者治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽。
74.權利要求73的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
75.權利要求73的方法，其中該肽是合成肽。
76.權利要求73的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
77.預防或治療糖尿病的方法，該方法包括給予需要其的受試者治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽。
78.權利要求77的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
79.權利要求77的方法，其中該肽是合成肽。
80.權利要求77的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
81.預防或治療艾滋病的方法，該方法包括給予需要其的受試者治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽。
82.權利要求81的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
83.權利要求81的方法，其中該肽是合成肽。
84.權利要求81的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
85.預防或治療HIV感染的方法，該方法包括給予需要其的受試者治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽。
86.權利要求85的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
87.權利要求85的方法，其中該肽是合成肽。
88.權利要求85的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
89.預防或治療與清髓性劑量的放化療相關的狀況的方法，所述清髓性放化療采用自體骨髓或外周血干細胞移植(ASCT)或異體骨髓移植(BMT)支持，該方法包括給予需要其的受試者治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽。
90.權利要求89的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
91.權利要求89的方法，其中該肽是合成肽。
92.權利要求89的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
93.治療紅細胞生成素可治療的狀況的方法，該方法包括給予需要其的受試者治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽。
94.權利要求93的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
95.權利要求93的方法，其中該肽是合成肽。
96.權利要求93的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
97.增加紅細胞生成素的作用的方法，該方法包括給予需要其的受試者治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽。
98.權利要求97的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
99.權利要求97的方法，其中該肽是合成肽。
100.權利要求97的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
101.治療血小板生成素可治療的狀況的方法，該方法包括給予需要其的受試者治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽。
102.權利要求101的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
103.權利要求101的方法，其中該肽是合成肽。
104.權利要求101的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
105.增加血小板生成素的作用的方法，該方法包括給予需要其的受試者治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽。
106.權利要求105的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
107.權利要求105的方法，其中該肽是合成肽。
108.權利要求105的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
109.增強外周干細胞動員的方法，該方法包括給予需要其的受試者治療有效量的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽。
110.權利要求109的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
111.權利要求109的方法，其中該肽是合成肽。
112.權利要求109的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
113.預防或治療自身免疫病的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
114.權利要求113的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
115.權利要求113的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
116.權利要求113的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
117.預防或治療病毒性疾病的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
118.權利要求117的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
119.權利要求117的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
120.權利要求117的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
121.預防病毒感染的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
122.權利要求121的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
123.權利要求121的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
124.權利要求121的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
125.誘導造血的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
126.權利要求117的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
127.權利要求117的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
128.權利要求117的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
129.誘導造血干細胞增殖的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
130.權利要求121的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
131.權利要求121的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
132.權利要求121的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
133.誘導造血干細胞增殖和分化的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
134.權利要求133的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
135.權利要求133的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
136.權利要求133的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
137.誘導巨核細胞生成的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
138.權利要求137的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
139.權利要求137的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
140.權利要求137的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
141.誘導紅細胞生成的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
142.權利要求141的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
143.權利要求141的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
144.權利要求141的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
145.誘導白細胞生成的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
146.權利要求145的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
147.權利要求145的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
148.權利要求145的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
149.誘導血小板生成的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
150.權利要求149的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
151.權利要求149的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
152.權利要求149的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
153.誘導漿細胞增殖的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
154.權利要求153的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
155.權利要求153的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
156.權利要求153的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
157.誘導樹突細胞增殖的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
158.權利要求157的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
159.權利要求157的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
160.權利要求157的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
161.誘導巨噬細胞增殖的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
162.權利要求161的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
163.權利要求161的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
164.權利要求161的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
165.預防或治療血小板減少癥的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
166.權利要求165的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
167.權利要求165的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
168.權利要求165的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
169.預防或治療全血細胞減少癥的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
170.權利要求169的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
171.權利要求169的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
172.權利要求169的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
173.預防或治療全血細胞減少癥的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
174.權利要求173的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
175.權利要求173的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
176.權利要求173的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
177.預防或治療高脂血癥的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
178.權利要求177的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
179.權利要求177的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
180.權利要求177的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
181.預防或治療高膽固醇血癥的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
182.權利要求181的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
183.權利要求181的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
184.權利要求181的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
185.預防或治療葡萄糖尿的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
186.權利要求185的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
187.權利要求185的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
188.權利要求185的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
189.預防或治療糖尿病的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
190.權利要求189的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
191.權利要求189的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
192.權利要求189的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
193.預防或治療HIV感染的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
194.權利要求193的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
195.權利要求193的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
196.權利要求193的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
197.預防或治療HIV感染的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
198.權利要求197的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
199.權利要求197的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
200.權利要求197的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
201.預防或治療與清髓性劑量的放化療相關的狀況的藥物組合物，所述清髓性放化療采用自體骨髓或外周血干細胞移植(ASCT)或異體骨髓移植(BMT)支持，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
202.權利要求201的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
203.權利要求201的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
204.權利要求201的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
205.治療血小板生成素可治療的狀況的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
206.權利要求205的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
207.權利要求205的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
208.權利要求205的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
209.增加血小板生成素的作用的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
210.權利要求209的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
211.權利要求209的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
212.權利要求209的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
213.增強外周干細胞動員的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
214.權利要求213的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
215.權利要求213的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
216.權利要求213的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
217.誘導造血的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
218.權利要求217的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
219.權利要求217的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
220.權利要求217的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
221.誘導造血干細胞增殖的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
222.權利要求221的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
223.權利要求221的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
224.權利要求221的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
225.誘導造血干細胞增殖和分化的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
226.權利要求225的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
227.權利要求225的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
228.權利要求225的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
229.誘導巨核細胞生成的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
230.權利要求229的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
231.權利要求229的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
232.權利要求229的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
233.誘導紅細胞生成的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
234.權利要求233的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
235.權利要求233的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
236.權利要求233的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
237.誘導白細胞生成的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
238.權利要求237的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
239.權利要求237的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
24 0.權利要求237的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
241.誘導血小板生成的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
242.權利要求241的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
243.權利要求241的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
244.權利要求241的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
245.預防或治療血小板減少癥的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
246.權利要求245的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
247.權利要求245的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
248.權利要求245的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
249.預防或治療全血細胞減少癥的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
250.權利要求249的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
251.權利要求249的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
252.權利要求249的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
253.預防或治療粒細胞減少癥的藥物組合物，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
254.權利要求253的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
255.權利要求253的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
256.權利要求253的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
257.治療或預防選自下組的適應癥的藥物組合物自身免疫病或狀況、病毒性疾病、病毒感染、血液病、血液系統(tǒng)缺陷、血小板減少癥、全血細胞減少癥、粒細胞減少癥、高脂血癥、高膽固醇血癥、葡萄糖尿、高血糖癥、糖尿病、艾滋病、HIV-1、輔助T細胞障礙、樹突細胞缺陷、巨噬細胞缺陷、造血干細胞障礙包括血小板、淋巴細胞、漿細胞和中性粒細胞障礙、白血病前狀況、白血病狀況、由化療或放療導致的免疫系統(tǒng)障礙、由免疫缺陷和細菌感染的疾病治療導致的人免疫系統(tǒng)障礙，該藥物組合物包括，作為活性成分的αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體。
258.權利要求257的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
259.權利要求257的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
260.權利要求257的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
261.治療或預防選自下組的適應癥的藥物組合物血液病、血液系統(tǒng)缺陷、血小板減少癥、全血細胞減少癥、粒細胞減少癥、樹突細胞缺陷、巨噬細胞缺陷、造血干細胞障礙包括血小板、淋巴細胞、漿細胞和中性粒細胞障礙、白血病前狀況、白血病狀況、骨髓發(fā)育不良綜合征、再生障礙性貧血和骨髓不足，該藥物組合物包括，作為活性成分的血小板生成素和αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體。
262.權利要求261的藥物組合物，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
263.權利要求261的藥物組合物，其中該肽是合成肽。
264.權利要求261的藥物組合物，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
265.一種純化的肽，該肽具有選自序列1-25的氨基酸序列。
266.一種藥物組合物，該藥物組合物包括一種純化的肽以及藥用載體，所述純化的肽具有選自序列1-25的氨基酸序列。
267.一種藥物組合物，該藥物組合物包括血小板生成素和一種純化的肽以及藥用載體，所述純化的肽具有選自序列1-25的氨基酸序列。
268.在清髓性受體體內(nèi)增強所提供的血液干細胞定殖的方法，該方法包括在受體中提供和植入所提供的血液干細胞前用αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽處理所提供的血液干細胞的供體。
269.權利要求268的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
270.權利要求268的方法，其中該肽是合成肽。
271.權利要求268的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
272.在清髓性受體體內(nèi)增強所提供的血液干細胞定殖的方法，該方法包括在受體中植入所提供的血液干細胞前用αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽處理所提供的血液干細胞。
273.權利要求272的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
274.權利要求272的方法，其中該肽是合成肽。
275.權利要求272的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
276.在清髓性受體體內(nèi)增強血液干細胞定殖的方法，該方法包括在受體中植入血液干細胞前用αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽處理所述血液干細胞。
277.權利要求276的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
278.權利要求276的方法，其中該肽是合成肽。
279.權利要求276的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
280.在清髓性受體體內(nèi)增強所提供的血液干細胞定殖的方法，該方法包括在受體中提供和植入所提供的血液干細胞前用αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和血小板生成素處理所提供的血液干細胞的供體。
281.權利要求280的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
282.權利要求280的方法，其中該肽是合成肽。
283.權利要求280的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
284.在清髓性受體體內(nèi)增強所提供的血液干細胞定殖的方法，該方法包括在受體中植入所提供的血液干細胞前用αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和血小板生成素處理所提供的血液干細胞。
285.權利要求284的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
286.權利要求284的方法，其中該肽是合成肽。
287.權利要求284的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
288.在清髓性受體體內(nèi)增強血液干細胞定殖的方法，該方法包括在受體中植入血液干細胞前用αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和血小板生成素處理所述血液干細胞。
289.權利要求288的方法，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
290.權利要求288的方法，其中該肽是合成肽。
291.權利要求288的方法，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
292.αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于預防或治療自身免疫病的藥物中的用途。
293.αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于預防或治療病毒性疾病的藥物中的用途。
294.αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于預防病毒感染的藥物中的用途。
295.αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于誘導造血的藥物中的用途。
296.αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于誘導造血干細胞增殖的藥物中的用途。
297.αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于誘導造血干細胞增殖和分化的藥物中的用途。
298.αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于誘導巨核細胞生成的藥物中的用途。
399.αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于誘導紅細胞生成的藥物中的用途。
300.αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于誘導白細胞生成的藥物中的用途。
301.αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于誘導血小板生成的藥物中的用途。
302.αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于誘導漿細胞增殖的藥物中的用途。
303.αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于誘導樹突細胞增殖的藥物中的用途。
304.αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于誘導巨噬細胞增殖的藥物中的用途。
305.αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于預防或治療血小板減少癥的藥物中的用途。
306.αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于預防或治療全血細胞減少癥的藥物中的用途。
307.αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于預防或治療粒細胞減少癥的藥物中的用途。
308.αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于預防或治療高脂血癥的藥物中的用途。
309.αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于預防或治療高膽固醇血癥的藥物中的用途。
310.αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于預防或治療葡萄糖尿的藥物中的用途。
311.αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于預防或治療糖尿病的藥物中的用途。
312.αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于預防或治療艾滋病的藥物中的用途。
313.αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于預防或治療HIV感染的藥物中的用途。
314.αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于預防或治療與清髓性劑量的放化療相關的狀況的藥物中的用途，所述清髓性放化療采用自體骨髓或外周血干細胞移植(ASCT)或異體骨髓移植(BMT)支持。
315.αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于治療血小板生成素可治療的狀況的藥物中的用途。
316.αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于增加血小板生成素的作用的藥物中的用途。
317.αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于增強外周干細胞動員的藥物中的用途。
318.αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于在清髓性受體體內(nèi)增強所提供的血液干細胞定殖的藥物中的用途。
319.αS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽在制備用于在清髓性受體體內(nèi)增強血液干細胞定殖的藥物中的用途。
320.包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療自身免疫病的用途。
321.包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療病毒性疾病的用途。
322.包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療病毒感染的用途。
323.包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于誘導造血的用途。
324.包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于誘導造血干細胞增殖的用途。
325.包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于誘導造血干細胞增殖和分化的用途。
326.包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于誘導巨核細胞生成的用途。
327.包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于誘導紅細胞生成的用途。
328.包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于誘導白細胞生成的用途。
329.包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于誘導血小板生成的用途。
330.包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于誘導漿細胞增殖的用途。
331.包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于誘導樹突細胞增殖的用途。
332.包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于誘導巨噬細胞增殖的用途。
333.包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療血小板減少癥的用途。
334.包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療全血細胞減少癥的用途。
335.包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療粒細胞減少癥的用途。
336.包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療高脂血癥的用途。
337.包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療高膽固醇血癥的用途。
338.包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療葡萄糖尿的用途。
339.包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療糖尿病的用途。
340.包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療艾滋病的用途。
341.包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療HIV感染的用途。
342.包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療與清髓性劑量的放化療相關的狀況的用途，所述清髓性放化療采用自體骨髓或外周血干細胞移植(ASCT)或異體骨髓移植(BMT)支持。
343.包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于治療血小板生成素可治療的狀況的用途。
344.包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于增加血小板生成素的作用的用途。
345.包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于在清髓性受體體內(nèi)增強所提供的血液干細胞定殖的用途。
346.包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于在清髓性受體體內(nèi)增強血液干細胞定殖的用途。
347.包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于增強外周干細胞動員的用途。
348.包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于誘導造血的用途。
349.包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于誘導造血干細胞增殖的用途。
350.包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于誘導造血干細胞增殖和分化的用途。
351.包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于誘導巨核細胞生成的用途。
352.包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于誘導紅細胞生成的用途。
353.包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于誘導白細胞生成的用途。
354.包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于誘導血小板生成的用途。
355.包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于預防或治療血小板減少癥的用途。
356.包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于預防或治療全血細胞減少癥的用途。
357.包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于預防或治療粒細胞減少癥的用途。
358.包括作為活性成分的aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽和藥用載體的藥物組合物用于預防或治療選自下組的適應癥的用途自身免疫病或狀況、病毒性疾病、病毒感染、血液病、血液系統(tǒng)缺陷、血小板減少癥、全血細胞減少癥、粒細胞減少癥、高脂血癥、高膽固醇血癥、葡萄糖尿、高血糖癥、糖尿病、艾滋病、HIV-1、輔助T細胞障礙、樹突細胞缺陷、巨噬細胞缺陷、造血干細胞障礙包括血小板、淋巴細胞、漿細胞和中性粒細胞障礙、白血病前狀況、白血病狀況、由化療或放療導致的免疫系統(tǒng)障礙、由免疫缺陷和細菌感染的疾病治療導致的人免疫系統(tǒng)障礙。
359.包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于預防或治療選自下組的適應癥的用途血液病、血液系統(tǒng)缺陷、血小板減少癥、全血細胞減少癥、粒細胞減少癥、樹突細胞缺陷、巨噬細胞缺陷、造血干細胞障礙包括血小板、淋巴細胞、漿細胞和中性粒細胞障礙、白血病前狀況、白血病狀況、骨髓發(fā)育不良綜合征、再生障礙性貧血和骨髓不足。
360.包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于在清髓性受體體內(nèi)增強所提供的血液干細胞定殖的用途。
361.包括作為活性成分的血小板生成素和aS1酪蛋白的N末端部分衍生的肽以及藥用載體的藥物組合物用于在清髓性受體體內(nèi)增強血液干細胞定殖的用途。
362.權利要求292-361的任意一項的用途，其中該肽是衍生于αS1酪蛋白斷裂的片段。
363.權利要求292-361的任意一項的用途，其中該肽是具有具有序列1-25之一所示的序列的純化肽。
364.權利要求292-361的任意一項的用途，其中該肽是合成肽。
365.權利要求292-361的任意一項的用途，其中該肽具有序列1-25之一所示的序列。
全文摘要
衍生于奶酪蛋白或與奶酪蛋白αS1部分N末端序列相似的生物活性肽。這些肽能夠刺激并增強免疫應答，保護避免病毒感染，使血清膽固醇水平正常化，并能刺激造血。酪蛋白衍生肽無毒，可以用來治療、預防免疫性疾病、高膽固醇血癥、血液系統(tǒng)疾病和病毒相關性疾病。
文檔編號A61P39/00GK1694719SQ02821674
公開日2005年11月9日 申請日期2002年8月29日 優(yōu)先權日2001年8月30日
發(fā)明者Z·斯德爾曼 申請人:蔡13醫(yī)療研究團體有限公司