專利名稱：β-葡聚糖的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及β_葡聚糖的制備方法，更特別地，本發(fā)明涉及利用新穎的蘑菇培養(yǎng)方法與培養(yǎng)系統(tǒng)以制備葡聚糖。
背景技術(shù)：
近年來有許多研究發(fā)現(xiàn)蘑菇菌絲體或子實體中含有相當(dāng)多的生理活性成分，如β -葡聚糖(β -Glucan)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, S0D)、三職類(Triterpenoids)等物質(zhì),具有免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗腫瘤等作用。而其中研究最深入且最具潛力的抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)物質(zhì)為多糖體。已知β -葡聚糖為一種良好的免疫促進劑，可有效刺激免疫細胞，不僅能增強生物體特異性免疫反應(yīng)，同時也提高了非特異性免疫反應(yīng)。此外，β_葡聚糖能使生物體抵抗細菌、真菌、病毒及寄生蟲的感染，并且抑制腫瘤的生長。近年來蘑菇多糖體(mushiOomβ -glucan)逐漸受到重視，主要原因在于蘑菇多糖體的分支度、分子量、水溶性以及結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性都較酵母菌多糖體高出許多，具有較高的免疫促進能力。然而，蘑菇類的成分復(fù)雜，如多糖、蛋白質(zhì)、多肽類、三萜類、多種氨基酸、生物堿、酯類和有機酸等，所以萃取蘑菇多糖體物需經(jīng)繁瑣的步驟，如熱萃取、堿萃取、酸萃取等方式，因此，易殘留有機溶齊U、氨基酸與蛋白質(zhì)，此等殘留皆可能產(chǎn)生刺激性免疫反應(yīng)?！闩囵B(yǎng)蘑燕的子實體,需要二至三個月，培養(yǎng)至米收耗時耗力，若蘑燕來源是從野外取得則更為困難；因此 ，目前多利用液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)蘑菇菌絲體。目前以深層培養(yǎng)(submerged culture)方式制造蘑燕菌絲體及其代謝產(chǎn)物最多；菌絲體經(jīng)初步培養(yǎng)后，經(jīng)由小、中及大型發(fā)酵槽依序連續(xù)培養(yǎng)，藉此大量生產(chǎn)。公知技術(shù)中，蘑菇培養(yǎng)設(shè)備需用到大小不同的不銹鋼材質(zhì)的發(fā)酵槽串聯(lián)，加上管路及大型鍋爐連結(jié)，設(shè)備繁復(fù)并且成本很高；然而，制備過程中除了發(fā)酵槽設(shè)備相當(dāng)昂貴的外，發(fā)酵期間若有污染(contamination)的情形發(fā)生，往往造成嚴(yán)重的損失。一般而言，蘑菇在液態(tài)發(fā)酵時菌絲體的生長速率較慢，過程中遭到污染的機會也相對提高，因此，通常使用較高的接種量，約10%-30%。體積越大的發(fā)酵槽，除了混合效果不佳以外，還會造成溫度、PH及營養(yǎng)的梯度問題，并造成發(fā)酵不均勻的狀況，故公知技術(shù)為盡量避免上述問題，勢必要增加前置培養(yǎng)的設(shè)備。再者，對于蘑菇的深層培養(yǎng)，需要考慮培養(yǎng)基的組成、pH值、溫度、通氣、和攪拌等條件，以制造菌絲體或其代謝物。深層培養(yǎng)的特色在于發(fā)酵過程中并無孢子形成(sporulation)期,所產(chǎn)生的菌絲體在發(fā)酵時會糾結(jié)在一起而形成菌球,若菌球愈大,其中心部分的菌絲體會因氧氣及養(yǎng)分輸送上的限制，造成饑餓的情形，對菌絲體增殖與代謝產(chǎn)物生成非常不利；這也使得培養(yǎng)液中營養(yǎng)源及氧氣的傳送程度較一般低等真菌或酵母菌的液體培養(yǎng)更為復(fù)雜。因此，在發(fā)酵期間，須控制發(fā)酵過程中的切應(yīng)力、攪拌轉(zhuǎn)數(shù)及溶氧程度等因素，以縮小菌絲體形成球狀物的體積。蘑菇液態(tài)發(fā)酵時，培養(yǎng)基中碳源、氮源及生長因子，是多糖體產(chǎn)率的關(guān)鍵之一，大多數(shù)的制造方法會尋找較便宜的生產(chǎn)物料，或者為提高產(chǎn)率而添加一些特殊化合物，如此卻衍生出更多純化的步驟，造成成本提高、設(shè)備增加及廢棄物處理的問題。并且以目前慣用的發(fā)酵槽進行大量的蘑菇液態(tài)發(fā)酵，自發(fā)酵液萃取所得的葡聚糖濃度仍然偏低，一般低于10重量％。為解決上述問題，本發(fā)明提供了制備蘑菇β-葡聚糖的方法與新穎的蘑菇培養(yǎng)系統(tǒng)。

發(fā)明內(nèi)容
由于上述公知技術(shù)的缺陷，本發(fā)明的主要目的是提供β-葡聚糖的制備方法與制備系統(tǒng)，利用含有簡單成分的培養(yǎng)基及價 格低廉的設(shè)備，提供良好的蘑菇液態(tài)培養(yǎng)環(huán)境，即可成功制造菌絲體及多糖體等代謝物，并克服了溶氧或菌體體積過大的問題，可作為蘑菇液態(tài)培養(yǎng)及其他領(lǐng)域的液態(tài)發(fā)酵的應(yīng)用。為達上述與其他目的，本發(fā)明提供一種制備β-葡聚糖的方法，包括:(a)將蘑菇菌液置入含有培養(yǎng)液與攪拌裝置的容器，并通過該攪拌裝置攪拌培養(yǎng)該蘑菇菌液；(b)將步驟(a)所培養(yǎng)的蘑菇菌液置入含有生產(chǎn)培養(yǎng)基的聚碳酸樹脂容器，且通過回轉(zhuǎn)式搖擺機，旋轉(zhuǎn)該聚碳酸樹脂容器而震蕩培養(yǎng)該蘑菇菌液；及(C)自步驟(b)震蕩培養(yǎng)的蘑菇菌液分離或純化葡聚糖。在本發(fā)明制備葡聚糖的方法中，步驟(a)的容器為具有硅膠透氣瓶塞的血清瓶，且攪拌裝置是磁石棒，提供轉(zhuǎn)速以控制溶氧量、菌絲體體積、及/或菌絲體生長速度。根據(jù)本發(fā)明，制備β -葡聚糖的方法進一步包含提供用于蘑菇菌種培養(yǎng)的T型培養(yǎng)盒，用以迅速篩選所欲發(fā)酵的蘑菇菌種。根據(jù)本發(fā)明，該生產(chǎn)培養(yǎng)基采用食品級原料，僅包括葡萄糖與酵母菌萃取物，其中培養(yǎng)基成分以重量百分比表示，優(yōu)選為1-10%葡萄糖與0.1-1%酵母菌萃取物，更優(yōu)選為4%葡萄糖與0.5%酵母菌萃取物。經(jīng)過實驗測試，本發(fā)明的生產(chǎn)培養(yǎng)基可適用于各類型蘑菇生長，而多糖體產(chǎn)率也良好；可適用的蘑菇包括所有食用蘑菇類與醫(yī)藥用蘑菇類，舉例但非限制，裂裙菌(Schizophyllum commue)、巴西蘑燕(Agarics blaze)、冬蟲夏草(Cordyceps sinensis)、靈芝(Ganoderma Iucidum)、云芝(Coriolus versicolor) >樟芝(Anthodia camphorate)、桑黃(Phellinus linteus)、珊瑚燕(Pleurotuscitrinopileatus)、香燕(Lentinula edodes)、田頭燕屬(Agrocybe sp.)如柳松燕(Agrocybe aegerita)、猴頭 (Hericium erinaceus)、杏鮑 (Pleurotus eryngiig)、花瓣鸞(Sparrasis crispa)、木鸞(Auricularia auricula)、金針 ^(Flammulinavelutipes)等。這種分離或純化葡聚糖的方法可以一般公知方法進行，在優(yōu)選實施例中，本發(fā)明分離或純化β_葡聚糖的方法包括:將經(jīng)前置培養(yǎng)與大量發(fā)酵所得的蘑菇菌液粉碎、離心并收取上清液、用乙醇沉淀上清液而得沉淀物、用水溶解沉淀物，并以薄膜進行分離而獲得葡聚糖。本發(fā)明的另一方面提供制備β_葡聚糖的培養(yǎng)液態(tài)蘑菇系統(tǒng)，包括:內(nèi)含攪拌裝置的玻璃容器，用于前置發(fā)酵液態(tài)蘑菇；聚碳酸樹脂容器，用于放大培養(yǎng)前置發(fā)酵的液態(tài)蘑菇；以及回轉(zhuǎn)式搖擺機，用于承載并旋轉(zhuǎn)該聚碳酸樹脂容器，藉以震蕩方式放大培養(yǎng)該液態(tài)蘑菇。此培養(yǎng)系統(tǒng)可用以實施本發(fā)明制備β-葡聚糖的方法。在上述液態(tài)蘑菇培養(yǎng)系統(tǒng)中，該玻璃容器是具有硅膠透氣瓶塞的血清瓶，該血清瓶的攪拌裝置是磁石棒。攪拌裝置提供轉(zhuǎn)速以控制溶氧量、菌絲體體積、及/或菌絲體生長速度。利用玻璃血清瓶蓋上的硅膠透氣塞提供前蘑菇前置發(fā)酵所需氣體，利用磁石攪拌培養(yǎng)，促進蘑菇胞外多糖體的生成、抑制菌絲體結(jié)成團塊、并可增加溶氧及物質(zhì)交換的速率。本發(fā)明用于培養(yǎng)制備β_葡聚糖的液態(tài)蘑菇系統(tǒng)，本發(fā)明進一步包括用于菌種培養(yǎng)與快速篩選菌種的T型培養(yǎng)盒，該培養(yǎng)盒有助于快速篩選所欲發(fā)酵的蘑菇菌種。


圖1是本發(fā)明用于前置發(fā)酵的容器及磁石攪拌機的概示圖。圖2是本發(fā)明用于液態(tài)蘑菇培養(yǎng)的聚碳酸樹脂容器及回轉(zhuǎn)搖擺機的概示圖。圖3是根據(jù)本發(fā)明的實施例，用以說明分離與純化β_葡聚糖的流程圖。主要元件符號說明11玻璃容器12多孔硅膠塞

13磁石攪拌子14磁石攪拌機21聚碳酸樹脂容器22回轉(zhuǎn)搖擺機
具體實施例方式以下是通過特定的具體實施例說明本發(fā)明的實施方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員可由本說明書所揭示的內(nèi)容了解本發(fā)明的其他優(yōu)點與功效。1.蘑菇菌種篩選與培養(yǎng)本發(fā)明可應(yīng)用的蘑燕菌株是如裂裙菌、巴西蘑燕、冬蟲夏草、靈芝、云芝、樟芝、桑黃、珊瑚菇、香菇、田頭菇屬如柳松菇、猴頭菇、杏鮑菇、花瓣茸、木茸、金針菇等，但不限于上述菌株。以裂褶菌與靈芝作為實施例，說明如下。在無菌操作條件下，將其接種于YM瓊脂培養(yǎng)基上，置于28 °C培養(yǎng)箱(Incubator)培養(yǎng)，其中YM瓊脂培養(yǎng)基包含0.3%(w/w)酵母菌萃取物、0.3%麥芽萃取物、0.5%蛋白胨(peptone)、1.0%右旋糖(dextrose)、1.5%瓊脂(agar)等。約培養(yǎng)2 3天后，開始出現(xiàn)菌絲體，約一周后菌絲體長滿固體培養(yǎng)基。觀察其菌種形態(tài)及生長速率，進行蘑菇菌種篩選及后續(xù)繼代培養(yǎng)YM培養(yǎng)液20毫升加入80T的T型動物細胞培養(yǎng)盒(T型塑膠培養(yǎng)盒)中，將篩選出的固態(tài)培養(yǎng)菌絲體切一小塊植入培養(yǎng)液，在28°C培養(yǎng)一周后,選擇生長良好快速的菌絲體，用作液態(tài)前置發(fā)酵的菌種。2.前置發(fā)酵使用圖1的裝置，取玻璃容器11(例如I公升的血清瓶)，使用單向透氣的多孔硅膠塞12作為瓶蓋，瓶內(nèi)放入Teflon磁石攪拌子13。在玻璃容器11內(nèi)配制800毫升的YM培養(yǎng)液，并將配置的培養(yǎng)液進行高溫高壓滅菌，滅菌條件121°C、15分鐘，滅菌后降至室溫。將在T型塑膠培養(yǎng)盒培養(yǎng)完成的蘑菇菌液接種于玻璃容器11內(nèi)，將玻璃容器11置于磁石攪拌機14上,于室溫條件下培養(yǎng)。將攪拌機的轉(zhuǎn)速控制在約300rpm,使培養(yǎng)液均勻分布，并利用轉(zhuǎn)速控制液體中的溶氧量，通過磁石旋轉(zhuǎn)的切應(yīng)力使菌絲體生長細密、增殖快速并使菌球形成減少與形成體積減小。待發(fā)酵至生長曲線的靜止期(stationary phase)而停止發(fā)酵。如上述條件，另取更大體積的玻璃容器(例如10公升的血清瓶)，其中注入8公升YM培養(yǎng)液，接種前述發(fā)酵完成的菌液，進行第二次菌種放大的前置發(fā)酵步驟。當(dāng)然，可視需要而進行多次的前置發(fā)酵步驟。3.大量發(fā)酵經(jīng)由至少兩次的前置發(fā)酵，由于菌絲體被磁石旋轉(zhuǎn)切碎，使得菌體的體積不至于過大而影響后續(xù)的發(fā)酵，此時可進行菌種大量發(fā)酵。本發(fā)明所使用的生產(chǎn)培養(yǎng)基包含4%葡萄糖(glucose)與0.5%酵母菌萃取物，將該生產(chǎn)培養(yǎng)基15-18公升注入體積為20公升的聚碳酸樹脂容器中，并放入高溫高壓滅菌，滅菌條件為121°C、15分鐘，滅菌后降至室溫。將前置發(fā)酵完成的蕈菇培養(yǎng)液接種入聚碳酸樹脂容器21中，將聚碳酸樹脂容器固定在回轉(zhuǎn)搖擺機22(如圖2)上，調(diào)節(jié)適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)速，約SOrpm，并給予充分的溶氧及旋轉(zhuǎn)震蕩，于室溫下培養(yǎng)，待發(fā)酵至生長曲線的靜止期(stationary phase)而停止發(fā)酵,此時菌絲體的細胞數(shù)與多糖體的濃度維持在最高。發(fā)酵期間，由于聚碳酸樹脂容器具有透明瓶身，可供清楚觀察整體的發(fā)酵情形，進行篩選及控制。4.β-葡聚糖的分離與純化經(jīng)本發(fā)明方法所獲得的液態(tài)蘑菇培養(yǎng)菌液，在培養(yǎng)液與菌絲體中皆含有β -葡聚糖，可直接供后續(xù)應(yīng)用；但也可從培養(yǎng)液與菌絲體中將葡聚糖進一步分離純化。如圖3所示，將上述發(fā)酵完成的蘑菇菌液，用超高速均質(zhì)機及超音波震蕩機分別處理10分鐘，以震碎菌絲體細胞壁。高速離心(每分鐘6，000 8，000轉(zhuǎn))，逐步收取上清液。加入與上清液等量的95%乙醇以萃取高分子多糖體，收取沉淀物。將沉淀物均勻溶解于二次蒸懼水中，再將此水溶液利用分離膜系統(tǒng)(Membrane Separation System)去除乙醇及剩余的小分子物質(zhì)，例如低于IOkDa的小分子，則可獲得β-葡聚糖。5.β-葡聚糖的濃度測定以測量多糖體的酹-硫酸法(Phenol-sulfuric acid method)測定本發(fā)明萃取的β -葡聚糖含量。于10毫升樣品加入40毫升95%乙醇(NACALAI)，充分混合。以1，OOOg離心15分鐘，沉淀物即為多糖體；倒掉上清液，以75%乙醇洗滌多糖體2次。經(jīng)離心后，去除殘余乙醇。以蒸餾水溶解沉淀物，并將最后體積調(diào)成10毫升，作為待測樣品的溶液。取0.5毫升溶液與等體積5%酚(AMRESC0)混合，再緩緩加入2.5毫升濃硫酸。 靜置10分鐘后震蕩，使其充分混合。靜置30分鐘后，用分光光度計(UltrospeclOOO, PHARMACIAB10TECH)測量波長490nm的吸光值。并依據(jù)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中所含多糖體的濃度。
測定本發(fā)明所制備的β -葡聚糖，所得裂褶菌的β -葡聚糖濃度為20 25% ;靈芝的葡聚糖濃度為20 25%。上述結(jié)果證實本發(fā)明制備β -葡聚糖的方法與系統(tǒng)確實可提高蘑菇液態(tài)發(fā)酵的
葡聚糖的產(chǎn)率。經(jīng)多次實驗證實多種蘑燕，如裂裙菌、巴西蘑燕、冬蟲夏草、靈芝、云芝、樟芝、桑黃、珊瑚菇、香菇、田頭菇屬如柳松菇、猴頭菇、杏鮑菇、花瓣茸、木茸、金針菇等菌株，皆適用本發(fā)明的方法。據(jù)上所述，本發(fā)明不僅提高蘑菇液態(tài)發(fā)酵的葡聚糖產(chǎn)率，而且具有至少以下優(yōu)點與功效:公知技術(shù)是使用三角燒瓶進行菌種的震蕩培養(yǎng)。然而，本發(fā)明是以玻璃血清瓶蓋上硅膠透氣塞，并且通過磁石棒進行攪拌培養(yǎng)，有助于促進蘑菇胞外多糖體生成、降低菌絲體結(jié)成團塊、增加溶氧及物質(zhì)交換的速率。本發(fā)明利用動物細胞培養(yǎng)方式取代一般瓊脂培養(yǎng)法，用80Τ的T型塑膠培養(yǎng)盒來培養(yǎng)蘑菇菌種，與公知技術(shù)的瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)法相比，本發(fā)明所培養(yǎng)的菌種具有生長快速、復(fù)制量可提高、可提早觀察出菌種是否遭受污染等優(yōu)點。再者，由于本發(fā)明的培養(yǎng)基采用食品級原料，故發(fā)酵完畢后，不需經(jīng)過繁瑣的純化程序，即可直接食用；且發(fā)酵液可進一步加工調(diào)制為各種不同形態(tài)的健康食品、化妝品及醫(yī)療用品。本發(fā)明的聚碳酸樹脂(polycarbonate, PC)容器可耐高溫達130°C,且具有材質(zhì)透明的特性，作為發(fā) 酵 桶可方便觀察內(nèi)部發(fā)酵狀況，使發(fā)酵控制和管理更為容易。根據(jù)本發(fā)明，聚碳酸樹脂容器外型設(shè)計如一般蒸餾水桶，蓋上硅膠透氣塞，即可放入一般小型殺菌鍋內(nèi)滅菌，發(fā)酵時操作容積可達約16公升，比一般桌上型發(fā)酵槽容量大，并且聚碳酸樹脂容器的重量較輕，且價格較低廉。將培養(yǎng)基置于聚碳酸樹脂容器中，用殺菌鍋進行滅菌，待其滅菌冷卻后，將血清瓶前置培養(yǎng)完成的菌株接種于聚碳酸樹脂容器中，置于回轉(zhuǎn)式搖擺機上，單次可操作1-16個容器，可視需要進行增減，亦可同時培養(yǎng)多種菌株，在生產(chǎn)或研發(fā)上的應(yīng)用極具彈性。此外，聚碳酸樹脂容器的透明瓶身可供隨時觀察發(fā)酵的情形，以調(diào)節(jié)搖擺的轉(zhuǎn)速，控制溶氧及生長狀況。本發(fā)明用于培養(yǎng)制備β_葡聚糖的液態(tài)蘑菇系統(tǒng)適用于各類蘑菇的液態(tài)發(fā)酵，并可用以制備出多糖體(如β_葡聚糖)和其他代謝產(chǎn)物。該系統(tǒng)利用旋轉(zhuǎn)搖擺轉(zhuǎn)速，配合操作體積，可控制溶氧量；依此原理，本培養(yǎng)系統(tǒng)的應(yīng)用范圍更可擴及嗜氧、微好氧或厭氧類微生物發(fā)酵，并可延伸至動、植物細胞培養(yǎng)。此外，由于聚碳酸樹脂容器為透明材質(zhì)，可配合特殊光照設(shè)備，視培養(yǎng)的需要，可滿足培養(yǎng)菌株的特定光照需求，因此，也適用于對于藻類、光合菌、或植株的液態(tài)培養(yǎng)。上述實施例僅示例性說明本發(fā)明的系統(tǒng)與方法，而非用于限制本發(fā)明。任何本領(lǐng)域技術(shù)人員均可在不違背本發(fā)明的精神及范疇下，對上述實施例進行修飾與改變。因此，本發(fā)明的權(quán)利保護范圍如前述權(quán)利要求。
權(quán)利要求
1.一種制備β-葡聚糖的方法，該方法包括: a)將蘑菇菌液置入含有培養(yǎng)液與攪拌裝置的容器，并通過該攪拌裝置攪拌培養(yǎng)該蘑菇菌液； b)將步驟a)所培養(yǎng)的蘑菇菌液置入含有生產(chǎn)培養(yǎng)基的聚碳酸樹脂容器，且通過回轉(zhuǎn)式搖擺機，旋轉(zhuǎn)該聚碳酸樹脂容器而震蕩培養(yǎng)該蘑菇菌液；及 c)從步驟b)震蕩培養(yǎng)的蘑菇菌液中分離或純化β_葡聚糖。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟c)包括: 將蘑菇菌液的菌絲體粉碎； 進行離心并收取上清液； 用乙醇沉淀該上清液，而得沉淀物； 用水溶解該沉淀物，而得水溶液；以及 用薄膜分離該水溶液，而獲得β -葡聚糖。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟a)的培養(yǎng)視需要重復(fù)數(shù)次。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中生產(chǎn)培養(yǎng)基包括葡萄糖與酵母菌萃取物。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其中生產(chǎn)培養(yǎng)基包括I至10%葡萄糖與0.1至1%酵母菌萃取物。
6.如權(quán)利要求5所述 的方法，其中生產(chǎn)培養(yǎng)基包括4%葡萄糖與0.5%酵母菌萃取物。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其中該步驟a)的容器為具有硅膠透氣瓶塞的血清瓶。
8.如權(quán)利要求1所述的方法，其中該攪拌裝置是磁石棒，用于提供轉(zhuǎn)速控制溶氧量、菌絲體體積，及/或菌絲體生長速度。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，該方法進一步包含提供T型培養(yǎng)盒，用于蘑菇菌種培養(yǎng)。
10.如權(quán)利要求1所述的方法，其中該蘑菇為裂褶菌、巴西蘑菇、冬蟲夏草、靈芝、云芝、樟芝、桑黃、珊瑚菇、香菇、柳松菇、猴頭菇、杏鮑菇、花瓣茸、木茸、金針菇或其組合物。
11.如權(quán)利要求1所述的方法，其中回轉(zhuǎn)式搖擺機轉(zhuǎn)速設(shè)定為50至150rpm。
12.如權(quán)利要求11所述的方法，其中回轉(zhuǎn)式搖擺機轉(zhuǎn)速設(shè)定為70至lOOrpm。
全文摘要
本發(fā)明提供一種β-葡聚糖的制備方法，包括a)將蘑菇菌液置入含有培養(yǎng)液與攪拌裝置的容器，并通過該攪拌裝置攪拌培養(yǎng)該蘑菇菌液；b)將步驟a)所培養(yǎng)的蘑菇菌液轉(zhuǎn)移置入含有生產(chǎn)培養(yǎng)基的聚碳酸樹脂容器，且通過回轉(zhuǎn)式搖擺機，旋轉(zhuǎn)該聚碳酸樹脂容器而震蕩培養(yǎng)該蘑菇菌液；及c)自步驟b)震蕩培養(yǎng)的蘑菇菌液分離或純化β-葡聚糖。
文檔編號A01G1/04GK103214593SQ201310091459
公開日2013年7月24日 申請日期2008年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月31日
發(fā)明者陳秀男 申請人:陳秀男