，紅外線照射，減少分泌物滲出。術(shù)后第3天打開外層敷料，保持干燥，直至敷料脫落。創(chuàng)面愈合后應用膠原蛋白、抗瘢痕藥物、彈力繃帶等綜合抗瘢痕治療，預防瘢痕增生。
[0073]圖3中是一名患有白癜風的34歲女性，進行本發(fā)明的自體表皮細胞和成纖維細胞的生物美容產(chǎn)品進行白癜風皮膚修復，經(jīng)自體表皮細胞和成纖維細胞的生物美容產(chǎn)品治療后腿部白癜風改善的圖片。圖3A圖為該患者治療前腿部白癜風的圖片，圖3B為患者腿部白癜風磨削后，經(jīng)自體表皮細胞和成纖維細胞的生物美容產(chǎn)品治療一次后，發(fā)現(xiàn)該女性腿部白癜風得到明顯的改善，皮膚上白癜風幾乎消失，恢復成與周圍皮膚相似的膚色。
[0074]實施例6祛瘢痕美容
[0075]美容者躺臥在手術(shù)臺上，使用潔面乳進行面部和頸部清潔，清水擦洗干凈；先用電動微針(長度0.5-2mm)對面部和頸部進行處理，包括額頭、臉部、眼皮、鼻梁、上嘴唇、耳后皮膚和頸部等部位，可進行2-3次處理，對于瘢痕較嚴重的部位進行多次處理。
[0076]電動微針處理完之后，將通過本發(fā)明實施例4制備的6ml生物美容產(chǎn)品涂抹在面部和頸部，不斷慢慢涂抹，包括額頭、臉部、眼皮、鼻梁、上嘴唇、耳后皮膚和頸部等部位；涂抹完，略變干后，臉部再覆上一片保濕面膜，保持60分鐘，撤下保濕面膜。
[0077]美容者本發(fā)明生物美容產(chǎn)品處理之后當天不使用其他化妝品和洗臉，使用爽膚水或膠原蛋白液保持皮膚濕潤；間隔7天后連續(xù)使用4-12次，作為一個療程。前2-3次使用的生物美容產(chǎn)品含自體表皮細胞，后面4-12次使用的生物美容產(chǎn)品含自體表皮細胞和/或成纖維細胞。
[0078]圖4中是一名36歲男性經(jīng)本發(fā)明生物美容產(chǎn)品6次美容后臉部前后變化圖，I個療程后面部和頸部瘢痕顯著變淺或消失，臉部皺紋和眼袋也得到明顯改善，毛孔變小，皮膚變得細膩有光澤；表明本發(fā)明的含自體表皮細胞和成纖維細胞生物美容產(chǎn)品具有很好的祛瘢痕、祛皺和煥膚等功效。
【主權(quán)項】
1.一種自體表皮細胞和成纖維細胞同時制備的方法，其中，所述方法包括通過從自體皮膚中獲取表皮細胞和經(jīng)體外培養(yǎng)得到成纖維細胞。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述自體表皮細胞由取人0.l-2cm2皮膚，用I X磷酸鹽緩沖液PBS 5ml浸潤15分鐘，用Iml移液槍吸棄，再用I X PBS同樣反復沖洗，洗滌后用分散劑II (disperse II)消化，放置4°C冰箱過夜，第二天取出皮膚用鑷子將表皮和真皮撕開，表皮用眼科剪刀剪碎至Imm3左右，用IXPBS洗滌后加入到15ml離心管中，1000轉(zhuǎn)每分種離心5分鐘后棄上清，加入3ml 0.25% (質(zhì)量體積比)胰酶消化1_60分鐘，其中胰酶含質(zhì)量體積比0.01% EDTA ;消化后過40 μ m細胞篩，過濾后加入5_10ml I XPBS,經(jīng)1000轉(zhuǎn)每分鐘離心10分鐘得到細胞沉淀，再次5-15ml IXPBS重懸后，經(jīng)1000轉(zhuǎn)每分鐘離心10分鐘獲得表皮細胞沉淀，加l-5ml 0.9%生理鹽水重懸，苔盤蘭計數(shù)，得到的17-1O8表皮細胞；放置4°C冰箱存放備用； 獲得的表皮細胞經(jīng)western blotting蛋白質(zhì)檢測表皮細胞生長因子表達水平，經(jīng)灰度分析結(jié)果顯示其灰度值達到9000以上。3.根據(jù)權(quán)利要求1-2任一項所述的方法，其特征在于，所述自體成纖維細胞由上述獲得真皮用眼科剪刀剪碎至Imm3左右，用I XPBS洗滌后加入到15ml離心管中，1000轉(zhuǎn)每分種離心5分鐘后棄上清，加入3ml 0.25 %胰酶消化1_60分鐘，消化后過40 μ m細胞篩，過濾后加入5-10ml 1XPBS，經(jīng)1000轉(zhuǎn)每分鐘離心10分鐘得到單細胞沉淀，再次5_15ml IXPBS重懸后，經(jīng)1000轉(zhuǎn)每分鐘離心10分鐘獲得單細胞沉淀，加入a -MEM培養(yǎng)基重懸，苔盤蘭計數(shù)，用a -MEM培養(yǎng)基按1-10X 16細胞/ml加入10_20ml到75cm 2培養(yǎng)瓶中，于37°C，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；每隔2天更換一次新鮮培養(yǎng)液； 成纖維細胞在75cm2培養(yǎng)瓶中生長融合達到90%以上，用5ml移液管吸棄培養(yǎng)液，加入0.5ml 0.25%胰酶消化后1000轉(zhuǎn)每分鐘離心5分鐘收集成纖維細胞；用5ml移液管加入1ml新鮮的a -MEM培養(yǎng)基，加入到75cm2培養(yǎng)瓶中繼續(xù)在37°C，5% CO2培養(yǎng)箱中生長，每隔2天換一次新鮮培養(yǎng)液；如此連續(xù)傳代1-5代培養(yǎng)經(jīng)胰酶消化離心后，獲得4X 17以上的成纖維細胞，用4-10ml生理鹽水重懸，計數(shù)，即獲得成纖維細胞，放置冰箱4°C存放備用； 獲得的成纖維細胞經(jīng)western blotting蛋白質(zhì)檢測堿性成纖維細胞生長因子表達水平，經(jīng)灰度分析結(jié)果顯示其灰度值達到12000以上。4.根據(jù)權(quán)利要求2-3任一項所述的方法，其特征在于，所述自體皮膚來源于耳后取皮、眼袋割除后皮膚、手臂取皮和腿上取皮；優(yōu)選地，選擇耳后取皮。5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的方法，其特征在于，所述PBS的pH值7.4，其含100活性單位/ml青霉素和0.lmg/ml鏈霉素。6.根據(jù)權(quán)利要求3-5任一項所述的方法，其特征在于，所述a-MEM培養(yǎng)基，其含1-10%胎牛血清、l-100ng/ml重組人干細胞生長因子、l_50ng/ml重組人表皮生長因子和l-50ng/ml重組人堿性成纖維細胞生長因子。7.一種含自體表皮細胞和/或成纖維細胞的生物美容產(chǎn)品，其特征在于，所述產(chǎn)品包括將權(quán)利要求1-6任一項所述的自體表皮細胞、成纖維細胞中的一種或兩種添加到自體外周血富含血小板的血漿中，生產(chǎn)出含自體活細胞的生物美容產(chǎn)品；優(yōu)選同時添加營養(yǎng)因子; 所述自體血漿由抽取人50-100ml肝素或EDTA抗凝外周血，經(jīng)1000轉(zhuǎn)每分鐘離心10分鐘得到的10-40ml血漿，再次3000轉(zhuǎn)每分鐘離心10分鐘獲得10_40ml富含血小板血漿，放置4°C冰箱存放備用； 取1-10 X 16自體表皮細胞和/或成纖維細胞，加入到5ml自體富含血小板的血漿中，混勾；優(yōu)選，同時加入1ng-1ug營養(yǎng)因子，裝入1ml無菌可密封的針管中，制備成含自體表皮細胞和/或成纖維細胞的生物美容產(chǎn)品，放置冰箱4°C中保存，保質(zhì)期為48小時。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的生物美容產(chǎn)品，其特征在于，優(yōu)選加入所述自體表皮細胞和成纖維細胞；優(yōu)選同時添加所述營養(yǎng)因子。9.根據(jù)權(quán)利要求7-8任一項所述的生物美容產(chǎn)品，其特征在于，所述營養(yǎng)因子，即為超氧化歧化酶、靈芝多糖、胎盤提取多肽素和銀杏葉提取液；優(yōu)選地，含有兩種以上所述營養(yǎng)因子。10.一種權(quán)利要求7-9中任一項所述的生物美容產(chǎn)品的應用。
【專利摘要】本發(fā)明提供了自體表皮細胞和成纖維細胞同時制備的方法，其中，所述方法包括通過從自體皮膚中獲取表皮細胞和培養(yǎng)得到成纖維細胞；本發(fā)明還提供了含自體表皮細胞和/或成纖維細胞的生物美容產(chǎn)品，其中，所述產(chǎn)品包括將其中一種或兩種細胞添加到自體外周血富含血小板的血漿中，同時可以添加營養(yǎng)因子，生產(chǎn)出含自體活細胞的生物美容產(chǎn)品，可用于白癜風祛斑、瘢痕修復、皮膚祛皺以及除斑等美容作用。
【IPC分類】A61Q19/00, A61P17/02, A61K8/98, A61Q19/02, A61K35/33, A61Q19/08, C12N5/071, A61K35/12
【公開號】CN105176914
【申請?zhí)枴?br>【發(fā)明人】黃啟明, 王旭, 王玉東
【申請人】怡諾博(北京)生物醫(yī)學技術(shù)有限公司
【公開日】2015年12月23日
【申請日】2015年10月13日