自體表皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞同時(shí)制備方法及其生物美容產(chǎn)品的制作方法
【專利說明】自體表皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞同時(shí)制備方法及其生物美容產(chǎn)口叩
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及自體表皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞同時(shí)制備的方法以及通過所述方法獲得的生物美容產(chǎn)品。特別地，本發(fā)明涉及通過從自體皮膚中獲取表皮細(xì)胞和培養(yǎng)得到成纖維細(xì)胞，將其中一種或兩種細(xì)胞添加到自體外周血富含血小板的血漿中，同時(shí)還可以添加營(yíng)養(yǎng)因子，生產(chǎn)出含自體活細(xì)胞的生物美容產(chǎn)品，本發(fā)明的生物美容產(chǎn)品可用于白癜風(fēng)祛斑、瘢痕修復(fù)、皮膚祛皺以及除斑等美容作用。
【背景技術(shù)】
[0002]日前，市場(chǎng)上已經(jīng)出現(xiàn)了各種細(xì)胞用于美容方面的產(chǎn)品，也被商家賦予了各種神奇的功效和希望，尤其是干細(xì)胞在美容方面的應(yīng)用。事實(shí)上，活細(xì)胞在醫(yī)學(xué)美容的應(yīng)用上取得一些很好的效果，主要體現(xiàn)在皺紋填充、祛斑等方面起到一定作用。但是現(xiàn)在市場(chǎng)上應(yīng)用的活細(xì)胞多數(shù)都為同源異體的，進(jìn)入皮膚內(nèi)容易發(fā)生免疫排斥而被清除，因而在皮膚中發(fā)揮作用的細(xì)胞微乎其微。
[0003]細(xì)胞生長(zhǎng)因子也是一直受追捧的美容方法，出現(xiàn)很多細(xì)胞生長(zhǎng)因子被應(yīng)用到美容中，包括干細(xì)胞因子、表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子、干細(xì)胞生長(zhǎng)因子、神經(jīng)生長(zhǎng)因子及纖維母細(xì)胞生長(zhǎng)因子等。各種細(xì)胞因子需要在低溫條件下保存，以保持其蛋白活性。然而在化妝品制作過程中，由于無法保證整個(gè)生產(chǎn)過程均處在低溫條件下，那么添加該產(chǎn)品極易造成細(xì)胞因子的失活和變性，從而失去細(xì)胞因子對(duì)組織和細(xì)胞的修復(fù)活性。同時(shí)，細(xì)胞因子加入到化妝品中，其有效濃度必然被降低，不能保證細(xì)胞因子對(duì)細(xì)胞核組織的修復(fù)效果。消費(fèi)者在使用過程中很難對(duì)該產(chǎn)品進(jìn)行定量使用，可能會(huì)造成效果不穩(wěn)定的現(xiàn)象。
[0004]另外，羊胎素和肉毒桿菌內(nèi)毒素作為目前備受消費(fèi)者青睞的產(chǎn)品，因其使用簡(jiǎn)便、效果顯著、安全可靠而廣受歡迎。但它們使用后的副反應(yīng)較多，常見的有表情不自然、畏光流淚、局部腫脹、淤斑、注射部位麻木、頭痛、額部緊繃感、鄰近部位皺紋加深等。這兩種因子應(yīng)用易產(chǎn)生較明顯的依賴性，隨著注射的次數(shù)增多，人對(duì)其的敏感性降低，而導(dǎo)致病人使用該方法更為頻繁，每次的使用量也會(huì)逐漸增多。
[0005]綜上，因?yàn)楦鞣N原因和問題，目前市場(chǎng)上生物美容產(chǎn)品存在各種效果不佳，對(duì)人們的皮膚美容的療效還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠，即使其中加入各種營(yíng)養(yǎng)成分。本發(fā)明利用個(gè)體化的材料和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，發(fā)揮其細(xì)胞生物學(xué)活性和自分泌營(yíng)養(yǎng)因子的功能，將對(duì)消費(fèi)者的美容效果達(dá)到更佳的美容作用，并且聯(lián)合美容物理療法將產(chǎn)生更好的白癜風(fēng)祛斑、瘢痕修復(fù)、皮膚祛皺以及除斑等效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明是我們研發(fā)團(tuán)隊(duì)通過多年的科研工作，發(fā)現(xiàn)了能從自體皮膚中獲得表皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞，通過體外體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)這兩種細(xì)胞對(duì)皮膚產(chǎn)生更好地白癜風(fēng)祛斑、疤痕修復(fù)、皮膚祛皺以及除斑等作用。本發(fā)明利用自體皮膚來源的表皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的生物學(xué)作用，可以高效產(chǎn)生皮膚美容作用，而且聯(lián)合美容物理療法將產(chǎn)生更好功效。本發(fā)明中的表皮細(xì)胞是成對(duì)存在，中間的孔隙中氣孔，可以進(jìn)行氣體交換，細(xì)胞內(nèi)有葉綠體，對(duì)皮膚起重要保護(hù)作用。表皮細(xì)胞能分泌人表皮生長(zhǎng)因子(Epidermal growth factor，EGF)，改善皮膚微循環(huán)，提供良好的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境；表皮生長(zhǎng)因子不僅具有促進(jìn)皮膚和黏膜創(chuàng)傷的愈合，防治潰瘍以及消炎鎮(zhèn)痛的作用，而且能有效促進(jìn)和調(diào)節(jié)表皮細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖，表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)保護(hù)和療養(yǎng)皮膚、黏膜具有獨(dú)特的功效。
[0007]本發(fā)明中成纖維細(xì)胞是皮膚真皮中的主體細(xì)胞成分，其分泌的膠原纖維，彈性纖維及基質(zhì)成分，與成纖維細(xì)胞一同構(gòu)成了真皮的主體。成纖維細(xì)胞可分泌人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic Fibroblast growth factor，bFGF)，能全面啟動(dòng)皮膚各層的更新功能，促進(jìn)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)，收縮毛孔，效果顯著，并能及時(shí)補(bǔ)充水分，回復(fù)肌膚的彈性和光澤。
[0008]盡管很多化妝品公司和美容醫(yī)生聲稱非介入的美容方法能達(dá)到使皮膚皺紋消失的效果，但科學(xué)研究表示這一方法的效果是有限的。皮膚衰老反映在細(xì)胞水平即為細(xì)胞衰老。當(dāng)紫外線和其他外界環(huán)境能刺激成纖維母細(xì)胞，上調(diào)膠原酶的基因表達(dá)，從而使膠原酶生成增多，這導(dǎo)致了膠原蛋白被降解，水分流失，皮膚組織失去支撐，皺紋和黃斑即生成。
[0009]本發(fā)明提供了自體表皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞同時(shí)制備的方法，其中，所述方法包括通過從自體皮膚中獲取表皮細(xì)胞和培養(yǎng)得到成纖維細(xì)胞。
[0010]本發(fā)明所述的自體表皮細(xì)胞由自體皮膚經(jīng)酶消化法和機(jī)械法直接獲得表皮單細(xì)胞懸液，減去了中間復(fù)雜的過程，并保證了表皮細(xì)胞的活性和數(shù)量。獲得的表皮細(xì)胞經(jīng)western blotting蛋白質(zhì)表達(dá)檢測(cè)，其特異高表達(dá)表皮生長(zhǎng)因子。
[0011 ]同時(shí)，本發(fā)明所述的自體成纖維細(xì)胞由同一皮膚的真皮經(jīng)酶消化法和機(jī)械法獲得細(xì)胞懸液后，在體外培養(yǎng)條件下獲得足量的成纖維細(xì)胞，并western blotting蛋白質(zhì)表達(dá)檢測(cè)特異高表達(dá)堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子。
[0012]本發(fā)明所述的自體皮膚來源于耳后取皮、眼袋割除后皮膚、手臂取皮和腿上取皮等，優(yōu)選地，選擇耳后取皮。
[0013]本發(fā)明還提供了含自體表皮細(xì)胞和/或成纖維細(xì)胞的生物美容產(chǎn)品，其中，所述產(chǎn)品包括將其中一種或兩種細(xì)胞添加到自體外周血富含血小板的血漿中，同時(shí)可以添加營(yíng)養(yǎng)因子，生產(chǎn)出含自體活細(xì)胞的生物美容產(chǎn)品。
[0014]本發(fā)明所述的自體富含血小板血漿是通過采集抗凝外周血兩次離心獲得的富含血小板的血漿，其富含各種生長(zhǎng)因子，其中成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、表皮生長(zhǎng)因子、血小板衍生生長(zhǎng)因子與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子等。
[0015]含自體表皮細(xì)胞和/或成纖維細(xì)胞的生物美容產(chǎn)品主要由如下成分組成:
[0016]I) 1-20 X 16自體表皮細(xì)胞和/或成纖維細(xì)胞；
[0017]2) l_50ml自體富含血小板血漿；
[0018]3)任選的1ng-1ug營(yíng)養(yǎng)因子；
[0019]生物美容制劑裝入1ml無菌的塑料針管中，可用蓋子密封包裝，形成產(chǎn)品。
[0020]該生物美容制劑保存在4°C條件下，保質(zhì)期為48小時(shí)。
[0021]本發(fā)明所述的一種或兩種自體表皮細(xì)胞和/或成纖維細(xì)胞，優(yōu)選地包括加入自體表皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞兩種細(xì)胞。
[0022]本發(fā)明所述的營(yíng)養(yǎng)因子，即為超氧化歧化酶、靈芝多糖、胎盤提取多肽素和銀杏葉提取液等，優(yōu)選地，含有兩種以上。
[0023]通過本發(fā)明的方法，通過自體皮膚獲取的表皮細(xì)胞和/或成纖維細(xì)胞，加入到自體外周血來源的富含血小板血楽，優(yōu)選添加一種或多種皮膚營(yíng)養(yǎng)因子，制備成生物美容產(chǎn)品。由本發(fā)明提供的方法得到含有自體皮膚獲取的表皮細(xì)胞和/或成纖維細(xì)胞的生物美容產(chǎn)品，能夠?qū)Π遵帮L(fēng)祛斑、皮膚瘢痕修復(fù)、皮膚祛皺以及除斑等功能。特別當(dāng)聯(lián)合物理美容療法使用時(shí)，將產(chǎn)生更佳的美容療效，即白癜風(fēng)磨削術(shù)、高溫深藍(lán)射頻美容療法、電動(dòng)微針療法等，能打開表皮毛孔或微創(chuàng)表皮皮層，為營(yíng)養(yǎng)因子和細(xì)胞進(jìn)入皮膚的通道，有助于皮膚的再生增殖。
【附圖說明】
[0024]圖1表示由實(shí)施例2所制備的成纖維細(xì)胞在倒置顯微鏡下觀察的生長(zhǎng)圖片。
[0025]圖2表示由實(shí)施例1制備的自體表皮生長(zhǎng)因子和實(shí)施例2制備的自體成纖維細(xì)胞表達(dá)特異蛋白印跡檢測(cè)圖片。
[0026]圖3表示一名女性經(jīng)由實(shí)施例4所制備的自體表皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的生物美容廣品治療后腿部白療風(fēng)改善的圖片。
[0027]圖4