蓬亂蛋白作為腦卒中生物標志物的用圖
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)學、生物領域，具體涉及蓬亂蛋白作為腦卒中診斷、罹患風險評估和 預后判斷的生物標志物的用途。本發(fā)明還涉及蓬亂蛋白作為藥物篩選的靶點用于篩選治療 腦卒中的藥物的用途。
【背景技術】
[0002] 從狹義上講，生物標志物是指通過化學或生物方法檢測血液或尿液來預測生理或 病理狀態(tài)與疾病危險程度的一類指示劑。生物標志物是藥物研發(fā)過程中的有效工具，它提 供了藥物性能及疾病進程的相關信息，反映了具體的藥物治療效果。糖尿病及免疫性疾病 等多種疾病都已經根據生物標志物進行治療。然而，在腦血管病中生物標志物仍相對缺乏。 而腦卒中是全球第三大高致死率、高致殘率疾病 [1]，缺血性腦卒中是腦卒中的常見類型，嚴 重威脅人類健康[2]。因此，探索缺血性腦卒中的生物標志物有著重要的意義。
[0003] 蓬亂蛋白（disheveled,DVL)作為Wnt通路的調節(jié)蛋白，參與細胞內信號轉導和 對其下游靶因子的轉錄過程，在細胞增殖、腫瘤形成、胚胎發(fā)育和神經分化等方面起重要作 用 [3'4]。DVL是由670個氨基酸殘基組成的1種信號轉導蛋白，在機體組織細胞中廣泛表 達。DVL主要包括 3 個保守結構域：DIX(Dis/Axinhomologousdomain)、F*DZ(PSD-95 與 ZO-ldomain)和DEP，以及位于DIX和PDZ結構域之間的富含絲氨酸/蘇氨酸區(qū)、位于H)Z 結構域下游的富含脯氨酸區(qū)以及位于DEP結構域下游的高度保守C-末端區(qū)[5]，不同結構域 分別與不同的信號蛋白結合來起到調節(jié)細胞的作用。但目前尚沒有將DVL作為腦卒中生物 標志物的報道。

【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明的發(fā)明人經過反復摸索和大量實驗，出人意料地發(fā)現蓬亂蛋白可以作為腦 卒中的生物標志物，用于腦卒中的診斷、罹患風險的評估和預后的判斷等，由此完成了本發(fā) 明。
[0005] 本發(fā)明的第一方面涉及蓬亂蛋白或其活性片段、或者檢測蓬亂蛋白或其活性片段 的物質在制備試劑盒中的用途，所述試劑盒用于診斷腦卒中和/或評估罹患腦卒中的風 險。
[0006] 在本發(fā)明的一個實施方案中，其中所述的試劑盒是根據樣品中蓬亂蛋白的含量或 含量的變化趨勢來診斷腦卒中和/或評估罹患腦卒中的風險。
[0007] 在本發(fā)明的一個實施方案中，其中所述的樣品為血液，例如選自血清、血漿和全 血。
[0008] 在本發(fā)明的一個實施方案中，所述的樣品來源于哺乳動物，例如人、小鼠、大鼠等。
[0009] 在本發(fā)明的實施方案中，當樣品中蓬亂蛋白的含量降低或其含量低于正常值時， 表明受試者患有腦卒中，或者罹患腦卒中的風險高。
[0010] 在本發(fā)明的一個實施方案中，所述的腦卒中為缺血性腦卒中。
[0011] 本發(fā)明的第二方面涉及蓬亂蛋白或其活性片段、或者檢測蓬亂蛋白或其活性片段 的物質在制備試劑盒中的用途，所述試劑盒用于評估腦卒中的治療效果或者判斷腦卒中的 預后。
[0012] 在本發(fā)明的一個實施方案中，其中所述的試劑盒是根據樣品中蓬亂蛋白的含量或 含量的變化趨勢來評估腦卒中的治療效果或者判斷腦卒中的預后。
[0013] 在本發(fā)明的一個實施方案中，其中所述的樣品為血液，例如選自血清、血漿和全 血。
[0014] 在本發(fā)明的一個實施方案中，所述的樣品來源于哺乳動物，例如人、小鼠、大鼠等。
[0015] 在本發(fā)明的一個實施方案中，當樣品中蓬亂蛋白的含量升高時，表明腦卒中的治 療有效或效果較好，或者表明腦卒中的預后較好。
[0016] 在本發(fā)明的一個實施方案中，所述的腦卒中為缺血性腦卒中。
[0017] 本發(fā)明的第三方面涉及蓬亂蛋白或其活性片段、或者檢測蓬亂蛋白或其活性片段 的物質用于篩選預防或治療腦卒中的藥物的用途或者在制備試劑盒中的用途，其中所述的 試劑盒用于篩選預防或治療腦卒中的藥物。
[0018] 在本發(fā)明的一個實施方案中，其通過檢測樣品中蓬亂蛋白的含量或含量的變化趨 勢來篩選治療腦卒中的藥物。
[0019] 在本發(fā)明的一個實施方案中，其中所述的樣品為血液，例如選自血清、血漿和全 血。
[0020] 在本發(fā)明的一個實施方案中，所述的樣品來源于哺乳動物，例如人、小鼠、大鼠等。
[0021] 在本發(fā)明的一個實施方案中，蓬亂蛋白可以用為藥物篩選的靶點，用于篩選預防 或治療腦卒中的藥物。當施用藥物后樣品中蓬亂蛋白的水平升高時，表明該藥物可以作為 預防或治療腦卒中的藥物。
[0022] 在本發(fā)明的一個實施方案中，所述的腦卒中為缺血性腦卒中。
[0023] 本發(fā)明的第四方面涉及能夠提高血液中蓬亂蛋白含量的物質用于制備預防或治 療腦卒中的藥物的用途。
[0024] 在本發(fā)明的一個實施方案中，其中所述血液選自血清、血漿和全血。
[0025] 在本發(fā)明的一個實施方案中，所述的樣品來源于哺乳動物，例如人、小鼠、大鼠等。
[0026] 在本發(fā)明的實施方案中，能夠提高血液中蓬亂蛋白含量的物質可以是任何物質， 例如小分子化合物、生物大分子例如蛋白質（如抗體、配體）、多肽或核酸等，該物質可以通 過與蓬亂蛋白的直接作用或間接作用來提高血液中蓬亂蛋白的含量。
[0027] 在本發(fā)明的一個實施方案中，所述能夠提高血液中蓬亂蛋白含量的物質為莫諾 苷。
[0028] 在本發(fā)明的一個實施方案中，所述的腦卒中為缺血性腦卒中。
[0029] 在本發(fā)明中，所述腦卒中是指由于腦部血管突然破裂或因血管阻塞造成血液循環(huán) 障礙而引起腦組織損傷的一組疾病。在本發(fā)明的實施方案中，所述腦卒中為缺血性腦卒中， 所述缺血性腦卒中是指因腦部血液循環(huán)障礙（例如頸內動脈、頸外動脈、椎動脈、大腦中動 脈因狹窄或閉塞引起的循環(huán)障礙），缺血、缺氧所致的局灶性腦組織缺血性壞死或軟化的總 稱，其是腦卒中的主要類型，占腦卒中的60 %~70%。
[0030] 在本發(fā)明中，所述蓬亂蛋白來源于哺乳動物，特別是人，其序列例如為AAH17225. 1 所示。所述蓬亂蛋白的活性片段是指具有蓬亂蛋白功能的片段，或者降解后可以在血液中 檢測到的片段，其可以為蓬亂蛋白的一部分，也可以為蓬亂蛋白的氨基酸序列經過缺失、添 加或替換后得到的片段；例如該活性片段為包含蓬亂蛋白與配體或受體結合的部分的片 段，或者經過氨基酸的缺失、添加或替換后仍保留蓬亂蛋白功能的片段。
[0031] 在本發(fā)明中，所述檢測蓬亂蛋白或其活性片段的物質為本領域所公知，或者其制 備方法或獲得方法為本領域所公知，通常情況下，其可以和蓬亂蛋白或其活性片段特異性 結合，通過檢測該物質即可以檢測蓬亂蛋白或其活性片段的存在或含量，例如其可以為哺 乳動物體內天然存在的可以與蓬亂蛋白或其活性片段結合的配體、受體或抗體，也可以為 本領域技術人員制備的能夠和蓬亂蛋白特異性結合的抗體，例如為單克隆抗體或多克隆抗 體。在本發(fā)明的實施方案中，所述檢測蓬亂蛋白或其活性片段的物質為多克隆抗體，其結合 位點位于人Dvl蛋白的第1-100位氨基酸之間。
[0032] 發(fā)明的有益效果
[0033] 本發(fā)明通過實驗證明了蓬亂蛋白可以作為腦卒中的生物標志物，用于腦卒中的診 斷、罹患風險的評估和預后的判斷；同時，蓬亂蛋白還可以作為篩選藥物的靶點，用于篩選 預防或治療腦卒中的藥物。
【附圖說明】
[0034] 圖1.造模后不同時間點各組大鼠血清DVL蛋白的表達情況，n= 4; *p〈0.05，* *p〈0.01，與假手術組相比。
[0035] 圖2.造模后第7天各組大鼠血清DVL蛋白的表達情況，n= 4，〃p〈0. 001，與假 手術組相比；_P〈〇. 001，與模型組相比。
[0036] 圖3.LudmilaBelayev12分評分法結果，+〃p〈0. 001與假手術組相比； p〈0. 001，與模型組相比。
[0037] 圖4.莫諾苷對腦缺血再灌注損傷模型大鼠腦梗死體積MIR檢測結果，mp〈0. 001 與假手術組相比；##P〈〇. 01，與模型組相比。
【具體實施方式】
[0038] 下面將結合實施例對本發(fā)明的實施方案進行詳細描述，但是本領域技術人員將會 理解，下列實施例僅用于說明本發(fā)明，而不應視為限定本發(fā)明的范圍。實施例中未注明具體 條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產廠商者，均為 可以通過市購獲得的常規(guī)產品。
[0039] 實施例1DVL可以作為腦卒中的生物標志物
[0040] 1材料與方法
[0041] 1. 1實驗動物
[0042] SPF級雄性Sprague-Dawley大鼠20只，7-8周齡，質量為260_280g。購自斯貝福 實驗動物科技有限公司，合格證編號：SCKK(京）2011-0004。常規(guī)飼養(yǎng)，環(huán)境溫度24± 1°C， 濕度55±5%，術前12h禁食不禁水。
[0043] 1. 2 藥物
[0044] 莫諾苷由宣武醫(yī)院藥物研究室自行從山茱萸中提取制備，高效液相色譜分析純度 98. 5%，臨用前用蒸餾水溶解成所需濃度的藥液供實驗用。
[0045] 中藥山茱萸為山茱萸科植物山茱萸（CornusofficinalisSieb.etZucc.)的干 燥成熟果實。宣武醫(yī)院藥物研究室對其有效成分山茱萸環(huán)烯醚萜苷進行進一步分離，得到 單體化合物莫諾苷。我們的前期研究發(fā)現，莫諾苷能減小局灶性腦缺血再灌注大鼠腦梗死 體積，增強皮層抗氧化、抗炎和抗凋亡能力 [6 8]，并促進內源性的神經干細胞增殖[9]，改善神 經功能。此外，莫諾苷在缺血初期調節(jié)血腦屏障的通透性，促進血腦屏障重構，在缺血后期 使內皮祖細胞增殖增強，促進血管新