Creg蛋白的醫(yī)藥用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及CREG蛋白的醫(yī)藥用途，具體涉及CREG蛋白在制備用于預(yù)防和/或治療動脈粥樣硬化或動脈粥樣硬化相關(guān)疾病(例如冠心病、腦卒中)的藥物或醫(yī)用器械中的用途。本發(fā)明還涉及表達(dá)CREG蛋白的重組載體、含有該重組載體的重組細(xì)胞、能夠抑制血管壁內(nèi)CREG蛋白表達(dá)下調(diào)或者能夠上調(diào)血管壁內(nèi)CREG蛋白表達(dá)水平的制劑在制備用于預(yù)防和/或治療動脈粥樣硬化或動脈粥樣硬化相關(guān)疾病(例如冠心病、腦卒中)的藥物或醫(yī)用器械中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]動脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)是硬化性血管病中最常見的類型。隨著人民生活水平的提高、生活方式的改變及壽命的延長，AS的發(fā)病率逐年上升。根據(jù)受累血管的不同，AS可表現(xiàn)為心肌梗死、腦卒中等多種形式，是致死致殘的主要疾病之一。研究表明，AS是一個復(fù)雜的、多因素參與的慢性炎癥過程。它包括脂質(zhì)聚集、單核-巨噬細(xì)胞的侵入、血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)的增生、泡沫細(xì)胞的形成、纖維組織增生、炎癥及抗原抗體反應(yīng)等等。到目前為止，AS的發(fā)生機制仍未完全闡明。尋找影響AS發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵內(nèi)源性分子、并以此分子為祀點治療AS是目前研究的熱點。
[0003]人E1A 激活基因阻遏子(human cellular repressor of ElA-stimulatedgene, hCREG)基因是1998年哈佛大學(xué)醫(yī)學(xué)院Gill教授首先克隆的一個細(xì)胞分化調(diào)控基因(Veal Ε,ΜοΙ Cell B1l，1998 ; 18 (9): 5032-5041)。前期研究證實，在 VSMC 由收縮表型向合成表型轉(zhuǎn)化的過程中，CREG蛋白及mRNA的表達(dá)水平顯著降低(Han Ya-Ling, ZhonghuaYi Xue Za Zhi,2005 ；85 (1):49-53 ；Han Ya-Ling, J Mol Cell Card1l, 2011 ；50(4):723-30 ；Han Ya-Ling, J Mol Cell Card1l, 2010 ;48 (6): 1225-35)，表明其參與VSMC表型調(diào)控過程。體外研究發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)CREG蛋白能明顯抑制VSMC的增殖并促進其分化(Han Ya-Ling, Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology, 2005 ；21 (5):570-574；Han Ya-Ling, Prog B1chem B1phys, 2004 ；31 (12):1099-1105 ；HanYa-Ling, Prog B1chem B1phys, 2005 ;32 (6): 517—522)。在體研究發(fā)現(xiàn)，在球囊損傷后的大鼠頸動脈血管中，血管中膜的CREG基因的表達(dá)明顯下降，且過表達(dá)CREG可以抑制VSMC 的增殖和新生內(nèi)膜的形成(Han Ya-Ling, Card1vasc Res, 2008 ；78 (3): 597-604 ；Han Ya-Ling, J Vase Surg, 2008 ;48 (1): 201-9)，同時，經(jīng)外膜包裹導(dǎo)入的 pLNCX2_hCREG逆轉(zhuǎn)錄病毒有效抑制了球囊拉傷后小鼠頸動脈狹窄的發(fā)生(Han Ya-Ling, ChineseJournal of Pathophys1logy, 2007 ；23(10):1873-1877)。除了 VSMC, CREG 對血管內(nèi)皮細(xì)胞(EC)也有調(diào)控作用。過表達(dá)CREG可以促進EC增殖(Tao Jie, Int J Mol Sci, 2013 ；14(9):18437-18456),并對抗炎癥引起的 EC 凋亡(Wang Na, Astherosclerosis, 2011 ；218(2):543-551)及屏障功能障礙(Duan Yan, Mol B1l Rep, 2013 ；40 (6):3891-3900)。上述研究提示，CREG是維持血管穩(wěn)態(tài)重要的內(nèi)源性調(diào)控因子。但尚沒有研究表明，CREG蛋白可做為AS治療的靶點。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)過大量實驗和反復(fù)摸索，發(fā)現(xiàn)通過提高血管壁內(nèi)CREG蛋白表達(dá)水平，可以縮小動脈粥樣硬化斑塊面積，減輕動脈粥樣硬化中的炎癥反應(yīng)，由此完成了本發(fā)明。
[0005]本發(fā)明第一方面涉及CREG蛋白在制備用于預(yù)防和/或治療動脈粥樣硬化或動脈粥樣硬化相關(guān)疾病(例如冠心病、腦卒中、腹主動脈瘤、外周動脈疾病等)的藥物或醫(yī)用器械中的用途。
[0006]本發(fā)明第二方面涉及表達(dá)CREG蛋白的重組載體或含有該重組載體的重組細(xì)胞在制備用于預(yù)防和/或治療動脈粥樣硬化或動脈粥樣硬化相關(guān)疾病(例如冠心病、腦卒中、腹主動脈瘤、外周動脈疾病等)的藥物或醫(yī)用器械中的用途；其中所述重組載體含有編碼CREG蛋白的核苷酸序列。
[0007]根據(jù)本發(fā)明第二方面任一項的用途，其中所述的重組載體為重組腺病毒載體。
[0008]在本發(fā)明的實施方案中，其中所述的重組腺病毒載體為人腺病毒5型Ad5 - CREG,其于2008年1月2日保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC，武漢，武漢大學(xué))，保藏號為CCTCC - V200801。該保藏信息已在中國專利CN101475961A中公開。
[0009]本發(fā)明第三方面涉及能夠抑制血管內(nèi)CREG蛋白表達(dá)下調(diào)或者能夠上調(diào)血管內(nèi)CREG蛋白表達(dá)水平的制劑在制備用于預(yù)防和/或治療動脈粥樣硬化或動脈粥樣硬化相關(guān)疾病(例如冠心病、腦卒中、腹主動脈瘤、外周動脈疾病等)的藥物或醫(yī)用器械中的用途。
[0010]本發(fā)明第四方面涉及組合物，其包含CREG蛋白、表達(dá)CREG蛋白的重組載體、含有該重組載體的重組細(xì)胞、能夠抑制血管內(nèi)CREG蛋白表達(dá)下調(diào)或者能夠上調(diào)血管內(nèi)CREG蛋白表達(dá)水平的制劑，以及任選的藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑，所述組合物用于預(yù)防和/或治療動脈粥樣硬化或動脈粥樣硬化相關(guān)疾病(例如冠心病、腦卒中、腹主動脈瘤、外周動脈疾病等);其中所述重組載體含有編碼CREG蛋白的核苷酸序列。
[0011]本發(fā)明第五方面涉及醫(yī)用器械，其包含CREG蛋白、表達(dá)CREG蛋白的重組載體、含有該重組載體的重組細(xì)胞、能夠抑制血管內(nèi)CREG蛋白表達(dá)下調(diào)或者能夠上調(diào)血管內(nèi)CREG蛋白表達(dá)水平的制劑，所述醫(yī)用器械用于預(yù)防和/或治療動脈粥樣硬化或動脈粥樣硬化相關(guān)疾病(例如冠心病、腦卒中、腹主動脈瘤、外周動脈疾病等)；其中所述重組載體含有編碼CREG蛋白的核苷酸序列。
[0012]本發(fā)明還涉及預(yù)防和/或治療動脈粥樣硬化或動脈粥樣硬化相關(guān)疾病(例如冠心病、腦卒中、腹主動脈瘤、外周動脈疾病等)的方法，所述方法包括給有需要的受試者有效量的CREG蛋白、表達(dá)CREG蛋白的重組載體、含有該重組載體的重組細(xì)胞、能夠抑制血管內(nèi)CREG蛋白表達(dá)下調(diào)或者能夠上調(diào)血管內(nèi)CREG蛋白表達(dá)水平的制劑的步驟。
[0013]本發(fā)明還涉及本發(fā)明第四方面任一項的組合物或第五方面任一項的醫(yī)用器械在制備用于預(yù)防和/或治療動脈粥樣硬化或動脈粥樣硬化相關(guān)疾病(例如冠心病、腦卒中、腹主動脈瘤、外周動脈疾病等)的產(chǎn)品中的用途。
[0014]在本發(fā)明中，所述CREG蛋白(即E1A激活基因阻遏子，cellular repressor ofElA-stimulated gene)既包括具有完整序列的CREG蛋白，也包括具有CREG蛋白功能的只含有部分序列的CREG蛋白。
[0015]在本發(fā)明的實施方案中，所述CREG蛋白的氨基酸序列號為NP_003842.1。
[0016]在本發(fā)明的實施方案中，所述CREG基因的Genbank號為NM003851。
[0017]在本發(fā)明的實施方案中，所述CREG蛋白為人CREG(hCREG)蛋白。
[0018]在本發(fā)明中，所述動脈粥樣硬化包括動脈粥樣硬化血管狹窄期的各個階段，但不包括動脈粥樣硬化嚴(yán)重時的血管梗塞期。
[0019]在本發(fā)明中，所述動脈粥樣硬化包括冠狀動脈粥樣硬化，主動脈粥樣硬化以及外周動脈粥樣硬化。
[0020]在本發(fā)明中，所述動脈粥樣硬相關(guān)疾病包括冠心病、腦卒中、腹主動脈瘤或外周動脈疾病(例如動脈血栓)。
[0021]在本發(fā)明中，所述載體為原核表達(dá)載體、真核表達(dá)載體或病毒載體。在本發(fā)明的實施方案中，所述載體為病毒載體，例如為腺病毒載體或腺相關(guān)病毒載體。在本發(fā)明的具體實施方案中，所述載體為腺病毒載體。
[0022]在本發(fā)明中，所述細(xì)胞為原核細(xì)胞或真核細(xì)胞，所述原核細(xì)胞例如為大腸桿菌、沙門氏菌，所述真核細(xì)胞例如為酵母細(xì)胞或哺乳動物細(xì)胞。
[0023]在本發(fā)明中，所述醫(yī)用器械為用于治療動脈粥樣硬化的器械，通常為介入血管的器械，例如為血管支架等。
[0024]在本發(fā)明中，所述C