一種分析分離替格瑞洛中間體的異構(gòu)體雜質(zhì)的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬涉及一種高效液相色譜法，尤其是一種分析分離替格瑞洛中間體的異構(gòu) 體雜質(zhì)的高效液相色譜法。
【背景技術(shù)】
[0002] 替格瑞洛是一種口服選擇性小分子抗凝血藥，能可逆性地作用與血小板上P2Y12 受體，對腺苷二磷酸（ADP)引起的血小板聚集有較強的抑制作用，因此可明顯改善急性冠心 病患者的癥狀。在其制備過程中，一種中間體的結(jié)構(gòu)式如式1所示：
其是制備替格瑞洛的關(guān)鍵中間體，化學名為（IR, 2S)-2-(3, 4-二氟苯基）環(huán)丙胺，該 中間體的分子中含2個手性碳原子，在通過定向合成目標化合物替格瑞洛的過程中需要控 制其異構(gòu)體的含量。
[0003] 對于替格瑞洛中間體的異構(gòu)體雜質(zhì)，在藥物合成過程當中是需要進行質(zhì)量控制 的。含手性碳原子的異構(gòu)體的分離一直是手性藥物合成和制劑過程中質(zhì)量控制的難點，實 現(xiàn)替格瑞洛中間體及其異構(gòu)體的分離在替格瑞洛藥物的合成和制劑過程的質(zhì)量控制方面 具有現(xiàn)實意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種分析分離替格瑞洛中間體的異構(gòu)體雜質(zhì)的高效液相 色譜方法，從而實現(xiàn)替格瑞洛中間體與其異構(gòu)體雜質(zhì)的分離測定。
[0005] 申請人發(fā)現(xiàn)，采用以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜柱，以乙腈和0.0 lmol/ 1的磷酸二氫銨溶液作為流動相，可以將替格瑞洛中間體及其異構(gòu)體進行有效分離，從而可 以準確控制替格瑞洛的質(zhì)量。本發(fā)明的方法能簡單、快速、準確地分析分離替格瑞洛中間體 的異構(gòu)體雜質(zhì)。
[0006] 本發(fā)明的方法中的流動相選用體積比為80 : 20的乙腈與0.0 lmol/Ι的磷酸二氫 銨溶液的混合液。
[0007] 本發(fā)明的方法中的流動相中的0.0 lmol/Ι磷酸二氫銨用磷酸調(diào)pH值為2. 5-3. 5， 優(yōu)選pH值為3.0。
[0008] 本發(fā)明所述的分析分離方法，可按照以下方法實現(xiàn)： (1)取替格瑞洛中間體及其各異構(gòu)體樣品適量，用甲醇或異丙醇溶解樣品，配制成每 ImL含替格瑞洛中間體0.1 mg~0. 5mg的樣品溶液。
[0009] (2)設(shè)置流動相流速為0· 4~I. 2mL/min，最佳流速為lml/min，檢測波長為205 ~235nm，最佳檢測波長為225nm，色譜柱柱溫箱為20~40°C，色譜柱柱溫的最佳溫度為 室溫。
[0010] (3)取⑴的樣品溶液2-50 μ L注入液相色譜儀，完成替格瑞洛中間體的異構(gòu)體 的分析與分離。
[0011] 其中： 高效液相色譜儀：島津：LC-10ATvp，SfiD-MIOAvp 色譜柱：C18, 250mmX 4. 6mm 流動相：乙腈-(〇· Olmol/L磷酸二氫鈉，磷酸調(diào)pH至3· 0) = 80 : 20 流速：1. OmL/min 檢測波長：225nm 柱溫：室溫 進樣體積：10 μ L 本發(fā)明采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜柱，能夠有效的分析分離替格瑞洛中 間體及其中間體的對映異構(gòu)體（雜質(zhì)）；選擇流動相溶解樣品，確保了溶液的穩(wěn)定 性；選擇進樣體積10 μ L，柱溫為室溫，提高了色譜峰的對稱性。本發(fā)明解決了含替格 瑞洛中間體的對映異構(gòu)體的原料及制劑的分析與分離問題，從而確保了替格瑞洛及其制劑 的質(zhì)量可控。
【具體實施方式】
[0012] 實施例1 儀器與條件 高效液相色譜儀：島津：LC-10ATvp，SfiD-MIOAvp ; 色譜柱：C18, 250mm X 4. 6mm ； 流動相：乙腈-(〇· 01m〇l/L磷酸二氫銨，磷酸調(diào)ρΗ3· 0) = 80 : 20 流速：1. OmL/min ; 柱溫：室溫； 進樣體積：10 μ L ; 檢測波長：225nm ; 實驗步驟 分別稱取替格瑞洛中間體及其異構(gòu)體各5mg，置于25mL容量瓶中，加流動相 溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為混合樣品溶液。并分別稱取替格瑞洛中間體其對映異構(gòu) 體各5mg，分別置于4個25mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為定性對照 溶液。
[0013] 分別取各對照溶液和混合樣品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色 譜圖，可以看出在該條件下替格瑞洛中間體及其異構(gòu)體完全分離開來，且替格瑞洛中 間體的主峰在15min左右，并可以采用面積歸一化法記錄異構(gòu)體雜質(zhì)的含量。
[0014] 實施例2 儀器與條件 高效液相色譜儀：島津：LC-10ATvp，SfiD-MIOAvp ; 色譜柱：C18, 250mm X 4. 6mm ； 流動相：乙腈-(O.Olmol/L磷酸二氫銨，磷酸調(diào)ρΗ2·5) =80 : 20 流速：1. OmL/min ; 柱溫：室溫； 進樣體積：10 μ L ; 檢測波長：225nm ; 實驗步驟 分別稱取替格瑞洛中間體及其異構(gòu)體各5mg，置于25mL容量瓶中，加流動相 溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為混合樣品溶液。并分別稱取替格瑞洛中間體其對映異構(gòu) 體各5mg，分別置于4個25mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為定性對照 溶液。
[0015] 分別取各對照溶液和混合樣品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色 譜圖，可以看出在該條件下替格瑞洛中間體及其異構(gòu)體完全分離開來，且替格瑞洛中 間體的主峰在IOmin左右，并可以采用面積歸一化法記錄異構(gòu)體雜質(zhì)的含量。
[0016] 實施例3 儀器與條件 高效液相色譜儀：島津：LC-10ATvp，SfiD-MIOAvp ; 色譜柱：C18, 250mm X 4. 6mm ； 流動相：乙腈-(0.01m〇l/L磷酸二氫銨，磷酸調(diào)ρΗ3·5) =80 : 20 流速：1. OmL/min ; 柱溫：室溫； 進樣體積：10 μ L ; 檢測波長：225nm ; 實驗步驟 分別稱取替格瑞洛中間體及其異構(gòu)體各5mg，置于25mL容量瓶中，加流動相 溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為混合樣品溶液。并分別稱取替格瑞洛中間體其對映異構(gòu) 體各5mg，分別置于4個25mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為定性對照 溶液。
[0017] 分別取各對照溶液和混合樣品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色 譜圖，可以看出在該條件下替格瑞洛中間體及其異構(gòu)體完全分離開來，且替格瑞洛中 間體的主峰在17. 5min左右，并可以采用面積歸一化法記錄異構(gòu)體雜質(zhì)的含量。
[0018] 對比例1 現(xiàn)有技術(shù)中對異構(gòu)體分離普遍采用手性色譜法進行分析，通過對比實施例進一步驗證 本發(fā)明的分離測定效果。
[0019] 儀器：戴安液相色譜儀 泵：P680 自動進樣器：WPS3000 檢測器：UVD3400 試藥：替格瑞洛中間體及其三個異構(gòu)體 用三（3, 5-二甲基苯基)-氨基甲酸酯直鏈為填充劑的AD-H色譜柱分析。以正庚烷：無 水乙醇=80:20為流動相，控制色譜柱柱溫為：30°C，流速為1.0 ml/min，檢測波長為225nm。 [0020] 分別取替格瑞洛中間體及其三個異構(gòu)體用甲醇溶解制成濃度為0. 2mg/ml濃度的 溶液，分別取上述溶液等量進行混合均勻后，取ιομL注入色譜儀，進行檢測分析，結(jié)果顯示 替格瑞洛中間體及其相應的異構(gòu)體能有效分離，且含量測定與本發(fā)明的測定無明顯差異。
【主權(quán)項】
1. 一種分析分離替格瑞洛中間體的異構(gòu)體雜質(zhì)的方法，其特征在于：采用以十八烷基 硅烷鍵合硅膠為填料的色譜柱，以乙腈和0.0 lmol/1的磷酸二氫銨溶液作為流動相，進行 反相高效液相色譜法檢測。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分析分離替格瑞洛中間體的異構(gòu)體雜質(zhì)的方法，其特征在于 所述的流動相中乙腈和0.0 lmol/1的磷酸二氫銨的體積比為80:20。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分析分離替格瑞洛中間體的異構(gòu)體雜質(zhì)的方法，其特征在于 所述的〇? Olmol/1磷酸二氫銨用磷酸調(diào)pH值為2. 5-3. 5,優(yōu)選pH值為3. 0。4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3任意一項所述的分析分離替格瑞洛中間體的異構(gòu)體雜質(zhì)的方法， 其特征在于： 高效液相色譜儀：島津：LC-10ATvp，SfiD-MIOAvp; 色譜柱：C18, 250mm X 4. 6mm ； 流動相：乙腈-(〇? Olmol/L磷酸二氫銨，磷酸調(diào)pH 3. 0) = 80 : 20 ; 流速：1. OmL/min ; 柱溫：室溫； 進樣體積：10 y L ; 檢測波長：225nm ; 實驗步驟： 分別稱取替格瑞洛中間體及其異構(gòu)體各5mg，置于25mL容量瓶中，加流動相溶解并稀 釋至刻度，搖勻，作為混合樣品溶液；并分別稱取替格瑞洛中間體及其異構(gòu)體各5mg，分別 置于4個25mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為定性對照溶液； 分別取各對照溶液和混合樣品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種替格瑞洛中間體的異構(gòu)體雜質(zhì)的分析與分離測定方法，采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為色譜柱，以乙腈與磷酸/磷酸鹽緩沖液(調(diào)至一定pH值)的混合溶液為流動相，用該方法可以快速的分離分析替格瑞洛中間體的異構(gòu)體雜質(zhì)。
【IPC分類】G01N30/89
【公開號】CN105092768
【申請?zhí)枴緾N201410215511
【發(fā)明人】嚴潔, 李軒
【申請人】天津市漢康醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司
【公開日】2015年11月25日
【申請日】2014年5月21日