檢測替格瑞洛中(1r,2s)-2-(3,4-二氟苯基)環(huán)丙胺的方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于化學分析、檢測領域，具體涉及檢測替格瑞洛中（lR，2S)-2-(3,4-二 氟苯基）環(huán)丙胺的方法。
【背景技術】
[0002]替格瑞洛（Ticagrelor商品名：BRILINTA)，化學名為（lS，2S，3R，5S)-3-[7-[[ (1R，2S)-2-(3, 4-二氟苯基）環(huán)丙基]氨基]-5-丙硫基-3H-1，2, 3-三唑基[4, 5-d]嘧 啶-3-基]-5- (2-羥乙氧基）-1，2-環(huán)戊烷二醇（分子式：C23H2SF具04S)，是由阿斯利康制藥 有限公司（AstraZenecaAB)開發(fā)的一種選擇性的二磷酸腺苷（ADP)受體詰抗劑，通過激活 P2Y12-受體，可逆性的阻滯ADP介導的血小板活化和聚集。
[0003]FDA于2011年7月20日批準替格瑞洛片上市，用于急性冠脈綜合征（不穩(wěn)定性 心絞痛、非ST段抬高心肌梗死或ST段抬高心肌梗死）患者，包括接受藥物治療和經(jīng)皮冠狀 動脈介入（PCI)治療的患者，降低血栓性心血管事件的發(fā)生率。替格瑞洛片的抗血小板作 用具有可逆性，直接作用于ADP受體，不經(jīng)肝代謝，不受體內(nèi)代謝影響，起效時間為30分鐘。 搶救ACS患者有著突出的優(yōu)勢，具有非血小板介導的作用，能夠提高血液腺苷濃度，改善心 肌血供，降低心梗面積，同時，較氯吡格雷抗血小板作用更強、更持久，維持期血小板抑制作 用更強，適合急性冠狀動脈綜合征患者長期使用。因此，替格瑞洛與氯吡格雷同為血小板 抑制劑，臨床試驗表明安全性和有效性都更優(yōu)，具有替代氯吡格雷的潛力，所以市場潛力巨 大，應用前景廣闊。
[0004]目前，替格瑞洛主要通過以下路線合成：
[0005]
[0006]
[0007] 其中，TG-2所示的化合物為（lR，2S)-2_(3,4-二氟苯基）環(huán)丙胺（分子式： C9H9F2N)，是合成替格瑞洛的起始原料。由于受到工藝技術和控制水平的限制，生產(chǎn)得到的 替格瑞洛產(chǎn)品中，很容易就存在有未反應的（1R，2S)-2-(3, 4-二氟苯基）環(huán)丙胺，作為雜質(zhì) 存在。
[0008] (lR，2S)-2-(3,4-二氟苯基）環(huán)丙胺具有致癌性示警結構，根據(jù)ICHQ3A(R2)、 M7 以及文獻 1 (文獻 1:RomualdoBenigni,CeciliaBossa,OlgaTcheremenskaia. Developmentofstructuralalertsfortheinvivomicronucleusassayin rodents[J].JRCScientificandTechnicalReports, 24·)，文獻 2(文獻 2:替格瑞洛片 (JXHL1000319、320)國際多中心臨床試驗申請藥學審評報告.）中明確提到該物質(zhì)為基因 毒性雜質(zhì)，需要將替格瑞洛中的（1R，2S)-2-(3, 4-二氟苯基）環(huán)丙胺的含量控制在8ppm以 內(nèi)，保證每日總攝入量不超過1. 5μg;因而，十分有必要對替格瑞洛中（1R，2S)-2-(3, 4-二 氟苯基）環(huán)丙胺含量進行監(jiān)控。
[0009] 現(xiàn)有技術中，也未見有檢測替格瑞洛中（1R，2S)-2-(3, 4-二氟苯基）環(huán)丙胺含量 的相關報道。因此，為了更好地監(jiān)控替格瑞洛藥物的產(chǎn)品質(zhì)量，進一步保證患者的用藥安 全，需要建立一種檢測替格瑞洛藥物中（lR，2S)-2-(3,4-二氟苯基）環(huán)丙胺的方法。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0010] 本發(fā)明的目的在于提供一種檢測替格瑞洛中（1R，2S)-2-(3, 4-二氟苯基）環(huán)丙胺 的方法。
[0011] 本發(fā)明提供的一種檢測替格瑞洛中（1R，2S)-2-(3, 4-二氟苯基）環(huán)丙胺的方法， 包括以下步驟：
[0012]a、?。?R, 2S)-2-(3, 4-二氟苯基）環(huán)丙胺（R)-扁桃酸，制備對照品溶液，用尚效 液相色譜方法進行檢測，得到標準曲線；
[0013] b、取待檢的替格瑞洛樣品，制備供試品溶液，用高效液相色譜方法進行檢測；
[0014] C、計算替格瑞洛樣品中的（1R，2S)-2-(3, 4-二氟苯基）環(huán)丙胺含量；
[0015] 步驟a和b所用高效液相色譜方法的色譜條件為：
[0016] C18色譜柱；流動相A為0. 05mol/L磷酸鹽緩沖液，流動相B為乙腈；
[0017] 梯度洗脫條件如下：
[0018]
[0019] 檢測波長為200nm~242nm。
[0020] 進一步的，步驟a中，制備對照品溶液的溶劑為乙腈-水；步驟b中，制備供試品溶 液的溶劑為乙腈-水。
[0021] 進一步的，所述的乙腈-水中，乙腈與水的體積比為35:65。
[0022] 進一步的，步驟a中，所述標準曲線是對照品色譜峰的峰面積與對照品濃度之間 的線性關系方程。
[0023] 進一步的，所述的色譜條件中，C18色譜柱為WatersXselectCSHC18柱，長度為 150mm，內(nèi)徑為4. 6mm，填料的粒徑為3. 5μm〇
[0024] 進一步的，所述的色譜條件中，柱溫為30°C~40°C。
[0025] 進一步的，所述的色譜條件中，流動相A的pH值為3. 0~4. 0 ;最好是，流動相A的 pH值為3. 5。
[0026] 進一步的，所述的色譜條件中，流速為0· 8ml/min~1.lml/min。
[0027] 進一步的，所述的色譜條件中，進樣體積為10μ1~50μ1 ;最好是，進樣體積為 20μ1〇
[0028] 進一步的，所述的色譜條件中，檢測波長為210nm。
[0029] 本發(fā)明提供了一種檢測替格瑞洛中（1R，2S)-2_(3, 4-二氟苯基）環(huán)丙胺的高效液 相色譜方法，（lR，2S)-2-(3,4-二氟苯基）環(huán)丙胺與其他雜質(zhì)之間的分離度高，其他雜質(zhì)不 干擾（lR，2S)-2-(3,4-二氟苯基）環(huán)丙胺的檢測；同時，本發(fā)明方法具有良好的專屬性、線 性關系、精密度、靈敏度和重復性，加樣回收率高，檢測結果準確、可靠，為監(jiān)控替格瑞洛藥 物中的（lR，2S)-2-(3,4-二氟苯基）環(huán)丙胺含量提供了一種行之有效的檢測方法，進一步 保證了替格瑞洛藥物的用藥安全。
[0030] 顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領域的普通技術知識和慣用手段，在不脫離 本發(fā)明上述基本技術思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
[0031] 以下通過實施例形式的【具體實施方式】，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進一步的詳細說 明。但不應將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容 所實現(xiàn)的技術均屬于本發(fā)明的范圍。
【附圖說明】
[0032] 圖1為本發(fā)明檢測條件下限度濃度的（lR，2S)-2_(3,4-二氟苯基）環(huán)丙胺對照品 溶液的HPLC圖。
[0033] 圖2為本發(fā)明檢測條件下扁桃酸對照品溶液的HPLC圖。
[0034] 圖3為本發(fā)明檢測條件下雜質(zhì)IV、雜質(zhì)V混合雜質(zhì)對照品溶液的HPLC圖。
[0035] 圖4為本發(fā)明檢測條件下（1R, 2S) _2_ (3, 4_二氟苯基）環(huán)丙胺（R)-扁桃酸和雜 質(zhì)IV、雜質(zhì)V混合溶液的HPLC圖。
[0036] 圖5為本發(fā)明檢測條件下供試品溶液的HPLC圖。
[0037] 圖6為對比試驗1色譜條件下（lR，2S)-2_(3,4-二氟苯基）環(huán)丙胺對照品溶液的 HPLC圖。
[0038] 圖7為對比試驗1色譜條件下扁桃酸對照品溶液的HPLC圖。
[0039] 圖8為對比試驗1色譜條件下雜質(zhì)IV對照品溶液的HPLC圖。
[0040] 圖9為對比試驗1色譜條件下混合雜質(zhì)溶液1的HPLC圖
[0041] 圖10為對比試驗1色譜條件下混合雜質(zhì)溶液2的HPLC圖
[0042] 圖11為對比試驗2色譜條件下（1R，2S)-2-(3, 4-二氟苯基）環(huán)丙胺對照品溶液 的HPLC圖。
[0043] 圖12為對比試驗2色譜條件下雜質(zhì)IV對照品溶液的HPLC圖。
[0044] 圖13為對比試驗2色譜條件下雜質(zhì)V對照品溶液的HPLC圖。
[0045] 圖14為對比試驗2色譜條件下雜質(zhì)VI對照品溶液的HPLC圖。
[0046] 圖15為對比試驗2色譜條件下混合雜質(zhì)溶液的HPLC圖。