吸水墊
(7)順次以適當重疊關(guān)系搭接在底板上，其特征在于該試劑條結(jié)合墊上包被具有相同激發(fā)不同發(fā)射波長熒光物質(zhì)(1，2，3)標記的不同檢測指標的探測分子和一種或多種質(zhì)控分子，分析膜上有檢測線(8)和質(zhì)控線，檢測線上包被多種待測指標捕獲分子(9)，質(zhì)控線上包被質(zhì)控分子捕獲分子；免疫層析開始時，待測指標分子和探測分子?熒光物質(zhì)在結(jié)合墊結(jié)合，后在分析膜上被檢測線中的捕獲分子捕獲，形成捕獲分子?待測分子?探測分子?熒光物質(zhì)復(fù)合物，置于多色熒光儀器下進行檢測，對檢測線照射相同波長的激發(fā)光，不同指標的不同熒光物質(zhì)激發(fā)后發(fā)射出不同波長的發(fā)射光，被光電材料捕捉后計算得出檢測數(shù)值，完成對多種檢測指標的同時檢測。
[0030]為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的詳細說明。
[0031]實施例1:多色熒光免疫層析試劑條的制備
[0032]I)多色熒光物質(zhì)偶聯(lián)不同探測分子:溶解于20?10Mmol的PBS緩沖液中，活化的360nm熒光物質(zhì)溶解于二甲基亞砜(DMF)中，然后將探測分子與360nm熒光物質(zhì)以1:1?1: 3混合，充分攪拌反應(yīng)lh，然后將溶液置于透析袋中梯度換液透析3次，每次6?8h，得到的溶液即為探測分子?熒光物質(zhì)復(fù)合物；
[0033]2)試劑條組裝:
[0034]a.結(jié)合墊的制備:結(jié)合墊選用玻璃纖維或者聚酯材質(zhì)，然后將結(jié)合墊用50mM PBS溶液(PH= 7.5)緩沖液浸泡，取出后干燥，將制得的探測分子?熒光物質(zhì)復(fù)合物均勻噴灑在結(jié)合墊上；
[0035]b.分析膜的制備:本發(fā)明優(yōu)選檢測線和質(zhì)控線融合為一條線的方法，將待測指標和質(zhì)控分子的捕獲分子用50mM PBS溶液(pH = 7.5)緩沖液稀釋至4mg/ml的濃度，0.8 μ L/cm在硝酸纖維素膜右端劃線得到檢測線，，在檢測線相隔5mm處在劃第二條檢測線，每條檢測線中的檢測項目只能和熒光物質(zhì)種類一樣多。
[0036]c.組裝:在底板上順次相互搭接的粘貼樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水紙，按要求切割成適當寬度的試紙條。
[0037]實施例二:優(yōu)選的同時檢測12指標的試劑條的結(jié)構(gòu)
[0038]本發(fā)明優(yōu)選一種同時檢測12種指標的多色熒光免疫層析試劑條，熒光物質(zhì)為激發(fā)波長360nm發(fā)射波長450nm的6?甲基香豆素，激發(fā)波長360nm發(fā)射波長525nm的丹磺酰肼，激發(fā)波長360nm發(fā)射波長615nm的三(二苯甲?；淄?單(菲羅啉)銪(III)，如圖1所示，12種指標同時檢測的試劑條共有3種熒光物質(zhì)，4條檢測線，12種指標的探測分子分成4份和3種熒光物質(zhì)形成標記的混合物后包被在結(jié)合墊上，每條檢測線上具有3種待測指標的捕獲分子，可以檢測12種待測指標，質(zhì)控線和檢測線融合。
[0039]結(jié)合墊中12種探測分子分別和3種熒光物質(zhì)形成如下復(fù)合物:探測分子a?丹磺酰肼，探測分子b?6?甲基香豆素，探測分子c?三(二苯甲?；淄?單(菲羅啉)銪(III)，探測分子d?丹磺酰肼，探測分子e?6?甲基香豆素，探測分子f?三(二苯甲?；淄?單(菲羅啉)銪(III)，探測分子g?丹磺酰肼，探測分子h?6?甲基香豆素，探測分子i?三(二苯甲?；卓?單(菲羅啉)銪(III)，探測分子j?丹磺酰肼，探測分子k?6?甲基香豆素，探測分子I?三(二苯甲酰基甲烷)單(菲羅啉)銪(III);四條檢測線上的捕獲分子分別是，檢測線1:捕獲分子a，捕獲分子b，捕獲分子C，檢測線2:捕獲分子d，捕獲分子e，捕獲分子f，檢測線3:，捕獲分子g，捕獲分子h，捕獲分子i，檢測線4:捕獲分子j，捕獲分子k，捕獲分子I (上述的排列組合可以任意進行，不局限于文中所述)。當層析反應(yīng)開始時，每條檢測線分別固定相應(yīng)的熒光物質(zhì)?探測分子復(fù)合物，再通過全自動熒光免疫層析分析儀的檢測，同時實現(xiàn)對多種指標的檢測分析。
【主權(quán)項】
1.一種同時檢測多種指標的多色熒光免疫層析試劑條，包括底板、樣品墊、結(jié)合墊、分析膜和吸水墊，樣品墊、結(jié)合墊、分析膜、吸水墊順次以適當重疊關(guān)系搭接在底板上，其特征在于該試劑條結(jié)合墊上包被具有相同激發(fā)不同發(fā)射波長的熒光物質(zhì)標記的不同檢測指標的探測分子和一種或多種質(zhì)控分子，分析膜上有檢測線和質(zhì)控線，檢測線上包被多種待測分子捕獲分子，質(zhì)控線上包被質(zhì)控分子捕獲分子；免疫層析開始時，待測分子和探測分子-熒光物質(zhì)在結(jié)合墊結(jié)合，后在分析膜上被檢測線中的捕獲分子捕獲，形成捕獲分子-待測分子-探測分子-熒光物質(zhì)復(fù)合物，置于多色熒光儀器下進行檢測，對檢測線照射相同波長的激發(fā)光，不同指標的不同熒光物質(zhì)激發(fā)后發(fā)射出不同波長的發(fā)射光，被光電材料捕捉后計算得出檢測數(shù)值，完成對多種檢測指標的同時檢測。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多色熒光免疫層析試劑條，其特征在于所述的分析膜上的檢測線有X條，X多1，所述的相同激發(fā)波長不同發(fā)射波長熒光物質(zhì)有Y種，Y多1，每條檢測線上能夠同時檢測Y種指標，試劑條同時能夠檢測x*Y種指標。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多色熒光免疫層析試劑條，其特征在于所述的分析膜上的質(zhì)控線可以選擇多種方式進行質(zhì)控，一種是質(zhì)控線單獨存在，可以選擇任意一種熒光物質(zhì)進行質(zhì)控，檢測指標為x*Y種；另一種是質(zhì)控線和一條或多條檢測線融合在一起，質(zhì)控指標和檢測指標共Χ*γ種，檢測和質(zhì)控指標任意組合。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多色熒光免疫層析試劑條，其特征在于所述的熒光物質(zhì)具有同樣的激發(fā)和不同的發(fā)射波長，熒光物質(zhì)之間發(fā)射峰明顯不重疊或重疊很少；優(yōu)選的熒光物質(zhì)在360nm激發(fā)時均有較強的吸收，發(fā)射波長在450_615nm范圍內(nèi)且具有明顯的區(qū)別分布，優(yōu)選的焚光物質(zhì)包括激發(fā)波長360nm發(fā)射波長450nm的6?甲基香豆素，激發(fā)波長350nm發(fā)射波長525nm的丹磺酰肼，激發(fā)波長360nm發(fā)射波長615nm的三(二苯甲?；淄?單(菲羅啉)銪(III)或包含上述3種熒光物質(zhì)的其他材料。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多色熒光免疫層析試劑條，其特征在于所述的結(jié)合墊為聚酯膜或玻璃纖維膜，分析膜為硝酸纖維素膜、尼龍膜或硝酸纖維素/醋酸纖維素混合膜，底板為聚酯或塑料板。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多色熒光免疫層析試劑條，其特征在于所述的結(jié)合墊可以舍去，熒光物質(zhì)標記抗體可以包被在分析膜上，包被位置位于分析膜靠近樣品墊一端的前端。
7.—種權(quán)利要求1所述的多色熒光免疫層析試劑條的制備方法，其特征在于包括以下步驟: 1)熒光物質(zhì)標記抗體:合成不同發(fā)射波長相同激發(fā)波長的熒光物質(zhì)，并分別將不同的檢測指標的特異性抗體以及質(zhì)控分子和上述熒光物質(zhì)相連后得到抗體/質(zhì)控分子修飾的熒光物質(zhì)，再將上述材料固定在結(jié)合墊上； 2)抗體包被:在分析膜上分別設(shè)有檢測線，質(zhì)控線和檢測線重合，固定能與質(zhì)控分子特異性結(jié)合的捕獲分子，檢測線固定上述待測分子不同抗原決定簇的特異性捕獲分子； 3)試劑條組裝:以樣品墊、結(jié)合墊、分析膜、吸水墊和底板構(gòu)建成熒光免疫層析試劑條，用斬切機切成一定寬度得所需的試劑條。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種同時檢測多種指標的多色熒光免疫層析試劑條，屬于醫(yī)學(xué)檢驗領(lǐng)域。該試紙條包括底板、樣品墊、結(jié)合墊、分析膜和吸水墊，樣品墊、結(jié)合墊、分析膜、吸水墊順次以適當重疊關(guān)系搭接在底板上，試劑條結(jié)合墊上包被具有相同激發(fā)波長不同發(fā)射波長熒光物質(zhì)標記的不同檢測指標的探測分子和一種或多種質(zhì)控分子，分析膜檢測線上包被多種待測指標捕獲分子，通過特異性結(jié)合反應(yīng)完成同時檢測多種指標。本發(fā)明試劑條成本降低，結(jié)構(gòu)簡化且達到了能夠同時、快捷檢測多種指標的目的。
【IPC分類】G01N21-64
【公開號】CN104749149
【申請?zhí)枴緾N201510147904
【發(fā)明人】金晶, 朱宗哲, 陳偉, 羅雅賽, 蘇恩本
【申請人】基蛋生物科技股份有限公司
【公開日】2015年7月1日
【申請日】2015年3月27日