血細胞檢測試劑及血細胞處理方法和識別方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本申請涉及血細胞檢測領(lǐng)域，特別是涉及一種血細胞檢測試劑，W及利用該試劑 對血細胞進行處理、識別的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 外周血中的血細胞由造血干細胞增殖、分化、發(fā)育而成。血細胞逐漸成熟并進入外 周血行使特定的功能：其中網(wǎng)織紅細胞（Reticulocytes, RET)是尚未完全成熟的紅細胞。 未成熟白細胞是指未完成分化、發(fā)育的白細胞（未成熟白細胞也稱為幼稚白細胞，主要包 括原始細胞（Blast)、幼稚粒細胞（IG)、幼稚淋己細胞等）。臨床上，需要檢驗血液樣本中的 網(wǎng)織紅細胞和未成熟白細胞。
[0003]美國專利5492833公開了一種利用紅細胞影化試劑去除紅細胞內(nèi)血紅蛋白，并通 過光散射的檢測方法實現(xiàn)網(wǎng)織紅細胞分類的方法。美國專利589173U5812127公開了可W 染色網(wǎng)織紅細胞和白細胞試劑英光染料，可W實現(xiàn)網(wǎng)織紅細胞與紅細胞的區(qū)分，并能夠差 異染色白細胞和網(wǎng)織紅細胞，去除白細胞的干擾。但該些網(wǎng)織紅細胞檢測的試劑并不能就 未成熟白細胞進行檢測。
[0004] 中國專利CN94102901. 8公開了使幼稚白細胞與其它細胞類群在體積和內(nèi)部結(jié)構(gòu) 產(chǎn)生差別的試劑，用該試劑處理血液等液體樣本，檢測電導信號（DC)和高頻電流信號（RF) 實現(xiàn)幼稚白細胞的區(qū)分。美國專利5958776公開了一種溶解紅細胞，損傷成熟白細胞，保護 并維持未成熟細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)，同時對受損傷的白細胞進行特異性英光染色，實現(xiàn)未成熟細 胞區(qū)分。該幾種方法均需要溶解紅細胞、容易受到紅細胞碎片的干擾，同時對白細胞的損傷 破壞了白細胞的內(nèi)部形態(tài)結(jié)構(gòu)信息。
[0005]綜上所述，目前的檢測方法中無同時檢測未成熟白細胞、白細胞及網(wǎng)織紅細胞的 方法的報道。如可通過一種試劑，實現(xiàn)在一次檢測中對多種細胞進行檢測，將會在很大程度 上降低檢測成本，并減少儀器的復雜性，對醫(yī)療設備的普及和推廣具有較大的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 針對上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本申請的目的在于提供一種可實現(xiàn)同時對多種血細胞 進行檢測的試劑，尤其是提供一種可現(xiàn)實同時對未成熟白細胞和網(wǎng)織紅細胞進行檢測的試 劑。
[0007] 同時，本申請還提供了一種血細胞處理方法和一種血細胞識別方法。
[0008] 為實現(xiàn)上述目的，本申請采用了 W下技術(shù)方案。
[0009] 本申請?zhí)峁┝艘环N血細胞檢測試劑，該試劑包括：英光染料、球形化組分和有機 醇。其采用的英光染料具有細胞通透性，且可W對細胞內(nèi)核酸物質(zhì)特異性染色。其采用的球 形化組分能夠球形化紅細胞，保持紅細胞膜完整且不對白細胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)產(chǎn)生破壞作用。 其采用的有機醇能夠增加細胞通透性，協(xié)助英光染料進入細胞。
[0010] 本申請還公開了一種血細胞處理方法，該方法包括：將待測樣品與英光染料、球形 化組分和有機醇混合，得到處理后的樣品。該英光染料具有細胞通透性，且可w對細胞內(nèi)核 酸物質(zhì)特異性染色。該球形化組分能夠球形化紅細胞，保持紅細胞膜完整且不對白細胞的 內(nèi)部結(jié)構(gòu)產(chǎn)生破壞作用。該有機醇能夠增加細胞通透性，協(xié)助英光染料進入細胞。
[0011] 在本申請的【具體實施方式】中，上述處理方法中的混合時間優(yōu)選為5到60砂，更優(yōu) 選20-50砂。
[0012] 此外，本申請還公開了一種血細胞識別方法，該識別方法包括（1)將含有血細胞的 待測樣品與上述包括英光染料、球形化組分和有機醇的試劑混合反應，使待測樣品中的紅 細胞球形化，保持紅細胞膜完整且不破壞白細胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)，對細胞內(nèi)部核酸物質(zhì)進行英 光染色，該血細胞中含有網(wǎng)織紅細胞和未成熟白細胞。（2)檢測處理后的血細胞的英光信號 和至少一種散射光信號，根據(jù)檢測結(jié)果同時識別出網(wǎng)織紅細胞和未成熟白細胞。
[0013] 在本申請的【具體實施方式】中，上述識別方法中的混合時間優(yōu)選為5到60砂，更優(yōu) 選20-50砂。
[0014] 同時，本申請也提供了上述試劑和試劑盒在血細胞檢測領(lǐng)域的應用。
[0015] 本申請的有益效果是；本申請?zhí)峁┑脑噭┲邪ㄓ⒐馊玖?、球形化組分與有機醇， 與血細胞反應時H者配合使用產(chǎn)生協(xié)同作用，使得細胞的膜通透性增加，可實現(xiàn)在不破壞 血細胞細胞膜的情況下染色網(wǎng)織紅細胞、成熟白細胞和未成熟白細胞等細胞。將待測樣品 與本申請?zhí)峁┑脑噭┗旌弦欢〞r間再通過光學檢測，即可實現(xiàn)通過一種試劑在一次檢測中 對不同血細胞，尤其是對未成熟白細胞和網(wǎng)織紅細胞的同時檢測。
【附圖說明】
[0016] 圖1是本申請的一種血細胞檢測裝置的光學檢測系統(tǒng)模式圖；
[0017] 圖2是本申請試劑檢測血液樣本各細胞類群分布的示意圖，圖2-A為前向散射 光-側(cè)向英光檢測結(jié)果示意圖，圖中通過側(cè)向英光強度和前向散射光強度可W劃分為實線 標志區(qū)域，分別為紅細胞、網(wǎng)織紅細胞、血小板、幼稚粒細胞、原始細胞和成熟白細胞分布區(qū) 域；圖2-B為側(cè)向散射光-側(cè)向英光檢測結(jié)果示意圖，圖中通過側(cè)向英光強度和側(cè)向散射光 強度可W劃分實線標志區(qū)域，分別為紅細胞、血小板、幼稚粒細胞、原始細胞、成熟白細胞分 布區(qū)域；
[0018] 圖3是本申請實施例一中含有網(wǎng)織紅細胞與未成熟白細胞的樣本與檢測試劑賠 育不同時間后的散點圖（圖3-A的賠育時間為3. 6砂；圖3-B的賠育時間為12. 6砂；圖3-C 的賠育時間為32. 6砂；圖3-D的賠育時間為62. 6砂）；
[001引圖4是本申請中實施例二中含有網(wǎng)織紅細胞樣本檢測散點圖，圖中根據(jù)前向散射 光和英光強度差異劃分出紅細胞、網(wǎng)織紅細胞、血小板、成熟白細胞分布區(qū)域；成熟白細胞 類群進一步可W劃分為中性粒細胞、單核細胞和淋己細胞區(qū)域；
[0020]圖5是本申請中實施例H含幼稚粒細胞的血液樣本檢測散點圖，圖5-A為前向散 射光-側(cè)向英光二維散點圖，成熟白細胞英光前方為幼稚粒細胞分布區(qū)域；圖5-B為側(cè)向散 射光和側(cè)向英光二維散點圖，成熟白細胞英光前方為幼稚粒細胞區(qū)域，具有高的側(cè)向散射 光信號；
[002。 圖6是本申請中實施例四含原始細胞的血液樣本檢測散點圖，圖6-A為前向散射 光-側(cè)向英光二維散點圖，原始細胞分布類群分布在較成熟白細胞英光信號低的區(qū)域；圖 6-B為側(cè)向散射光和側(cè)向英光二維散點圖，原始細胞分布在側(cè)向散射光相對低的區(qū)域，具有 較低的側(cè)向散射光信號；
[0022] 圖7是本申請中實施例五含網(wǎng)織紅細胞、幼稚粒細胞和原始細胞的血液樣本的經(jīng) 前向散射光、側(cè)向散射光和側(cè)向英光信號檢測結(jié)果圖，圖7-A為前向散射光-側(cè)向英光二維 散點圖，幼稚粒細胞、原始細胞分布類群分布在較成熟白細胞英光信號低的區(qū)域；圖7-B為 側(cè)向散射光和側(cè)向英光二維散點圖，幼稚粒細胞較原始細胞具有更高的側(cè)向散射光信號；
[0023]圖8是本申請中實施例六中含有網(wǎng)織紅細胞的樣本檢測結(jié)果與鏡檢結(jié)果對比散 點圖，兩組結(jié)果相關(guān)性系數(shù)R為0. 99。
【具體實施方式】
[0024] 定義
[0025] 除另有說明外，本文中使用的術(shù)語具有W下含義。
[0026] 本文中使用的術(shù)語"烷基"，無論是單獨使用還是與其他基團結(jié)合使用，指包含 1-18、優(yōu)選1-12,、更優(yōu)選1-6個碳原子的直鏈烷基和支鏈烷基。如提及單個烷基如"正丙 基"，則只特指直鏈烷基，如提及單個支鏈烷基如"異丙基"，則只特指支鏈烷基。例如，"Ci_e 烷基"包括Ci_4烷基、Ci_3烷基、甲基、己基、正丙基、異丙基和叔了基。類似的規(guī)則也適用于 本說明書中使用的其他基團。
[0027] 本文中使用的術(shù)語"烷基醇"是指至少一個羥基與上述定義的"烷基"結(jié)合的醇， 該"烷基"包括直鏈烷基和支鏈烷基，該"烷基醇"可包含一個或多個羥基。例如，本文中的 Ci_e烷基醇包括甲醇、己醇、丙醇、下醇、己二醇、丙二醇、丙H醇等。
[0028] 本申請中的血細胞檢測試劑和試劑盒，其檢測目標為血細胞，該血細胞包括紅細 胞、白細胞和血小板，其中紅細胞包括成熟紅細胞(無核紅細胞）和網(wǎng)織紅細胞，白細胞包括 成熟白細胞和未成熟白細胞，其中未成熟白細胞主要包括幼稚粒細胞和原始細胞。適用于 本申請的待測樣品具體包括但不限于血液樣品、骨髓樣品和體液等。
[0029] 現(xiàn)有技術(shù)中對上述血細胞的檢測，通常情況下需