一種同時檢測多種指標的多色熒光免疫層析試劑條的制作方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種以具有相同同激發(fā)不同發(fā)射波長的熒光物質為基礎，可以同時進行多種指標檢測的多色熒光免疫層析試劑條，屬于醫(yī)學檢驗領域。
【背景技術】
[0002]免疫層析技術是近年來興起的一種快速診斷技術，具有精確、快速和操作簡單等特點。其原理是包括樣品墊、結合墊、分析膜和吸水墊，將特異的抗體先固定在分析膜上特定的檢測線上，當樣品墊上添加樣品后，隨著毛細作用開始做層析運動。當移動至檢測線時，樣品中抗原和抗體特異性結合，若是膠體金、免疫酶染色或熒光可使這一區(qū)域產(chǎn)生一定顏色，從而實現(xiàn)特異性診斷過程。
[0003]就現(xiàn)有技術來說，免疫層析技術特別是膠體金免疫層析技術已經(jīng)是一種較成熟、工藝穩(wěn)定的快捷，簡便現(xiàn)場診斷技術，但其通常只能對一種指標檢測，同時通常應用在半自動的檢測儀器上，實現(xiàn)多種指標同時全自動檢測的技術暫時還不成熟。
[0004]同時熒光免疫層析技術近年來也得到大力的發(fā)展，其較膠體金、酶染色等免疫層析方法測量結果更加迅速準確，能夠將多指標同熒光免疫層析結合形成多指標同時檢測的熒光免疫層析產(chǎn)品十分必要。
[0005]中國專利CN201110451642X公開了一種定量檢測肌鈣蛋白I/肌酸激酶同工酶/肌紅蛋白的熒光免疫層析方法及其試劑盒，該專利利用量子點優(yōu)良的熒光特性，結合熒光多色標記技術和免疫層析技術，實現(xiàn)多種指標的多色熒光同時檢測。中國專利CN201410501474.4公開了一種同步定量多種腫瘤標志物的量子點免疫層析試條及其方法，該專利同樣利用量子點材料結合免疫層析技術實現(xiàn)多種指標同時多色熒光檢測。中國專利CN201410151364X公開了一種多色熒光免疫層析蛋白芯片，該專利描述了一種結合熒光免疫層析和蛋白芯片技術的芯片結構，其中包括混合多種指標于一起的檢測質控線，具有多種檢測標志物的結合墊等結構。上述專利均描述了同時檢測多種指標的技術，但是前兩個專利主要是運用量子點材料作為熒光物質，工藝復雜，成本很高，且其分析膜中的檢測區(qū)域與傳統(tǒng)試劑條相同，檢測項目還是偏少；后一個專利雖然公開了多色熒光的檢測原理，但其中的結構和材料等部分均沒有描述清楚，內容需要補充較多。
[0006]綜合現(xiàn)有的技術和發(fā)展前景，研發(fā)一種同時檢測多種指標的多色熒光免疫層析產(chǎn)品十分必要。

【發(fā)明內容】

[0007]本發(fā)明針對現(xiàn)有技術的上述不足，公開了一種同時檢測多種指標的多色熒光免疫層析試劑條。
[0008]為實現(xiàn)上述目標，本發(fā)明采用以下技術方案予以實現(xiàn):
[0009]一種同時檢測多種指標的多色熒光免疫層析試劑條，包括底板、樣品墊、結合墊、分析膜和吸水墊，樣品墊、結合墊、分析膜、吸水墊順次以適當重疊關系搭接在底板上，其特征在于該試劑條結合墊上包被具有相同激發(fā)不同發(fā)射波長熒光物質標記的不同檢測指標的探測分子和一種或多種質控分子，分析膜上有檢測線和質控線，檢測線上包被多種待測分子捕獲分子，質控線上包被質控分子捕獲分子；免疫層析開始時，待測分子和探測分子-熒光物質在結合墊結合，后在分析膜上被檢測線中的捕獲分子捕獲，形成捕獲分子-待測分子-探測分子-熒光物質復合物，置于多色熒光儀器下進行檢測，對檢測線照射相同波長的激發(fā)光，不同指標的不同熒光物質激發(fā)后發(fā)射出不同波長的發(fā)射光，被光電材料捕捉后計算得出檢測數(shù)值，完成對多種檢測指標的同時檢測。
[0010]所述的分析膜上的檢測線有X條，X多1，所述的相同激發(fā)波長不同發(fā)射波長熒光物質有Y種，Y ^ I，每條檢測線上能夠同時檢測Y種指標，試劑條同時能夠檢測X*Y種指標。
[0011]所述的分析膜上的質控線可以選擇多種形式進行質控，一種是質控線單獨存在，，則可以選擇任意一種熒光物質進行質控，檢測指標為Χ*γ種；另一種是質控線和檢測線融合在一起，則質控指標和檢測指標共計Χ*Υ種，檢測和質控指標任意組合。
[0012]一種優(yōu)選的檢測試劑條具有4條檢測線，3種不同發(fā)射波長熒光物質，質控線和一條檢測線融合，質控熒光物質為上述3種中的I種發(fā)射波長，故每條檢測線可以檢測3種指標，去掉一個質控，共檢測11種指標。
[0013]所述的熒光物質具有同樣的激發(fā)波長和不同的發(fā)射波長，熒光物質之間發(fā)射峰明顯不重疊或重疊很少；優(yōu)選的熒光物質在360nm激發(fā)波長時均有較強的吸收，發(fā)射波長在450-615nm范圍內且具有明顯的區(qū)別分布，優(yōu)選的熒光物質包括激發(fā)波長360nm發(fā)射波長450nm的6?甲基香豆素，激發(fā)波長350nm發(fā)射波長525nm的丹磺酰肼，激發(fā)波長360nm發(fā)射波長615nm的三(二苯甲?；淄?單(菲羅啉)銪(III)或包含上述3種熒光物質的其他材料。
[0014]所述的結合墊為聚酯膜或玻璃纖維膜，分析膜為硝酸纖維素膜、尼龍膜或硝酸纖維素/醋酸纖維素混合膜，底板為聚酯或塑料板。
[0015]所述的結合墊可以舍去，熒光物質標記抗體可以包被在分析膜上，包被位置位于分析膜靠近樣品墊一端的前端。
[0016]一種如權利要求1所述的多色熒光免疫層析試劑條的制備方法，其特征在于包括以下步驟:
[0017]I)熒光物質標記抗體:合成不同發(fā)射波長相同激發(fā)波長的熒光物質，并分別將不同的檢測指標的特異性抗體以及質控分子和上述熒光物質相連后得到抗體/質控分子修飾的熒光物質，再將上述材料固定在結合墊上；
[0018]2)抗體包被:在分析膜上分別設有檢測線，質控線和檢測線重合，固定能與質控分子特異性結合的捕獲分子，檢測線固定上述待測分子不同抗原決定簇的特異性捕獲分子;
[0019]3)試劑條組裝:以樣品墊、結合墊、分析膜、吸水墊和底板構建成熒光免疫層析試劑條，用斬切機切成一定寬度得所需的試劑條。
[0020]有益效果
[0021]本發(fā)明將多色熒光表及技術，免疫層析技術和具有相同激發(fā)波長不同發(fā)射波長的熒光物質結合應用，完成了同時檢測多種指標的免疫層析試劑條的開發(fā)過程，該試劑條具有以下優(yōu)點:
[0022]首先，本發(fā)明所述試劑條采用360nm激發(fā)波長，450-615nm的多種區(qū)別發(fā)射波長的熒光物質進行抗體標記，較現(xiàn)有的量子點等熒光物質制作簡單，成本較低，且標記和檢測性能均表現(xiàn)良好；
[0023]其次，本發(fā)明將多種檢測指標的捕獲分子混合在一起固定在多條檢測線上，在試劑條結合墊上包被標記了多色熒光物質的多種檢測指標的探測分子，免疫層析開始后，在每條檢測線上都能檢測出幾種不同的指標，最終實現(xiàn)了多種指標的同時檢測，同時該試劑條的結構發(fā)生改變，傳統(tǒng)的質控線和檢測線融為一條線，同樣利用熒光物質進行質控，試劑條結構簡化，制作難度降低。
[0024]最后，本發(fā)明試劑條可以應用在全自動、半自動等多種儀器上，特別是可以應用在全自動熒光免疫定量分析裝置中，多指標和全自動結合，檢測效率更是大大提高。
【附圖說明】
[0025]圖1本發(fā)明多色熒光免疫層析試劑條結構示意圖。
[0026]其中，1、2、3為三種熒光物質，，4為樣品墊，5為結合墊，6為分析膜，7為吸水墊，8為檢測線，9為捕獲分子。
【具體實施方式】
[0027]本發(fā)明公開了一種同時檢測多種指標的多色熒光免疫層析試劑條，本領域技術人員可以借鑒本文內容，適當改進工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對于本領域技術人員來說是顯而易見的，他們都被視為包括在本發(fā)明之內。本發(fā)明的試劑條已經(jīng)通過較佳的實施例進行描述，相關人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內容】
、精神和范圍內對文本所述的方法和應用進行改動或是當變更與組合，來實現(xiàn)和應用本發(fā)明技術。
[0028]本發(fā)明的技術方案為:
[0029]如圖1所示，一種同時檢測多種指標的多色熒光免疫層析試劑條，包括底板、樣品墊(4)、結合墊(5)、分析膜(6)和吸水墊(7)，樣品墊(4)、結合墊(5)、分析膜￠)、