本申請(qǐng)涉及抗體領(lǐng)域，尤其是一種抗hpv16型e7蛋白的單克隆抗體、檢測(cè)試紙和檢測(cè)試劑盒。
背景技術(shù)：
：宮頸癌是在女性中發(fā)病率極高的癌癥，并且在99.7％的情況下與高危人乳頭瘤病毒感染相關(guān)，全世界每年有約520000例宮頸癌，近260000人死亡。hpv有超過(guò)100種不同的分離株，已根據(jù)它們與宮頸癌或與良性宮頸病變或非典型增生的關(guān)聯(lián)性被寬泛地再分成高危和低危亞型。低危險(xiǎn)型hpv包括hpv6、11、42、43、44等，常引起外生殖器濕疣等良性病變包括宮頸上皮內(nèi)低度病變(cini)，高危險(xiǎn)型hpv包括hpv16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68，cp8304等亞型，與宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)高度病變(cinii/iii)的發(fā)生相關(guān)，尤其是hpv16和18型，其中hpv16占50%以上。人乳頭瘤病毒(humanpapillomavirus，hpv)是一種嗜上皮性病毒，共有3個(gè)基因區(qū)組成，包括早期區(qū)(earlyregion，e區(qū))、晚期區(qū)(lateregion，l區(qū))與非編碼區(qū)(uncodingregion，ucr)或上游調(diào)控區(qū)(urr)。e區(qū)按順序?yàn)閑6、e7、e1、e2、e3、e4和e5共7個(gè)基因，參與病毒dna的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、編碼病毒蛋白、維持細(xì)胞內(nèi)病毒的高拷貝數(shù)的基因，其中e6和e7是hpv的主要致癌基因，與病毒細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能及致癌性有關(guān)。e6和e7蛋白使腫瘤阻抑蛋白p53和prb鈍化，分別解除細(xì)胞周期控制和抑制細(xì)胞凋亡。因此，用于測(cè)定腫瘤中的hpv狀態(tài)的最佳方法是測(cè)量腫瘤細(xì)胞中的e6/e7蛋白。高危型人乳頭瘤病毒(hpv)已被確認(rèn)為導(dǎo)致宮頸癌的誘因，但90%以上的hpv感染是一過(guò)性的，在2年內(nèi)會(huì)被免疫系統(tǒng)清除。當(dāng)hpv病毒發(fā)生持續(xù)性感染后，特別是hpv的dna和人類宮頸上皮細(xì)胞的dna發(fā)生整合后，e6，e7基因會(huì)大量表達(dá)一種稱為mrna的物質(zhì)，從而大量產(chǎn)生致癌蛋白，使人類細(xì)胞逐漸發(fā)生癌變。目前宮頸癌的篩查方法有3類：1.傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)方法檢測(cè)hpv包括巴氏涂片細(xì)胞病理學(xué)檢測(cè)、陰道鏡檢查、宮頸活檢組織病理學(xué)檢查等。宮頸細(xì)胞學(xué)篩查特異性高，但是靈敏度較低，同時(shí)花費(fèi)很高。細(xì)胞出現(xiàn)病變前已經(jīng)有hpv感染，所以必須結(jié)合其他方法。2.hpvdna的檢測(cè)以上已經(jīng)提到高危型hpv的持續(xù)感染時(shí)宮頸癌的直接病因，在細(xì)胞學(xué)篩查正常前，hpvdna的檢測(cè)很重要。目前應(yīng)用最多的是pcr，其次是雜交捕獲技術(shù)。pcr靈敏度高，可以同時(shí)診斷多個(gè)亞型，但會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性，特異性低；雜交捕獲技術(shù)沒(méi)有假陽(yáng)性，但需要專業(yè)設(shè)備、專業(yè)人才，目前不能推廣使之受到限制。3.血清學(xué)方法和免疫學(xué)方法主要是檢測(cè)患者血清中的l1抗體或是用抗體檢測(cè)抗原。但l1抗體在hpv清除后幾個(gè)月到1年后都有較高的效價(jià)，所以血清中的l1抗體的檢測(cè)無(wú)法確定具體感染日期。用elisa檢測(cè)血清中的hpve6、e7特異性抗體，目前在hpv16陽(yáng)性的口腔癌患者血清中可以檢測(cè)到e6、e7特異性抗體，在其他hpv相關(guān)癌癥中沒(méi)有研究過(guò)。用抗體檢測(cè)抗原的方法主要指免疫組化法，因?yàn)樵摲椒ǖ臅r(shí)間很長(zhǎng)，操作繁瑣。所以血清學(xué)和免疫學(xué)方法檢測(cè)的應(yīng)用受到限制。以上檢測(cè)hpv的方法在宮頸癌及癌前病變篩查和癌前預(yù)報(bào)中發(fā)揮了重要作用。但是有一個(gè)共同的局限性：操作程序復(fù)雜、需要專業(yè)的儀器設(shè)備、成本高，不易推廣。因此建立一種簡(jiǎn)單快速的檢測(cè)方法迫在眉睫。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本申請(qǐng)?zhí)峁┮环N抗hpv16型e7蛋白的單克隆抗體、檢測(cè)試紙和檢測(cè)試劑盒，可簡(jiǎn)單快速地檢測(cè)出hpv型e7蛋白。根據(jù)本申請(qǐng)的第一方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┮环N抗hpv16型e7蛋白的單克隆抗體，其與hpv16型e7蛋白結(jié)合位點(diǎn)是：hpv16型e7蛋白第30-36氨基酸、hpv16型e7蛋白第36-43氨基酸、hpv16型e7蛋白第62-73氨基酸或hpv16型e7蛋白第73-77氨基酸。根據(jù)本申請(qǐng)的第二方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┮环Nhpv16型e7蛋白的檢測(cè)試紙，包括背襯以及固定于背襯上的樣品墊、結(jié)合墊、nc膜和吸水墊；結(jié)合墊貼合固定于樣品墊下方，nc膜的一端貼合固定于結(jié)合墊下方，另一端與吸水墊相連；所述nc膜上噴涂有檢測(cè)抗體，所述檢測(cè)抗體包括權(quán)利要求1所述的抗hpv16型e7蛋白的單克隆抗體和羊抗鼠二抗，所述的抗hpv16型e7蛋白的單克隆抗體用作檢測(cè)線，所述羊抗鼠二抗用作質(zhì)控線；所述結(jié)合墊上包被有熒光微球標(biāo)記抗體。優(yōu)選的，所述nc膜上檢測(cè)抗體的包被量為0.05～0.5μg，所述結(jié)合墊上熒光微球標(biāo)記抗體的包被量為0.05～0.5μg。優(yōu)選的，所述熒光微球標(biāo)記抗體為上述抗hpv16型e7蛋白的單克隆抗體。優(yōu)選的，所述熒光微球標(biāo)記抗體通過(guò)如下方法制備獲得：用活化液替換微球原有保存液；加入edc和sulfo-nhs進(jìn)行活化：稱取一定量的edc和sulfo-nhs，溶解后加入微球溶液中旋轉(zhuǎn)反應(yīng)15-20min；去除未反應(yīng)或殘余的反應(yīng)物；用反應(yīng)液超聲重懸微球，然后加入一定量的待標(biāo)記蛋白，避光反應(yīng)1-4小時(shí)；去除未偶聯(lián)的蛋白；封閉微球上未偶聯(lián)的反應(yīng)基團(tuán)：用封閉液反應(yīng)0.5-1小時(shí)或用封閉液重復(fù)進(jìn)行去除未偶聯(lián)的蛋白操作；用保存液重懸微球至原體積，2-8℃保存?zhèn)溆?。根?jù)本申請(qǐng)的第三方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┮环Nhpv16型e7蛋白的檢測(cè)試紙的制備方法，包括如下本步驟：使用點(diǎn)膜儀將上述抗hpv16型e7蛋白的單克隆抗體及羊抗鼠二抗噴涂在nc膜上,分別作為檢測(cè)線與質(zhì)控線,經(jīng)36-38℃干燥箱干燥過(guò)夜；同時(shí)將熒光微球標(biāo)記抗體噴涂在結(jié)合墊上，常溫下真空干燥2h；將nc膜、結(jié)合墊、樣品墊、吸水墊及背襯組裝好后,切割成試紙條,加干燥劑于4~30℃密封保存。根據(jù)本申請(qǐng)的第四方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┮环Nhpv16型e7蛋白的檢測(cè)試劑盒，包括盒體以及設(shè)置在盒體內(nèi)的上述的hpv16型e7蛋白的檢測(cè)試紙。根據(jù)本申請(qǐng)的第五方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┮环N使用上述檢測(cè)試劑盒的hpv16型e7蛋白的檢測(cè)方法，包括如下步驟：制備人體宮頸脫落細(xì)胞裂解液，獲取待檢測(cè)的人體宮頸脫落細(xì)胞樣本，加入所述裂解液中，渦旋震蕩1-5min，放入冰箱凍融1-3次，再次震蕩1-5min，離心5-10min，收集上清，加入到所述檢測(cè)試劑盒中，并將檢測(cè)試劑盒置于熒光檢測(cè)儀孵育倉(cāng)；熒光檢測(cè)儀自動(dòng)檢測(cè)，讀取檢測(cè)試劑盒上的發(fā)光值；熒光檢測(cè)儀依據(jù)所述發(fā)光值確定樣本中hpv16型e7蛋白含量，當(dāng)hpv16型e7蛋白含量大于預(yù)定值時(shí)，確定樣本中hpv16型e7蛋白呈陽(yáng)性，否則，確定樣本中hpv16型e7蛋白呈陰性。優(yōu)選的，制備人體宮頸脫落細(xì)胞裂解液的過(guò)程包括如下步驟：用1mm-100mm緩沖液配置體積百分比為0.1%-5%的表面活性劑；用之前加入終濃度為0.1mm-1mm蛋白酶抑制劑；所述的表面活性劑為tween20、triton-100和十二烷基磺酸鈉中的至少一種，所述的緩沖液為硼酸鹽溶液、tris-hcl或碳酸鹽溶液，所述的蛋白酶抑制劑為pmsf和antipain中的至少一種。優(yōu)選的，所述預(yù)定值為7.3ng/ml。本申請(qǐng)的有益效果是，樣本加入到樣本墊后，經(jīng)層析作用，hpv16型e7蛋白先后與熒光微球標(biāo)記抗體和檢測(cè)抗體結(jié)合，最后用配套的熒光檢測(cè)儀檢測(cè)熒光信號(hào)，由于熒光信號(hào)與e7蛋白含量呈正相關(guān)，由此實(shí)現(xiàn)對(duì)人體宮頸脫落細(xì)胞中的hpv16型e7蛋白的定量檢測(cè)。相比于原有檢測(cè)方法，該方法無(wú)需操作人員進(jìn)行繁多的操作程序，更加簡(jiǎn)單、快捷。本發(fā)明直接檢測(cè)高危型hpv16型e7致癌蛋白的表達(dá)量，從而對(duì)于高危型hpv的感染程度有了精準(zhǔn)的判斷，方便了后續(xù)的治療。附圖說(shuō)明圖1為本申請(qǐng)一種實(shí)施例的hpv16型e7蛋白的檢測(cè)試紙的結(jié)構(gòu)示意圖；圖2為本申請(qǐng)一種實(shí)施例的hpv16型e7蛋白的檢測(cè)試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖；圖3為本申請(qǐng)一種實(shí)施例的通過(guò)擬合法得到的hpv16型e7蛋白的標(biāo)準(zhǔn)曲線。具體實(shí)施方式下面通過(guò)具體實(shí)施方式結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。本申請(qǐng)實(shí)施例提供一種抗hpv16型e7蛋白的單克隆抗體，其與hpv16型e7蛋白具有如下結(jié)合位點(diǎn)：hpv16型e7蛋白第30-36氨基酸、hpv16型e7蛋白第36-43氨基酸、hpv16型e7蛋白第62-73氨基酸或hpv16型e7蛋白第73-77氨基酸，該抗體與hpv16型e7蛋白特異結(jié)合。本申請(qǐng)實(shí)施例提供一種hpv16型e7蛋白的檢測(cè)試紙，如圖1所示，其包括背襯1以及固定于背襯1上的樣品墊2、結(jié)合墊3、nc膜4和吸水墊5。其中，樣品墊2用于放置待檢測(cè)樣品，結(jié)合墊3貼合固定于樣品墊1下方，nc膜4用于發(fā)生免疫反應(yīng)，其一端貼合固定于結(jié)合墊3下方，另一端與吸水墊5相連。在所述nc膜4上噴涂有檢測(cè)抗體，所述檢測(cè)抗體包括上述的抗hpv16型e7蛋白的單克隆抗體和羊抗鼠二抗，所述抗hpv16型e7蛋白的單克隆抗體用作檢測(cè)線41，所述羊抗鼠二抗用作質(zhì)控線42。在所述結(jié)合墊3上包被有熒光微球標(biāo)記抗體。在使用時(shí)，將待檢測(cè)樣品滴加到樣品墊2，待檢測(cè)樣品將沿圖中的層析方向，依次經(jīng)過(guò)樣品墊2、結(jié)合墊3、nc膜4，并在nc膜上發(fā)生免疫反應(yīng)。從而可在檢測(cè)線41和質(zhì)控線42上觀察到相應(yīng)的反應(yīng)結(jié)果。具體的，為了保證反應(yīng)的充分進(jìn)行，使反應(yīng)結(jié)果可見，所述nc膜4上檢測(cè)抗體的包被量為0.05～0.5μg，所述結(jié)合墊5上熒光微球標(biāo)記抗體的包被量為0.05～0.5μg。且所述熒光微球標(biāo)記抗體為上述的抗hpv16型e7蛋白的單克隆抗體。在一種實(shí)施例中，所述熒光微球標(biāo)記抗體通過(guò)如下方法制備獲得：用活化液替換微球原有保存液：依次進(jìn)行離心、去上清和活化液超聲重懸操作；加入edc和sulfo-nhs進(jìn)行活化：稱取一定量的edc和sulfo-nhs，溶解后加入微球溶液中旋轉(zhuǎn)反應(yīng)15-20min；去除未反應(yīng)或殘余的反應(yīng)物：依次進(jìn)行離心、去上清和活化液超聲重懸操作；用反應(yīng)液超聲重懸微球，然后加入一定量的待標(biāo)記蛋白，避光反應(yīng)1-4小時(shí)；去除未偶聯(lián)的蛋白：依次進(jìn)行離心、去上清和活化液超聲重懸操作；封閉微球上未偶聯(lián)的反應(yīng)基團(tuán)：用封閉液反應(yīng)0.5-1小時(shí)或用封閉液重復(fù)進(jìn)行去除未偶聯(lián)的蛋白操作；用保存液重懸微球至原體積，2-8℃保存?zhèn)溆?。本申?qǐng)實(shí)施例提供一種hpv16型e7蛋白的檢測(cè)試紙的制備方法，包括如下本步驟：使用點(diǎn)膜儀將上述的抗hpv16型e7蛋白的單克隆抗體及羊抗鼠二抗噴涂在nc膜上,分別作為檢測(cè)線與質(zhì)控線,經(jīng)36-38℃干燥箱干燥過(guò)夜；同時(shí)將熒光微球標(biāo)記抗體噴涂在結(jié)合墊上，常溫下真空干燥2h；將nc膜、結(jié)合墊、樣品墊、吸水墊及背襯按照上述的檢測(cè)試紙的結(jié)構(gòu)組裝粘貼好后,切割成試紙條,加干燥劑于4~30℃密封保存。具體的，上述的點(diǎn)膜儀可以是bio-dotxyz3000型點(diǎn)膜儀，或者其他型號(hào)的點(diǎn)膜儀。nc膜的干燥溫度可以選用近似人體體溫的37℃。結(jié)合墊的干燥溫度可以選用30℃左右的常溫。本申請(qǐng)實(shí)施例提供一種hpv16型e7蛋白的檢測(cè)試劑盒，如圖2所示，包括100盒體以及設(shè)置在盒體100內(nèi)的上述的hpv16型e7蛋白的檢測(cè)試紙。所述盒體100的表面在樣品墊2的上方開設(shè)有采樣口101，待檢測(cè)樣品通過(guò)采樣口101加入到樣品墊2上。所述盒體100的表面在檢測(cè)線41與質(zhì)控線42上方開設(shè)有觀察口102，通過(guò)該觀察口102可觀察到nc墊上的反應(yīng)結(jié)果。該hpv16型e7蛋白的檢測(cè)試劑盒的制作過(guò)程可參考hpv16型e7蛋白的檢測(cè)試紙的制備方法，先制作hpv16型e7蛋白的檢測(cè)試劑盒的盒體，再制作hpv16型e7蛋白的檢測(cè)試紙，再將檢測(cè)試紙與盒體結(jié)合起來(lái)。本申請(qǐng)實(shí)施例還提供一種使用上述檢測(cè)試劑盒的hpv16型e7蛋白的檢測(cè)方法，包括如下步驟：制備人體宮頸脫落細(xì)胞裂解液，獲取待檢測(cè)的人體宮頸脫落細(xì)胞樣本，加入所述裂解液中，渦旋震蕩1-5min，放入冰箱凍融1-3次，冰箱的溫度可以在-20℃左右，再次震蕩1-5min，以10000rpm的速度離心5-10min，收集上清，加入到所述檢測(cè)試劑盒中，并將檢測(cè)試劑盒置于熒光檢測(cè)儀孵育倉(cāng)；熒光檢測(cè)儀自動(dòng)檢測(cè)，讀取檢測(cè)試劑盒上的發(fā)光值；熒光檢測(cè)儀依據(jù)所述發(fā)光值確定樣本中hpv16型e7蛋白含量，當(dāng)hpv16型e7蛋白含量大于預(yù)定值時(shí)，確定樣本中hpv16型e7蛋白呈陽(yáng)性，否則，確定樣本中hpv16型e7蛋白呈陰性。其中，在將待檢測(cè)的樣本加入到所述檢測(cè)試劑盒之前，還應(yīng)將檢測(cè)試紙抽出，并在室溫下放置10-20min，具體可以是15min。從而使試紙做好反應(yīng)準(zhǔn)備，以提升檢測(cè)的準(zhǔn)確性。在檢測(cè)過(guò)程中，需要使用大量檢測(cè)試劑盒，每個(gè)檢測(cè)試劑盒中可加入100ul的待檢測(cè)樣品，加入樣品后的檢測(cè)試劑盒均放置在熒光檢測(cè)儀，從而可以一次性檢測(cè)多個(gè)樣品，提升檢測(cè)效率。hpv16型e7蛋白會(huì)被熒光微球標(biāo)記抗體標(biāo)記，從而發(fā)出一定的熒光，熒光檢測(cè)儀可自動(dòng)檢測(cè)其發(fā)出熒光的發(fā)光值。具體的，如圖3所示，熒光檢測(cè)儀中的內(nèi)部程序，自動(dòng)以校準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，發(fā)光值為縱坐標(biāo)，采用四參數(shù)邏輯擬合法得到hpv16型e7蛋白含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算待檢樣本中hpv16型e7蛋白含量。檢測(cè)結(jié)果的判讀如下表：即設(shè)定的預(yù)定值為7.37.3ng/ml。當(dāng)然，結(jié)合到實(shí)際情況時(shí)，該預(yù)定值會(huì)在7.3ng/ml上下產(chǎn)生合理的波動(dòng)，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解。在一種實(shí)施例中，制備人體宮頸脫落細(xì)胞裂解液的過(guò)程包括如下步驟：用10mm~1m緩沖液配置0.05%~1%（體積百分比）表面活性劑；用之前加入終濃度為1mm~10mm蛋白酶抑制劑；所述的表面活性劑為tween20、triton-100和十二烷基磺酸鈉中的至少一種，所述的緩沖液為phosphate-bufferedsaline、tris-hcl或碳酸鹽溶液，所述的蛋白酶抑制劑為cystatin、pmsf和antipain中的至少一種。用本發(fā)明檢測(cè)試劑盒檢測(cè)部分健康人以及病人宮頸脫落細(xì)胞，檢測(cè)正常人宮頸脫落細(xì)胞數(shù)據(jù)結(jié)果如下：檢測(cè)病人宮頸脫落細(xì)胞數(shù)據(jù)結(jié)果如下：數(shù)據(jù)分析1、根據(jù)正常人檢測(cè)值，計(jì)算出平均值，標(biāo)準(zhǔn)方差，cut-off值。分別將41例正常人宮頸脫落細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果取平均數(shù)，并計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)方差sd，本試劑盒在確定cutoff值時(shí)選擇正常人平均值加上兩倍的標(biāo)準(zhǔn)方差作為hpv16e7蛋白表達(dá)陰陽(yáng)性的判斷標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果如下：cut-off計(jì)算公式為：cut-off=平均值+2*sd標(biāo)準(zhǔn)方差，檢測(cè)數(shù)據(jù)表一統(tǒng)計(jì)結(jié)果：平均值3.03sd標(biāo)準(zhǔn)方差2.15cut-off7.33ng/ml2、通過(guò)cut-off值，判斷待檢樣本hpv16e7蛋白表達(dá)的陰陽(yáng)性，超過(guò)這個(gè)cut-off值的即認(rèn)為是陽(yáng)性，即認(rèn)為表達(dá)了hpv16e7蛋白，同時(shí)與病理資料對(duì)比。3、根據(jù)cut-off值判斷表二病人宮頸脫落細(xì)胞診斷結(jié)果(“+”表示檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性；“-”表示檢測(cè)結(jié)果陰性）根據(jù)上表病人宮頸脫落細(xì)胞診斷結(jié)果陰陽(yáng)性制定準(zhǔn)確率比例表：在表2實(shí)驗(yàn)中所檢測(cè)的病人宮頸脫落細(xì)胞共計(jì)12例，該試劑盒hpv16e7蛋白檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的為9例。其中針對(duì)8例cinii以上病例樣本，該試劑盒檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果為為7例，診斷靈敏度高達(dá)87%。檢測(cè)試劑盒的分析靈敏度免疫層析試紙條的制備同上述實(shí)施例。①取出所需免疫層析試紙條，室溫放置15min；②每孔加入100ul裂解液，共20孔，置于熒光檢測(cè)儀孵育倉(cāng)；③15min后，儀器自動(dòng)檢測(cè)，讀取熒光值，計(jì)算t/(t+c)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到分析靈敏度為1.02ng/ml。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表：檢測(cè)試劑盒的批間差免疫層析試紙條的制備同上述實(shí)施例。①取出所需免疫層析試紙條，室溫放置15min；②每孔分別加入100ul內(nèi)部質(zhì)控品，置于熒光檢測(cè)儀孵育倉(cāng)；③15min后，儀器自動(dòng)檢測(cè)，讀取熒光值，計(jì)算t/(t+c)。該試劑盒的批間差<15%。數(shù)據(jù)如下：檢測(cè)試劑盒的準(zhǔn)確性（回收實(shí)驗(yàn)）免疫層析試紙條的制備同上述實(shí)施例。①取出所需免疫層析試紙條，室溫放置15min；②每孔分別加入100ul樣品，置于熒光檢測(cè)儀孵育倉(cāng)；③15min后，儀器自動(dòng)檢測(cè)，讀取熒光值，計(jì)算t/(t+c)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品濃度。該試劑盒的回收率為100.5%。數(shù)據(jù)如下表：以上內(nèi)容是結(jié)合具體的實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明所作的進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，不能認(rèn)定本發(fā)明的具體實(shí)施只局限于這些說(shuō)明。對(duì)于本發(fā)明所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干簡(jiǎn)單推演或替換。當(dāng)前第1頁(yè)12