一種液基培養(yǎng)親水性低脫片率粘附載玻片的制備方法與流程

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導(dǎo)航： X技術(shù)> 最新專利>測量裝置的制造及其應(yīng)用技術(shù)

本發(fā)明屬于載玻片領(lǐng)域，具體涉及一種液基培養(yǎng)親水性低脫片率粘附載玻片的制備方法。

背景技術(shù)：

液基薄層細(xì)胞檢測技術(shù)自上世紀(jì)從歐美引入我國，現(xiàn)在已廣泛應(yīng)用于腫瘤預(yù)防檢查和篩查的醫(yī)學(xué)檢測。而液基培養(yǎng)專用載玻片是液基制片的核心技術(shù)，制片染色好不好直接與載玻片的粘附性有關(guān)，也是制約液基細(xì)胞技術(shù)的關(guān)健所在。如果載玻片質(zhì)量不過關(guān)，則導(dǎo)致細(xì)胞量少且染色效果不好，細(xì)胞分布不均，甚至無細(xì)胞的白片。

為使染色效果顯著、細(xì)胞分布均勻并緊密與玻片表面結(jié)合，必須先對普通載玻片表面進(jìn)行清潔處理，后進(jìn)行物理化學(xué)修飾。目前載玻片表面清潔方法主要有以下幾種：硫酸清洗法(包括濃硫酸-乙醇法和濃硫酸-雙氧水法)、重鉻酸鉀清洗法，這些方法都可達(dá)到使載玻片表面清潔的效果。載玻片表面化學(xué)修飾方法包括羧基化、氨基硅烷化、炔基化、醛基化、環(huán)氧基化等。

目前，國內(nèi)的普通粘附載玻片部分為疏水性粘附載玻片，這種疏水性粘附載玻片在儀器上使用時(shí)經(jīng)常會出現(xiàn)染色不均勻的缺點(diǎn)。而部分的親水粘附載玻片也并非液基培養(yǎng)專用載玻片，在液基薄層細(xì)胞檢測儀器中檢測時(shí)也存在脫片率高及染色不均勻的缺點(diǎn)。因此，解決普通粘附載玻片在液基薄層細(xì)胞檢測時(shí)的缺陷，具有重要意義。

中國專利【cn104805590a】公開了一種羧基修飾的基因芯片基片及其制備方法，以普通玻璃為載體，先后進(jìn)行甲醇-鹽酸溶液和硫酸清洗，通過硅烷化試劑進(jìn)行硅烷化修飾，后進(jìn)行羧基修飾。本發(fā)明先后選用甲醇-鹽酸溶液、硫酸進(jìn)行表面清洗，存在以下問題：甲醇易揮發(fā)，有毒性，若操作人員不慎吸入或接觸到皮膚，有害健康；后用濃硫酸清洗，硫酸具有腐蝕性，安全性低。

中國專利【cn106345544a】公開了一種微陣列用氨基修飾基片及制備方法。該制備方法主要通過濃硫酸與雙氧水的混合溶液浸泡玻璃基片，后在其表面進(jìn)行氨基硅烷化處理，在獲得表面富含氨基的玻璃基片的基礎(chǔ)上進(jìn)行多聚賴氨酸涂層，最終獲得活性氨基修飾的玻璃基片。本發(fā)明將玻璃基片在濃硫酸雙氧水混合液中浸泡13～18h,耗時(shí)過長，且配置混合液時(shí)，雙氧水與濃硫酸反應(yīng)，劇烈放熱甚至?xí)霈F(xiàn)爆沸現(xiàn)象，安全性過低。氨基硅烷化處理時(shí)玻璃表面的羥基與氨基硅烷脫醇縮合后氨基化，用長疏水鏈的脂肪酸和氨基反應(yīng)，最終在玻璃表面形成帶有疏水鏈的一層膜，基片最終呈疏水性，在細(xì)胞檢測時(shí)容易出現(xiàn)脫片現(xiàn)象。

中國專利【cn101831504a】公開了一種炔基修飾的基因芯片及制備方法。該制備方法主要先用玻璃、硅片、金、銀、鐵、鋅、銅、殼聚糖、葡聚糖、聚乙烯醇、纖維素、聚丙烯酰胺、聚碳酸酯、聚苯乙烯、聚乳酸制備好基因芯片，再通過分子自組裝技術(shù)將三乙氧基硅炔組裝在羥基化或氨基化的基因基片載體表面，形成一層末端為叁鍵的單分子自組裝膜，從而獲得炔基修飾的基因基片。本發(fā)明將玻璃基片通過分子的自組裝技術(shù)進(jìn)行處理時(shí)，存在以下問題，未預(yù)先處理玻璃基片表面并不能形成易岑末端為叁鍵的單分子組裝膜，且若先預(yù)先處理玻璃基片則存在著成本過高，不利于液基薄層細(xì)胞檢測的大范圍應(yīng)用，并且操作難度高，對操作人員的操作要求極高。

中國專利【cn105220237a】公開了一種微列陣用活性醛基修飾基片及其制備方法，該制備方法主要通過用濃硫酸與純化水清洗，然后用多聚賴氨酸包被，最后使用戊二醛引入活性醛基基團(tuán)，從而得到活性醛基修飾基片。該發(fā)明制備方法簡單，成本低，但是因?yàn)槎嗑圪嚢彼岚还に嚤旧泶嬖诘膯栴}，要控制環(huán)境的無菌無塵，并且多聚賴氨酸的存儲溫度要求比較高，所以這種氨基修飾的玻片存在著固定量低同時(shí)靈敏度不高的問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

發(fā)明目的：本發(fā)明的目的在于克服普通粘附載玻片在液基薄層細(xì)胞檢測時(shí)經(jīng)常出現(xiàn)染色不均勻以及細(xì)胞脫片的缺點(diǎn)，提供一種液基培養(yǎng)親水性低脫片率粘附載玻片的制備方法。

技術(shù)方案：一種液基培養(yǎng)親水性低脫片率粘附載玻片的制備方法，包括如下步驟：

1)將載玻片浸泡于一定質(zhì)量分?jǐn)?shù)的清潔液溶液中，浸泡5-15分鐘；用去離子水檢測其親水性，若親水，則表面潔凈，繼續(xù)后續(xù)操作；

2)將上述表面潔凈的載玻片在20℃—80℃下，浸泡在質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.4‰—4％的粘附母液溶液中，浸泡20-30分鐘；其中粘附母液有效成分為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％-2％的聚酰胺類及0.2％-1％的醚類物質(zhì)；

3)將上述載玻片取出，去離子水清洗，烘干，得到親水性低脫片率粘附載玻片。

作為優(yōu)選方案：所述載玻片為超白玻璃材質(zhì)，單面單頭彩色涂裝，大小為76*26，厚度1—1.2mm。

作為優(yōu)選方案：所述超白玻璃的主要組成為na20、cao、sio2、al2o3、mg0、k2o、fe2o3等中的一種或幾種，其中fe2o3的含量小于5‰。

作為優(yōu)選方案：清潔液為清潔液溶液、鹽酸、硫酸溶液中的一種或多種組合，清潔液質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5％-30％。

作為優(yōu)選方案：所述聚酰胺類物質(zhì)為聚酰胺醚、聚酰胺鈉、聚酰胺鉀中的一種或多種組合。

作為優(yōu)選方案：所述醚類物質(zhì)為聚醚多元醇、鹵化醚、聚酰胺醚中的一種或多種組合。

作為優(yōu)選方案：所述的粘附母液溶液溫度為40℃-50℃。

作為優(yōu)選方案：所述的粘附母液溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.4‰-4‰。

作為優(yōu)選方案：所述的烘干溫度為40-70℃。

作為優(yōu)選方案：粘附母液有效成分聚酰胺類物質(zhì)與醚類物質(zhì)的一種或多種組合由于酰胺鍵與醚鍵，本身具有吸附作用，經(jīng)清潔的載玻片在粘附母液后，與生物大分子相容性好的酰胺鍵及粘附作用強(qiáng)的醚鍵直接吸附在玻片表面。

有益效果：本發(fā)明中的液基培養(yǎng)親水性低脫片率粘附載玻片進(jìn)行表面處理時(shí)，使用的粘附母液的有效成分為聚酰胺醚、聚酰胺鈉、聚酰胺鉀中的一種或多種聚酰胺類物質(zhì)的組合以及聚醚多元醇、鹵化醚、聚酰胺醚中的一種或多種組合。聚酰胺類物質(zhì)均含酰胺鍵，酰胺鍵為一種帶負(fù)電性的官能團(tuán)，與生物大分子相容性好；醚類物質(zhì)均含醚鍵，醚鍵為極性基團(tuán)，有助于粘附作用。因而使用聚酰胺類物質(zhì)處理載玻片表面可以使載玻片具有較好的親水性與粘附性，克服了普通粘附載玻片在液基薄層細(xì)胞檢測時(shí)經(jīng)常出現(xiàn)的染色不均勻及細(xì)胞脫片的缺點(diǎn)。

同時(shí)，相對于其他細(xì)胞檢測方法，液基薄層細(xì)胞檢測從根本上解決了常規(guī)脫落細(xì)胞制片假陰性率高、丟失細(xì)胞率高(其他檢測方法丟失率約為80％)和涂片質(zhì)量差等技術(shù)難題，使宮頸癌的陽性檢出率達(dá)95％以上，使胸腹水脫落細(xì)胞的陽性診斷準(zhǔn)確率比傳統(tǒng)細(xì)胞檢測高了近2倍，因此尤其適合宮頸脫落細(xì)胞、胸腹水脫落細(xì)胞及痰液脫落細(xì)胞的檢測。而這些技術(shù)難題的解決很大程度上依賴于載玻片較好的親水性與粘附性，本發(fā)明所展示的親水性粘附載玻片為脫落細(xì)胞學(xué)診斷作出了重大貢獻(xiàn)。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)闡述。

具體實(shí)施例一：