一種苦瓜葉的薄層檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種苦瓜葉薄層色譜檢測方法。本發(fā)明的方法，通過多個工藝的篩選，將苦瓜葉中的多個成分有效分離并檢測出來，從而可以簡便、快速、全面、準確、可靠地監(jiān)控苦瓜葉藥材的質(zhì)量，為臨床療效提供了有效保障。
【專利說明】
一種苦瓜葉的薄層檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及藥材的檢測方法，具體涉及苦瓜葉的薄層檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 苦瓜葉為萌蘆科苦瓜屬一年生蔓性草本植物苦瓜(Momordica charantia L.)的 干燥葉。性涼、味苦。具清熱解毒、殺菌、止痢、止痛的功效，能治療胃痛，痢疾，疔瘡腫毒?？?瓜葉作為常用民間藥，使用廣泛，常用于治療蚊蟲叮咬后皮膚的紅腫熱痛、小兒痱子、熱毒 瘡腫、楊梅瘡、狗咬和鵝掌風(fēng)。
[0003] 苦瓜葉資源豐富，療效確切，民間使用廣泛，認可度高且方便易得，具有較好的開 發(fā)價值。但是目前，國內(nèi)外多對苦瓜果實進行多角度研究而其葉研究甚少，尚缺乏對苦瓜葉 的質(zhì)量評價方法和標準。
[0004] 因此，為了確?？喙先~的質(zhì)量和安全，需要一種檢測方法，用于評估苦瓜葉的質(zhì) 量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種苦瓜葉的薄層檢測方法，包括以下步驟：
[0006] (1)對照品溶液的制備：
[0007] 取對照藥材粉末，加入石油醚提取，過濾，取濾渣，加入乙醇回流，過濾，蒸干濾液， 殘渣加入水復(fù)溶，加三氯甲烷萃取，取水層，乙酸乙酯萃取，蒸干萃取液，殘渣加入甲醇復(fù) 溶，作為對照品溶液；
[0008] (2)供試品溶液的制備：
[0009] 取供試藥材粉末，按照步驟(1)相同的方法，制備得到供試品溶液；
[0010] (3)薄層檢測：
[0011] 分別將對照品溶液和供試品溶液在薄層板上點樣，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸體積比 =(5~7): (3~4): 1為展開劑展開，顯色，檢視，比對即可。
[0012] 進一步地，步驟(3)中，所述展開劑為甲苯-乙酸乙酯-甲酸體積比=7: 3:1的展開 劑。
[0013] 進一步地，步驟(1)中，所述提取是超聲提取。
[0014]進一步地，步驟(1)中，所述石油醚與藥材粉末的體積質(zhì)量比為1 OmL: 1 g。
[0015] 進一步地，步驟（2)中，所述顯色的方法為熒光顯色法、碘蒸氣顯色法或氨蒸汽顯 色法;其中，所述熒光顯色法的檢測波長為365nm。
[0016] 進一步地，所述顯色法為碘蒸氣顯示法。
[0017]進一步地，步驟(3)中，所述點樣量為5-10此。
[0018]進一步地，步驟⑶中，所述點樣量為6此。
[0019] 進一步地，步驟(3)中，所述展開的展距為8~12cm。
[0020] 進一步地，步驟(3)中，所述展開的展距為10cm。
[0021] 本發(fā)明的苦瓜葉薄層色譜檢測方法，通過多個工藝的篩選，將苦瓜葉中的多個成 分有效分離并檢測出來，從而可以簡便、快速、全面、準確、可靠地監(jiān)控苦瓜葉藥材的質(zhì)量， 為臨床療效提供了有效保障。
[0022] 顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離 本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
[0023] 以下通過實施例形式的【具體實施方式】，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進一步的詳細說 明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容 所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
【附圖說明】
[0024] 圖1是供試品溶液的制備工藝篩選中，方法I的薄層色譜圖。
[0025] 圖2是供試品溶液的制備工藝篩選中，方法n的薄層色譜圖。
[0026] 圖3是展開系統(tǒng)為甲苯時的薄層色譜圖。
[0027]圖4是展開系統(tǒng)為甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:4:1)的薄層色譜圖。
[0028]圖5是展開系統(tǒng)為甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:4:1)的薄層色譜圖。
[0029]圖6是展開系統(tǒng)為甲苯-乙酸乙酯-甲酸(6:4:1)的薄層色譜圖。
[0030]圖7是展開系統(tǒng)為甲苯-乙酸乙酯-甲酸(7:3:1)的薄層色譜圖。
[0031]圖8是熒光顯色法的薄層色譜圖。
[0032]圖9是碘蒸氣顯色法的薄層色譜圖。
[0033]圖10是氨蒸氣顯色法的薄層色譜圖。
[0034]圖11是展距8cm的薄層色譜圖。
[0035]圖12是展距10cm的薄層色譜圖。
[0036]圖13是展距12cm的薄層色譜圖。
[0037]圖14是點樣5iU時的薄層色譜圖。
[0038]圖15是點樣6yl時的薄層色譜圖。
[0039]圖16是點樣10yl時的薄層色譜圖。
[0040] 圖17為不同產(chǎn)地苦瓜葉藥材薄層色譜圖1、四川省三臺縣2、四川省簡陽市3、四川 省宜賓縣4、四川省雙流縣5、四川省內(nèi)江市6、四川省自貢市7、四川省彭州市8、河北省保定 市9、廣東省佛山市10、浙江省嘉興市S、苦瓜葉對照藥材。
【具體實施方式】
[0041] 下述實施例所用實驗材料如下：
[0042]不同采收地點的樣品于2011年8月前后分別采自四川省成都市、彭州市、簡陽市、 內(nèi)江市、自貢市、宜賓市及河北保定，浙江嘉興，廣東佛山等地。采集新鮮葉，除去雜質(zhì)，陰干 即得。以上實驗樣品均經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院蔣桂華教授鑒定為萌蘆科植物苦瓜 Momordica charantia L.的干燥葉。樣品采集地點、時間及生長環(huán)境見表1。
[0043] 于2011年8月20日對口采于四川省彭州市敖平鎮(zhèn)，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院蔣桂 華教授鑒定為萌蘆科苦瓜屬植物苦瓜Momordica charantia L.的干燥葉，作為對照藥材； 所用試劑均為分析純。
[0044] 表1不同產(chǎn)地苦瓜葉樣品 [0046]儀器如下：
[0047] 可見紫外檢測儀(ZF-401，上海市顧村電光儀器廠），電子恒溫水浴鍋(DZKW-4,北 京中興偉興儀器有限公司），十萬分之一電子天平(德國Sart〇riUSBP211D)，超聲波清潔器 (KQ-50B型，昆山市超聲儀器有限公司），真空干燥箱(ZF-401，上海市顧村電光儀器廠），層 析缸(上海信宜儀器廠）。
[0048] 實施例1
[0049] (1)苦瓜葉供試品溶液的制備方法考察
[0050] 取同一批次(表1中7號樣)苦瓜葉樣品，考察苦瓜葉供試品溶液的制備方法。
[0051 ] 方法I:取藥材粉末5.0g，置于250ml錐形瓶中，加石油醚50ml，超聲15min，濾過，重 復(fù)一次。殘渣加乙酸乙酯20ml超聲30min，濾過，蒸干，殘渣加甲醇lml，溶解，作為供試品溶 液。
[0052] 方法II:取藥材粉末5.0g，置于250ml錐形瓶中，加石油醚50ml，超聲15min，濾過， 重復(fù)一次。殘渣加乙醇50ml水浴回流lh，濾過，濾液蒸干，殘渣加蒸餾水50ml溶解，加三氯甲 烷20ml萃取，重復(fù)一次。水層加乙酸乙酯10ml萃取，重復(fù)兩次，合并乙酸乙酯萃取液，蒸干， 殘渣加甲醇lml，溶解，作為供試品溶液。
[0053]分別吸取供試品溶液10yl，點樣，以乙酸乙酯-甲酸-甲苯(4:1:5)展開，顯色，置紫 外光燈(365nm)下檢視。薄層色譜圖見圖1~2。
[0054]結(jié)果表明：方法I的斑點不清晰，拖尾嚴重。方法II的斑點明顯，分離度好。因此，選 擇方法II作為苦瓜葉薄層色譜鑒別供試品溶液的制備方法。
[0055] (2)展開系統(tǒng)的考察
[0056]展開系統(tǒng)I:甲苯。
[0057] 展開系統(tǒng)II :甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:4:1)。
[0058] 展開系統(tǒng)m :甲苯-乙酸乙酯-甲酸(6:4:1)。
[0059] 展開系統(tǒng)IV:甲苯-乙酸乙酯-甲酸(7:3:1)。
[0060]吸取供試品溶液l〇yl，點樣，以上述系統(tǒng)分別展開，取出，晾干，顯色，置紫外光燈 (365nm)下檢視。薄層色譜圖見圖3~7〇
[0061]結(jié)果表明，展開系統(tǒng)IV:甲苯-乙酸乙酯-甲酸(7:3:1)能將苦瓜葉供試品溶液相對 較好地分離，因此選擇甲苯-乙酸乙酯-甲酸(7:3:1)作為苦瓜葉薄層色譜(TLC)鑒別展開系 統(tǒng)。
[0062] (3)顯色方法考察 [0063] I熒光顯色法 [0064] n碘蒸氣顯色法 [0065] m氨蒸氣顯色法
[0066] 吸取供試品溶液10yl，點樣，以甲苯-甲酸-乙酸乙酯（7:1:3)展開，取出，晾干，用 以上三種檢視方法分別檢視。薄層色譜圖見圖8~10。實驗結(jié)果表明：方法n顯色效果最好， 故選擇碘蒸氣作為苦瓜葉薄層色譜(TLC)鑒別的顯色劑。
[0067] (4)展距的考查
[0068] 吸取供試品溶液lOiil，點樣，以甲苯-甲酸-乙酸乙酯（7:1:3)分別展開8(^、1〇?、 12cm，取出，晾干，用碘蒸氣顯色檢視。薄層色譜圖見圖11~13。實驗結(jié)果表明，當展開距離 為10cm時，各斑點得到較好的展開效果且Rf值適中，因此選擇展開距離為10cm〇 [00 69] (5)點樣量考察
[0070] 分別吸取供試品溶液各如1、6以1、1(^1，點樣，以甲苯-甲酸-乙酸乙酯（7:1:3)展 開，取出，晾干，顯色，檢視。薄層色譜圖見圖14~16。
[0071]結(jié)果表明：點樣量為5iU時斑點顏色較淺，點樣量為6yl時斑點顏色適中，而點樣量 為1 〇y 1時斑點顏色較深且托尾，故選擇點樣量為6ii 1。
[0072] (6)苦瓜葉薄層鑒別 [0073] 1。供試品溶液的制備
[0074] 取苦瓜葉藥材，照（1)項下方法n供試品溶液的制備方法，制備供試品溶液。
[0075] 2.對照藥材溶液的制備
[0076] 取苦瓜葉對照藥材，照（1)項下方法n供試品溶液的制備方法，制備對照品溶液。 (3)薄層鑒別方法
[0077] 吸取上述供試品溶液和對照藥材溶液各6iU，點樣，以甲苯-甲酸-乙酸乙酯（7:1: 3)為展開系統(tǒng)，展開10cm，取出，晾干，置于碘蒸氣中顯色，至斑點清晰，取出，于日光下檢 視?？喙先~供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點。
[0078] 結(jié)果如圖10所示。可以看出，各斑點清晰，分離度良好。
[0079] 綜上所述，本發(fā)明的苦瓜葉薄層色譜檢測方法，通過多個工藝的篩選，將苦瓜葉中 的多個成分有效分離并檢測出來，從而可以簡便、快速、全面、準確、可靠地監(jiān)控苦瓜葉藥材 的質(zhì)量，為臨床療效提供了有效保障。
【主權(quán)項】
1. 一種苦瓜葉的薄層檢測方法，包括以下步驟： (1) 對照品洛液的制備： 取對照藥材粉末，加入石油醚提取，過濾，取濾渣，加入乙醇回流，過濾，蒸干濾液，殘渣 加入水復(fù)溶，加三氯甲烷萃取，取水層，乙酸乙酯萃取，蒸干萃取液，殘渣加入甲醇復(fù)溶，作 為對照品溶液； (2) 供試品溶液的制備： 取供試藥材粉末，按照步驟(1)相同的方法，制備得到供試品溶液； (3) 薄層檢測： 分別將對照品溶液和供試品溶液在薄層板上點樣，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸體積比=(5 ~7): (3~4): 1為展開劑展開，顯色，檢視，比對即可。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的薄層檢測方法，其特征在于:步驟(3)中，所述展開劑為甲苯-乙酸乙酯-甲酸體積比=7:3:1的展開劑。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的薄層檢測方法，其特征在于：步驟（1)中，所述提取是超聲 提取。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的薄層檢測方法，其特征在于:步驟（1)中，所述石油醚與藥材粉 末的體積質(zhì)量比為10mL: lg。5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的薄層檢測方法，其特征在于:步驟(2)中，所述顯色的 方法為熒光顯色法、碘蒸氣顯色法或氨蒸汽顯色法；其中，所述熒光顯色法的檢測波長為 365nm〇6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的薄層檢測方法，其特征在于:所述顯色法為碘蒸氣顯示法。7. 根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項所述的薄層檢測方法，其特征在于:步驟(3)中，所述點樣量 為5-10yL。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的薄層檢測方法，其特征在于:步驟(3)中，所述點樣量為6yL。9. 根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項所述的薄層檢測方法，其特征在于:步驟(3)中，所述展開的 展距為8~12cm。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的薄層檢測方法，其特征在于：步驟(3)中，所述展開的展距為 10cm〇
【文檔編號】G01N30/90GK106053708SQ201610556375
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年7月14日
【發(fā)明人】蔣桂華, 于宗強, 連艷, 劉曉芬, 王少男, 蘭群, 高必興, 張慧慧, 鄭佳
【申請人】成都中醫(yī)藥大學(xué)