本發(fā)明涉及中藥測量領域，特別涉及一種扭肚藤中原兒茶酸的含量測定方法。

背景技術：

扭肚藤收載于《廣東省中藥材標準》(第一冊)，為木犀科植物扭肚藤的干燥莖葉。別名青藤仔花、左扭藤、謝三娘、毛毛茶、斷骨草，又因為其花為白色，形似素馨花，故又名為白花茶、假素馨等。其生于山坡、河旁、灌木叢及混交林中，主要分布在廣東、海南、廣西、云南等地。

據文獻報道，扭肚藤中含有原兒茶酸、咖啡酸、水楊酸、香草酸、阿魏酸、咖啡酸甲酯、咖啡堿、3,6-diisopropylpiperazin-2,5-dione、東莨菪內酯等成分；有文獻采用HPLC法測定扭肚藤藥材中東莨菪素的含量，也有人研究復方扭肚藤膠囊對實驗性腹瀉的影響，結果顯示具有顯著的鎮(zhèn)痛和抗炎作用，相關研究較少。

扭肚藤具有清熱解毒、利濕消滯之功效，主治濕熱腹痛，腸炎、痢疾、四肢麻痹腫痛、瘰疬、疥瘡等。

現(xiàn)代研究表明，原兒茶酸具有抗菌，抗病毒，抗氧化，降低心肌耗氧量，緩解心絞痛，抑制體外血小板聚集，增加冠脈流量，增強心肌耐缺氧，抗心肌缺血再灌注損傷等多種藥理活性。

目前還沒有比較好的扭肚藤中原兒茶酸的含量測定方法。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于，針對上述問題，提供一種扭肚藤中原兒茶酸的含量測定方法。

本發(fā)明為實現(xiàn)上述目的所采用的技術方案為：

一種扭肚藤中原兒茶酸的含量測定方法，其包括以下步驟：

(1)對照品溶液的制備：取原兒茶酸對照品適量，精密稱定，置25ml棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得濃度為0.278mg·ml^-1的對照品溶液；

(2)供試品溶液的制備：取扭肚藤藥材粉末2g，精密稱定，置50ml具塞錐形瓶中，精密加入20ml甲醇，精密稱定，超聲提取(功率100W，頻率50Hz)30min，放冷，精密稱定，用甲醇補足減少的重量，搖勻，用0.22μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為扭肚藤藥材供試品溶液；

(3)線性關系考察：精密吸取對照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8ml分別置于10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，過0.22μm微孔濾膜，即得質量濃度分別為0.00278、0.00556、0.01112、0.01668、0.02224mg·ml^-1的對照品溶液；按設定色譜條件進行測定，進樣量5μl，以原兒茶酸進樣量X(ng),對峰面積積分值Y進行線性回歸，回歸方程Y＝4086x+2816.5，r＝0.9998；

(4)精密度試驗：分別精密吸取供試品溶液10ul，連續(xù)進樣6次，按所述設定色譜條件進行測定，記錄原兒茶酸峰面積。

所述設定色譜條件為：

色譜柱：Waters Xbridge^TM(4.6×250mm，5μm)；

流動相：乙腈-0.2％磷酸(8:92)；

檢測波長：260nm；

流速：1.0ml·min^-1；

柱溫：25℃；

進樣量：10μl。

(5)重復性試驗：取同一批扭肚藤樣品，按步驟(2)方法平行制備6份供試品溶液，按所述設定色譜條件進行測定，記錄色譜圖，計算供試品中原兒茶酸的含量。

(6)加樣回收率試驗：取同一批已知原兒茶酸含量的扭肚藤藥材粗粉1g，該扭肚藤藥材粗粉中含原兒茶酸0.0512mg·g^-1，精密稱定，平行9份，分別精密加入一定量的原兒茶酸對照品，按步驟(2)方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進行測定，計算回收率。

所述步驟(3)中，結果表明，原兒茶酸在13.9～111.2ng范圍內，呈良好的線性關系。

所述步驟(4)中，結果顯示，原兒茶酸的峰面積值RSD為1.75％，表明儀器精密度良好。

所述步驟(5)中，結果顯示，原兒茶酸的平均含量為0.0512mg·g^-1，RSD為1.14％，表明測定方法重復性良好。

所述步驟(6)中，原兒茶酸的平均回收率為98.99％，RSD為1.74％，表明回收率良好，準確度高。

本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明方法簡單易操作，能夠快速、準確地對扭肚藤中原兒茶酸的含量進行測定，精密度、重復性好，準確度高，回收率良好。

下面結合附圖與實施例，對本發(fā)明進一步說明。

附圖說明

圖1是原兒茶酸標準曲線；

圖2是本發(fā)明中原兒茶酸對照品圖；

圖3是S1扭肚藤供試品圖；

圖4是S2扭肚藤供試品圖。

具體實施方式

實施例：如圖1至圖4所示，本發(fā)明一種扭肚藤中原兒茶酸的含量測定方法，其包括以下步驟：

(1)對照品溶液的制備：取原兒茶酸對照品適量，精密稱定，置25ml棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得濃度為0.278mg·ml^-1的對照品溶液；

(2)供試品溶液的制備：取扭肚藤藥材粉末2g，精密稱定，置50ml具塞錐形瓶中，精密加入20ml甲醇，精密稱定，超聲提取(功率100W，頻率50Hz)30min，放冷，精密稱定，用甲醇補足減少的重量，搖勻，用0.22μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為扭肚藤藥材供試品溶液；

(3)線性關系考察：精密吸取對照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8ml分別置于10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，過0.22μm微孔濾膜，即得質量濃度分別為0.00278、0.00556、0.01112、0.01668、0.02224mg·ml^-1的對照品溶液；按設定色譜條件進行測定，進樣量5μl，以原兒茶酸進樣量X(ng),對峰面積積分值Y進行線性回歸，回歸方程Y＝4086x+2816.5，r＝0.9998；

(4)精密度試驗：分別精密吸取供試品溶液10ul，連續(xù)進樣6次，按所述設定色譜條件進行測定，記錄原兒茶酸峰面積。

所述設定色譜條件為：

色譜柱：Waters Xbridge^TM(4.6×250mm，5μm)；

流動相：乙腈-0.2％磷酸(8:92)；

檢測波長：260nm；

流速：1.0ml·min^-1；

柱溫：25℃；

進樣量：10μl。

(5)重復性試驗：取同一批扭肚藤樣品，按步驟(2)方法平行制備6份供試品溶液，按所述設定色譜條件進行測定，記錄色譜圖，計算供試品中原兒茶酸的含量。

(6)加樣回收率試驗：取同一批已知原兒茶酸含量的扭肚藤藥材粗粉1g，該扭肚藤藥材粗粉中含原兒茶酸0.0512mg·g^-1，精密稱定，平行9份，分別精密加入一定量的原兒茶酸對照品，按步驟(2)方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進行測定，計算回收率。

所述步驟(3)中，結果表明，原兒茶酸在13.9～111.2ng范圍內，呈良好的線性關系。見表2，圖1。

表2原兒茶酸線性關系考察結果

所述步驟(4)中，結果顯示，原兒茶酸的峰面積值RSD為1.75％，表明儀器精密度良好。見表3。

表3精密度試驗結果

所述步驟(5)中，結果顯示，原兒茶酸的平均含量為0.0512mg·g^-1，RSD為1.14％，表明測定方法重復性良好。見表4。

表4重復性試驗結果

所述步驟(6)中，原兒茶酸的平均回收率為98.99％，RSD為1.74％，表明回收率良好，準確度高。見表5。

表5加樣回收率試驗結果

在本實施例中，所采用的儀器為:Waters e2695-2489型高效液相色譜儀；PDA檢測器，在線真空脫氣系統(tǒng)，四元梯度泵，Empower2數(shù)據處理軟件系統(tǒng)；Agilent 1200高效液相色譜儀(包括柱溫箱，自動進樣器，泵，紫外檢測器)；Mettler Toledo XS205DU電子分析天平(瑞士)；KQ700DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；Milliporre Advantage A10超純水系統(tǒng)(美國)；JP300A型高速多功能粉碎機(浙江永康市久品工貿有限公司)；TLE204型電子分析天平(梅特-托利多儀器(上海)有限公司)。

乙腈、甲醇(德國默克股份兩合公司)均為色譜純；水為超純水(Millipore超純水系統(tǒng))；甲醇(廣州化學試劑廠)、磷酸(賽默飛世爾科技有限公司)均為分析純；原兒茶酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號)；扭肚藤樣品：見表1。

表1扭肚藤藥材來源

不同產地及批次扭肚藤藥材中原兒茶酸的含量測定，取各扭肚藤藥材粗粉，按上述步驟(2)方法制備供試品溶液，按照所述設定色譜條件進行測定其峰面積，代入線性回歸方程，計算原兒茶酸含量，結果見表6、圖3、圖4。

表6 2批扭肚藤原兒茶酸含量測定結果

本發(fā)明方法簡單易操作，能夠快速、準確地對扭肚藤中原兒茶酸的含量進行測定，精密度、重復性好，準確度高，回收率良好。

以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實施例而已，并非對本發(fā)明作任何形式上的限制。任何熟悉本領域的技術人員，在不脫離本發(fā)明技術方案范圍情況下，都可利用上述揭示的方法和技術內容對本發(fā)明技術方案做出許多可能的變動和修飾，或修改為等同變化的等效實施例。故凡是未脫離本發(fā)明技術方案的內容，依據本發(fā)明之形狀、構造及原理所作的等效變化，均應涵蓋于本發(fā)明的保護范圍內。