本發(fā)明屬于檢測分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定尿液中荷爾蒙含量的方法。

背景技術(shù)：

隨著現(xiàn)代科技的發(fā)展，工業(yè)化程序的提高，越來越多的工業(yè)品，化學品及添加劑的使用導致環(huán)境中數(shù)百中環(huán)境干擾物質(zhì)的暴露，對人體造成不同程度的損傷及影響。在日常生活中，塑料制品中的鄰苯二甲酸酯類如鄰苯二甲酸單甲基酯(MMP)、鄰苯二甲酸單乙基酯(MEP)、鄰苯二甲酸單丁基酯(MnBP)、鄰苯二甲酸單芐基酯(MBzP)、鄰苯二甲酸單乙基己基酯(MEHP)，在實際應(yīng)用中因其低毒，廉價，廣譜抗菌性，穩(wěn)定被廣泛使用；對羥基苯甲酸酯類如對羥基苯甲酸甲酯(MP)、對羥基苯甲酸乙酯(EP)、對羥基苯甲酸丙酯(PP)、對羥基苯甲酸丁酯(BP)因其低毒，穩(wěn)定，廣譜抗菌能力及穩(wěn)定性被廣泛用作食品，藥品，化妝品，衛(wèi)生用品行業(yè)防腐抑菌劑；酚類如壬基苯酚(NP)、辛基苯酚(4-t-OP)、丁基苯酚(2，4-di-t-BP)、雙酚A(BPA)、三氯沙(Triclosan)在清潔用品中大量使用，可在生物體內(nèi)積累，嚴重影響人體生殖能力。由于這類物質(zhì)的大量使用，目前在許多環(huán)境介質(zhì)如水體，空氣，土壤，化妝品，藥品中均能夠檢到，可通過皮膚接觸、飲食、呼吸等多種渠道進入人體，進而會干擾內(nèi)分泌功能，與生殖發(fā)育、不孕癥、性早熟、前列腺癌、精子數(shù)量降低等都密切相關(guān)。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種檢出限低、重現(xiàn)性好、準確度高的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定尿液中14種環(huán)境荷爾蒙含量的方法。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定尿液中14種環(huán)境荷爾蒙含量的方法，

所述14種環(huán)境荷爾蒙分別為：鄰苯二甲酸單甲基酯、鄰苯二甲酸單乙基酯、鄰苯二甲酸單丁基酯、鄰苯二甲酸單芐基酯、鄰苯二甲酸單乙基己基酯、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯、壬基苯酚、辛基苯酚、丁 基苯酚、雙酚A、三氯沙；

采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法定量檢測尿液樣品中14種環(huán)境荷爾蒙，具體程序是先用高效液相色譜將經(jīng)過預凈化處理的尿液樣本進行初步分離，串聯(lián)質(zhì)譜法負離子電噴霧離子化的多離子反應(yīng)監(jiān)測模式對目標組分的母離子-子離子對進行掃描，氘代同位素內(nèi)標法進行準確定量，以標準品濃度與內(nèi)標品濃度比值為X軸，以標準品響應(yīng)峰面積與內(nèi)標品響應(yīng)峰面積比值為Y軸，建立校正曲線，計算上述14種環(huán)境荷爾蒙的含量；

其中，色譜柱1和色譜柱2并聯(lián)設(shè)置，通過流動相A1、B1與色譜柱1實現(xiàn)鄰苯二甲酸單甲基酯、鄰苯二甲酸單乙基酯、鄰苯二甲酸單丁基酯、鄰苯二甲酸單芐基酯、鄰苯二甲酸單乙基己基酯、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯這9種組分的定量分析，分析結(jié)束后切換至流動相A2、B2與色譜柱2實現(xiàn)壬基苯酚、辛基苯酚、丁基苯酚、雙酚A和三氯沙這5種組分定量分析；

具體色譜條件為：

(1)高效液相色譜條件：

色譜柱1：Kinetex XB-C18 100mm*2.1mm*2.6uM；

流動相：A1，含0.1％v/v甲酸的水溶液；

流動相：B1，乙腈；

洗脫梯度見表1；

柱溫：35℃；

流速：0.4mL/min；

進樣量：20μL；

色譜柱2：BEH C18 50mm*2.1mm*1.7uM；

流動相A2，含0.1％v/v氨水的水溶液；

流動相B2，甲醇；

洗脫梯度見表2；

柱溫：50℃；

流速：0.2mL/min；

進樣量：20μL；

表1 色譜柱1的梯度洗脫參數(shù)

表2 色譜柱2的梯度洗脫參數(shù)

(2)質(zhì)譜條件：

離子源：電噴霧Turbo Spray，負離子掃描；離子源溫度550.00℃；掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測；碰撞氣5.00Psi；氣簾氣40.00Psi；霧化氣55.00Psi；輔助氣55.00Psi；電噴霧電壓-4500.00V；采集離子對見表3；

表3 十四個環(huán)境荷爾蒙組分及內(nèi)標對應(yīng)采集離子對及質(zhì)譜參數(shù)

其中，所述的經(jīng)過預凈化處理的尿液樣本按如下方法制備得到：準備200uL尿液樣本，向其中加入10μL β-葡萄糖甘酸酶，加入20μL混合氘代內(nèi)標液，在37℃水浴鍋中充分酶解2h，待酶解結(jié)束之后向其中加入400μL甲酸和甲醇的混合水溶液，充分渦旋均勻，待SPE上樣凈化即得。

其中，所述標準品按如下方法制備得到：分別稱取14種標準品用甲醇定容，分別得到14種2mg/mL標準品溶液，然后用甲醇分級稀釋得到1μg/mL(每一種標準品的濃度都是1μg/mL)混合標準品工作液待用，從工作液中分別移取適量標液，用尿液基質(zhì)稀釋液定容得到不同濃度標準點1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL各1mL，待用。

其中，所述的尿液基質(zhì)稀釋液按如下方法配制得到：準確稱取二水合氯化鈣0.0559g、六水合氯化鎂0.0610g、氯化鈉0.4208g、硫酸鈉0.2060g、檸檬酸鈉二水合物0.0647g、草酸鈉0.0020g、磷酸二氫鉀0.2545g、氯化鉀0.1439g、氯化銨0.0920g、尿素0.2498g和肌酐0.1052g定容至100mL，充分混勻，放置4℃待用。

其中，所述的內(nèi)標品按如下方法制備得到：分別移取內(nèi)標品用甲醇定容至2mg/mL，然后分級稀釋得到0.5μg/mL混合氘代內(nèi)標工作液待用；分別準備200μL不同濃度標準點，向其中加入10μL β-葡萄糖甘酸酶，加入20μL混合氘代內(nèi)標工作液，在37℃水浴中充分酶解2h，待酶解結(jié)束之后向其中加入400μL甲酸和甲醇的混合水溶液進行稀釋，充分渦旋均勻，待SPE上樣凈化。

其中，甲酸和甲醇的混合水溶液中，甲酸、甲醇和水的體積比為5：10：85。其中，β-葡萄糖甘酸酶，其酶活100000units/mL以上。

其中，所述的SPE上樣凈化，過程如下：依次用1ml甲醇、1ml水進行活化SPE小柱；上樣，移取預處理過的尿液樣本或內(nèi)標品300uL進行上樣，自然滴落，流出液棄去；淋洗，依次用1ml水、1ml 10％v/v甲醇水溶液淋洗小柱，淋洗液棄去，以真空泵抽干柱子約1min至近干；洗脫，1ml甲醇進行洗脫，收集洗脫液；將洗脫液氮吹至近干，用100μL含0.1％v/v甲酸的甲醇水溶液復溶。其中，所述的含0.1％v/v甲酸的甲醇水溶液，甲醇和水體積比是1∶1。

有益效果：目前文獻僅針對此類其中一種或幾種物質(zhì)進行分析檢測，但針對此類14種環(huán)境荷爾蒙類物質(zhì)進行精確定量分析尚未見報道。本發(fā)明利用液質(zhì)聯(lián)用分析技術(shù)結(jié)合多年應(yīng)用經(jīng)驗，綜合固相萃取技術(shù)及柱切換功能實現(xiàn)尿液樣本中14種環(huán)境荷爾蒙定量準確檢測，10min可實現(xiàn)14個目標物質(zhì)的定量分析。本發(fā)明方法檢出限低，重現(xiàn)性好，準確度高，可以實現(xiàn)真實監(jiān)測人體內(nèi)這些有毒，有害物質(zhì)的暴露情況，進而采取適當預防與防護措施。本研究的實現(xiàn)應(yīng)用于臨床，可有效干預人體因環(huán)境荷爾蒙在人體內(nèi)暴露引起的生殖發(fā)育、不孕癥、性早熟、前列腺癌、精子數(shù)量降低等疾病，可有效提高人民生活質(zhì)量，提升新生兒健康率，有效監(jiān)控污染源排放等等。

附圖說明

圖1為9個組分(鄰苯二甲酸單甲基酯、鄰苯二甲酸單乙基酯、鄰苯二甲酸單丁基酯、鄰苯二甲酸單芐基酯、鄰苯二甲酸單乙基己基酯、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯)的標準譜圖；

圖2為5個組分(壬基苯酚、辛基苯酚、丁基苯酚、雙酚A和三氯沙)標準品譜圖；

圖3為尿液樣本中9個組分(鄰苯二甲酸單甲基酯、鄰苯二甲酸單乙基酯、鄰苯二甲酸單丁基酯、鄰苯二甲酸單芐基酯、鄰苯二甲酸單乙基己基酯、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯)的圖譜；

圖4為尿液樣本中5個組分(壬基苯酚、辛基苯酚、丁基苯酚、雙酚A和三氯沙)的譜圖。

圖5為試劑盒模擬包裝圖。

具體實施方式

根據(jù)下述實施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實 施例所描述的內(nèi)容僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)當也不會限制權(quán)利要求書中所詳細描述的本發(fā)明。

實施例1：

一、材料

1.儀器 AB SCIEX API 4000+^TM LC-MS/MS系統(tǒng)、醫(yī)用高速離心機(北京白洋醫(yī)療器械有限公司)、多管渦旋混合儀(杭州奧盛儀器有限公司)、快速混勻器(姜堰市康泰醫(yī)療器材廠)、可調(diào)移液器(Thermo Scientific公司)、優(yōu)普超純水儀(成都超純科技有限公司)等。

2.試劑 甲醇(色譜級)、乙腈(色譜級)均購自美國Tedia High Purity Solvent公司，乙酸乙酸(色譜級)購自Adamas Reagent，Ltd，甲酸購自天津致遠化學制劑有限公司，氨水，二水合氯化鈣、六水合氯化鎂、氯化鈉、硫酸鈉、檸檬酸鈉二水合物、草酸鈉、磷酸二氫鉀、氯化鉀、氯化銨、尿素、肌酐、重鉻酸鉀、濃硫酸等均購自國藥集團化學試劑有限公司，超純水為自制。

3.標準品 鄰苯二甲酸單甲基酯(MMP)、鄰苯二甲酸單乙基酯(MEP)、鄰苯二甲酸單丁基酯(MnBP)、鄰苯二甲酸單芐基酯(MBzP)、鄰苯二甲酸單乙基己基酯(MEHP)、對羥基苯甲酸甲酯(MP)、對羥基苯甲酸乙酯(EP)、對羥基苯甲酸丙酯(PP)、對羥基苯甲酸丁酯(BP)、壬基苯酚(NP)、辛基苯酚(4-t-OP)、丁基苯酚(2，4-di-t-BP)、雙酚A(BPA)、三氯沙(Triclosan)均購自加拿大Toronto Research Chemical公司及德國Dr.Ehrenstorfer公司；

4.內(nèi)標品 對羥基苯甲酸丙酯-d4(PP-D4)鄰苯二甲酸單正丁基酯-同位素-d4(MnBP-D4)、4-壬基苯酚-d8(NP-D8)(CDN ISOTOPES INC，德國Dr.Ehrenstorfer公司)

二、方法

先用高效液相色譜將經(jīng)過預凈化處理的尿液樣本進行初步分離，串聯(lián)質(zhì)譜法負離子電噴霧離子化的多離子反應(yīng)監(jiān)測模式對目標組分的母離子-子離子對進行掃描，氘代同位素內(nèi)標法進行準確定量，以標準品濃度與內(nèi)標品濃度比值為X軸，以標準品響應(yīng)峰面積與內(nèi)標品響應(yīng)峰面積比值為Y軸，建立校正曲線，計算上述14種環(huán)境荷爾蒙的含量；

其中，色譜柱1和色譜柱2并聯(lián)設(shè)置，通過流動相A1、B1與色譜柱1實現(xiàn)鄰苯二 甲酸單甲基酯、鄰苯二甲酸單乙基酯、鄰苯二甲酸單丁基酯、鄰苯二甲酸單芐基酯、鄰苯二甲酸單乙基己基酯、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯這9種組分的定量分析，分析結(jié)束后切換至流動相A2、B2與色譜柱2實現(xiàn)壬基苯酚、辛基苯酚、丁基苯酚、雙酚A和三氯沙這5種組分定量分析；

具體色譜條件為：

(1)高效液相色譜條件：

色譜柱1：Kinetex XB-C18 100mm*2.1mm*2.6uM；

流動相：A1，含0.1％v/v甲酸的水溶液；

流動相：B1，乙腈；

洗脫梯度見表1；

柱溫：35℃；

流速：0.4mL/min；

進樣量：20μL；

色譜柱2：BEH C18 50mm*2.1mm*1.7uM；

流動相A2，含0.1％v/v氨水的水溶液；

流動相B2，甲醇；

洗脫梯度見表2；

柱溫：50℃；

流速：0.2mL/min；

進樣量：20μL；

(2)質(zhì)譜條件：

離子源：電噴霧Turbo Spray(ESI)，負離子掃描；離子源溫度(TEM)：550.00℃；掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)；碰撞氣：5.00Psi；氣簾氣(CUR)：40.00Psi；霧化氣(GS1)：55.00Psi；輔助氣(GS2)：55.00Psi；電噴霧電壓(IS)：-4500.00V。

電噴霧離子源(Negative Electro-spray ionization-，ESI-)，多反應(yīng)監(jiān)測模式(Multiple reaction monitor，MRM)；采集離子對見表3。

3.尿液基質(zhì)稀釋液準備 準確稱取二水合氯化鈣0.0559g、六水合氯化鎂0.0610g、氯化鈉0.4208g、硫酸鈉0.2060g、檸檬酸鈉二水合物0.0647g、草酸鈉0.0020g、磷酸二氫鉀0.2545g、氯化鉀0.1439g、氯化銨0.0920g、尿素0.2498g和肌酐0.1052g定容 至100mL，充分混勻，放置4℃待用。

4.玻璃器皿處理 在實驗之前將所用玻璃離心管及移液管分別用重鉻酸鉀-濃硫酸洗液浸泡過液，然后用超純水充分清洗，自然晾干。

5.標準品準備與處理 分別稱取14種標準品用甲醇定容，分別得到14種2mg/mL標準品溶液，然后用甲醇分級稀釋得到1μg/mL混合標準品工作液(其中單一標準品的濃度都是1μg/mL)待用，從工作液中分別移取適量標液，用尿液基質(zhì)稀釋液定容得到不同濃度標準點1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL各1mL，待用。分別移取內(nèi)標品用甲醇定容至2mg/mL，然后分級稀釋得到0.5μg/mL混合氘代內(nèi)標工作液待用(其中單一內(nèi)標品的濃度都是0.5μg/mL)；分別準備200μL不同濃度標準點，向其中加入10μL β-葡萄糖甘酸酶，加入20μL混合氘代內(nèi)標工作液，在37℃水浴中充分酶解2h，待酶解結(jié)束之后向其中加入400μL甲酸和甲醇的混合水溶液進行稀釋，充分渦旋均勻，待SPE上樣凈化。其中，甲酸和甲醇的混合水溶液中，甲酸、甲醇和水的體積比為5∶10∶85。

6.SPE上樣凈化 活化 依次用1ml甲醇、1ml水進行活化SPE小柱；上樣，移取預處理過的尿液樣本或標準品300uL進行上樣，自然滴落，流出液棄去；淋洗，依次用1ml水、1ml 10％v/v甲醇水溶液淋洗小柱，淋洗液棄去，以真空泵抽干柱子約1min至近干；洗脫，1ml甲醇進行洗脫，收集洗脫液；將洗脫液氮吹至近干，用100μL含0.1％v/v甲酸的甲醇水溶液復溶，其中，所述的含0.1％v/v甲酸的甲醇水溶液，甲醇和水體積比是1∶1。

7.尿液樣本的處理 準備200uL 尿液樣本，向其中加入10μLβ-葡萄糖甘酸酶，加入20μL混合氘代內(nèi)標液，在37℃水浴鍋中充分酶解2h，待酶解結(jié)束之后向其中加入400μL甲酸和甲醇的混合水溶液，充分渦旋均勻，待SPE上樣凈化即得。凈化程序同標準品6。

三、方法學評價

1.線性 分別將準備好的混合標準品濃度為1、2、5、10、20、50、100、200ng/mL的標準點按照正常樣本處理程序進行處理然后進樣分析，計算含量，考察各目標物質(zhì)的線性關(guān)系。

2.精密度 分別準備低、中、高三個具有代表性尿液樣本進行六次重復處理，檢測各個組分含量，考察批內(nèi)重復性；準備低、中、高三個具有代表性尿液樣本分三批進行六 次重復處理，檢測各目標組分含量，考察批間重復性。

3.添加回收考察 按照尿液樣品同樣處理方法處理分別處理同一尿液樣本，并在些尿液樣本基礎(chǔ)上分別添加兩個濃度L1和L2，分別進行處理并測試結(jié)果，驗證其添加回收效果。

四、結(jié)果

1、線性及保留時間考察

14種環(huán)境荷爾蒙在1～200ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(線性相關(guān)系數(shù)分別為0.9906～0.9999)，保留時間參表4，10min可完成十四個目標組分分析，各組分及對應(yīng)內(nèi)標總離子流色譜圖參附圖1～2。

表4 線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)，保留時間

2、精密度驗證

采用本方法對低、中、高三個濃度代表性樣本進行重復處理測試，各對應(yīng)目標物質(zhì)批內(nèi)精密度(CV％)范圍為2.43％～12.85％，批間精密度(CV％)范圍為3.34％～14.30％，參表5。

表5 14個目標組分批內(nèi)批間精密度

備注：L，M，H分別表示低，中，高三個濃度

3、正確度驗證

按照正常尿液樣品進行提取處理，多次測試求得L0，L1，L2平均值，求得對應(yīng)回收率，在低、高兩個濃度添加范圍內(nèi)，回收率81.1％～116.3％，滿足100±20％要求，參表6。

表6 14個目標組分添加回收數(shù)據(jù)

備注：L1、L2分別表示兩個濃度級別，單位：ng/mL

五、討論

環(huán)境荷爾蒙做為一種潛在的對人體有害的物質(zhì)，隨著檢測技術(shù)的發(fā)展及相關(guān)研究的關(guān)注越來越多被人重視，也相繼有多種研究報告指出其在人體內(nèi)的存在會嚴重影響身體健康，造成男性不育、新生兒畸形、內(nèi)分泌紊亂等.目前檢測此類環(huán)境干擾物質(zhì)的常見方法有氣相色譜法、氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法、液相色譜法、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法等，本研究采用目前國內(nèi)外公認精準度最高的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法進行檢測。

本研究通過一次SPE固相萃取小柱凈化處理尿液樣本，可有效消除尿液中復基質(zhì)的干擾，保留時間穩(wěn)定，回收率高；兩次進樣分析，在10min內(nèi)實現(xiàn)三類14種環(huán)境荷爾蒙的定量分析，提高分析效率。為保證檢測結(jié)果的準確性，分別考察了14種目標組分不同濃度標準點線性范圍，在2～200ng/mL范圍內(nèi)線性良好，線性相關(guān)系數(shù)0.9906～0.9999；三個不同濃度代表性樣品批內(nèi)精密度(CV)為2.43％～12.85％，批間精密度：3.34％～14.30％，添加回收率81.1％～116.3％。綜上所述，本研究應(yīng)用LC-MS/MS檢測人體尿液中14種環(huán)境荷爾蒙含量靈敏度高，結(jié)果準確、重復性好，可以保證尿液樣本內(nèi)環(huán)境荷爾蒙含量測試的準確性，可應(yīng)用于人體內(nèi)環(huán)境荷爾蒙暴露監(jiān)測分析。

五、分析試劑盒

分析試劑盒各組分見表7。

表7 分析試劑盒中各組分配制

上述試劑盒的制備方法：

，包括

(1)洗脫液

流動相：A1，含0.1％v/v甲酸的水溶液；

流動相：B1，乙腈；

流動相：A2，含0.1％v/v氨水的水溶液；

流動相：B2，甲醇。

(2)混合標準品工作液

分別稱取鄰苯二甲酸單甲基酯、鄰苯二甲酸單乙基酯、鄰苯二甲酸單丁基酯、鄰苯二甲酸單芐基酯、鄰苯二甲酸單乙基己基酯、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯、壬基苯酚、辛基苯酚、丁基苯酚、雙酚A、三氯沙各10mg用甲醇定容至5mL，得到14種2mg/mL標準品溶液，然后用甲醇分級稀釋得到1μg/mL混合標準品工作液。

(3)混合氘代內(nèi)標工作液

分別移取對羥基苯甲酸丙酯-d4鄰苯二甲酸單正丁基酯-同位素-d4、4-壬基苯酚-d8各10mg用甲醇定容至5mL，得到3種2mg/mL內(nèi)標品溶液，然后用甲醇分級稀釋得到0.5μg/mL混合氘代內(nèi)標工作液。

(4)稀釋液

尿液基質(zhì)稀釋液a：準確稱取二水合氯化鈣0.0559g、六水合氯化鎂0.0610g、氯化鈉0.4208g、硫酸鈉0.2060g、檸檬酸鈉二水合物0.0647g、草酸鈉0.0020g、磷酸二氫鉀0.2545g、氯化鉀0.1439g、氯化銨0.0920g、尿素0.2498g和肌酐0.1052g用水定容 至100mL。

尿液前處理稀釋液b：分別移取甲酸5mL，甲醇10mL，用水定容至100mL。

(5)淋洗液/活化液：超純水200mL；10％甲醇水溶液：移取10mL甲醇用水定容至100mL。

(6)洗脫液/活化液：甲醇：色譜純。

(7)復溶液：0.1％甲酸甲醇水：分別移取甲醇水各499.5mL，然后加入1mL甲酸，定容至1L，得到0.1％v/v甲酸的甲醇水溶液，甲醇和水體積比是1∶1。

(8)質(zhì)控品：

QC(L)：準確移取1μg/mL含有14個目標組分的混合標準品工作液5μL用尿液基質(zhì)稀釋液稀釋至1mL，得到濃度為5ng/mL QC(L)。

QC(M)：準確移取1μg/mL含有14個目標組分的混合標準品工作液20μL用尿液基質(zhì)稀釋液稀釋至1mL，得到濃度為20ng/mL QC(M)。

QC(H)：準確移取1μg/mL含有14個目標組分的混合標準品工作液100μL用尿液基質(zhì)稀釋液稀釋至1mL，得到濃度為100ng/mL QC(H)。

試劑盒內(nèi)部的模擬包裝參考圖5。試劑盒上下四周加膜，防震保溫，從左至右分為A，B，C，D四個部分，A部分放置4瓶洗脫液，B部分放置150mL及250mL4瓶溶液C部分放置另外7瓶小包裝溶液，D部分放置SPE小柱。