技術(shù)特征：

1.液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定尿液中14種環(huán)境荷爾蒙含量的方法，其特征在于，

所述14種環(huán)境荷爾蒙分別為：鄰苯二甲酸單甲基酯、鄰苯二甲酸單乙基酯、鄰苯二甲酸單丁基酯、鄰苯二甲酸單芐基酯、鄰苯二甲酸單乙基己基酯、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯、壬基苯酚、辛基苯酚、丁基苯酚、雙酚A、三氯沙；

采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法定量檢測尿液樣品中14種環(huán)境荷爾蒙，具體程序是先用高效液相色譜將經(jīng)過預(yù)凈化處理的尿液樣本進行初步分離，串聯(lián)質(zhì)譜法負離子電噴霧離子化的多離子反應(yīng)監(jiān)測模式對目標組分的母離子-子離子對進行掃描，氘代同位素內(nèi)標法進行準確定量，以標準品濃度與內(nèi)標品濃度比值為X軸，以標準品響應(yīng)峰面積與內(nèi)標品響應(yīng)峰面積比值為Y軸，建立校正曲線，計算上述14種環(huán)境荷爾蒙的含量；

其中，色譜柱1和色譜柱2并聯(lián)設(shè)置，通過流動相A1、B1與色譜柱1實現(xiàn)鄰苯二甲酸單甲基酯、鄰苯二甲酸單乙基酯、鄰苯二甲酸單丁基酯、鄰苯二甲酸單芐基酯、鄰苯二甲酸單乙基己基酯、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯這9種組分的定量分析，分析結(jié)束后切換至流動相A2、B2與色譜柱2實現(xiàn)壬基苯酚、辛基苯酚、丁基苯酚、雙酚A和三氯沙這5種組分定量分析；

具體色譜條件為：

(1)高效液相色譜條件：

色譜柱1：Kinetex XB-C18 100mm*2.1mm*2.6uM；

流動相：A1，含0.1％v/v甲酸的水溶液；

流動相：B1，乙腈；

洗脫梯度見表1；

柱溫：35℃；

流速：0.4mL/min；

進樣量：20μL；

色譜柱2：BEH C18 50mm*2.1mm*1.7uM；

流動相：A2，含0.1％v/v氨水的水溶液；

流動相：B2，甲醇；

洗脫梯度見表2；

柱溫：50℃；

流速：0.2mL/min；

進樣量：20μL；

表1 色譜柱1的梯度洗脫參數(shù)

表2 色譜柱2的梯度洗脫參數(shù)

(2)質(zhì)譜條件：

離子源：電噴霧Turbo Spray，負離子掃描；離子源溫度550.00℃；掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測；碰撞氣5.00Psi；氣簾氣40.00Psi；霧化氣55.00Psi；輔助氣55.00Psi；電噴霧電壓-4500.00V；采集離子對見表3；

表3 十四個環(huán)境荷爾蒙組分及內(nèi)標對應(yīng)采集離子對及質(zhì)譜參數(shù)

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定尿液中14種環(huán)境荷爾蒙含量的方法，其特征在于，所述的經(jīng)過預(yù)凈化處理的尿液樣本按如下方法制備得到：準備200uL尿液樣本，向其中加入10μLβ-葡萄糖甘酸酶，加入20μL混合氘代內(nèi)標液，在37℃水浴鍋中充分酶解2h，待酶解結(jié)束之后向其中加入400μL甲酸和甲醇的混合水溶液，充分渦旋均勻，待SPE上樣凈化即得。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定尿液中14種環(huán)境荷爾蒙含量的方法，其特征在于，所述標準品按如下方法制備得到：分別稱取14種標準品用甲醇定容，分別得到14種2mg/mL標準品溶液，然后用甲醇分級稀釋得到1μg/mL混合標準品工作液待用，從工作液中分別移取適量標液，用尿液基質(zhì)稀釋液定容得到不同濃度標準點1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL各1mL，待用。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定尿液中14種環(huán)境荷爾蒙含量的方法，其特征在于，所述的尿液基質(zhì)稀釋液按如下方法配制得到：準確稱取二水合氯化鈣0.0559g、六水合氯化鎂0.0610g、氯化鈉0.4208g、硫酸鈉0.2060g、檸檬酸鈉二水合物0.0647g、草酸鈉0.0020g、磷酸二氫鉀0.2545g、氯化鉀0.1439g、氯化銨0.0920g、尿素0.2498g和肌酐0.1052g定容至100mL，充分混勻，放置4℃待用。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定尿液中14種環(huán)境荷爾蒙含量的 方法，其特征在于，所述的內(nèi)標品按如下方法制備得到：分別移取內(nèi)標品用甲醇定容至2mg/mL，然后分級稀釋得到0.5μg/mL混合氘代內(nèi)標工作液待用；分別準備200μL不同濃度標準點，向其中加入10μL β-葡萄糖甘酸酶，加入20μL混合氘代內(nèi)標工作液，在37℃水浴中充分酶解2h，待酶解結(jié)束之后向其中加入400μL甲酸和甲醇的混合水溶液進行稀釋，充分渦旋均勻，待SPE上樣凈化。

6.根據(jù)權(quán)利要求2或5所述的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定尿液中14種環(huán)境荷爾蒙含量的方法，其特征在于，甲酸和甲醇的混合水溶液中，甲酸、甲醇和水的體積比為5：10：85。

7.根據(jù)權(quán)利要求2或5所述的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定尿液中14種環(huán)境荷爾蒙含量的方法，其特征在于，β-葡萄糖甘酸酶，其酶活100000units/mL以上。

8.根據(jù)權(quán)利要求2或5所述的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定尿液中14種環(huán)境荷爾蒙含量的方法，其特征在于，所述的SPE上樣凈化，過程如下：依次用1ml甲醇、1ml水進行活化SPE小柱；上樣，移取預(yù)處理過的尿液樣本或內(nèi)標品300uL進行上樣，自然滴落，流出液棄去；淋洗，依次用1ml水、1ml 10％v/v甲醇水溶液淋洗小柱，淋洗液棄去，以真空泵抽干柱子約1min至近干；洗脫，1ml甲醇進行洗脫，收集洗脫液；將洗脫液氮吹至近干，用100μL含0.1％v/v甲酸的甲醇水溶液復(fù)溶。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定尿液中14種環(huán)境荷爾蒙含量的方法，其特征在于，所述的含0.1％v/v甲酸的甲醇水溶液，甲醇和水體積比是1∶1。