本實用新型屬于免疫學(xué)檢測領(lǐng)域，具體涉及一種快速檢測抗SSB抗體的膠體金試紙條。

背景技術(shù)：

干燥綜合征( syndrome,SS)是一種慢性炎癥型自身免疫病，以大量淋巴細(xì)胞浸潤和產(chǎn)生大量自身抗體為特征。本病主要影響外分泌腺尤其是唾液腺和淚腺，導(dǎo)致腺體機能受損及分泌減少，引起口干、眼干的典型表現(xiàn)，亦可同時影響其他組織器官，導(dǎo)致腎損害、肝臟損害及肺部損害等系統(tǒng)性損害，嚴(yán)重時會危及生命。干燥綜合征是一種常見的風(fēng)濕免疫病，居彌散性結(jié)締組織病之首，發(fā)病率高于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。據(jù)研究報道其全球發(fā)病率約為0.1％～4％，而在我國發(fā)病率為0.29％～0.77％。該病患病比約為女性:男性＝9:1，任何年齡均可發(fā)病，但多見于40歲以后，在老年人群中的患病率達(dá)3％～4％，且有明顯上升趨勢。目前公認(rèn)發(fā)病人群主要為中老年女性。

當(dāng)今，干燥綜合征(SS)的分類診斷是以唇腺的病理組織學(xué)檢查為標(biāo)準(zhǔn)，該項檢查具有一定創(chuàng)傷性，患者的依從性較低，臨床上輔助診斷干燥綜合征(SS)最常用的血清學(xué)指標(biāo)是抗SSA抗體和抗SSB抗體。多篇文獻(xiàn)證實抗SSB/La抗體幾乎僅見于干燥綜合癥(SS,40％～80％)和系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE,10％～20％)患者的血清中，但敏感性較低；但是抗SSA/Ro抗體并不是SS干燥綜合征(SS)的標(biāo)志物，其在其它自身免疫性疾病中亦有較高的陽性率，特異性較差。所以與抗SSA抗體相比，抗SSB抗體雖然其靈敏度稍差，但卻是干燥綜合征(SS)更特異的抗體。

早期已有報導(dǎo)提出干燥綜合征(SS)可能發(fā)生在有臨床表現(xiàn)之前，Isenberg等人于1982年在抗SSB/La抗體陽性且有關(guān)節(jié)疼痛的病例中發(fā)現(xiàn)兩年后73.33％的患者病情發(fā)展為干燥綜合征(SS)，這證明了抗SSB抗體陽性的檢查結(jié)果可能使干燥綜合征(SS)提前數(shù)月甚至數(shù)年被發(fā)現(xiàn)，所以對于抗SSB抗體的早診斷具有非常重要的意義。目前常用的針對特異性自身抗體的檢測方法有酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-linkedimmunosorbent assay,ELISA)、線性免疫印跡法(Linear immunoblotting assay,LIA)、放射免疫法(Radioimmunoassay,RIA)、乳膠凝集試驗(Latex agglutination test,LAT)、免疫比濁法(Immunoturbidimetric assay,ITA)、膠體金快速免疫層析技術(shù)(Immune colloidal goldtechnique,GICT)等方法，這些方法各有優(yōu)缺點。酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)可定量、高靈敏和高特異性對特異性抗體進(jìn)行分類鑒定，但費時，檢測成本高，所需儀器昂貴，做特異抗體分類需要純化的抗原；線性免疫印跡法(LIA)可實現(xiàn)高靈敏高特異性檢測，但操作復(fù)雜，費時費力，易造成抗原的丟失；放射免疫法(RIA)可高靈敏和特異性地檢測出ELISA法檢測不到的IgM型抗體，但方法復(fù)雜，費時，并有放射性危害；乳膠凝集試驗(LAT)和免疫比濁法(ITA)雖操作簡單，不需要特殊儀器，成本低，但國內(nèi)外臨床上普遍用于檢測類風(fēng)濕因子(RF)，對結(jié)果的判斷主觀性強；而膠體金免疫層析技術(shù)(GICT)具有快速簡便、特異性強、敏感性高、穩(wěn)定性強、不需要特殊設(shè)備和試劑、成本低、不需要專業(yè)人員、結(jié)果判斷直觀等優(yōu)點，能定性和半定量，對于輔助臨床診斷而言，該檢測結(jié)果具有極大的參考價值。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本實用新型的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點與不足，提供一種快速檢測抗SSB抗體的膠體金試紙條，試紙條可以實現(xiàn)對干燥綜合征(SS)的特異性抗體進(jìn)行定性或者半定量檢測，并且基于此原理可以實現(xiàn)單一項目或多個項目的聯(lián)合檢測，提高對疾病診斷的準(zhǔn)確性。

本實用新型的目的通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)：一種快速檢測抗SSB抗體的膠體金試紙條，包括外殼和底板，底板上附著有由左至右緊密相連的樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水紙；樣品墊與結(jié)合墊緊密相連時樣品墊壓著結(jié)合墊，結(jié)合墊與硝酸纖維素膜緊密相連時結(jié)合墊壓著硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜與吸水紙緊密相連時吸水紙壓著硝酸纖維素膜；在硝酸纖維素膜上設(shè)置檢測線(T線)和質(zhì)控線(C線)，結(jié)合墊、檢測線、質(zhì)控線和吸水紙依次排列。

所述的結(jié)合墊上設(shè)置有膠體金標(biāo)記的葡萄球菌A蛋白(Staphylococcal ProteinA,SPA)層。

所述的檢測線處設(shè)置有SSB抗原層。

所述的質(zhì)控線處設(shè)置有羊抗人IgG層。

所述的外殼為塑料外殼。

所述的底板為PVC底板。

所述的外殼上設(shè)置有加樣孔和觀察孔，加樣孔位于樣品墊上，觀察孔位于硝酸纖維素膜上檢測線和質(zhì)控線區(qū)域。

所述的外殼的作用是防止膠體金試紙條受到污染以及便攜易用。

所述的樣品墊的材質(zhì)為玻璃纖維素膜。

所述吸水紙為能吸收不低于500μL液體的吸水紙。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實用新型的優(yōu)點在于：本實用新型的設(shè)計簡單巧妙，試劑安全無毒，對環(huán)境污染小，成本低，便于攜帶，操作簡便，快速顯色，結(jié)果直觀，不需任何儀器，無需專業(yè)人員操作。

附圖說明

圖1為本實用新型的結(jié)構(gòu)示意圖；其中，1為樣品墊，2為結(jié)合墊，3為硝酸纖維素膜，4為吸水紙，5為底板，6為檢測線，7為質(zhì)控線。

圖2為本實用新型用于檢測樣品后的顯色示意圖；其中，2a為陽性結(jié)果示意圖，2b為陰性結(jié)果示意圖，2c為無效結(jié)果示意圖。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例及附圖對本實用新型作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本實用新型的實施方式不限于此。

實施例1

一、本實用新型的結(jié)構(gòu)

一種快速檢測抗SSB抗體的膠體金試紙條，如圖1所示，包括外殼和底板，底板上附著有由左至右緊密相連的樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水紙；樣品墊與結(jié)合墊緊密相連時樣品墊壓著結(jié)合墊，結(jié)合墊與硝酸纖維素膜緊密相連時結(jié)合墊壓著硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜與吸水紙緊密相連時吸水紙壓著硝酸纖維素膜；在硝酸纖維素膜上設(shè)置檢測線(T線)和質(zhì)控線(C線)，結(jié)合墊、檢測線、質(zhì)控線和吸水紙依次排列。結(jié)合墊上設(shè)置有膠體金標(biāo)記的葡萄球菌A蛋白(PROSPEC)層。

所述的檢測線處設(shè)置有SSB抗原(上海前迪生物科技有限公司)層。

所述的質(zhì)控線處設(shè)置有羊抗人IgG(Solarbio)層。

二、本實用新型的制備過程

(1)噴金

在室溫條件下，控制環(huán)境濕度在45％～60％，設(shè)置噴點參數(shù)為2.0μL/cm，用劃膜噴金儀將膠體金標(biāo)記的葡萄球菌A蛋白噴涂于結(jié)合墊2上，并將噴好的金標(biāo)結(jié)合墊置于27℃，濕度為20％的干燥箱干燥3小時以上備用。

(2)劃膜

將硝酸纖維素膜3非點樣面粘貼于PVC(聚氯乙烯)底板5上，置于27℃，濕度20％的干燥箱平衡1小時；將SSB抗原用0.015M、pH7.4的PBS稀釋至0.4mg/ml，并將羊抗人IgG用0.015M、pH7.4的PBS稀釋至1mg/ml；設(shè)定BIODOT儀器噴點量為1.0μL/cm，劃涂于硝酸纖維素膜3的特定區(qū)域分別作為檢測線6和質(zhì)控線7；再放入27℃烘箱內(nèi)干燥，濕度為20％干燥48小時以上，備用。

(2)試紙條的組裝、切割和包裝

1)在已粘貼有硝酸纖維素膜3的PVC底板5上，將金標(biāo)結(jié)合墊粘貼在硝酸纖維素膜3的上方，覆蓋硝酸纖維素膜1～3mm；金標(biāo)結(jié)合墊與硝酸纖維素膜3上的檢測線相鄰；

2)吸水紙4粘貼在硝酸纖維素膜3的上方，覆蓋硝酸纖維素膜1～3mm；吸水紙與硝酸纖維素膜3上的質(zhì)控線相鄰；

3)樣品墊1粘貼在金標(biāo)SPA結(jié)合墊2的上方，覆蓋膠體金結(jié)合墊1～3mm；

4)用切條儀把膠體金免疫層析試紙條切成4mm寬的試紙條后放到塑料外殼里組成完整的試紙條成品；外殼的作用是為了防止膠體金試紙條受到污染以及便攜易用。外殼上設(shè)置有加樣孔和觀察孔，加樣孔位于樣品墊1上方，觀察孔位于硝酸纖維素膜3上檢測線和質(zhì)控線區(qū)域上方。

5)將上述試紙條成品和干燥劑一并裝入鋁箔袋，密封后貼上標(biāo)簽。

三、本實用新型的應(yīng)用

(1)血清樣本的檢測

從醫(yī)院收集血清分裝后于-20℃凍存，檢測前取一支已分裝的血清移至4℃解凍；將血清用PBS-T稀釋200倍，平衡至室溫，然后取60μL稀釋后的血清滴加到樣品墊1中；樣品墊1可以將檢測液體充分吸收，檢測液體先層析至結(jié)合墊2上與噴涂的金標(biāo)SPA完全接觸，充分反應(yīng)，再層析至硝酸纖維素膜3上進(jìn)行反應(yīng)。5～8min后觀察試紙條T線、C線的出線情況。

具體的結(jié)果判斷如下：陽性結(jié)果：在硝酸纖維素膜的檢測線6(SSB抗原包被處)、質(zhì)控線7(羊抗人IgG包被處)均有紅色條帶出現(xiàn)，且與自身抗體的含量成正相關(guān)。如圖2-2a所示。陰性結(jié)果：只在硝酸纖維素膜的質(zhì)控線7(羊抗人IgG包被處)有紅色條帶出現(xiàn)，如圖2-2b所示。無效結(jié)果：當(dāng)硝酸纖維素膜的質(zhì)控線7(羊抗人IgG包被處)不顯示出紅色條帶，則無論檢測線顯示出紅色條帶與否，該試紙條判為無效，如圖2-2c所示。

本實用新型采用間接法免疫層析測定，其原理是：在試紙條上預(yù)先將膠體金標(biāo)記的葡萄球菌A蛋白(SPA)噴涂在結(jié)合墊上，將SSB抗原和羊抗人IgG預(yù)先包被在硝酸纖維素膜上?；诳乖贵w反應(yīng)的高度特異性，以及葡萄球菌A蛋白(SPA)能與人IgG分子-Fc段發(fā)生非特異性結(jié)合，且不影響IgG分子-Fab段與抗原結(jié)合的活性這一特點，結(jié)合抗SSB抗體的本質(zhì)是一種IgG，采用了免疫層析技術(shù)來實現(xiàn)抗SSB抗體的快速檢測。當(dāng)?shù)渭訕悠窓z測時，樣品墊可以將檢測液體充分吸收，檢測液體先層析至結(jié)合墊上，人血清中的IgG會與結(jié)合墊上的金標(biāo)SPA結(jié)合，形成抗體-金標(biāo)SPA復(fù)合物。若樣本含有抗SSB抗體，由于毛細(xì)作用會在包被有SSB抗原的檢測線上富集抗原-抗體-金標(biāo)SPA復(fù)合物，形成肉眼可見的紅色條帶，過剩的抗體-金標(biāo)SPA復(fù)合物則會在質(zhì)控線處與羊抗人IgG結(jié)合，富集抗抗體-抗體-金標(biāo)SPA復(fù)合物，形成肉眼可見的紅色條帶；反之若是陰性樣本，則包被有SSB抗原的檢測線上沒有紅色條帶，只在質(zhì)控線形成肉眼可見的紅色條帶。

上述實施例為本實用新型較佳的實施方式，但本實用新型的實施方式并不受上述實施例的限制，其他的任何未背離實用新型的精神實質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本實用新型的保護(hù)范圍之內(nèi)。