本發(fā)明屬于化妝品技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種從化妝品中檢測丹參酮ⅱa(tanshinoneiia)含量的方法。

背景技術(shù)：

具有中國特色含中草藥成分的化妝品，由于其產(chǎn)品含有天然中草藥的美容護(hù)膚成份，作用溫和，綠色、環(huán)保、無刺激，目前成為一種潮流。

丹參酮ⅱa分子式為：c19h18o3，分子量294.33，cas號為568-72-9，廣泛存在于唇形科植物丹參的根及根莖，屬于二萜類成分，其結(jié)構(gòu)如下式：

根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)丹參酮ⅱa具有擴(kuò)展血管、降壓、抗栓等作用。

目前有關(guān)丹參酮ⅱa含量測定的報(bào)道有：(1)薄層掃描法測定定頸康寧膠囊中的丹參酮ⅱa含量。以硅膠g薄層板為固定相，苯一醋酸乙酯(19：l)為展開劑，檢測波長為270nm，測定頸康寧膠囊中丹參酮丹參酮ⅱa的含量。(2)雙波長薄層色譜掃描法測定頭痛胺片中丹參酮ⅱa的含量。在gf254薄層板上，苯一醋酸乙酯(19：l)為展開劑，采用雙波長反射式鋸齒掃描法測定，測定波長為268nm，參比波長為205nm。(3)hplc法測定丹參藥材中丹參酮類的含量。樣品超聲處理，采用c18色譜柱，以乙腈和0.02％磷酸溶液為流動相進(jìn)行梯度洗脫，檢測波長270nm。但目前暫無化妝品中丹參酮ⅱa的含量測定方法，因此有必要探索出更易操作、準(zhǔn)確的化妝品中丹參酮ⅱa的含量測定方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種易操作、準(zhǔn)確度高的化妝品中丹參酮ⅱa的含量測定方法。

本發(fā)明的第一方面，提供一種檢測化妝品中丹參酮ⅱa含量的方法，所述方法包括以下步驟：

(a)提供待測化妝品，采用甲醇超聲提取獲得提取液；

(b)過濾步驟a)獲得的提取液，得到供試品溶液；

(c)采用反相高效液相色譜檢測步驟b)獲得的供試品溶液，獲得待測化妝品中丹參酮ⅱa的含量。

在另一優(yōu)選例中，所述步驟a)中待測化妝品與甲醇的質(zhì)量體積為0.08～0.12g/ml，較佳為0.09-0.11g/ml，更佳為0.1g/ml。

在另一優(yōu)選例中，所述步驟a)中于150-300w、20-80khz下超聲10-60分鐘，較佳地，在200-250w、30-50khz下超聲20-40分鐘，更佳地，在220w、40khz下超聲30分鐘。

在另一優(yōu)選例中，所述步驟b)采用0.2-0.5微米過濾膜進(jìn)行過濾。

在另一優(yōu)選例中，所述步驟b)采用0.22微米過濾膜進(jìn)行過濾。

在另一優(yōu)選例中，所述步驟b)采用0.45微米過濾膜進(jìn)行過濾。

在另一優(yōu)選例中，所述反相高效液相色譜使用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的c18色譜柱。

在另一優(yōu)選例中，所述反相高效液相色譜使用體積比為60-90:40:10的甲醇：水作為流動相進(jìn)行等度洗脫。

在另一優(yōu)選例中，所述反相高效液相色譜使用體積比為70-80:30:20的甲醇：水作為流動相進(jìn)行等度洗脫。

在另一優(yōu)選例中，所述反相高效液相色譜使用體積比為70:30的甲醇：水作為流動相進(jìn)行等度洗脫。

在另一優(yōu)選例中，所述反相高效液相色譜使用體積比為75:25的甲醇：水作為流動相進(jìn)行等度洗脫。

在另一優(yōu)選例中，所述流動相的流速為0.8-1.2ml/min，較佳為1ml/min。

在另一優(yōu)選例中，所述反相高效液相色譜的進(jìn)樣量為5～20μl，較佳為8-15μl，更佳為6-11μl。

在另一優(yōu)選例中，所述反相高效液相色譜的柱溫為25-35℃，較佳為30℃。

在另一優(yōu)選例中，所述反相高效液相色譜的檢測波長為270nm。

本發(fā)明提到的上述特征，或?qū)嵤├岬降奶卣骺梢匀我饨M合。本案說明書所揭示的所有特征可與任何組合物形式并用，說明書中所揭示的各個(gè)特征，可以被任何提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特別說明，所揭示的特征僅為均等或相似特征的一般性例子。

目前暫無化妝品中丹參酮ⅱa的含量測定方法，本發(fā)明提供一種易操作、準(zhǔn)確度高的化妝品中丹參酮ⅱa的含量測定方法，為化妝品的質(zhì)量控制提供了技術(shù)保證。

本發(fā)明采用反相高效液相色譜檢測化妝品中丹參酮ⅱa的含量，根據(jù)樣品的保留時(shí)間和色譜圖進(jìn)行定性分析，根據(jù)峰面積進(jìn)行定量分析，高效液相色譜響應(yīng)值高，檢測誤差小，精密度和準(zhǔn)確性高，且操作簡便，重現(xiàn)性好，實(shí)用性強(qiáng)，適合于丹參酮ⅱa的含量測定。

應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文(如實(shí)施例)中具體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在此不再一一贅述。

附圖說明

圖1為本發(fā)明方法實(shí)施例1的含量測定色譜圖。

圖2為本發(fā)明方法實(shí)施例2的含量測定色譜圖。

圖3為對比例1檢測結(jié)果圖。

圖4為對比例2檢測結(jié)果圖。

具體實(shí)施方式

本申請的發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入地研究，首次研發(fā)出一種測定化妝品中丹參酮ⅱa含量的方法，采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的c18色譜柱用高效液相色譜進(jìn)行檢測，檢測誤差小，精密度和準(zhǔn)確性都較高，方法操作簡便、實(shí)用性強(qiáng)。在此基礎(chǔ)上，完成了本發(fā)明。

下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件如sambrook等人，分子克?。簩?shí)驗(yàn)室手冊(newyork:coldspringharborlaboratorypress,1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數(shù)是重量百分比和重量份數(shù)。

除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學(xué)用語與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明方法中。文中所述的較佳實(shí)施方法與材料僅作示范之用。

實(shí)施例1：

色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性：色譜柱使用symmetrixods-r(4.6×150mm，5μm)；流動相為甲醇/水＝70/30，流速為1ml/min，柱溫30℃，檢測波長270nm，進(jìn)樣量5μl；

供試品溶液的制備：取化妝品霜劑約1g，精密稱定，置具塞試管中，精密加入甲醇10ml，密塞，稱重，超聲處理(220w，40khz)30min，放冷，再稱重，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻。用0.45μm的微孔濾膜過濾，即得。

標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備：精密稱取丹參酮ⅱa樣品12.3mg，置于25ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻；再精密吸取該溶液1ml置100ml容量瓶中，用流動相定容至刻度，搖勻，即得。

測定法：精密吸取樣品溶液5μl，注入高效液相色譜儀，測定，即得。

供試品和對照品圖譜見圖1。根據(jù)高效液相色譜峰的保留時(shí)間和紫外光譜圖定性。記錄色譜峰面積，按外標(biāo)法進(jìn)行定量。

結(jié)果：測得化妝品中丹參酮ⅱa的含量為0.029％。

實(shí)施例2：

色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性：色譜柱使用agilentzorbaxextendc18(4.6×150mm，5μm)；流動相為甲醇-水＝75-25為流動相，流速為1ml/min，柱溫30℃，檢測波長270nm；進(jìn)樣量為20μl；

供試品溶液的制備：取化妝品水劑約1g，精密稱定，置具塞試管中，精密加入甲醇10ml，密塞，稱重，超聲處理(220w，40khz)30min，放冷，再稱重，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻。用0.45μm的微孔濾膜過濾，即得。

對照品溶液的制備：精密稱取丹參酮ⅱa樣品11.9mg，置于25ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻；再精密吸取該溶液1ml置100ml容量瓶中，用流動相定容至刻度，搖勻，即得。

測定法：精密吸取樣品溶液20μl，注入高效液相色譜儀，測定，即得。

供試品和對照品圖譜見圖2。根據(jù)高效液相色譜峰的保留時(shí)間和紫外光譜圖定性。記錄色譜峰面積，按外標(biāo)法進(jìn)行定量。

結(jié)果：測得化妝品中丹參酮ⅱa的含量為0.028％。

對比例1

hplc法測定化妝品中丹參酮ⅱa的含量，方法同實(shí)施例1，不同之處在于樣品采用氯仿：甲醇＝3:7超聲處理，采用c18色譜柱，以甲醇：水＝75:25為流動相進(jìn)行梯度洗脫，檢測波長270nm。

結(jié)果如圖3所示。

對比例2

hplc法測定化妝品中丹參酮ⅱa的含量，方法同實(shí)施例2，不同之處在于樣品甲醇超聲處理，采用c18色譜柱，以甲醇：水＝70:30為流動相進(jìn)行梯度洗脫，檢測波長290nm。

結(jié)果如圖4所示。

由圖3和圖4的檢測結(jié)果可知，采用不同的溶劑處理以及采用梯度洗脫方式，檢測結(jié)果不理想。

在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。