液態(tài)調(diào)味品中丙烯酰胺含量的快速檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種基質(zhì)分散固相萃取法聯(lián)合超高效液相色譜-串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定基質(zhì)復(fù)雜的液態(tài)調(diào)味品中丙烯酰胺含量的快速檢測(cè)方法，屬于丙烯酰胺的檢測(cè)方法領(lǐng)域。本發(fā)明的丙烯酰胺快速檢測(cè)方法利用基質(zhì)分散固相萃取法提取、凈化樣品，得產(chǎn)物A；對(duì)產(chǎn)物A進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，用乙酸乙酯進(jìn)行洗滌，用氮?dú)獯蹈?，并用水超聲溶解；用正己烷脫脂，離心分離后取下層溶液過濾后使用UPLC/MS/MS檢測(cè)，用內(nèi)標(biāo)法定量。與現(xiàn)行的通用檢測(cè)方法相比，本發(fā)明方法高通量、快速、準(zhǔn)確、高效、安全，能準(zhǔn)確對(duì)基質(zhì)復(fù)雜的醬油等調(diào)味品中丙烯酰胺的含量進(jìn)行檢測(cè)，滿足企業(yè)生產(chǎn)中食品安全日常監(jiān)控要求。
【專利說明】液態(tài)調(diào)味品中丙烯酰胺含量的快速檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種丙烯酰胺的檢測(cè)方法，尤其是涉及一種基質(zhì)分散固相萃取法聯(lián)合超高效液相色譜-串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定基質(zhì)復(fù)雜的液態(tài)調(diào)味品中丙烯酰胺含量的快速檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]丙烯酰胺是一種化學(xué)物質(zhì)，是生產(chǎn)聚丙烯酰胺的原料。其聚合物聚丙烯酰胺廣泛用于紡織、化工、冶金等行業(yè)，也可用于水處理中的絮凝劑。2002年4月瑞典國家食品局和斯德哥爾摩大學(xué)科學(xué)家率先報(bào)道在炸薯?xiàng)l、面包等經(jīng)高溫處理的食品中廣泛存在較高水平的丙烯酰胺，由于丙烯酰胺潛在的神經(jīng)毒性、遺傳毒性及致癌性，該項(xiàng)研究結(jié)果引起了全球的極大關(guān)注。隨后，世界各國的科學(xué)家對(duì)食品中丙烯酰胺的形成機(jī)制、不良反應(yīng)、檢測(cè)方法等各個(gè)方面進(jìn)行了深入研究。
[0003]目前，關(guān)于丙烯酰胺含量的檢測(cè)研究主要針對(duì)涉及烤、烘、炸、煎類的淀粉食品，而對(duì)于中國老百姓餐桌上常用的調(diào)味品，特別是醬油類色深液態(tài)的調(diào)味品中的檢測(cè)研究較少。而醬油等調(diào)味品由于用途較廣，用量較大，已經(jīng)成為不可忽視的一項(xiàng)食品安全檢測(cè)項(xiàng)目。國內(nèi)外大量研究表明，氨基酸和還原糖由高溫加熱發(fā)生的美拉德反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生丙烯酰胺。醬油富含氨基酸和糖類物質(zhì)，存在產(chǎn)生丙烯酰胺的風(fēng)險(xiǎn)。因此有必要開發(fā)一種針對(duì)醬油、鹵水汁等富含氨基酸、糖類物質(zhì)的調(diào)味品的丙烯酰胺檢測(cè)方法，以此來進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與食品安全監(jiān)控。
[0004]醬油、鹵水汁等色深液態(tài)調(diào)味品成分相當(dāng)復(fù)雜，含有多種氨基酸、糖類、有機(jī)酸、酯類物質(zhì)、焦糖色素及多種芳香物質(zhì)。要在檢測(cè)分析前處理中除掉這些有機(jī)雜質(zhì)的干擾，處理過程相對(duì)復(fù)雜繁瑣。尤其是對(duì)于添加了天然色素焦糖色來增加色澤和稠度的產(chǎn)品老抽、鹵水汁等，基質(zhì)更為復(fù)雜，在色譜上會(huì)有多個(gè)色譜峰出現(xiàn)干擾目標(biāo)物質(zhì)的定性和定量。
[0005]我國現(xiàn)有針對(duì)食品的丙烯酰胺檢測(cè)方法主要是GB/T5009.204-2005—食品中丙烯酰胺含量的測(cè)定方法氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)法。該法也是當(dāng)前行業(yè)測(cè)定食品中丙烯酰胺主要使用的方法。其采用的是衍生化處理，氣質(zhì)聯(lián)用色譜進(jìn)行檢測(cè)。原理是通過對(duì)食品中丙烯酰胺用水、醇類等極性溶劑提取，使用正己烷脫脂的凈化處理，溴化衍生生成2，3-二溴丙烯酰胺(2，3-DBPA)，并結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)機(jī)分析檢測(cè)丙烯酰胺含量。使用上述方法對(duì)醬油等色深液態(tài)調(diào)味品進(jìn)行檢測(cè)，雜質(zhì)干擾嚴(yán)重，無法準(zhǔn)確定性定量。
[0006]綜合目前丙烯酰胺的檢測(cè)方法，主要是用水或甲醇等極性有機(jī)溶劑進(jìn)行提取，利用正己烷除脂，使用GC/MS方法則使用衍生化處理進(jìn)行檢測(cè)；使用LC/MS和LC/MS/MS方法則直接檢測(cè)凈化所得物質(zhì)。從以上可參考的檢測(cè)方法上來看，主要存在著以下幾點(diǎn)不足:(I)所有方法在樣品的提取步驟多數(shù)用水提取，正己烷凈化，并不能有效去除色深液態(tài)調(diào)味品中同樣具有較強(qiáng)極性的雜質(zhì)，該雜質(zhì)干擾同樣具有較強(qiáng)極性的丙烯酰胺的儀器定性定量，影響著檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性；(2) GC/MS法需要樣品在提取凈化后進(jìn)行溴化衍生，需要使用溴水、氫溴酸這些毒性和腐蝕性較大的試劑，對(duì)檢測(cè)人員的身體健康構(gòu)成威脅。而且衍生化用時(shí)長，需要15個(gè)小時(shí)，條件要求較高，需要避光、在冷藏溫度下進(jìn)行，能耗比較高；(3)GC/MS法在衍生化過程中，復(fù)雜的樣品基質(zhì)影響了衍生化率，這需使用標(biāo)準(zhǔn)添加法來校正結(jié)果，在延長檢測(cè)時(shí)間的基礎(chǔ)上檢測(cè)人員的工作量同時(shí)也大大增加；(4)所有方法普遍存在色譜分析過程用時(shí)較長，總的色譜分析過程在10分鐘以上。
[0007]總而言之，目前現(xiàn)有的丙烯酰胺檢測(cè)方法在前處理方法上并不能解決對(duì)于基質(zhì)復(fù)雜的色深液態(tài)調(diào)味品的凈化問題；衍生化和標(biāo)準(zhǔn)加入法導(dǎo)致一個(gè)樣品的分析時(shí)間長；衍生化試劑毒性較大；較長的儀器分析測(cè)試時(shí)間，這些均滿足不了目前高通量、快速、準(zhǔn)確、高效、安全的檢測(cè)方法要求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明旨在針對(duì)現(xiàn)有的食品中丙烯酰胺檢測(cè)方法操作繁瑣、耗時(shí)、準(zhǔn)確性低、毒性較大等問題，特別是針對(duì)處理基質(zhì)復(fù)雜的色深液態(tài)調(diào)味品凈化效果不理想的問題，提供一種液態(tài)調(diào)味品中丙烯酰胺含量的快速檢測(cè)方法。該檢測(cè)方法是將基質(zhì)分散固相萃取法聯(lián)合超高效液相色譜-串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定基質(zhì)復(fù)雜的液態(tài)調(diào)味品中丙烯酰胺含量的快速檢測(cè)方法，具有針對(duì)色深液態(tài)調(diào)味品、操作簡(jiǎn)單、高通量、快速高效、準(zhǔn)確安全的特點(diǎn)。
[0009]本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):一種液態(tài)調(diào)味品中丙烯酰胺含量的快速檢測(cè)方法，具體包括以下步驟:
[0010]I)樣品前處理:稱取樣品，并加入內(nèi)標(biāo)物后，加水稀釋，并與硅藻土混合均勻，獲得已經(jīng)混合樣品的硅藻土 ；取玻璃層析柱依次裝入棉花、下層無水硫酸鈉、已經(jīng)混合樣品的硅藻土以及上層無水硫酸鈉，敲實(shí)，平衡；
[0011]2)丙烯酰胺的凈化及提取:向步驟I)的玻璃層析柱中加入乙酸乙酯，控制流速進(jìn)行3?5次吸附洗脫，得洗脫液A ;將洗脫液A進(jìn)行濃縮，用乙酸乙酯溶液洗滌并轉(zhuǎn)移到離心管中；在室溫下將濃縮液吹近干，然后加水超聲溶解，再加入正己烷渦旋后離心，取水層過濾，獲得待測(cè)提取液B;
[0012]3)儀器檢測(cè):將步驟2)中所得待測(cè)提取液B放入超高效液相色譜-串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀中采用正離子電離模式和多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式(MRM)進(jìn)行檢測(cè)，通過內(nèi)標(biāo)法定量，經(jīng)3分鐘色譜分析檢測(cè)出樣品中丙烯酰胺的含量。
[0013]步驟I)中所述的樣品為基質(zhì)復(fù)雜的色深液態(tài)調(diào)味品；優(yōu)選為生抽、老抽和鹵水汁中的一種；
[0014]步驟I)中所述的內(nèi)標(biāo)物優(yōu)選為甲基丙烯酰胺；內(nèi)標(biāo)物在提取液B中的終濃度優(yōu)選為 0.02 ?0.2ug/mL ；
[0015]步驟I)中所述的樣品與水的質(zhì)量比為I?3:7?9 ;
[0016]步驟I)中所述的樣品與水的質(zhì)量和等于所用硅藻土的質(zhì)量；
[0017]步驟I)中所述的平衡的時(shí)間為3?6min ；
[0018]步驟I)中所述的下層無水硫酸鈉和上層無水硫酸鈉的柱高分別為I?2cm ;
[0019]步驟2)中所述的洗脫中每次所用乙酸乙酯的量?jī)?yōu)選為10?20ml ；
[0020]步驟2)中所述的控制流速優(yōu)選為I滴/秒的流速；
[0021]步驟2)中所述的用乙酸乙酯溶液洗滌的次數(shù)優(yōu)選3?5次；
[0022]步驟2)中所述的吹干優(yōu)選為用氮?dú)獯蹈?；[0023]步驟2)中所述的加水的加入量為I?5ml ;水和正己烷的用量的體積比為I?5:3?5 ;
[0024]步驟2)中所用正己烷主要用于脫脂；
[0025]步驟2)中所述的離心優(yōu)選為在4000?8000r/min下離心5?IOmin ；
[0026]步驟2)中所述的過濾優(yōu)選為用0.22um的過濾膜過濾；
[0027]步驟3)所述的色譜條件為:
[0028]色譜柱為超高效液相色譜專用C18色譜柱；
[0029]流動(dòng)相A為乙酸銨甲酸溶液(5?10nmol/mL，甲酸(FA)體積分?jǐn)?shù)為0.05?0.1%)，流動(dòng)相B為甲醇，流速為0.2mL/min ；
[0030]流動(dòng)相梯度洗脫條件:a)甲醇:5%線性變化至40%?65%，用時(shí)2?3min ；b)甲醇:40%?65%馬上變化至5%，保持I?2min ；
[0031]步驟3)中所述的電離模式為ESI+ ；
[0032]步驟3)中所述的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式(MRM)推薦條件為:
[0033]丙烯酰胺:定量離子對(duì):71.9>54.6，一級(jí)錐孔電壓20?25kv，碰撞能量:5.0?11.0kv,駐留時(shí)間為0.1?0.4min ;定性離子對(duì):71.9>43.8, 一級(jí)錐孔電壓20?25kv,碰撞能量5.0?11.0kv,駐留時(shí)間為0.1?0.4min。
[0034]甲基丙烯酰胺:離子對(duì):85.7>57.6，一級(jí)錐孔電壓20?25kv，碰撞能量:5.0?
11.0kv,駐留時(shí)間為0.1?0.4min。
[0035]本發(fā)明的技術(shù)方案為使用基質(zhì)分散固相萃取法提取并凈化液態(tài)調(diào)味品中的丙烯酰胺，并對(duì)提取的丙烯酰胺進(jìn)行濃縮、脫脂，結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀(UPLC/MS/MS)進(jìn)行快速檢測(cè)，并用內(nèi)標(biāo)法來進(jìn)行定量，以此提高本檢測(cè)方法準(zhǔn)確性。
[0036]本發(fā)明方法中，使用以硅藻土為材料的基質(zhì)分散固相萃取法代替常規(guī)檢測(cè)方法中用水提取、過柱、離心凈化的步驟，提取與凈化同時(shí)進(jìn)行；而且硅藻土能較好地吸附樣品中的復(fù)雜基質(zhì)，選擇極性適合的試劑可實(shí)現(xiàn)選擇性地將丙烯酰胺洗脫下來的同時(shí)極性高的雜質(zhì)不被洗脫。在大大縮短了前處理時(shí)間的同時(shí)起到很好的樣品凈化效果。在儀器檢測(cè)階段，使用超高效液相色譜-串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行含量測(cè)定，分析時(shí)間(3min)比常用的方法縮小1/3，大大提高了檢測(cè)效率。使用內(nèi)標(biāo)法定量進(jìn)一步提高方法的準(zhǔn)確性。內(nèi)標(biāo)物采用與丙烯酰胺化學(xué)性質(zhì)相近的甲基丙烯酰胺，既起到內(nèi)標(biāo)物的作用，同時(shí)使用成本低，易于在企業(yè)日常分析中應(yīng)用。
[0037]與現(xiàn)有技術(shù)的國標(biāo)分析檢測(cè)方法(GB/T5009.204-2005)等相比，本發(fā)明所提出的丙烯酰胺檢測(cè)方法主要有以下幾點(diǎn)優(yōu)勢(shì):
[0038]I)本發(fā)明方法具有技術(shù)方案步驟少，用時(shí)時(shí)間短的特點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)一種快速處理樣品技術(shù):基質(zhì)分散固相萃取法，大大縮短樣品處理時(shí)間。現(xiàn)有技術(shù)的GB/T5009.204-2005等分析方法為5步檢測(cè)，用時(shí)為27小時(shí)左右；本發(fā)明方法僅需3步檢測(cè)，用時(shí)6小時(shí)左右。
[0039]2)本發(fā)明方法分析時(shí)間大大減少，在儀器分析使用的時(shí)間上，現(xiàn)有技術(shù)的GB/T5009.204-2005等分析方法為10分鐘以上，本發(fā)明方法用時(shí)為3分鐘。
[0040]3)本發(fā)明方法無需衍生，減少步驟和損失，而現(xiàn)有技術(shù)的檢測(cè)方法大都需要衍生化處理。
[0041]4)本發(fā)明方法使用的內(nèi)標(biāo)法具有高通量的特點(diǎn)，能同時(shí)處理多個(gè)樣品，效率較高。現(xiàn)有技術(shù)的GB/T5009.204-2005等分析方法使用標(biāo)準(zhǔn)加入法，要得到一個(gè)樣品的數(shù)據(jù)需要同時(shí)處理4個(gè)相同樣品，因此I次只能處理I個(gè)樣品；本發(fā)明使用內(nèi)標(biāo)法，能同時(shí)處理至少5個(gè)樣品，得到5不同樣品的數(shù)據(jù)。
[0042]5)本發(fā)明方法檢測(cè)限優(yōu)于國標(biāo)方法。本發(fā)明的檢測(cè)限為5μ g/kg，優(yōu)于國標(biāo)方法的檢測(cè)限7 μ g/kg。
[0043]6)本發(fā)明方法能較好的凈化樣品并獲得良好的色譜峰，定性定量準(zhǔn)確?，F(xiàn)有技術(shù)中GB/T5009.204-2005等分析方法所得凈化樣品顏色較深，在目標(biāo)峰處雜峰較多，干擾定性定量；本發(fā)明方法所得凈化樣品顏色為淡黃色，在目標(biāo)峰處雜峰少。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0044]圖1為本發(fā)明實(shí)施例1中標(biāo)準(zhǔn)溶液的丙烯酰胺質(zhì)譜圖。
[0045]圖2為本發(fā)明實(shí)施例1中標(biāo)準(zhǔn)溶液的丙烯酰胺(500ng/mL)和甲基丙烯酰胺(200ng/mL)總離子流圖。
[0046]圖3為本發(fā)明實(shí)施例1中標(biāo)準(zhǔn)溶液的丙烯酰胺(500ng/mL)和甲基丙烯酰胺(200ng/mL)的 MRM 色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0047]下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，選用了廣東珠江橋生物科技股份有限公司的生抽、老抽及鹵水汁作為分析物，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。
[0048]實(shí)施例1:
[0049]I)直接稱取生抽樣品2g于燒杯中，加入內(nèi)標(biāo)物甲基丙烯酰胺(lOug/mL) 0.02mL,加入8g的水溶解稀釋,加入IOg娃藻土混合。取玻璃層析柱，依次墊棉花、Icm高的無水硫酸鈉，然后加入混合好的樣品，再加一層Icm高的無水硫酸鈉，平衡3min。
[0050]2)加入20mL的乙酸乙酯，控制流速I滴/秒，用IOOmL梨形瓶接液；待溶液完全流出，讓柱子重新吸附3min ;如此進(jìn)行3次的吸附洗脫及接液。將所得液進(jìn)行濃縮至ImL左右并轉(zhuǎn)移刻度管。用乙酸乙酯進(jìn)行3次洗滌梨形瓶并轉(zhuǎn)移至IOmL離心管。在室溫下用氮?dú)獯蹈?，用ImL水超聲溶解,加入3ml正己燒潤旋。用5000r/min轉(zhuǎn)速離心IOmin后,取水層用0.22um濾膜過濾，獲得待測(cè)提取液。
[0051]3)上機(jī)檢測(cè)并計(jì)算丙烯酰胺含量:將步驟2)中所得待測(cè)提取液放入超高效液相色譜-串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀中進(jìn)行檢測(cè)；本發(fā)明質(zhì)譜方法采用正離子電離模式和多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式(MRM)進(jìn)行檢測(cè)，使用內(nèi)標(biāo)法定量，色譜分析時(shí)間為3分鐘；對(duì)實(shí)施例中樣品進(jìn)行了精密度及回收率試驗(yàn)，標(biāo)準(zhǔn)曲線制作顯示在本實(shí)驗(yàn)條件下獲得良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2均大于0.999，表明該檢測(cè)方法具有良好的精密度及準(zhǔn)確度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠。
[0052]本實(shí)例配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液的線性范圍在5?1000ng/mL。稀釋液為水。用甲醇配制母液10ug/mLο定量限為5 μ g/kg。
[0053]具體配置如下:
[0054]標(biāo)準(zhǔn)溶液配制:
[0055]丙烯酰胺溶液:準(zhǔn)確稱取丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)0.025g，用色譜純甲醇定容至25mL，制成標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.25mL，用純水稀釋定容至25mL，制成標(biāo)準(zhǔn)工作液10 μ g/mL0
[0056]甲基丙烯酰胺溶液:準(zhǔn)確稱取甲基丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)0.025g，用色譜純甲醇定容至25mL，制成標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.25mL，用純水稀釋定容至25mL，制成標(biāo)準(zhǔn)工作液 10 μ g/mL。
[0057]標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制:
[0058]吸取丙烯酰胺和甲基丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)工作液，用純水稀釋，配制系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，含甲基丙烯酰胺內(nèi)標(biāo)200ng/mL，含丙烯酰胺5，10，50，100，500，1000ng/mL。
[0059]檢測(cè)的色譜條件為:
[0060]色譜柱為超高效液相色譜專用C18色譜柱；
[0061 ] 流動(dòng)相A為乙酸銨甲酸溶液(5nmol/mL，F(xiàn)A0.1%)，流動(dòng)相B為甲醇，流速為0.2mL/min0
[0062]流動(dòng)相梯度洗脫條件如表1:
[0063]表1流動(dòng)相梯度洗脫條件
[0064]
【權(quán)利要求】
1.一種液態(tài)調(diào)味品中丙烯酰胺含量的快速檢測(cè)方法，其特征在于具體包括以下步驟: 1)樣品前處理:稱取樣品，并加入內(nèi)標(biāo)物后，加水稀釋，并與硅藻土混合均勻，獲得已經(jīng)混合樣品的娃藻土 ；取玻璃層析柱依次裝入棉花、下層無水硫酸鈉、已經(jīng)混合樣品的娃藻土以及上層無水硫酸鈉，敲實(shí)，平衡； 2)丙烯酰胺的凈化及提取:向步驟I)的玻璃層析柱中加入乙酸乙酯，控制流速進(jìn)行3~5次吸附洗脫，得洗脫液A ;將洗脫液A進(jìn)行濃縮，用乙酸乙酯溶液洗滌并轉(zhuǎn)移到離心管中；在室溫下將濃縮液吹近干，然后加水超聲溶解，再加入正己烷渦旋后離心，取水層過濾，獲得待測(cè)提取液B ； 3)儀器檢測(cè):將步驟2)中所得待測(cè)提取液B放入超高效液相色譜-串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀中采用正離子電離模式和多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式進(jìn)行檢測(cè)，通過內(nèi)標(biāo)法定量，經(jīng)3分鐘色譜分析檢測(cè)出樣品中丙烯酰胺的含量； 步驟I)中所述的樣品為基質(zhì)復(fù)雜的色深液態(tài)調(diào)味品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液態(tài)調(diào)味品中丙烯酰胺含量的快速檢測(cè)方法，其特征在于:步驟I)中所述的樣品為生抽、老抽和鹵水汁中的一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液態(tài)調(diào)味品中丙烯酰胺含量的快速檢測(cè)方法，其特征在于:步驟I)中所述的內(nèi)標(biāo)物為甲基丙烯酰胺；內(nèi)標(biāo)物在提取液B中的終濃度為0.02~0.2ug/Π?Τ, η
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液態(tài)調(diào)味品中丙烯酰胺含量的快速檢測(cè)方法，其特征在于:步驟1)中所述的樣品與水的質(zhì)量比為1~3:7~9 ; 步驟1)中所述的樣品與水的質(zhì)量和等于所用硅藻土的質(zhì)量。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液態(tài)調(diào)味品中丙烯酰胺含量的快速檢測(cè)方法，其特征在于:步驟1)中所述的平衡的時(shí)間為3~6min ； 步驟1)中所述的下層無水硫酸鈉和上層無水硫酸鈉的柱高分別為1~2cm。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液態(tài)調(diào)味品中丙烯酰胺含量的快速檢測(cè)方法，其特征在于:步驟2)中所述的洗脫中每次所用乙酸乙酯的量為10~20ml ； 步驟2)中所述的控制流速為I滴/秒的流速； 步驟2)中所述的用乙酸乙酯溶液洗滌的次數(shù)為3~5次； 步驟2)中所述的吹干為用氮?dú)獯蹈伞?br> 7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液態(tài)調(diào)味品中丙烯酰胺含量的快速檢測(cè)方法，其特征在于:步驟2)中所述的加水的加入量為1~5ml ;水和正己烷的用量的體積比為1~5:3~5 ; 步驟2)中所述的離心為在4000~8000r/min下離心5~10min ； 步驟2)中所述的過濾為用0.22um的過濾膜過濾。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液態(tài)調(diào)味品中丙烯酰胺含量的快速檢測(cè)方法，其特征在于:步驟3)所述的色譜條件為: 色譜柱為超高效液相色譜專用C18色譜柱； 流動(dòng)相A為乙酸銨甲酸溶液，流動(dòng)相B為甲醇，流速為0.2mL/min ;所述的乙酸銨甲酸溶液濃度為5~l0nmol/mL，其中甲酸體積濃度為0.05~0.1% ； 流動(dòng)相梯度洗脫條件:a)甲醇:5%線性變化至40%~65%，用時(shí)2~3min ；b)甲醇:40%~65%馬上變化至5%，保持1~2min。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液態(tài)調(diào)味品中丙烯酰胺含量的快速檢測(cè)方法，其特征在于:步驟3)中所述的電離模式為ESI+。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液態(tài)調(diào)味品中丙烯酰胺含量的快速檢測(cè)方法，其特征在于:步驟3)中所述的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式條件為: 丙烯酰胺:定量離子對(duì):71.9>54.6，一級(jí)錐孔電壓20~25kv，碰撞能量:5.0~，11.0kv,駐留時(shí)間為0.1~0.4min ;定性離子對(duì):71.9>43.8, 一級(jí)錐孔電壓20~25kv,碰撞能量5.0~11.0kv,駐留時(shí)間為0.1~0.4min ； 甲基丙烯酰胺: 離子對(duì):85.7>57.6，一級(jí)錐孔電壓20~25kv，碰撞能量:5.0~，11.0kv,駐留時(shí)間為0.1~0.4min。
【文檔編號(hào)】G01N30/06GK103472178SQ201310451262
【公開日】2013年12月25日 申請(qǐng)日期:2013年9月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月27日
【發(fā)明者】黃曉雯, 馮笑軍, 成姍, 王知非 申請(qǐng)人:廣東珠江橋生物科技股份有限公司