專利名稱：瘦肉精快速三聯(lián)檢測(cè)卡的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
瘦肉精快速三聯(lián)檢測(cè)卡技術(shù)領(lǐng)域[0001]本實(shí)用新型屬于免疫化學(xué)快速檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種能夠檢測(cè)瘦肉精類物質(zhì)，包括鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇的快速檢測(cè)卡。
背景技術(shù)：
[0002]瘦肉精是對(duì)一類動(dòng)物用藥的統(tǒng)稱。能夠促進(jìn)瘦肉生長(zhǎng)、抑制動(dòng)物脂肪生長(zhǎng)的物質(zhì)都可以叫做“瘦肉精”，是一種非常廉價(jià)的藥品，對(duì)于減少脂肪增加瘦肉(Lean Mass)作用非常好。雖然瘦肉精可以讓豬的單位經(jīng)濟(jì)價(jià)值提升不少，但它有很危險(xiǎn)的副作用，輕則導(dǎo)致心律不整，嚴(yán)重一點(diǎn)就會(huì)導(dǎo)致心臟病。目前，能夠?qū)崿F(xiàn)這種功能的物質(zhì)是一類叫做β_興奮劑 (β -agonist)的藥物。[0003]在國(guó)內(nèi)，通常所說(shuō)的“瘦肉精”則是指克倫特羅。鹽酸克倫特羅(Clenbuteix)I， CLE)，是一種從天然兒茶酚胺衍生合成的化合物。口服或肌注后能選擇性的松弛支氣管平滑肌，具有擴(kuò)張支氣管的作用，常用來(lái)防治哮喘、肺氣腫等肺部疾病。然而這種藥物對(duì)人有嚴(yán)重的副作用。輕則導(dǎo)致心跳及心律不正常，重則可引發(fā)心臟病。[0004]萊克多巴胺、沙丁胺醇都是克倫特羅的替代品，食用含有此類化合物殘留的肉類或內(nèi)臟時(shí)，均可能引發(fā)中毒癥狀，惡心、頭暈、肌肉顫抖、心悸、血壓上升、促進(jìn)心血管疾病等。2002年，農(nóng)業(yè)部會(huì)同衛(wèi)生部和 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局聯(lián)合發(fā)布《禁止在飼料和動(dòng)物飲用水中使用的藥物品種目錄》，規(guī)定禁止使用鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇等“瘦肉精”類物質(zhì)。[0005]目前現(xiàn)有的檢測(cè)產(chǎn)品都存在一定的局限性，無(wú)法同時(shí)檢測(cè)出多種“瘦肉精”類物質(zhì)的殘留，不利于基層單位的推廣應(yīng)用。實(shí)用新型內(nèi)容[0006]本實(shí)用新型的目的是提供一種靈敏度高、操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)時(shí)間短，能夠同時(shí)檢測(cè)鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇的檢測(cè)卡。[0007]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本實(shí)用新型的技術(shù)方案如下瘦肉精快速三聯(lián)檢測(cè)卡，其特征在于它包括底板、反應(yīng)膜、樣品墊、結(jié)合物釋放墊和吸水墊。盒體上有相應(yīng)的加樣槽9和觀察窗10。與常規(guī)試紙條不同的是，所述樣品墊和所述結(jié)合物釋放墊有重疊區(qū)，所述結(jié)合物釋放墊和所述反應(yīng)膜有重疊區(qū)，所述吸水墊和所述反應(yīng)膜有重疊區(qū)。優(yōu)選的重疊區(qū)保證了樣品液流動(dòng)的連續(xù)性，延長(zhǎng)了反應(yīng)時(shí)間，是反應(yīng)能夠充分發(fā)生，有效地降低了實(shí)驗(yàn)誤差。[0008]沿樣品液流動(dòng)方向，底板I分為三個(gè)區(qū)域加樣區(qū)、反應(yīng)膜設(shè)置區(qū)和吸水墊設(shè)置區(qū)。反應(yīng)膜2設(shè)于反應(yīng)膜設(shè)置區(qū)上；結(jié)合物釋放墊4、樣品墊3設(shè)置于加樣區(qū)上，結(jié)合釋放墊靠近反應(yīng)膜處設(shè)置；所述結(jié)合物釋放墊上包被有抗鹽酸克倫特羅偶聯(lián)物、抗萊克多巴胺偶聯(lián)物和抗沙丁胺醇偶聯(lián)物金標(biāo)抗體的混合物。所述吸水墊設(shè)置區(qū)上設(shè)有吸水墊5 ;所述反應(yīng)膜上設(shè)有T線6和C線7，T線依次包被有鹽酸克倫特羅蛋白偶聯(lián)物、萊克多巴胺蛋白偶聯(lián)物、沙丁胺醇蛋白偶聯(lián)物，C線包被有兔抗鼠的質(zhì)控線。[0009]所述三條T線與一條C線相互平行且與樣品流動(dòng)方向垂直。在反應(yīng)膜上檢測(cè)線印 跡和質(zhì)控線印跡的組合排列可為紫紅色的條帶。所述T線靠近結(jié)合物釋放墊，所述C線靠 近吸水墊。[0010]試紙條還包括固定膜8，可覆蓋于所述樣品墊、所述結(jié)合物釋放墊和所述吸水墊 上，固定膜與所述樣品墊對(duì)應(yīng)的區(qū)域設(shè)有樣品槽9。所述固定膜為防水材質(zhì)，可用于固定檢 測(cè)卡的各個(gè)組件，避免樣品或試劑與外界環(huán)境中的物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，影響檢測(cè)結(jié)果。[0011]所述樣品墊的長(zhǎng)度可為18_，所述結(jié)合物釋放墊的長(zhǎng)度可為6_，所述反應(yīng)膜的 長(zhǎng)度可為20mm，所述吸水墊的長(zhǎng)度可為20mm。所述T線距離所述結(jié)合物釋放墊的垂直距離 可為6mm ;所述C線距離所述吸水墊的垂直距離可為6mm ;所述T線和所述C線的垂直距離 可為5mm，所述T線間的垂直距離可為3. 5mm。[0012]所述反應(yīng)膜、所述樣品墊、所述結(jié)合物釋放墊和所述吸水墊可通過(guò)雙面膠固定于 盒體的底板上，它們與底板之間可設(shè)有高分子材料制成的背襯膜，用以阻止粘合劑中的有 機(jī)溶劑對(duì)包被的蛋白和抗體的破壞。[0013]所述試紙卡具體為長(zhǎng)70mm,寬20mm的條狀。[0014]所述克倫特羅抗體可為克倫特羅單克隆抗體或多克隆抗體。所述萊克多巴胺抗體 可為萊克多巴胺單克隆抗體和多克隆抗體。所述的沙丁胺醇抗體可為沙丁胺醇的單克隆抗 體和多克隆抗體。[0015]所述與鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇的偶聯(lián)物可為牛血清白蛋白、人血 清蛋白、卵清蛋白等。[0016]所述盒體可為硬質(zhì)塑料。具體可為PVC材質(zhì)。所述樣品吸收墊可由玻璃纖維棉或 玻璃棉制成。所述結(jié)合物釋放墊可由玻璃纖維棉或玻璃棉制成。所述吸水墊可為厚濾紙、 無(wú)紡布制成。所述反應(yīng)膜為硝酸纖維素膜(NC膜)。所述保護(hù)膜可為PE材質(zhì)的保護(hù)膜。[0017]本檢測(cè)卡的檢測(cè)原理為硝酸纖維素膜(NC)含有預(yù)先固定于測(cè)試區(qū)(T)的包被 抗原、控制區(qū)(C)的二抗和固定于結(jié)合釋放墊上的金標(biāo)抗體。樣品中的被檢物在毛細(xì)滲移 的過(guò)程中與膠體金標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合，抑制了抗體和T區(qū)包被抗原的結(jié)合，使T區(qū)不顯 色，結(jié)果為陽(yáng)牲；反之，T區(qū)出現(xiàn)一條肉眼可見的紅色條帶，結(jié)果為陰性。[0018]本實(shí)用新型瘦肉精三聯(lián)檢測(cè)卡具有以下特點(diǎn)[0019]1、試紙卡具有很高的特異性。在實(shí)際檢測(cè)中，可以同時(shí)檢測(cè)克倫特羅、萊克多巴胺 和沙丁胺醇藥物。并且能夠顯示出每一種化合物的檢測(cè)結(jié)果。檢測(cè)限見表I。[0020]表I檢測(cè)限[0021]藥物名稱檢測(cè)限U g/L(kg)克倫特羅3萊克多巴胺3沙丁胺醇3[0022]2、操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)時(shí)間短。檢測(cè)過(guò)程中操作簡(jiǎn)便，無(wú)需專業(yè)人員進(jìn)行，15min內(nèi)即可 完成樣品的檢測(cè)，一次操作就能得到三份實(shí)驗(yàn)結(jié)果，大大節(jié)約了檢測(cè)時(shí)間。[0023]3、樣品處理簡(jiǎn)單。檢測(cè)三種化合物只需對(duì)樣本進(jìn)行一次簡(jiǎn)單的前處理，方便檢測(cè) 人員對(duì)樣品進(jìn)行處理，同時(shí)也節(jié)約了樣品處理時(shí)間。[0024]4、應(yīng)用價(jià)值高。檢測(cè)卡操作簡(jiǎn)單，可以簡(jiǎn)單明了的對(duì)結(jié)果的陰陽(yáng)性就行判定。[0025]5、易于推廣應(yīng)用。檢測(cè)卡操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)時(shí)間迅速，能夠滿足不同的檢測(cè)機(jī)構(gòu)的需 求，包括養(yǎng)殖企業(yè)自檢、質(zhì)量監(jiān)管部門抽檢、檢測(cè)機(jī)構(gòu)化驗(yàn)等，具有很好的社會(huì)效益及經(jīng)濟(jì) 效益。[0026]本實(shí)用新型具有較高的應(yīng)用價(jià)值和較大的經(jīng)濟(jì)社會(huì)效益，將對(duì)食品中有害合 物——“瘦肉精”的檢測(cè)監(jiān)管發(fā)揮重要作用。


[0027]圖1為本實(shí)用新型試紙條的結(jié)構(gòu)示意圖[0028]圖2為本實(shí)用新型瘦肉精三聯(lián)快速檢測(cè)卡的俯視結(jié)構(gòu)示意圖具體實(shí)施方案[0029]
以下結(jié)合附圖做進(jìn)一步說(shuō)明[0030]1、瘦肉精三聯(lián)檢測(cè)卡本實(shí)用新型包括盒體和盒體內(nèi)的試紙條,盒體上設(shè)有加樣 槽9，觀察窗10和樣品標(biāo)記處11 ;試紙條包括底板1、反應(yīng)膜2、樣品墊3、結(jié)合物釋放墊4和 吸水墊5。反應(yīng)膜2、樣品墊3、結(jié)合物釋放墊4和吸水墊5通過(guò)雙面膠固定在底板I上，在 他們與底板I之間設(shè)有高分子材料制成的背襯膜。沿樣品流動(dòng)的方向，底板分為加樣區(qū)、反 應(yīng)膜設(shè)置區(qū)和吸水墊設(shè)置區(qū)。反應(yīng)膜2設(shè)于反應(yīng)膜設(shè)置區(qū)上。所述加樣區(qū)上，遠(yuǎn)離所述反 應(yīng)膜設(shè)置區(qū)處設(shè)有樣品墊3，靠近所述反應(yīng)膜設(shè)置區(qū)處設(shè)有結(jié)合物釋放墊4。結(jié)合物釋放墊 4上包被有金標(biāo)抗體混合物(抗鹽酸克倫特羅偶聯(lián)物、抗萊克多巴胺偶聯(lián)物、抗沙丁胺醇偶 聯(lián)物金標(biāo)抗體的混合溶液)。為了保證樣品液流動(dòng)的連續(xù)性，樣品墊3和結(jié)合物釋放墊4設(shè) 有重疊區(qū)，結(jié)合物釋放墊4和反應(yīng)膜2設(shè)有重疊區(qū)，吸水墊5和反應(yīng)膜2設(shè)有重疊區(qū)。反應(yīng) 膜2上設(shè)有Tl、T2、T3和C線，對(duì)應(yīng)盒體上觀察窗11。Tl上包有鹽酸克倫特羅偶聯(lián)物、T2 上包有萊克多巴胺偶聯(lián)物，T3上包有沙丁胺醇偶聯(lián)物，C線上包有兔抗鼠的抗體。T線間相 互平行，并且與C線平行，同樣品液流動(dòng)方向垂直，T線靠近結(jié)合物釋放墊4，C線靠近吸水 墊5。樣品墊3和結(jié)合物釋放墊4上覆蓋有固定膜8。固定膜8和樣品墊3對(duì)應(yīng)盒體上的 區(qū)域?yàn)榧訕硬?。[0031]2、檢測(cè)卡的使用[0032]樣本前處理[0033]尿樣若樣品比較混池時(shí),可3000g離心5min或過(guò)濾。[0034]肉樣取4g勻漿去脂肪肉樣(或肉泥)于50mL離心管中，蓋緊管蓋。將裝有樣品 的離心管放入沸水中加熱lOmin，取出管中液體移至干凈離心管中，冷卻至室溫。[0035]飼料準(zhǔn)確稱取2±0.05g均質(zhì)后的飼料樣品于50mL離心管中；加入IOmL O. 05MHC1，充分渦動(dòng)Imin ;加入IOmLO. 05MNa0H溶液調(diào)pH值至7-8充分渦動(dòng)30s，靜置 5min。[0036]血清收集的血液需首先進(jìn)行抗凝血處理，以4000 5000轉(zhuǎn)/分，離心5min后，收集上清液。[0037]檢測(cè)卡的使用取出檢測(cè)卡，開封后平放于桌面，請(qǐng)使用本產(chǎn)品附帶滴管吸取待檢 樣品，加入3-4滴于樣品孔中；加樣后5-8min，觀察顯色區(qū)，判斷結(jié)果，其他時(shí)間判斷無(wú)效。[0038]檢測(cè)結(jié)果若樣本中含有克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇三種化合物的一種或多種，則會(huì)與相應(yīng)的標(biāo)記抗體反應(yīng)形成復(fù)合物，出現(xiàn)一道(C線)或多道紫紅色印跡或；若C 線位置沒(méi)有紫紅色印跡顯示表明檢測(cè)卡已經(jīng)失效；陰性樣品，卡中T、C顯示紫紅色印跡，沒(méi) 有紫紅色印跡顯示表明檢測(cè)卡已經(jīng)失效。
權(quán)利要求1.一種可快速檢測(cè)瘦肉精的三聯(lián)檢測(cè)卡，其特征在于它包括底板、反應(yīng)膜、結(jié)合物釋放墊和吸水墊；所述結(jié)合物釋放墊可由玻璃纖維棉或玻璃棉制成；所述吸水墊可為厚濾紙或無(wú)紡布；所述反應(yīng)膜為硝酸纖維素膜； 沿樣品液流動(dòng)方向，底板(I)分為三個(gè)區(qū)域加樣區(qū)、反應(yīng)膜設(shè)置區(qū)和吸水墊設(shè)置區(qū)；反應(yīng)膜(2)設(shè)于反應(yīng)膜設(shè)置區(qū)上；結(jié)合物釋放墊(4)、樣品墊(3)設(shè)置于加樣區(qū)上，結(jié)合釋放墊靠近反應(yīng)膜處設(shè)置；所述吸水墊設(shè)置區(qū)上設(shè)有吸水墊(5);所述反應(yīng)膜上設(shè)有T線(6)和C線(7)，T線依次包被有鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇，C線包被有兔抗鼠的質(zhì)控線。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)卡，其特征在于所述三條T線與一條C線相互平行且與樣品流動(dòng)方向垂直，檢測(cè)印跡可為紫紅色條帶；所述T線靠近所述結(jié)合物釋放墊，所述C線靠近所述吸水墊。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測(cè)卡，其特征在于所述檢測(cè)卡還包括固定膜(8)，覆蓋于所述樣品墊、所述結(jié)合物釋放墊和所述吸水墊上，固定膜與所述樣品墊對(duì)應(yīng)的區(qū)域設(shè)有樣品槽(9)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)卡，其特征在于所述樣品墊和所述結(jié)合物釋放墊有重疊區(qū)，所述結(jié)合物釋放墊和所述反應(yīng)膜有重疊區(qū)，所述吸水墊和所述反應(yīng)膜有重疊區(qū)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測(cè)卡，其特征在于沿樣品液流動(dòng)方向，所述樣品墊的長(zhǎng)度可為18_，所述結(jié)合物釋放墊的長(zhǎng)度可為6_，所述反應(yīng)膜的長(zhǎng)度可為20_，所述吸水墊的長(zhǎng)度可為20_。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測(cè)卡，其特征在于所述T線距離所述結(jié)合物釋放墊的垂直距離可為6mm ;所述C線距離所述吸水墊的垂直距離可為6mm ;所述T線和所述C線的垂直距離可為5mm，所述T線間的垂直距離可為3. 5mm。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測(cè)卡，其特征在于所述反應(yīng)膜、所述樣品墊、所述結(jié)合物釋放墊和所述吸水墊可通過(guò)雙面膠固定于盒體的底板上，在他們與底板之間可設(shè)有高分子材料制成的背襯膜，用以阻止粘合劑中的有機(jī)溶劑對(duì)包被的蛋白和抗體的破壞。
專利摘要本實(shí)用新型公開了一種可以快速檢測(cè)瘦肉精類化合的三聯(lián)檢測(cè)卡。本實(shí)用新型包括盒體和盒體內(nèi)的試紙條。試紙條包括底板、反應(yīng)膜、樣品墊、結(jié)合物釋放墊和吸水墊；盒體上有相應(yīng)的加樣槽和觀察窗。沿樣品液流動(dòng)方向，底板1分為三個(gè)區(qū)域加樣區(qū)、反應(yīng)膜設(shè)置區(qū)和吸水墊設(shè)置區(qū)；結(jié)合物釋放墊4、樣品墊3設(shè)置于加樣區(qū)上；結(jié)合物釋放墊上包被有抗鹽酸克倫特羅偶聯(lián)物、抗萊克多巴胺偶聯(lián)物和抗沙丁胺醇偶聯(lián)物抗體膠體金標(biāo)物的混合物；反應(yīng)膜上設(shè)有T線6和C線7，T線依次包被有鹽酸克倫特羅蛋白偶聯(lián)物、萊克多巴胺蛋白偶聯(lián)物、沙丁胺醇蛋白偶聯(lián)物，C線包被有兔抗鼠的質(zhì)控線。本實(shí)用新型操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)時(shí)間短，易于推廣，應(yīng)用價(jià)值高。
文檔編號(hào)G01N33/558GK202854140SQ20122026675
公開日2013年4月3日 申請(qǐng)日期2012年6月7日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月7日
發(fā)明者江海洋, 徐飛, 李向梅, 王照鵬, 方沅 申請(qǐng)人:北京維德維康生物技術(shù)有限公司