專利名稱：高中和活性抗SEB單克隆抗體FMU-SEB-No.1的輕鏈和重鏈可變區(qū)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)學技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種單克隆抗體，特別涉及高中和活性抗SEB 單克隆抗體FMU-SEB-No. 1的輕鏈和重鏈可變區(qū)，包括其氨基酸序列和核苷酸序列。
背景技術(shù)：
生物威脅及其防御是目前世界各國最重要的國家安全關(guān)切問題之一，也是軍事醫(yī) 學研究的重要領(lǐng)域之一。生物威脅主要包括生物戰(zhàn)爭和生物恐怖活動，是指利用生物劑 (包括戰(zhàn)劑)故意對特定目標人群以及與人類生產(chǎn)生活密切相關(guān)的其他生物體(如動物、植 物)和設(shè)施等發(fā)動襲擊的行為。因此，生物威脅不僅可以大量殺傷人、畜，而且造成的民眾 心理恐慌、社會混亂以及經(jīng)濟損失等都是十分巨大的。盡管聯(lián)合國制定的《禁止生物武器公 約》)存在，但并沒有有效遏止生物武器研制和發(fā)展的勢頭，一些軍事大國不斷提高其生物 戰(zhàn)能力，擁有生物武器的國家和地區(qū)進一步增多，國際生物威脅的形勢日趨惡化。構(gòu)成生物 威脅的主要元素是生物劑，而生物劑中最主要的是烈性病原體及其毒性產(chǎn)物(毒素)。B型葡萄球菌腸毒素(Staphylococal enterotoxin B, SEB)毒性大、極少量毒素 侵入人或動物機體便會中毒，對人、動物及環(huán)境構(gòu)成極大威脅。1. 7μ g的SEB就可殺死一個 成年人，是被列入聯(lián)合國《禁止生物武器公約》核查清單的11種生物毒素之一。美軍10年 來的毒素戰(zhàn)劑防治研究規(guī)劃始終將SEB作為重要的研究對象之一，重點研究SEB損傷治療 性抗體和小分子抑制劑等，但是也僅有多克隆抗體(PcAb)制備的報道，治療性單克隆抗體 (mAb)仍然處于起步研究階段?？贵w單體分子是由兩條相同的重鏈(H鏈)和兩條相同的輕鏈(L鏈)，通過鏈間二 硫鍵連接而成的四肽鏈結(jié)構(gòu)。H鏈和L鏈包括氨基(N)端和羧基(C)端，靠近N端的可變區(qū) (V區(qū))由高變區(qū)/互補決定區(qū)(HVR/CDR)和骨架區(qū)(FR)組成；靠近C端為恒定區(qū)(C區(qū))。 重鏈可變區(qū)(VH)和輕鏈可變區(qū)(VL)形成的蛋白質(zhì)折疊是抗原結(jié)合部位，其中的CDR/HVR 是抗體與抗原決定基互補結(jié)合的部位，C區(qū)引發(fā)抗原抗體識別后的反應?？贵w根據(jù)FR/C區(qū) 不同可分為人源、鼠源等，鼠源性抗體在人體內(nèi)使用時具有免疫原性，易引起人體的免疫反 應，這些免疫反應可引起對鼠源性抗體的清除以及免疫復合物介導的超敏反應。為了克服 鼠源性抗體的缺陷，需要構(gòu)建高親和力的特異性嵌合抗體、單鏈抗體或人源化抗體。在改造過程中，最為重要的是首先必須獲得具有良好特異性、親和力和中和活性 的鼠源性親本抗體，克隆其輕鏈和重鏈可變區(qū)基因，然后將這兩條基因進行改造，構(gòu)建重組 抗體基因。因此，篩選出高親和力、具有中和活性的鼠源性抗SEB mAb，從中克隆出輕、重鏈 可變區(qū)基因，對進一步研制具有完全自主知識產(chǎn)權(quán)的緊急救治SEB毒素中毒的中和性基因 工程抗體制劑，作為戰(zhàn)略儲備以填補我國、我軍在該領(lǐng)域的空白，對于提升我軍未來反生物 戰(zhàn)、反生物恐怖應對能力，不僅具有極其重大的軍事意義，而且在平時食物中毒救治方面也 具有十分重要的實際應用價值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明解決的問題在于提供一種高中和活性抗SEB單克隆抗體FMU-SEB-No. 1的 輕鏈和重鏈可變區(qū)，包括其氨基酸和核苷酸序列，為構(gòu)建高親和力、具有中和活性的抗SEB 嵌合或人源化基因工程抗體提供支持。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)一種抗SEB單克隆抗體FMU-SEB-No. 1的輕鏈和重鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)的3 個互補決定區(qū)(CDR)序列分別為CDRl =Gln-Asn-Val-Ile-Thr-Asn ；CDR2 =Ser-Ala-Ser ； CDR3 =Gln-Gln-Tyr-Asn-Ser-Tyr-Pro-Asp-Thr ；所述重鏈可變區(qū)的3個互補決定區(qū)(OTR)序列分別為CDRl.Gly-Tyr-Thr-Phe-Thr-Asn-Tyr-Tyr ；CDR2 Jle-Tyr-Pro-Gly-Asp-Ala-Thr-Thr ；CDR3 :Thr-Arg-Gly-Phe-Leu-Thr-Ala-Ser-Val-Phe-Ala-Tyr。所述的抗SEB單克隆抗體FMU-SEB-No. 1的輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ. ID. NO. 1，重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ. ID. NO. 2所示。所述的編碼SEB單克隆抗體FMU-SEB-No. 1輕鏈可變區(qū)的基因序列如SEQ. ID. NO. 3 所示，編碼重鏈可變區(qū)的基因序列如SEQ. ID. NO. 4所示。所述的抗SEB單克隆抗體FMU-SEB-No. 1的輕鏈和重鏈可變區(qū)應用于構(gòu)建針對SEB 的基因工程抗體或診斷試劑的制備。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益的技術(shù)效果1、本發(fā)明提供的抗SEB單克隆抗體FMU-SEB-No. 1與SEB的親和力高，能夠特異性 識別SEB并進行免疫反應，動物體內(nèi)外實驗證實對SEB具有較強的中和能力；2、本發(fā)明克隆抗SEB單克隆抗體FMU-SEB-No. 1的輕鏈、重鏈可變區(qū)基因和氨基酸 序列，序列分析證實了該抗體序列的惟一性。3、分析獲得輕鏈、重鏈可變區(qū)的⑶R區(qū)，在此基礎(chǔ)上為構(gòu)建高親和力、具有中和活 性的抗SEB嵌合或人源化基因工程抗體提供支持。


圖1是間接ELISA檢測FMU-SEB-No. 1 mAb與SEA、SEB和SECl的交叉反應結(jié)果 圖；圖2是FMU-SEB-No. 1 mAb抑制SEB引起的小鼠脾細胞體外增殖實驗結(jié)果圖；圖3是FMU-SEB-No. 1 mAb體內(nèi)中和SEB中毒的小鼠存活實驗結(jié)果圖；圖4是FMU-SEB-No. 1 mAb輕鏈可變區(qū)基因同源性序列檢測結(jié)果；圖5是FMU-SEB-No. 1 mAb重鏈可變區(qū)基因同源性序列檢測結(jié)果；圖6是FMU-SEB-No. 1 mAb輕鏈可變區(qū)氨基酸同源性序列檢測結(jié)果；圖7是FMU-SEB-No. 1 mAb重鏈可變區(qū)氨基酸同源性序列檢測結(jié)果。
具體實施例方式
本發(fā)明用天然SEB免疫Balb/c小鼠，制備了一組小鼠抗SEB的單克隆抗體，從中 篩選出能穩(wěn)定分泌高親和力抗SEB的FMU-SEB-No. 1 mAb雜交瘤細胞株，制備腹水獲得高親 和力抗SEB mAb ；并確認該基因序列和相應蛋白序列的惟一性及其CDR序列；為抗SEB嵌合 或人源化基因工程抗體提供支持。下面結(jié)合具體單克隆抗體的制備方法、抗體活性檢測，以 及序列的檢測和唯一性的確定對本發(fā)明做詳細說明，所述是對本發(fā)明的解釋而不是限定。 本發(fā)明具體按以下步驟實施 1、小鼠抗SEB高親和力抗體FMU-SEB-No. 1 mAb的制備1. 1單克隆抗體的制備、純化按單克隆抗體制備方法(細胞和分子免疫學實驗技術(shù)第一版，P9-P17)，用天然 SEB免疫Balb/c小鼠(購自第四軍醫(yī)大學實驗動物中心)，初次免疫，使用福氏完全佐劑， 后續(xù)免疫使用福氏不完全佐劑，每次間隔3周，均為皮下多點注射，共免疫4次。末次免疫 7 10天后采血測其效價，檢測免疫效果。間隔2 3周后，經(jīng)腹腔注射抗原再加強免疫， 3天后處死動物取脾進行細胞融合。取對數(shù)生長的小鼠骨髓瘤細胞SP2/0計數(shù)，同時制備免疫脾細胞懸液。將骨髓瘤 細胞與脾細胞按1 10比例混合進行細胞融合。融合后細胞懸液加入含有飼養(yǎng)細胞(正常 Balb/c小鼠腹腔巨噬細胞)的96孔板，37°C、5% CO2孵箱培養(yǎng)。待克隆出現(xiàn)后，間接ELISA 檢測，挑選陽性克隆。對含有陽性克隆孔的細胞采用有限稀釋法進行克隆化，直至獲得能夠 穩(wěn)定分泌抗體的雜交瘤細胞系(體外連續(xù)培養(yǎng)超過6個月)，并對其分泌的抗體進行Ig亞 類測定(結(jié)果為IgGl亞類，κ型輕鏈)。在獲得能夠穩(wěn)定分泌抗體的雜交瘤細胞株后，按小鼠腹水制備方法制備包含單 克隆抗體的腹水(細胞和分子免疫學實驗技術(shù)第一版，P9-P17)。腹水經(jīng)45%飽和硫酸 銨沉淀后，采用QFF陰離子交換層析法純化。用SDS-PAGE鑒定純化抗體的純度，純化的 FMU-SEB-No. 1 mAb 純度達到 95%。1. 2抗SEB單克隆抗體FMU-SEB-No. 1的效價測定用間接ELISA方法測定純化前腹水以及純化后mAb的相對親和力。其中包被抗原 為天然SEB，待測樣品為系列稀釋的腹水以及純化后mAb，檢測抗體為羊抗鼠-HRP酶標記抗 體，底物使用ABTS。所篩選出的高親和力FMU-SEB-No. 1 mAb，腹水效價為1 X 10_7，純化后 效價為0. 5ng/ml，而一般采用間接ELISA檢測腹水效價達1 X 10_5以上的抗體即可使用。1. 3間接ELISA檢測FMU-SEB-No. 1 mAb與其他型別葡萄球菌腸毒素的交叉反應分別用SEA(A型葡萄球菌腸毒素)、SEB、SECl (Cl型葡萄球菌腸毒 素)包被 96 孔 ELISA 板，100 μ 1/孔，4 °C 過夜。0. 05 % Tween20-PBS(PBST)洗滌后，將 FMU-SEB-No. 1 mAb用含0. 1 % BSA的抗體稀釋液稀釋至0. 5 μ g/ml加入到ELISA板孔中， 100 μ 1/孔，37°C孵育lh。PBST洗滌后，加入工作濃度羊抗鼠-HRP酶標記抗體，100 μ 1/孔， 37Γ孵育45min，行間接ELISA。結(jié)果如圖1所示，其中，縱坐標為405nm波長處的吸光度值 (A405)，表示FMU-SEB-No. 1 mAb與不同抗原反應的程度，可以看出FMU-SEB-No. 1 mAb僅特 異性地與SEB反應，而與SEA和SECl均無交叉反應。1.4 FMU-SEB-No. 1 mAb體內(nèi)外中和活性測定通過抗SEB的FMU-SEB-No. 1 mAb抑制SEB引起的小鼠脾細胞體外增殖情況來確定抗體的體外中和活性。取8周齡Balb/c小鼠的脾細胞懸液，按1 X IO6/孔的濃度加入到 培養(yǎng)板當中，加入RPMI 1640作為陰性對照組(既不加SEB、也不加阻斷抗體)，其余的培養(yǎng) 孔分別加入濃度為200ng/ml的SEB組、SEB+FMU-SEB-No. 1 mAb組(濃度為200 μ g/ml)、 SEB+PcAb (針對SEB的多克隆抗體，小鼠免疫血清)組、SEB+抗卵類粘蛋白No. 9 (無關(guān)抗體 對照)組，均與小鼠脾細胞共培養(yǎng)5天(37°C，5% CO2)，在倒置顯微鏡下觀察對照孔細胞有 明顯的增殖時，用MTT法檢測細胞增殖情況。檢測結(jié)果如圖2所示，縱坐標為490nm波長處 的吸光度值(A490)，表示細胞增殖程度，RPMI 1640組為陰性對照組，相當于正常的脾細胞 增殖；可以看出加入SEB后，脾細胞在受到SEB的刺激之后，與正常相比顯示出明顯的增殖 促進作用；加入作為阻斷抗體的FMU-SEB-No. 1 mAb與針對SEB的多克隆抗體對SEB的刺激 進行阻斷，細胞增殖效果與正常培養(yǎng)相當，說明加入的阻斷抗體能夠完全阻斷SEB對小鼠 脾細胞的刺激作用；而作為對照抗體的抗卵類粘蛋白No. 9則幾乎無阻斷作用，細胞增殖效 果與SEB刺激組相當。體重14 17g的8周齡Balb/c小鼠，兩只為一組，以生理鹽水作為陰性對照， anti-PTAl mAb 作為無關(guān)抗體對照，將不同劑量 FMU-SEB-No. 1 mAb (2 μ g、20 μ g、200 μ g、 2mg)分別與SEB(2yg)預先混合(PBS稀釋至0. 5ml)，室溫放置1小時，小鼠腹腔注射 (0. 5ml/只)；4小時后腹腔注射LPS (PBS稀釋至75 μ g/0. 5ml/只)，觀察小鼠存活情況4 天(96小時)。具體結(jié)果如圖3所示，橫坐標為觀察的時間，縱坐標為小鼠存活的個數(shù)，可以 看出，生理鹽水對照和anti-PTAl對照抗體均不能保護小鼠，24h之后無小鼠存活；注射劑 量為2 μ g的mAb組也不能保護小鼠，顯示相同的結(jié)果；而注射劑量為20 μ g的mAb組在24 h之后一直到96h內(nèi)，有一只小鼠存活；注射劑量為200yg或2mg mAb組的兩只小鼠一直 存活，說明注射劑量達到200 μ g之后，F(xiàn)MU-SEB-No. 1 mAb可以有效保護注射SEB (2 μ g相 當于8 LD50)小鼠的存活，在體內(nèi)表現(xiàn)出對SEB的中和活性。2、抗SEB的FMU-SEB-No. 1 mAb輕鏈和重鏈可變區(qū)基因的克隆2. IFMU-SEB-Νο. 1 mAb雜交瘤細胞的培養(yǎng)按常規(guī)方法復蘇(細胞培養(yǎng)，第一版，P88)分泌FMU-SEB-No. 1 mAb的雜交瘤細胞， 用含10%小牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基于37°C，5% CO2孵箱中培養(yǎng)至對數(shù)生長期。2. 2總RNA的提取和cDNA第一鏈的合成采用TRIZOL Reagent (購自美國GIBCO公司)提取總RNA，具體操作步驟按說明書 進行；cDNA第一鏈合成試劑盒購自美國GIBCO公司，在得到總RNA后按說明書進行反轉(zhuǎn)錄 合成cDNA第一鏈。2. 3RT-PCR 法擴增 FMU-SEB-No. 1 mAb 的 VL 禾口 VH 基因一步法RT-PCR擴增試劑盒購自TakaRa公司，按試劑盒說明書擴增FMU-SEB-No. 1 mAb的VL禾口 VH基因；利用VL F (上游引物)和VL B (下游引物)以及VH F和VH B兩對引物，以總RNA 為模板進行RT-PCR ；反應體積50μ 1，反應條件為94°C 5min ；95°C 30s, 58°C lmin,72°C lmin，循環(huán) 35次;72 °C 7min;引物序列為:VL F :gttagatctc cagcttggtc cc22bp ；VL B:gacattcagc tgacccagtc tcca24bp ；
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VH F:tgaggagacg gtgaccgtgg tcccttggcc ccag 34bp ；VH B:aggtsmarct gcagsagtcw gg22bp ；(IUB 標準兼并堿基代碼:s :c/g ；m :a/c ；r :a/g ；w :a/t)2. 4PCR擴增產(chǎn)物的克隆和篩選PCR產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳，用小量膠回收試劑盒(購自上海華舜生物工程 有限會司)回收PCR擴增片段，用DNA連接試劑盒(購自TakaRa公司)將該片段按說明書， 利用加A尾插入pMD-TIS載體(購自TakaRa公司)中，連接物轉(zhuǎn)化E. coli (購自中國普通 微生物菌種保藏中心，CGMCC，北京)，接種在Amp抗性LB瓊脂培養(yǎng)平皿中37°C培養(yǎng)過夜。挑取LB瓊脂培養(yǎng)平皿中克隆，在Amp抗性LB培養(yǎng)基中37°C搖菌過夜，以1 μ 1菌 液為模板，通過上述針對輕鏈、重鏈可變區(qū)設(shè)計的引物，用PCR法篩選重組陽性Ε. coli克 ?。粚⑺@得重組陽性Ε. coli克隆搖菌，菌液送交上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司 完成基因序列測定，輕鏈可變區(qū)的基因序列如SEQ ID NO. 3所示，重鏈可變區(qū)的基因序列如 SEQ ID NO. 4 所示。3 FMU-SEB-No. 1 mAb輕鏈和重鏈可變區(qū)的核苷酸序列及同源性分析3. 1確定測序無誤后，在GenBank+EMBL+DDBJ+PDB數(shù)據(jù)庫中，進行核苷酸序列同源 性分析(Blastn)。FMU-SEB-No. 1 mAb 輕鏈可變區(qū)基因與編號為 ref | XM_001477552. 1 的小鼠 Igt κ 輕鏈可變區(qū)基因同源性最高，達270/284(95% )，如圖4所示。FMU-SEB-No. 1 mAb重鏈可變區(qū)基因與編號為ref | XM_001474335. 1的小鼠Ig重鏈 可變區(qū)基因同源性最高，為230/277(83% )，如圖5所示。同源性分析表明，編碼FMU-SEB-No. 1 mAb的輕、重鏈可變區(qū)的核苷酸序列，盡管與 其它基因序列有一定同源性，但未發(fā)現(xiàn)與本發(fā)明完全相同的基因序列，表明本發(fā)明在基因 序列上具有惟一性。3. 2將可變區(qū)基因翻譯成氨基酸序列，進行氨基酸序列分析FMU-SEB-No. 1 mAb輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ ID N0. 1，重鏈可變區(qū)的氨基 酸序列如SEQ ID N0. 2所示。在 non-redundant Genbank CDS translations+PDB+SwissProt+PIR+PRF 蛋白質(zhì) 數(shù)據(jù)庫中，進行氨基酸序列同源性分析(Blastp)。分析結(jié)果表明，F(xiàn)MU-SEB-No. 1 mAb輕鏈氨基酸序列與編號為qb | AAD54374. 1的小 鼠Ig輕鏈可變區(qū)蛋白的同源性最高，達99/106(93% )，如圖6所示。FMU-SEB-No. 1 mAb 重鏈氨基酸序列與編號為 pir | | S21810 或 emb | CAA40257. 1 的 小鼠Ig重鏈可變區(qū)蛋白的同源性最高，為92/119(77% )，如圖7所示。同源性分析表明，F(xiàn)MU-SEB-No. 1 mAb輕、重鏈可變區(qū)的氨基酸序列，盡管與其它蛋 白氨基酸序列有一定同源性，但未發(fā)現(xiàn)與本發(fā)明完全相同的氨基酸序列，表明本發(fā)明在氨 基酸序列上也具有惟一性。3. 3利用IMGT/V-QUEST分析可變區(qū)結(jié)構(gòu)，確定⑶R區(qū)。將測序所得FMU-SEB-No. 1 mAb輕鏈和重鏈可變區(qū)序列，在IMGT/V-QUEST網(wǎng)站 (http://imgt. cines. fr/IMGT_vquest/vquest)進行分析，得出其 CDR 區(qū)。
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輕鏈可變區(qū)的3個互補決定區(qū)(OTR)序列，如SEQ ID NO. 1劃線部分所示，具體 為CDRl =Gln-Asn-Val-Ile-Thr-Asn ；CDR2 =Ser-Ala-Ser ；CDR3 =Gln-Gln-Tyr-Asn-Ser-Tyr-Pro-Asp-Thr ；重鏈可變區(qū)的3個互補決定區(qū)(OTR)序列，如SEQ ID NO. 2劃線部分所示，具體 為CDRl.Gly-Tyr-Thr-Phe-Thr-Asn-Tyr-Tyr ；CDR2 Jle-Tyr-Pro-Gly-Asp-Ala-Thr-Thr ；CDR3 :Thr-Arg-Gly-Phe-Leu-Thr-Ala-Ser-Val-Phe-Ala-Tyr。4.基因工程抗體設(shè)計基于抗SEB mAb FMU_SEB_No. 1的表達、純化以及序列分析，設(shè)計構(gòu)建以下生物制
P BFI1)單鏈抗體的構(gòu)建可將本發(fā)明的FMU-SEB-No. 1 mAb輕、重鏈可變區(qū)基因通過 linker連接，插入原核或真核表達載體，轉(zhuǎn)化宿主菌或轉(zhuǎn)染真核細胞，用于制備可對SEB中 毒有治療作用的單鏈抗體。2)人-鼠抗SEB嵌合抗體的構(gòu)建可將本發(fā)明的FMU-SEB-No. 1 mAb輕、重鏈可變 區(qū)基因插入通用型嵌合抗體表達載體中，獲得含嵌合基因的載體轉(zhuǎn)染真核細胞，用于制備 可對SEB中毒有治療作用的嵌合抗體。3)人源化抗體的構(gòu)建可將本發(fā)明的FMU-SEB-No. 1 mAb輕、重鏈可變區(qū)基因 的CDR區(qū)移植到人源抗體可變區(qū)的骨架區(qū)(FR)中，形成互補決定區(qū)(CDR)移植抗體 (CDR-grafted antibody)，也禾爾重構(gòu)Jf^本(reshaping antibody) ^iKMVcijiW (humanized antibody)。利用CDR移植技術(shù)改造抗體，可以獲得既保持鼠源性親本mAb特異性，又更加接近 人抗體的新型抗體，用于制備可對SEB中毒有治療作用的人源化抗體。4)可根據(jù)本發(fā)明的基因序列及其編碼的氨基酸序列，制備針對SEB功能表位的其 它生物制品。5)可應用本發(fā)明的高親和力FMU-SEB-No. 1 mAb制備測定環(huán)境中SEB含量的ELISA 試劑盒，可望在反恐、食品檢驗中有廣泛的應用價值。
權(quán)利要求
一種抗SEB單克隆抗體FMU SEB No.1的輕鏈和重鏈可變區(qū)，其特征在于，所述輕鏈可變區(qū)的3個互補決定區(qū)(CDR)序列分別為CDR1Gln Asn Val Ile Thr Asn；CDR2Ser Ala Ser；CDR3Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Asp Thr；所述重鏈可變區(qū)的3個互補決定區(qū)(CDR)序列分別為CDR1Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Tyr；CDR2Ile Tyr Pro Gly Asp Ala Thr Thr；CDR3Thr Arg Gly Phe Leu Thr Ala Ser Val Phe Ala Tyr。
2.如權(quán)利要求1所述的抗SEB單克隆抗體FMU-SEB-No.1的輕鏈和重鏈可變區(qū)，其特征 在于，所述的輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ. ID. NO. 1，重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ. ID. NO. 2 所示。
3.如權(quán)利要求1所述的抗SEB單克隆抗體FMU-SEB-No.1的輕鏈和重鏈可變區(qū)，其特 征在于，編碼輕鏈可變區(qū)的基因序列如SEQ. ID. NO. 3所示，編碼重鏈可變區(qū)的基因序列如 SEQ. ID. NO. 4 所示。
4.權(quán)利要求1所述的抗SEB單克隆抗體FMU-SEB-No.1的輕鏈和重鏈可變區(qū)應用于構(gòu) 建針對SEB的基因工程抗體或診斷試劑的制備。
全文摘要
本發(fā)明公開了高中和活性抗SEB單克隆抗體FMU-SEB-No.1的輕鏈和重鏈可變區(qū)，F(xiàn)MU-SEB-No.1 mAb輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1，重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.2所示。通過采用天然B型葡萄球菌腸毒素(SEB)免疫Balb/c小鼠，制備了一組小鼠抗SEB mAbs，篩選出能穩(wěn)定分泌高親和力抗SEB mAb的雜交瘤細胞株，制備腹水獲得高親和力的抗SEB mAb FMU-SEB-No.1。確認該基因序列和相應蛋白序列的惟一性及其CDR序列；為研制和開發(fā)抗SEB嵌合或人源化基因工程抗體提供支持。
文檔編號G01N33/577GK101955533SQ20101029537
公開日2011年1月26日 申請日期2010年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月28日
發(fā)明者孫元杰, 宋朝君, 李永明, 楊琨, 董邦權(quán), 金伯泉 申請人:中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學