專利名稱：一種定量檢測血液中腫瘤相關(guān)抗原15-3的磁性免疫層析試紙條及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)檢驗領(lǐng)域，特別是涉及一種定量檢測血液中腫瘤相關(guān)抗原15-3 的磁性免疫層析試紙條及制備方法。
背景技術(shù)：
1984年Hi lkens等從人乳脂肪球膜上糖蛋白MAM_6制成的小鼠單克隆抗體 (115-DB) 1984年Kufu等自肝轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞膜制成單克隆抗體(DF_3) 。 CA15-3是一種乳 腺癌相關(guān)抗原，屬糖蛋白，分子量超過400kD。乳腺癌患者常有CA15-3升高，但在乳腺癌的 初期敏感性較低，轉(zhuǎn)移性乳腺癌陽性率可達(dá)80%。 CA15-3可以作為原發(fā)性乳腺癌的輔助診 斷指標(biāo)，也可以作為手術(shù)后隨訪，監(jiān)測腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的指標(biāo)。其它惡性腫瘤，如肺癌、腎癌、 結(jié)腸癌、胰腺癌、卵巢癌、子宮頸癌、原發(fā)性肝癌等也有不同程度的陽性率。肝臟、胃腸道、 肺、乳腺、卵巢等非惡性腫瘤疾病，陽性率一般低于10%。 目前的血液中CA15-3的診斷技術(shù)主要包括放射免疫分析(RIA)，酶聯(lián)免疫分析 (ELISA)、化學(xué)發(fā)光免疫分析(CLIA)、時間分辨熒光免疫分析、膠體金免疫層析等方法，但這 些方法都有各自的特點(diǎn)及不足放射免疫是臨床比較常用的方法，優(yōu)點(diǎn)是結(jié)果比較準(zhǔn)確，線 性范圍較寬，缺點(diǎn)是操作繁瑣，耗時長，且放射性標(biāo)記物會對操作者產(chǎn)生危害，并且會產(chǎn)生 環(huán)境污染，目前已經(jīng)逐漸被其他方法所替代。ELISA和化學(xué)發(fā)光以及時間分辨熒光法原理類 似，只是因為最終的檢測系統(tǒng)有所區(qū)別而在靈敏度方面有差異，目前已經(jīng)實(shí)現(xiàn)自動化、大批 量、定量檢測，但是存在方法間結(jié)果差異大，線性范圍較窄等缺點(diǎn)，同時，自動化檢測目前由 國外大廠商所壟斷，儀器設(shè)備昂貴，并且不適合單人份和較小批量檢測用，大大限制了它們 在基層醫(yī)院、診所的應(yīng)用。近年來出現(xiàn)了膠體金免疫層析法來檢測CA15-3，快速，便捷，單人 份操作，但是缺點(diǎn)是只能實(shí)現(xiàn)半定量，只能指示一個大概范圍，無法實(shí)現(xiàn)精確定量，異常標(biāo) 本需要使用其他方法復(fù)核檢測，增加了被測試者的就醫(yī)成本，在市場推廣方面有較大難度， 很難廣泛使用。 磁性免疫層析(Mgnetic ImmunoChromatographic Test， MICT)是近年來出現(xiàn)的 一種單人份快速定量檢測技術(shù)。是以超順磁性顆粒(superPMPs)代替?zhèn)鹘y(tǒng)的標(biāo)記物(膠體 金，乳膠顆粒等)來進(jìn)行免疫層析，通過檢測結(jié)合在超順磁性納米微粒上的生化物質(zhì)來提 供對生物樣品的定量檢測數(shù)據(jù)。通過檢測測量磁場強(qiáng)度來表達(dá)標(biāo)記在樣品區(qū)域的量，采用 標(biāo)記的免疫復(fù)合物_磁場強(qiáng)度的標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而達(dá)到定量的目的。該技術(shù)與傳統(tǒng)技術(shù)相比 具有下述優(yōu)勢a.所用磁性檢測儀器采用固相元件，微型化設(shè)計自成一體，獨(dú)立運(yùn)行，體積 小，操作簡便；b.靈敏度比各類目測快速診斷法高10-100倍；c.分析速度可在15秒內(nèi)測 量到多達(dá)6個分析位點(diǎn)的數(shù)據(jù)；d.線形范圍在4個數(shù)量級濃度范圍內(nèi)呈線性；e.超順磁性 納米微粒由聚合物包被，不會隨時間而衰變。該技術(shù)繼承了傳統(tǒng)免疫層析法(膠體金，乳膠 顆粒等)簡便快速，單人份操作的優(yōu)點(diǎn)，又彌補(bǔ)了傳統(tǒng)免疫層析技術(shù)靈敏度低，只能定性， 不能定量的缺點(diǎn)，代表了當(dāng)今即時檢驗(Point of Care Test, P0CT)技術(shù)發(fā)展的方向和潮
3流，一經(jīng)問世，發(fā)展迅速，目前已經(jīng)成為替代傳統(tǒng)免疫層析技術(shù)的首選。 將超順磁性顆粒引入免疫層析中，在極大地提高了檢測方法的靈敏度的同時，又 提供了一種極好的定量分析技術(shù)平臺，有利于大規(guī)模生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的即是將免疫層析技術(shù)和超順磁性顆粒技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用在CA15-3定量 檢測試紙條中，將一株CA15-3抗體共價偶聯(lián)于超順磁顆粒上，將另一株配對的CA15-3抗 體包被于硝酸纖維素膜上作為捕獲固相，按照常規(guī)免疫層析法的原理進(jìn)行標(biāo)本的檢測，結(jié) 合簡便易行的磁性檢測儀進(jìn)行檢測，在實(shí)現(xiàn)高靈敏度檢測的同時又能大大縮短檢測的窗口 期，可以避免前述幾種檢測方法的種種弊端，又綜合了前述幾種方法的優(yōu)勢可以單人份 檢測，也可以批量檢測，并且可以即時給出定量結(jié)果，測量儀器簡單可靠，操作簡便，方便實(shí) 用。 為達(dá)到上述的目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下一種定量檢測血液中CA15-3的磁性 免疫層析試紙條，該試紙條是在底板上依次相互交錯2mm地粘貼上包被膜、結(jié)合了 CA15-3 抗體的磁顆粒墊、樣品墊、吸水墊、然后在上層覆蓋透明塑料密封膜組裝而成的試紙條，包 被膜上預(yù)包被有CA15-3抗體檢測線T和質(zhì)控線C。 其中所述的樣品墊是經(jīng)過樣品墊處理液預(yù)處理的纖維素膜，所述的樣品墊處理液 是含有1 % _5 %酪蛋白(Casein)和0. 1 % _1 %的聚乙烯醇(PVA)以及0. 01-0. 2 %吐溫 20 (Tween-20)的0. 02M pH7. 0-7. 6的磷酸鹽緩沖液(PBS)。 上述定量檢測血液中CA15-3的磁性免疫層析試紙條制備方法包括以下步驟
A、磁顆粒的制備選用直徑為100-300nm的超順磁顆粒，使用碳二亞胺(EDC)共價 偶聯(lián)的方式將CA15-3抗體標(biāo)記到磁顆粒上，以1 : 2-1 : 5的比例(摩爾比)與磁顆?；?合. B、將制備好的磁顆粒使用定量噴液裝置以25 iU/cm-50 iU/cm的量噴涂于磁顆 粒墊上； C、包被膜的制備使用包被緩沖液分別將抗CA15-3包被抗體以及抗鼠的二抗稀 釋到0. 5-2mg/ml濃度，使用定量噴液裝置分別將二者以0. 5_1. Ocm的間隔噴印于硝酸纖維 素膜上，晾干后于封閉液中浸泡10分鐘后于25-35度烘干8小時，加入干燥劑封存?zhèn)溆茫?
D、樣品墊的處理將樣品墊放入樣品墊處理溶液中浸泡處理1小時后取出 25-35t:烘干8小時； E、試紙條的組裝在透明塑料底板上依次相互交錯2mm地貼上包被膜、磁顆粒墊、 樣品墊、吸水墊，然后在上層覆蓋透明塑料密封膜得到試紙板，根據(jù)要求寬度切割即得到試 紙條。
進(jìn)一步，上述的步驟A包括以下步驟 使用含有0. 1 % Tween-20的50mM， pH4. 5-5. 0的醋酸鈉緩沖液洗滌磁顆粒，加入 EDC和CA15-3抗體使CA15-3抗體與磁顆粒的比例為5 : 1 (摩爾比)，室溫反應(yīng)3小時，加 入含有0. 5% BSA的0. 02M，pH7. 0_7. 6的PBS室溫封閉30分鐘，用上述醋酸鈉緩沖液洗滌 磁顆粒，使用含有1%PVP，1% Case in ，0.5% Tween-20， 5%蔗糖的50mM(pH8. 2-9. 0)硼酸
保存緩沖液復(fù)溶磁顆粒，4t:保存?zhèn)溆茫?br> 進(jìn)一步，上述的步驟B中，磁顆粒的噴涂方法是將制備好的磁顆粒使用定量噴膜
裝置以50iU/cm的量均勻噴涂于玻璃纖維上，冷凍干燥后加入干燥劑封存?zhèn)溆谩?進(jìn)一步，上述的步驟C中，包被膜的制備方法是用包被緩沖液(0.02M pH 7.2的
磷酸緩沖液)將CA15-3抗體稀釋為0. 5mg/ml，抗鼠的二抗稀釋為lmg/ml，使用定量噴膜裝
置以liU/cm的量將二者以0. 6cm的間隔噴印于硝酸纖維素膜上，室溫晾干30分鐘后于封
閉液(含有0. 5% BSA的0. 02M PBS，pH7. 0_7. 6)中浸泡10分鐘后于25-35。C烘干8小時，
加入干燥劑封存?zhèn)溆谩?與現(xiàn)有快速檢測試紙條相比較，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn) 1)通過對試紙條的改進(jìn)，首次將磁性免疫層析技術(shù)引入CA15-3的檢測中，結(jié)合磁 性檢測儀，實(shí)現(xiàn)了 CA15-3的單人份寬范圍定量檢測，為臨床使用提供了極大便利。
2)通過引入磁顆粒系統(tǒng)，使得試紙條的檢測靈敏度比傳統(tǒng)的免疫層析技術(shù)提高了 100倍。 本發(fā)明操作簡便，適合大規(guī)模生產(chǎn)，檢測所需的便攜式設(shè)備也已經(jīng)上市，因此能廣 泛用于醫(yī)院、血站、防疫站、體檢等大批量使用單位以及一些采血現(xiàn)場、農(nóng)村和基層診所等 小批量或單人份使用的單位使用。對于乳腺癌的定量診斷有著積極的意義。


圖1為本發(fā)明磁性免疫層析法定量檢測血液中CA15-3的試紙條結(jié)構(gòu)示意圖
為進(jìn)一步說明本發(fā)明磁性免疫層析法定量檢測血液中CA15-3的試紙條及制備方 法，特舉以下的實(shí)施例進(jìn)行說明，該實(shí)施例是為了解釋而不是以任何方式限制本發(fā)明。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明所述的定量檢測血液中CA15-3的磁性免疫層析試紙條如圖1所示，該試紙 條是在底板1)上依次相互交錯2mm地粘貼上包被膜2)、結(jié)合了 CA15-3抗體的磁顆粒墊3)、 樣品墊4)、吸水墊5)，然后在上層覆蓋透明塑料密封膜6)組裝而成的試紙條，包被膜2)上 預(yù)包被有CA15-3抗體檢測線T和質(zhì)控線C。 在具體實(shí)施例中，所采用CA15-3配對抗體為單克隆抗體技術(shù)制備的單抗。利用雙 抗體夾心檢測CA15-3抗原的原理檢測標(biāo)本，當(dāng)待測標(biāo)本中含有CA15-3抗原時，抗原會先 和磁顆粒上偶聯(lián)的抗體結(jié)合，隨著層析作用的進(jìn)行，結(jié)合物向前移動到達(dá)CA15-3抗體包被 線T處，抗原會再次和包被抗體結(jié)合形成雙抗體夾心復(fù)合物而聚集在T線處，另外，未結(jié)合 的偶聯(lián)CA15-3抗體的磁顆粒會繼續(xù)前行，到達(dá)指控線C時，抗鼠的二抗會與CA15-3抗體結(jié) 合從而在C線處同樣出現(xiàn)磁顆粒聚集。整個反應(yīng)在30分鐘內(nèi)進(jìn)行完全， 一般反應(yīng)十五分鐘 后即可進(jìn)行上機(jī)讀卡，T線以及C線都會產(chǎn)生相應(yīng)的磁性信號值，磁性免疫層析檢測儀會根 據(jù)檢測卡上的二維碼信息將實(shí)際測值代入預(yù)設(shè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線即可得出確定量的結(jié)果。整個讀 卡、識別二維碼、將實(shí)測值代入預(yù)設(shè)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出定量值的過程已經(jīng)完全程序化，磁性檢測 儀會直接給出定量結(jié)果。 本發(fā)明所述的定量檢測血液中CA15-3的磁性免疫層析試紙條的制備方法見以下 實(shí)例 實(shí)施例1
定量檢測血液中CA15-3的磁性免疫層析試紙條及試紙盒的制備方法
本實(shí)施例的試紙條及試紙盒的制備方法包括以下步驟 A、抗體制備選用商品化的的CA15-3配對抗體，對20mM， pH7. 2 (pH7. 0_7. 6均適 用)的PBS 4t:透析過夜備用。 B、包被膜的制備 包被緩沖液的配制0. 02M pH 7. 2的磷酸緩沖液(PB)為包被緩沖液，0. 22 y m微
孔濾膜過濾除菌后置4t:保存?zhèn)溆?，有效期兩周?封閉液的配制含0. 5% BSA的0. 02M， pH7. 2 (pH7. 0_7. 6均適用)的磷酸鹽緩沖 液(PBS) ，0. 22 ii m微孔濾膜過濾除菌后置于4t:保存?zhèn)溆茫行谝恢堋?
包被膜的制備用包被緩沖液(0. 02M PB， pH7. 2 (pH7. 0-7. 6均適用))將CA15-3 抗體稀釋為0. 5mg/ml，抗鼠的二抗稀釋為lmg/ml，使用定量噴膜裝置以1 y 1/cm的量將二 者以0. 6cm的間隔均勻噴印于3. 5cm寬度硝酸纖維素膜上，室溫晾干30分鐘后于封閉液 (含有0. 5% BSA的0. 02M PBS， pH7. 2 (pH7. 0_7. 6均適用))中浸泡10分鐘后于25-35度 烘干8小時，加入干燥劑封存?zhèn)溆谩?
C、磁顆粒的制備 醋酸鈉緩沖液的配制用雙蒸水和醋酸鈉及冰醋酸配制pH值為4. 7(pH4. 5_5. 0均 適用)，濃度為50mM的醋酸緩沖液，加入Tween-20至終濃度為0. 1 % ， 0. 22 y m微孔濾膜過 濾除菌后4t:保存?zhèn)溆?，有效期兩周?硼酸保存緩沖液的配制用雙蒸水，硼酸和硼砂配制pH為8. 5(pH8. 2-9. 0均適 用)，終濃度為50mM的硼酸緩沖液，加入PVP， Casine， Tween-20，蔗糖，終濃度分別為1%， 1 % ， 0. 5 % ， 5 % ， 0. 22 ii m微孔濾膜過濾除菌后4°C保存?zhèn)溆?，有效期一周?
磁顆粒的制備使用含有0. 1 % Tween-20的50mM， pH4. 7 (pH4. 5-5. 0均適用)醋 酸鈉緩沖液洗滌磁顆粒，加入EDC和NHS使二者終濃度均為20mmo1，室溫反應(yīng)1小時，充分 洗滌磁顆粒后，加入CA15-3抗體使CA15-3抗體與磁顆粒的比例為5 : 1 (摩爾比)，室溫反 應(yīng)3小時，加入含有0. 5% BSA的0. 02M，pH7. 2(pH7. 0-7. 6均適用)的PBS室溫封閉30分 鐘，使用含有0. 1 % Tween-20的50mM， pH4. 7 (pH4. 5_5. 0均適用)的醋酸鈉緩沖液洗滌磁顆 粒，使用含有1% PVP， 1% Case in ，0. 5% Tween-20， 5%蔗糖的50mM pH 8. 5 (pH8. 2-9. 0均
適用)硼酸保存緩沖液，復(fù)溶磁顆粒，4t:保存?zhèn)溆谩?D、磁顆粒的噴涂與凍干 使用BioDot噴膜儀的專用噴頭將處理好的磁顆粒以50iU/cm的量均勻噴涂于 0. 8cm寬度玻璃纖維墊上，過夜冷凍干燥，加入干燥劑封存?zhèn)溆茫?
E、樣品墊的處理 將1. 8cm寬度樣品墊放入樣品墊處理溶液中浸泡處理1小時后取出25-35。C烘干 8小時。 樣品墊處理液是含有1% -5% Casein和O. 1% _1 %的PVA以及O. 01-0. 2% Tween-20的0. 02M， pH7. 2 (pH7. 0-7. 6均適用)的PBS溶液。
F、試紙條的組裝及切割 下述所有操作都必須在濕度小于20%，溫度20-25t:的房間內(nèi)進(jìn)行。 試紙板的組裝使用BioDot LM5000型組裝儀按照要求將3. 5cm包被膜，2. 5cm吸水紙，O. 8cm磁顆粒墊，1. 8cm樣品墊組裝于9. 8cm寬度透明塑料底板上，覆蓋上層透明塑料 蓋板，組裝成試紙板。 試紙條的裁切使用BioDot CM4000型切條機(jī)將組裝好的試紙板切成0. 5cm寬的 成品試紙條。 G、試紙卡的組裝 將本發(fā)明所述的切割好的單人份試紙條置于塑料底卡上的卡槽內(nèi)，蓋上上蓋，使 用壓卡機(jī)將上下兩片塑料卡壓緊，確保整個試紙條處于繃緊狀態(tài)。加入干燥劑室溫封存?zhèn)?用。 H、確定該批次的二維碼信息
品名CA15-3定量磁性檢測卡 批次試紙卡的組裝日期，格式為年/月/日，XXXX/XX/XX 判讀標(biāo)準(zhǔn)的確定取CA15-3標(biāo)準(zhǔn)抗原原料，用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液稀釋成500U/mL， 150U/mL， 50U/mL， 15U/mL， 5U/ml，每個標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)作10個測試，按照統(tǒng)計學(xué)方法確定每個標(biāo)準(zhǔn) 點(diǎn)與磁性測量值的關(guān)系并建立方程使之?dāng)M合成線性，此方程和標(biāo)準(zhǔn)曲線即可使磁性檢測儀 得以確定標(biāo)本測量值。標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液配方:20,1 PBS， pH7. 2(pH7. 0-7. 6均適用)，0. 5% BSA，O. 01%
NaN3。 1、二維碼的打印粘貼 將上述二維碼信息輸入二維碼打印機(jī)內(nèi)并打印，將二維碼粘貼于試紙卡的特定位 置，使用二維碼粘貼位置檢測器隨機(jī)抽檢2%確保二維碼粘貼無誤。
J、成品包裝 將貼好二維碼的單人份試紙卡與一包干燥劑密封于鋁箔袋內(nèi)，100人份為一個包 裝置于一個包裝盒內(nèi)，一盒一份說明書和1瓶10ml裝層析緩沖液即制成試紙盒，該試紙盒 于室溫避光保存，保質(zhì)期為18個月。 層析緩沖液配方為1% Tween-20，0. 5% Triton X_100， 1% NP_40，0. 05% NaN3， 20mmolPBS， pH7. 2 (pH7. 0-7. 6均適用)。
實(shí)施例2 除了 CA15-3抗體的磁顆粒的制備的步驟中CA15-3抗體使CA15-3抗體與磁顆粒 的比例為l : 3，其它步驟同實(shí)施例1，
實(shí)施例3 除了 CA15-3抗體的磁顆粒的制備的步驟中CA15-3抗體使CA153抗體與磁顆粒 的比例為l : 8，其它步驟同實(shí)施例1。
實(shí)施例4 本發(fā)明的檢測卡的使用方法
1、加樣 從包裝盒中取出單人份的檢測卡，撕開鋁箔帶包裝，將試紙卡置于平整桌面上，用 微量移液器取50 ii 1樣本血清加入卡上的加樣孔內(nèi)，再加入50 ii 1層析緩沖液，等待反應(yīng)進(jìn) 行15分鐘。 2、測量及結(jié)果輸出
7
將檢測卡插入磁性免疫層析檢測儀的插卡口 ，運(yùn)行儀器，儀器會自行讀取卡的二
維碼信息，進(jìn)行測量并即時打印測量結(jié)果，陰陽性結(jié)果會在打印結(jié)果中顯示。 實(shí)施例5本發(fā)明的試紙條的方法學(xué)鑒定 按照本領(lǐng)域中常規(guī)的制造及檢定規(guī)程對實(shí)施例1中制備的試紙條進(jìn)行檢定，
(1)試紙條靈敏度實(shí)驗 以SO校準(zhǔn)品進(jìn)行10次重復(fù)測定，其平均值加上兩倍標(biāo)準(zhǔn)差帶入曲線方程所得的 濃度值為試紙條的靈敏度，其靈敏度為2. 1U/mL。
(2)試紙條特異性實(shí)驗 與其類似物作交叉反應(yīng)實(shí)驗，交叉反應(yīng)率< 0. 01 % 。
(3)試紙條精密性實(shí)驗
批內(nèi)變異 取低、中、高三份質(zhì)控血清樣品分別進(jìn)行10孔平行實(shí)驗，計算測定值的平均值(i ) 和標(biāo)準(zhǔn)差(s)。按公式CV二s/iX100X計算變異系數(shù)，批內(nèi)變異系數(shù)CV分別為5.8X， 5. 2%，4. 5%。
批間變異 選擇5份不同濃度的血清樣品對每份血清進(jìn)行3次重復(fù)測定，計算其批間變異系 數(shù)(CV% )，批間變異CV在8. 96 10. 69%之間。
(4)試紙條穩(wěn)定性實(shí)驗 試紙條保存溫度為2_8°C ，經(jīng)過15個月的測定試紙條的各項指標(biāo)均滿足要求，考 慮到運(yùn)輸和使用過程中對試紙條的影響，我們進(jìn)行37°C 7天的加速實(shí)驗，實(shí)驗結(jié)果表明試 紙條的各項指標(biāo)完全符合要求。 說明"定量檢測血液中CA15-3的磁性免疫層析試紙條及試劑盒"的靈敏度、特異 性、精密性和穩(wěn)定性是完全合格的。
權(quán)利要求
一種定量檢測血液中腫瘤相關(guān)抗原15-3(CA15-3)的磁性免疫層析試紙條，其特征在于該試紙條是在底板上依次相互交錯2mm地粘貼包被膜、結(jié)合了CA15-3抗體的磁顆粒墊、樣品墊、吸水墊、然后在上層覆蓋透明塑料密封膜而組裝成的試紙條，包被膜上預(yù)包被有CA15-3抗體的檢測線T和質(zhì)控線C。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1的定量檢測血液中CA15-3的磁性免疫層析試紙條制備方法，其特征 在于所述的包被膜制備是使用0. 02mM，pH7. 0_7. 6的PBS，分別將抗CA15-3包被抗體以及 抗鼠的二抗稀釋到0. 5-2. Omg/ml濃度，使用定量噴液裝置分別將二者以0. 5_1. Ocm的間隔 噴印于硝酸纖維素膜上，晾干后于封閉液中浸泡10分鐘后于25-35t:烘干8小時，加入干燥 劑封存?zhèn)溆谩?br> 3. 根據(jù)權(quán)利要求1的定量檢測血液中CA15-3的磁性免疫層析試紙條制備方法，其特征 在于所述的磁顆粒墊制備是選用直徑為100-300nm的超順磁顆粒，使用碳二亞胺共價偶 聯(lián)的方式將CA15-3抗體與磁顆粒聯(lián)結(jié)，將制備好的磁顆粒使用定量噴液裝置以25-50 iU/ cm的量噴涂于磁顆粒墊上。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1的定量檢測血液中CA15-3的磁性免疫層析試紙條，其特征在于所 述的樣品墊是經(jīng)過樣品墊處理液預(yù)處理的纖維素膜，所述的樣品墊處理液是含有1% _5% 酪蛋白和0. 1% _1%的聚乙烯醇以及0. 01-0. 2%吐溫-20的O. 02M， pH7. 0-7. 6的磷酸鹽 緩沖液。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述包被膜的制備方法是用包被緩沖液將CA15-3抗體稀釋為 0. 5mg/ml，抗鼠的二抗稀釋為lmg/ml，使用定量噴膜裝置以1 y 1/cm的量將二者以0. 6cm的 間隔噴印于硝酸纖維素膜上，室溫晾干30分鐘后于封閉液中浸泡10分鐘后于25-35t:烘干 8小時，加入干燥劑封存?zhèn)溆谩?br> 6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的磁顆粒墊的制備方法，其特征在于包括以下步驟 使用含有0. 1% Tween-20的50mmo1， pH4. 5-5. 0的醋酸鈉緩沖液洗滌磁顆粒，加入碳二亞胺和琥珀酰亞胺使二者終濃度均為20mmol，室溫反應(yīng)1小時，充分洗滌磁顆粒后加入 CA15-3抗體使其與磁顆粒的比為5 : 1(摩爾比)，室溫反應(yīng)3小時，加入含有0. 5%BSA 的0. 02M，pH7. 0-7. 6的PBS室溫封閉30分鐘，洗滌磁顆粒，使用含有1% PVP， 1% Case in ， 0. 5% Tween-20，5X蔗糖的50mmol，pH8. 2-9. 0的硼酸保存緩沖液，復(fù)溶磁顆粒，4"保存?zhèn)?用。
7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述磁顆粒的噴涂方法是將制備好的磁顆粒使用定量噴膜裝置以 50iU/cm的量均勻噴涂于玻璃纖維上，冷凍干燥后加入干燥劑封存?zhèn)溆谩?br> 全文摘要
本發(fā)明涉及一種定量檢測血液中腫瘤相關(guān)抗原15-3的磁性免疫層析試紙條及其制備方法。該試紙條是在底板上依次相互交錯2mm粘貼上包被膜、結(jié)合了腫瘤相關(guān)抗原15-3抗體的磁顆粒墊、樣品墊、吸水墊，然后在上層覆蓋透明塑料密封膜組裝而成的試紙條，包被膜上預(yù)包被有腫瘤相關(guān)抗原15-3抗體檢測線和質(zhì)控線，本發(fā)明將磁性免疫層析技術(shù)引入到腫瘤相關(guān)抗原15-3的定量檢測中，大大提高了檢測靈敏度，并且可以準(zhǔn)確的給出定量結(jié)果，操作簡便，診斷快速。
文檔編號G01N33/577GK101762697SQ200910087638
公開日2010年6月30日 申請日期2009年6月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月24日
發(fā)明者唐寶軍, 應(yīng)希堂, 張坤, 李強(qiáng), 胡國茂, 鄭金來 申請人:北京科美東雅生物技術(shù)有限公司