專利名稱：：鑒定抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽的方法和由此得到的毛發(fā)有益試劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品領(lǐng)域。更具體地，本發(fā)明涉及鑒定抗毛發(fā)劑和著色劑中的用途。
背景技術(shù)：
：毛發(fā)調(diào)理劑和毛發(fā)著色劑是公知的，并且常用于毛發(fā)護(hù)理產(chǎn)品。目前的毛發(fā)調(diào)理劑和非氧化染發(fā)劑的主要問題是缺乏長(zhǎng)期持續(xù)效果需要的耐久性。氧化染發(fā)劑提供長(zhǎng)期持續(xù)的顏色，但它們所含有的氧化劑導(dǎo)致毛發(fā)受損。為了改進(jìn)這些組合物的耐久性，開發(fā)了基于肽的毛發(fā)調(diào)理劑、毛發(fā)著色劑和其它有益試劑(Huang等人的共同未決和共同擁有的美國專利申請(qǐng)公開No.2005/0050656和美國專利申諱~公開No.2005/0226839)。基于肽的毛發(fā)調(diào)理劑或著色劑是通過將與毛發(fā)具有高親和力的特定肽序列分別與調(diào)理劑或著色劑偶聯(lián)而制備的。肽部分結(jié)合于毛發(fā)，從而強(qiáng)烈附著于調(diào)理劑或著色劑。用噬菌體展示篩選技術(shù)鑒定了與毛發(fā)具有高結(jié)合親和力的肽(Huangetal.,supra;Estelletal.WO0179479;Murrayetal.,美國專利申請(qǐng)公開No.2002/0098524;Janssenetal.,美國專利申請(qǐng)7^開No.2003/0152976;和Janssenetal.，WO04048399)。0179479、2002/0098524、2003/0152976和04048399申i會(huì)描述了在沐浴露的稀溶液(即2。/q的水溶液)存在下〗吏肽文庫與毛發(fā)樣品結(jié)合，并且在噬菌體展示篩選過程中用沐浴露溶液洗滌噬菌體-肽-毛發(fā)復(fù)合物。但是，使用的沐浴露的濃度太低，以至于不能鑒定抗沐浴露的毛發(fā)結(jié)合肽。在毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)存在下毛發(fā)結(jié)合肽的結(jié)合親和力降低，因此不能與調(diào)理劑基質(zhì)中的毛發(fā)強(qiáng)結(jié)合，并且由于采用毛發(fā)調(diào)理劑而從毛發(fā)上洗掉。此外，在調(diào)理劑基質(zhì)中毛發(fā)結(jié)合肽不能長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定，這使得它們的結(jié)合親和力在毛發(fā)調(diào)理劑產(chǎn)品中隨時(shí)間降低。已經(jīng)報(bào)道了鑒定抗洗發(fā)液的毛發(fā)結(jié)合肽的方法(Huang等人的共同未決和共同擁有的美國專利申請(qǐng)公開No.2005/0050656,和O'Brien等人的共同未決和共同擁有的美國專利申請(qǐng)No.11/251715)、結(jié)合秕糠狀鱗斑霉的細(xì)胞表面蛋白的抗洗發(fā)液的抗體片段(Dolk等人的Appl.Environ.Microbiol.71:442-450(2005))和抗皮膚護(hù)理組合物的皮月夫結(jié)合肽(Wang等人的共同未決和共同擁有的美國專利申請(qǐng)N0.6O/657494)。但是，還沒有描述過鑒定抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽的方法。因此，要解決的問題是提供能夠結(jié)合毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)中的毛發(fā)并且在其中穩(wěn)定的毛發(fā)結(jié)合肽。申請(qǐng)人通過發(fā)現(xiàn)鑒定抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽的方法而解決了上述問題。鑒定的抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽序列結(jié)合于毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)中的毛發(fā)，并且在調(diào)理劑基質(zhì)中21天后沒有損失結(jié)合活性。這些毛發(fā)結(jié)合肽可以用于制備基于肽的毛發(fā)有益試劑，如毛發(fā)調(diào)理劑和著色劑，在毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)存在下與毛發(fā)具有高結(jié)合親和力，并且在毛發(fā)調(diào)理劑組合物中具有改進(jìn)的穩(wěn)定性。發(fā)明概述本發(fā)明提供了用于鑒定和分離新的抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽的方法，所述肽用作毛發(fā)護(hù)理組合物中的連接物和粘合劑。抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽可以摻入二嵌段或三嵌段結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)任選包含化學(xué)或肽間隔基和有益試劑，如著色劑和/或調(diào)理劑。本發(fā)明的方法依賴于在各種調(diào)理劑存在下篩選組合產(chǎn)生的肽文庫，得到毛發(fā)結(jié)合特性。括、、八"、口、、、、、a)提供DNA聯(lián)合的肽(DNAassociatedpeptide)的組合文庫；b)使(a)的文庫與毛發(fā)樣品接觸，形成包含DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物的反應(yīng)溶液；c)從反應(yīng)溶液分離(b)的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物；d)使(c)的分離的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物與毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)接觸，形成調(diào)理溶液，其中毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)的濃度是完全強(qiáng)度濃度的至少約10%;e)從調(diào)理溶液分離(d)的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物；f)擴(kuò)增編碼(e)的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物中的肽部分的DNA;和g)對(duì)(f)的擴(kuò)增的編碼抗調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽的DNA進(jìn)^f亍測(cè)序，其中鑒定出抗調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽。任選可以在步驟(e)之后用洗脫劑從毛發(fā)洗脫毛發(fā)結(jié)合肽，并且可以通過連續(xù)采用該方法而進(jìn)一步精制本發(fā)明的方法鑒定的肽。的毛發(fā)結(jié)合肽:、'、'？、、、、':'、。a)提供DNA聯(lián)合的肽的組合文庫；b)使(a)的文庫與毛發(fā)樣品接觸，形成包含DNA聯(lián)合的月太-毛發(fā)復(fù)合物的反應(yīng)溶液；c)從反應(yīng)溶液分離(b)的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物；d)使(c)的分離的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物與毛發(fā)調(diào)^里劑基質(zhì)接觸，形成調(diào)理溶液，其中毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)的濃度是完全強(qiáng)度;農(nóng)度的至少約10%;e)從調(diào)理溶液分離(d)的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物；f)擴(kuò)增編碼(e)的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物中的月大部分的DNA;和其中鑒定出抗調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽。本發(fā)明的特定抗毛發(fā)調(diào)理劑6勺毛發(fā)結(jié)合肽示于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5和SEQIDNO:12。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了二嵌段的、基于肽的有益^式劑，其具有通式結(jié)構(gòu)(HCPm)n-BA，其中a)HCP是抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽；b)BA是有益試劑；c)m的范圍是1-約100;并且d)n的范圍是1-約50,000。以相似的方式，本發(fā)明提供了三嵌段的、基于肽的有益試劑，其具有通式結(jié)構(gòu)[(HCPx-S)m]n-BA,其中a)HCP是抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽；b)BA是有益試劑；c)S是間隔基；d)x的范圍是l-約10;e)m的范圍是1-約100;并且f)n的范圍是1-約50,000。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了毛發(fā)調(diào)理劑和著色劑，其中通過包括以下步驟的方法分離抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽a)提供DNA聯(lián)合的肽的組合文庫；b)使(a)的文庫與毛發(fā)樣品接觸，形成包含DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物的反應(yīng)溶液；c)從反應(yīng)溶液分離(b)的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物；d)使(c)的分離的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物與毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)接觸，形成調(diào)理溶液，其中毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)的濃度是完全強(qiáng)度濃度的至少約10%;e)從調(diào)理溶液分離(d)的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物；f)擴(kuò)增編碼(e)的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物中的肽部分的DNA;和其中鑒定出抗調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽。''''、此外，本發(fā)明提供了包含有效量的本發(fā)明的肽二嵌段和三嵌段有益試劑的毛發(fā)護(hù)理產(chǎn)品組合物。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了形成毛發(fā)上的基于肽的調(diào)理劑的保護(hù)層的方法，包括將本發(fā)明的組合物施用于毛發(fā)，并且使得形成所述保護(hù)層。類似地，本發(fā)明提供了使毛發(fā)著色的方法，包括將本發(fā)明的組合物施用于毛發(fā)，持續(xù)足以導(dǎo)致毛發(fā)著色的一段時(shí)間?；蛘撸景l(fā)明提供了使眉毛或睫毛著色的方法，包括將本發(fā)明的組合物施用于眉毛或睫毛。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了使毛發(fā)、眉毛或睫毛著色的方法，包括以下步驟a)提供包含選自下組的毛發(fā)著色劑的毛發(fā)著色組合物i)(HCPm)n-C;和ii)[(HCPx-S)m]n-C其中1)HCP是抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽；2)C是著色劑；3)n的范圍是l-約50,000;4)S是間隔基；5)m的范圍是1-約100;并且6)x的范圍是l-約10;并且其中抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽是通過包含以下步驟的方法選擇的A)提供DNA聯(lián)合的肽的組合文庫；B)使(A)的文庫與毛發(fā)樣品接觸，形成包含DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物的反應(yīng)溶液；C)從反應(yīng)溶液分離(B)的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物；D)使(C)的分離的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物與毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)接觸，形成調(diào)理溶液，其中毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)的濃度是完全強(qiáng)度濃度的至少約10%;E)從調(diào)理溶液分離(D)的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物；F)擴(kuò)增編碼(E)的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物中的肽部分的DNA;和G)對(duì)(F)的擴(kuò)增的編碼抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽的DNA進(jìn)行測(cè)序，其中鑒定出抗調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽；和b)將(a)的毛發(fā)著色組合物施用于毛發(fā)、眉毛或睫毛，持續(xù)足以使毛發(fā)著色劑結(jié)合于毛發(fā)、眉毛或睫毛的一段時(shí)間。類似地，本發(fā)明提供了在毛發(fā)上形成基于肽的調(diào)理劑的保護(hù)層的方法，包括以下步驟a)提供包含選自下組的毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)護(hù)理組合物i)(HCPm)n-HCA;和ii)[(HCPx-S)m]n-HCA其中1)HCP是抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽；2)HCA是毛發(fā)調(diào)理劑；3)n的范圍是1-約50，000;4)S是間隔基；5)m的范圍是1-約100;并且6)x的范圍是l-約10;并且其中抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽是通過包含以下步驟的方法選4,的A)提供DNA聯(lián)合的肽的組合文庫；B)使(A)的文庫與毛發(fā)樣品接觸，形成包含DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物的反應(yīng)溶液；C)從反應(yīng)溶液分離(B)的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物；D)使(C)的分離的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物與毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)接觸，形成調(diào)理溶液，其中毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)的濃度是完全強(qiáng)度濃度的至少約10%;E)從調(diào)理溶液分離(D)的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物；F)擴(kuò)增編碼(E)的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物中的肽部分的DNA;和G)對(duì)(F)的擴(kuò)增的編碼抗調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽的DNA進(jìn)行測(cè)序，其中鑒定出抗調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽；和b)將(a)的毛發(fā)護(hù)理組合物施用于毛發(fā)，使得形成所述保護(hù)層。附圖簡(jiǎn)述和序列描述通過以下的詳細(xì)說明、附圖和所附的序列描述，可以更充分地理解本發(fā)明，其中序列描迷也是本申請(qǐng)的一部分。圖1顯示毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)中的抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽HCP.l(SEQIDNO:l)的穩(wěn)定性。圖2顯示毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)中的抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽HCR6(SEQIDNO:4)的穩(wěn)定性。以下的序列符合37C.F.R.1.821—1.825("包含核苷酸序列和/或氨基酸序列公開的專利申請(qǐng)所必備的條件-序列條款")，并符合世界知識(shí)產(chǎn)權(quán)組織(WIPO)標(biāo)準(zhǔn)ST.25(1998),以及EPO和PCT(5.2條和49.5(a-bis)條，和使用說明208部分和附件C)的序列表要求。在核苷酸和氨基酸序列數(shù)據(jù)中所使用的符號(hào)和格式均符合37C.F.R.§1.822的規(guī)定。SEQIDNOs:l-5是抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽的氨基酸序列。SEQIDNO:6是胱天蛋白酶3切割位點(diǎn)的氨基酸序列。SEQIDNO:7是用于對(duì)噬菌體DNA進(jìn)行測(cè)序的寡核苷酸引物的核普酸序列。SEQIDNO:8是用作實(shí)施例4中的對(duì)照的皮膚結(jié)合肽的氨基酸序列。SEQIDNO:9是抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽HCP.l(5-FAM)的氨基酸序列，其在C末端用熒光標(biāo)記5-羧基熒光素-氨基己基amidite衍生化，如實(shí)施例4的描述。SEQIDNO:IO是抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽HCP.6(5-FAM)的氨基酸序列，其在C末端用熒光標(biāo)記5-羧基熒光素-氨基己基amidite衍生化，如實(shí)施例4的描述。SEQIDNO:ll是皮膚結(jié)合對(duì)照肽Skinl(5-FAM)的氨基酸序列，其在C末端用熒光標(biāo)記5-羧基熒光素-氨基己基amidite衍生化，如實(shí)施例4的描述。SEQIDNO:12是實(shí)施例8中描述的半胱氨酸連接的10HCP.l毛發(fā)結(jié)合肽的氨基酸序列。SEQIDNOs:13-15是肽間隔基的氨基酸序列。發(fā)明詳述本發(fā)明提供了鑒定在毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)存在下以高親和力特異性結(jié)合于人毛發(fā)的抗毛發(fā)調(diào)理劑肽序列的方法。鑒定的抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽序列結(jié)合毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)中的毛發(fā)，并且在調(diào)理劑基質(zhì)中21天后沒有損失結(jié)合活性。這些毛發(fā)結(jié)合肽可以用于制備基于肽的毛發(fā)有益試劑，如毛發(fā)調(diào)理劑和著色劑，在毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)存在下與毛發(fā)具有高結(jié)合親和力，并且在毛發(fā)調(diào)理劑組合物中具有改進(jìn)的穩(wěn)定性。此處采用如下定義，其用于解釋權(quán)利要求書和說明書。"HCP"表示抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽。"BA"表示毛發(fā)有益試劑。"HCA"表示毛發(fā)調(diào)理劑。"C"表示毛發(fā)著色劑。"S"表示間隔基。術(shù)語"肽"是指通過肽鍵或修飾的肽鍵彼此連接在一起的兩個(gè)或多個(gè)氨基酸。如本文所使用的，術(shù)語"毛發(fā)"是指人毛發(fā)、眉毛和睫毛。術(shù)語"抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽"是指與毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)中的毛發(fā)強(qiáng)結(jié)合并且在其中穩(wěn)定的肽。術(shù)語"毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)"是指一種介質(zhì)，其包含未稀釋或稀釋形式的毛發(fā)調(diào)理劑產(chǎn)品，或包含毛發(fā)調(diào)理劑產(chǎn)品的至少一種成分的混合物以及毛發(fā)調(diào)理劑產(chǎn)品的至少兩種成分。毛發(fā)調(diào)理劑產(chǎn)品的成分包括但不限于毛發(fā)調(diào)理劑、抗氧化劑、防腐劑、填料、表面活性劑、UVA和/或UVB防曬劑、香料、增稠劑、潤(rùn)濕劑和陰離子、非離子或兩性聚合物；以及染料或色素。術(shù)語"完全強(qiáng)度濃度"是指成分存在于毛發(fā)調(diào)理劑產(chǎn)品中的濃度。術(shù)語"有益試劑，，是表示可以與抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽偶聯(lián)，以施用于毛發(fā)而提供美容或皮膚學(xué)效果的化合物或物質(zhì)。有益試劑典型地包括調(diào)理劑、著色劑、香料、防曬劑等，以及通常用于個(gè)人護(hù)理工業(yè)的其它物質(zhì)。如本文所使用的，術(shù)語"偶聯(lián)"和"偶聯(lián)的"指任意的化學(xué)締合，包括共價(jià)的和非共價(jià)的相互作用。術(shù)語"肽-毛發(fā)復(fù)合物"表示一種結(jié)構(gòu)，其包含通過肽上的結(jié)合位點(diǎn)與毛發(fā)纖維結(jié)合的肽。術(shù)語"DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物"是指毛發(fā)和肽之間的復(fù)合物，其中所述肽聯(lián)合了鑒定性核酸成分。典型地，DNA聯(lián)合的肽作為展示系統(tǒng)的結(jié)果產(chǎn)生，所述展示系統(tǒng)如噬菌體展示。在該系統(tǒng)中，肽展示在噬菌體的表面，而編碼該肽的DNA包含在噬菌體的附著的糖蛋白外殼內(nèi)。編碼DNA在p盆菌體內(nèi)的聯(lián)合可以用于促進(jìn)編碼區(qū)的擴(kuò)增，從而鑒定肽。術(shù)語"非靶"表示一種底物，對(duì)于該底物，具有結(jié)合親和力的肽不是理想的。為了選擇抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽，所述"非革巴"包括但不限于皮膚和塑料。在本文中將術(shù)語"納米顆粒"定義為具有1至100nm的平均粒徑的顆粒。優(yōu)選地，顆粒的平均粒徑是約1至40nm。如本文所使用的，"粒度"和"粒徑"具有相同的含義。納米顆粒包括但不限于，金屬、半導(dǎo)體、聚合物或其它有機(jī)或無機(jī)顆粒。術(shù)語"氨基酸"指蛋白或多肽的基本化學(xué)結(jié)構(gòu)單元。在本文中使用如下的縮寫來代表特定的氨基酸氨基酸_三字母縮寫_單字母縮寫丙氨酸AlaA精氨酸ArgR天冬酰胺AsnN天冬氨酸AspD半胱氨酸CysC谷氨酰胺GinQ谷氨酸GluE甘氨酸GlyG組氨酸HisH異亮氨酸lieI亮氨酸LeuL賴氨酸LysK曱碌u氨酸MetM苯丙氨酸PheF脯氨酸ProP絲氨酸SerS蘇氨酸ThrT色氨酸TrpW酪氨酸TyrY纈氨酸ValV"基因"指表達(dá)特定蛋白的核酸片段，包括編碼序列之前的調(diào)控序列(5，非編碼序列)和之后的序列(3'非編碼序列)，"天然基因"指在天然狀態(tài)下發(fā)現(xiàn)的帶有自身調(diào)控序列的基因。"嵌合基因"指非天然基因的任意基因，其包含在天然狀態(tài)下不會(huì)同時(shí)發(fā)現(xiàn)的調(diào)控序列和編碼序列。因此，嵌合基因可能包含源自不同來源的調(diào)控序列和編碼序列，或者包含源自相同來源、但排列方式不同于天然狀態(tài)的調(diào)控序列和編碼序列。"外源"基因指在宿主生物體中通常不存在、而是通過基因轉(zhuǎn)移引入到宿主生物體的基因。外源基因可以包含插入非天然生物體中的天然基因，或嵌合基因。使用本領(lǐng)域中技術(shù)人員已知的方法，可以將化學(xué)合成的寡核苷酸結(jié)構(gòu)單元裝配成"合成的基因"。連接這些結(jié)構(gòu)單元并退火，形成基因片段，然后再酶促地裝配它們，構(gòu)建完整的基因。當(dāng)涉及DNA序列時(shí)，"化學(xué)合成的"表示在體外裝配組分核苷酸。DNA的人工化學(xué)合成，可以使用充分確立的技術(shù)來完成，或自動(dòng)化學(xué)合成可以使用許多市售儀器之一來進(jìn)行。因此，可以根據(jù)反映宿主細(xì)胞密碼子偏倚的核苷酸序列最優(yōu)化，對(duì)基因進(jìn)行裁剪，進(jìn)行最佳的基因表達(dá)。如果密碼子選擇偏向宿主偏愛的那些密碼子，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠意識(shí)到成功的基因表達(dá)的可能性?；趯?duì)源自可得到序列信息的宿主細(xì)胞的基因的分析，可以確定出優(yōu)選的密碼子。"編碼序列"指編碼特定氨基酸序列的DNA序列。"適當(dāng)?shù)恼{(diào)控序列"指位于編碼序列上游(5，非編碼序列)、其中或下游(3，非編碼序列)的核苷酸序列，其會(huì)影響相關(guān)編碼序列的轉(zhuǎn)錄、RNA加工或穩(wěn)定性、或翻譯。調(diào)控序列可以包括啟動(dòng)子、翻譯前導(dǎo)序列、內(nèi)含子、聚腺苷酸化識(shí)別序列、RNA加工位點(diǎn)、效應(yīng)物結(jié)合位點(diǎn)和莖環(huán)結(jié)構(gòu)。"啟動(dòng)子"指能夠控制編碼序列或功能性RNA的表達(dá)的DNA序列。一^L來說，編碼序列位于啟動(dòng)子序列的3，。啟動(dòng)子可以整體地源自天然基因，或包含源自不同天然啟動(dòng)子的不同元件，或者甚至包含合成的DNA片段。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，不同的啟動(dòng)子可以指導(dǎo)基因表達(dá)，后者發(fā)生在不同組織或細(xì)胞類型中，或在不同的發(fā)育階段，或?qū)Σ煌h(huán)境或生理?xiàng)l件作出的反應(yīng)。導(dǎo)致基因在大多數(shù)細(xì)胞類型中在大多數(shù)時(shí)間下表達(dá)的啟動(dòng)子，一般稱為"組成型啟動(dòng)子"。進(jìn)一步認(rèn)識(shí)到，因?yàn)樵诖蠖鄶?shù)情況下不能完全確定調(diào)控序列的確切界限，因此不同長(zhǎng)度的DNA片段可能具有相同的啟動(dòng)子活性。如本文所使用的，術(shù)語"表達(dá)，，指源自本發(fā)明的核酸片段的有義(mRNA)或反義RNA的轉(zhuǎn)錄和穩(wěn)定累積。表達(dá)還可以指mRNA翻譯為多肽。術(shù)語"轉(zhuǎn)化"指將核酸片段轉(zhuǎn)移到宿主生物體的基因組中，導(dǎo)致遺傳上穩(wěn)定的遺傳特性。包含轉(zhuǎn)化的核酸片段的宿主生物體也稱作"轉(zhuǎn)基因的"或"重組的"或"轉(zhuǎn)化的"生物體。術(shù)語"宿主細(xì)胞"指已經(jīng)或能被外源多核苷酸序列轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。術(shù)語"質(zhì)粒"、"載體"和"盒"指經(jīng)常攜帶特定基因的染色體外元件，所述基因不是細(xì)胞中心代謝的一部分，并且通常是環(huán)狀雙鏈DNA分子形式。這樣的元件可以是任意來源的單鏈或雙鏈DNA或RNA的線狀或環(huán)狀自主復(fù)制序列、基因組整合序列、噬菌體或核苷酸序列，其中許多核苷酸序列已經(jīng)結(jié)合或組合在獨(dú)特的構(gòu)建體中，該構(gòu)建體能夠?qū)⑺x基因產(chǎn)物的啟動(dòng)子片段和DNA序列連同適當(dāng)?shù)?'非翻譯序列引入細(xì)胞中。"轉(zhuǎn)化盒"指一種特殊的載體，其包含外源基因，除外源基因外還具有促進(jìn)特定宿主細(xì)胞的轉(zhuǎn)化的元件。"表達(dá)盒"指一種特殊的載體，其包含外源基因，除外源基因外還具有增強(qiáng)該基因在外源宿主中的表達(dá)的元件。術(shù)語"噬菌體(phage或bacteriophage)"指能感染細(xì)菌的病毒。變化形式的噬菌體也能用于本發(fā)明目的。優(yōu)選的噬菌體源自叫做M13的"野生"噬菌體。M13系統(tǒng)可以在細(xì)菌內(nèi)生長(zhǎng)，因此不會(huì)石皮壞它所感染的細(xì)胞，只是使它不斷地制造新的噬菌體。它是單鏈DNA噬菌體。術(shù)語"噬菌體展示"指在噬菌體或噬菌粒顆粒表面上所進(jìn)行的功能性外源肽或小蛋白的展示?？梢允褂没蚬こ袒氖删w，將肽展示為它們的天然表面蛋白的片段。具有不同基因序列的噬菌體群可以產(chǎn)生肽文庫。"PCR"或"聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)"是用于擴(kuò)增特定DNA片段的技術(shù)(美國專利No.4,683，195和4,800,159)。本文所使用的標(biāo)準(zhǔn)重組DNA和分子克隆技術(shù)，是本領(lǐng)域眾所周知的才支術(shù)，且i己載在Sambrook,J.，F(xiàn)ritsch,E.F.和Maniatis,T.，MolecularCloning:ALaboratoryManual,SecondEdition,ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，NY(1989)(下文稱作"Maniatis");和Silhavy,T.J.，Bennan,M丄.和Enquist,L.W.,ExperimentswithGeneFusions,ColdSpringHarborLaboratoryColdPressSpringHarbor,NY(1984);和Ausubel,F.M.等，CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenePublishingAssoc,和Wiley-Interscience出版(1987)。本發(fā)明提供了鑒定在毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)存在下以高親和力特異性結(jié)合于毛發(fā)的抗毛發(fā)調(diào)理劑的肽序列的方法。該方法是標(biāo)準(zhǔn)生物淘選技術(shù)的改進(jìn)，其中毛發(fā)與組合產(chǎn)生的肽的文庫接觸。在本發(fā)明的內(nèi)容中，得到的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物與毛發(fā)調(diào)理劑接觸一段時(shí)間。分離DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物，任選與洗脫劑接觸，得到洗脫的DNA聯(lián)合的肽和保持與毛發(fā)結(jié)合的DNA聯(lián)合的肽。擴(kuò)增和鑒定洗脫的DNA聯(lián)合的肽和/或保留的結(jié)合的DNA聯(lián)合的肽。可以用鑒定的抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽序列構(gòu)建基于肽的毛發(fā)有益試劑，如毛發(fā)調(diào)理劑和著色劑?？姑l(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽的恭定本文定義的抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽(HCP)是特異性結(jié)合毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)中的毛發(fā)并且在其中穩(wěn)定的肽序列。本發(fā)明的抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽的長(zhǎng)度是約7個(gè)氨基酸-約45個(gè)氨基酸，更優(yōu)選約7個(gè)氨基酸-約25個(gè)氨基酸，最優(yōu)選約12-約20個(gè)氨基酸。本發(fā)明的肽是隨機(jī)產(chǎn)生的，然后按照下文所述，在毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)存在下，基于它們對(duì)毛發(fā)的結(jié)合親和力針對(duì)毛發(fā)樣品進(jìn)行選擇。隨機(jī)的肽文庫的產(chǎn)生是眾所周知的，且可以通過許多技術(shù)來實(shí)現(xiàn)，包括，細(xì)菌展示(Kemp，D丄;Proc.Natl.Acad.Sci.USA78(7):4520—4524(1981),和Helfman等，Pro"Natl,Acad.Sci.USA80(1):31-35,(1983))，酵母展示(Chien等，ProcNatlAcadSciUSA88(21):9578-82(1991))，組合固相肽合成(美國專利No.5,449,754，美國專利No.5,480,971,美國專利No.5,585，275,美國專利No.5,639,603)，和噬菌體展示技術(shù)(美國專利No.5,223,409，美國專利No.5,403，484，美國專利No.5,571,698,美國專利No.5,837,500)。產(chǎn)生這樣的生物肽文庫的技術(shù)是本領(lǐng)域7>知的。示例的方法記載在Dani,M.,J.ofReceptor&SignalTransductionRes.，21(4):447-468(2001),Sidhuetal.,MethodsinEnzymology328:333-363(2000),和PhageDisplayofPeptidesandProteins,ALaboratoryManual,BrianK.Kay,JillWinter,以、及JohnMcCafferty,eds.;AcademicPress,.NY,1996。jt匕夕卜，可以從商業(yè)來源如NewEnglandBiolabs(Beverly,MA)購買喧菌體展示文庫。在一個(gè)實(shí)施方案中，特別有用的是以某種方式使編碼肽的DNA與肽聯(lián)合。該聯(lián)合在篩選或生物淘選過程中促進(jìn)結(jié)合肽的快速鑒定。編碼DNA可以是PCR擴(kuò)增的，或用于感染復(fù)制中的宿主，以增加用于快速鑒定的肽的表達(dá)。典型地通過噬菌體展示、細(xì)菌展示和酵母展示的方法生產(chǎn)DNA聯(lián)合的肽。隨機(jī)產(chǎn)生肽的一個(gè)優(yōu)選的方法是利用噬菌體展示。噬菌體展示是一種體外選擇技術(shù)，其中將肽或蛋白遺傳地融合到噬菌體外殼蛋白上，從而在噬菌體病毒體的外部形成融合肽展示，而編碼融合體的DNA停留在病毒體內(nèi)。展示肽和其編碼DNA之間的這種物理連接，允許通過稱作"生物淘選，，的簡(jiǎn)單體外選擇過程，篩選大量肽變體，每個(gè)變體均與相應(yīng)的DNA序列連接。生物淘選中最簡(jiǎn)單的形式是，將噬菌體-展示的變體庫與目標(biāo)耙一起溫育，洗去未結(jié)合的噬菌體，并通過破壞噬菌體與靶之間的結(jié)合相互作用，洗脫特異性地結(jié)合的噬菌體。然后，體內(nèi)擴(kuò)增洗脫的噬菌體，重復(fù)該過程，得到逐步富集的有利于最緊密結(jié)合序列的噬菌體庫。經(jīng)過3輪或更多輪的選擇/擴(kuò)增，通過DNA測(cè)序?qū)蝹€(gè)克隆進(jìn)行表4正?？梢酝ㄟ^在毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)存在下，基于對(duì)毛發(fā)的結(jié)合親和力，針對(duì)毛發(fā)樣品選擇噬菌體肽，從而用噬菌體展示法鑒定本發(fā)明的抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽。毛發(fā)和噬菌體肽可以以多種途徑與毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)接觸，形成調(diào)理溶液，如下文的詳細(xì)描述。例如，可以將噬菌體肽文庫溶解于毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)，然后與毛發(fā)樣品接觸?；蛘?，可以隨后將通過使毛發(fā)樣品接觸噬菌體展示文庫而形成的噬菌體-肽-毛發(fā)復(fù)合物與毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)接觸。此外，可以使用這些毛發(fā)調(diào)理劑接觸方法的任意組合。在已經(jīng)生產(chǎn)出或者從供應(yīng)商購買DNA聯(lián)合的肽的合適文庫后，使該文庫與適量的毛發(fā)樣品相接觸，形成包含DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物的反應(yīng)溶液。人毛發(fā)樣品是可以商購的，例如，購自InternationalHairImportersandProducts(Bellerose,NY)，其具有不同顏色，如棕色、黑色、紅色和金色，有各種類型，如黑人、白人和亞洲人的類型。此外，例如可以用過氧化氫處理毛發(fā)樣品，以獲得漂白的毛發(fā)。將DNA聯(lián)合的肽的文庫溶解于合適的溶液，用于接觸毛發(fā)樣品。在一個(gè)實(shí)施方案中，將肽的文庫溶解于含有表面活性劑的緩沖鹽水溶液中。合適的溶液是含有0.5%Tween20的Tris緩沖的鹽水(TBS)。在另一實(shí)施方案中，將肽的文庫溶解于毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)中(參見下文)，然后與毛發(fā)樣品接觸?？梢酝ㄟ^任何方法攪拌含有肽文庫的溶液，以便增加肽到毛發(fā)表面的質(zhì)量轉(zhuǎn)移速度，從而縮短達(dá)到最大結(jié)合所需的時(shí)間。達(dá)到最大結(jié)合所需的時(shí)間依賴于一些因素而改變，例如毛發(fā)樣品的大小、肽文庫的濃度和攪拌速度。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以采用常規(guī)實(shí)驗(yàn)容易地確定需要的時(shí)間。典型地，接觸時(shí)間是1分鐘到1小時(shí)。任選地，可以使肽文庫與非耙，如皮膚或塑料接觸，所述接觸是在^^妄觸毛發(fā)樣品之前或同時(shí)，以除去結(jié)合于非靶的不需要的DNA聯(lián)合的肽。接觸毛發(fā)樣品后，許多隨機(jī)產(chǎn)生的肽就結(jié)合于毛發(fā)，形成DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物。許多肽保持未復(fù)合狀態(tài)，部分樣品也未結(jié)合?？梢匀芜x用任何合適的緩沖液洗滌，從而除去未復(fù)合的肽，所述緩沖液如Tris-HC1、Tris緩沖的鹽水、Tris-硼酸鹽、Tris-乙酸、三乙胺、磷酸緩沖液和甘氨酸-HC1，其中優(yōu)選Tris緩沖的鹽水溶液。洗滌溶液也可以含有表面活性劑，如SDS(十二烷基石克酸鈉)、DOC(脫氧膽酸鈉)、NonidetP-40、TritonX-100、Tween20,其中優(yōu)選濃度為0.5%的Tween20。洗滌步驟可以重復(fù)一次或多次。除去未復(fù)合的材料后，使DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物與毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)接觸一段時(shí)間，典型地，接觸約1分鐘至約30分鐘，以形成調(diào)理溶液。本文用到的毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)是指一種介質(zhì)，其包含未稀釋或稀釋形式的毛發(fā)調(diào)理劑產(chǎn)品，或包含毛發(fā)調(diào)理劑產(chǎn)品的至少一種成分的混合物以及毛發(fā)調(diào)理劑產(chǎn)品的至少兩種成分。合適的毛發(fā)調(diào)理劑產(chǎn)品組合物是本領(lǐng)域公知的。毛發(fā)調(diào)理劑產(chǎn)品組合物的成分由Philippe等人描述于美國專利No.6,280,747,由Omura等人描述于美國專利No.6,139,851，并且由Cannell等人描述于美國專利No.6,013,250，在此引入作為參考。例如，毛發(fā)調(diào)理劑組合物可以是水溶液、水-醇溶液和油包水(W/O)或水包油(OAV)乳液。此外。毛發(fā)調(diào)理劑組合物可以包含一種或多種常規(guī)的化妝品或皮膚病學(xué)添加劑或佐劑，包括但不限于毛發(fā)調(diào)理劑(參見下文實(shí)施例)、抗氧化劑、防腐劑、填料、表面活性劑、UVA和/或UVB防曬劑、香料、增稠劑、潤(rùn)濕劑和陰離子、非離子或兩性聚合物，以及染料或色素。這些佐劑是化妝品領(lǐng)域/>知的，并且描述于許多^Hf文南史，例如參見Harry'sBookofCosmeticology,第8版，MartinRieger,ed.，ChemicalPublishing,NewYork(2000)。jt匕夕卜，可以J吏用可商購的毛發(fā)調(diào)理劑產(chǎn)品，如DoveExtraVolumeConditioner(Unilever)、PanteneProV(ProctorandGamble)、HerbalEssence(Clairol)，F(xiàn)inesse(HeleneCurtis)和Tresemme(Alberto'Culver)。毛發(fā)調(diào)理劑可以在地區(qū)超市和藥店購買。優(yōu)選地，本方法中采用這樣的毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)，其中最終使用抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽。毛發(fā)調(diào)理劑組合物可是不稀釋使用，也可以稀釋以促進(jìn)其應(yīng)用，特別是在非常粘稠的組合物的情況下。毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)可以用水或合適的緩沖液稀釋，如可以使用上文描述的那些。毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)的濃度是完全強(qiáng)度濃度的至少約10%，優(yōu)選至少約20%，更優(yōu)選至少約50%,更優(yōu)選至少約75%。最優(yōu)選地，以未稀釋形式使用毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)。任選地，可以使DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物與毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)接觸一次或多次。從調(diào)理溶液分離DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物，任選用上文描述的緩沖液洗滌一次或多次。也可以將毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)用作洗液。然后使DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物與洗脫劑接觸(優(yōu)選在轉(zhuǎn)移到新容器之后)，以使DNA聯(lián)合的肽從毛發(fā)上解離；但是，一些DNA聯(lián)合的肽在該處理之后可能仍然保持與毛發(fā)結(jié)合。洗脫劑可以是任何已知的洗脫劑，包括但不限于酸(pH1.5-3.0);石咸(pH10-12.5);含有高鹽濃度如MgCl2(3-5M)和LiC1(5-10M)的溶液；水；乙二醇(25-50%);二哺烷(5-20%);硫氰酸鹽(1-5M);胍(2-5M);和脲(2-8M),其中優(yōu)選用酸處理。如果使用的洗脫緩沖液是酸或堿，那么，加入中和緩沖液，以便在洗脫步驟后將pH調(diào)節(jié)至中性范圍。可以使用任何合適的緩沖液，其中采用酸性洗脫液時(shí)優(yōu)選使用1MTris-HCIpH9.2。然后，用本領(lǐng)域已知的方法擴(kuò)增編碼洗脫的肽或保持結(jié)合的肽的DNA，或編碼洗脫的肽和保持結(jié)合的肽這兩者的DNA。例如，可以通過用編碼需要的肽的DNA感染細(xì)菌宿主，如大腸桿菌ER2738，來擴(kuò)增編碼洗脫的肽和保持結(jié)合的肽的DNA,如Huang等人的描述(共同未決和共同擁有的美國專利申請(qǐng)一^開No.2005/0050656，在此引入作為參考)。在合適的生長(zhǎng)培養(yǎng)基(例如LB(Luria-Bertani)培養(yǎng)基)中培養(yǎng)感染的宿主細(xì)胞，然后將培養(yǎng)物涂布到瓊脂上，瓊脂包含合適的生長(zhǎng)培養(yǎng)基，例如含有IPTG(異丙基(3-D-硫代吡喃半乳糖苷)和S-GalTM(3,4-環(huán)己烯基七葉亭-|3-D-吡喃半乳糖苷)的LB培養(yǎng)基。生長(zhǎng)后，挑選噬斑進(jìn)行DNA分離和測(cè)序，以鑒定編碼抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽序列的序列?；蛘?，可以用核酸擴(kuò)增方法，如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增編碼洗脫的肽和保持結(jié)合的肽的DNA。在該方法中，用合適的引物，在編碼洗脫的肽和/或保持結(jié)合的肽的DNA上進(jìn)行PCR,如Janssen等人在美國專利申請(qǐng)公開No.2003/0152976中的描述，在此引入作為參考。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過感染細(xì)菌宿主細(xì)胞擴(kuò)增編碼洗脫的肽和保持結(jié)合的肽的DNA,使擴(kuò)增的DNA聯(lián)合的肽與新鮮的毛發(fā)樣品接觸，將上述完整過程重復(fù)一次或多次，得到富含抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合DNA聯(lián)合的肽的群體。在需要數(shù)目的生物淘選周期后，用本領(lǐng)域公知的標(biāo)準(zhǔn)DNA序列技術(shù)確定擴(kuò)增的DNA序列，以鑒定抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽序列。用上述方法鑒定抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽。具體地，分離了SEQIDNOs:l-5所示的結(jié)合肽，其對(duì)毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)中的正常棕色毛發(fā)具有高親和力，并且在其中穩(wěn)定?？姑l(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽的生產(chǎn)可以使用本領(lǐng)域/>知的標(biāo)準(zhǔn)的肽合成方法來制備本發(fā)明的抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽(參見例如Stewart等，SolidPhasePeptideSynthesis,PierceChemicalCo.，Rockford,IL,1984;Bodanszky，PrinidplesofPeptideSynthesis,Springer-Verlag,NewYork,1984;和Pennington等，PeptideSynthesisProtocols,HumanaPress,Totowa,NJ,1994)。另外，許多公司能夠提供提供常規(guī)肽合成服務(wù)。或者，可以使用重組DNA和分子克隆技術(shù)來制備本發(fā)明的肽?？梢栽诋愒此拗骷?xì)胞(尤其是微生物宿主細(xì)胞)中生產(chǎn)編碼毛發(fā)結(jié)合肽的基因。用于表達(dá)本發(fā)明結(jié)合肽的優(yōu)選異源宿主細(xì)胞是微生物宿主，其廣泛地存在于真菌或細(xì)菌家族中，并能夠在寬溫度、pH值和溶劑耐受性范圍內(nèi)生長(zhǎng)。因?yàn)檗D(zhuǎn)錄、翻譯和蛋白質(zhì)生物合成裝置均同樣地與細(xì)胞原料供給無關(guān)，因此功能性基因的表達(dá)與用于生成細(xì)胞生物量的碳原料供給無關(guān)。宿主菌林的實(shí)例包括但不限于，真菌或酵母物種，如曲霉屬(Aspergillus),木霉菌屬(Trichoderma)、糖酵母屬(Saccharomyces)、畢赤酵母屬(Pichia)、假絲酵母屬(Candida)、漢遜酵母屬(Hansenula),或細(xì)菌物種，如沙門氏菌屬(Salmonella),芽孢桿菌屬(Bacillus)、不動(dòng)桿菌屬(Acinetobacter)、紅球菌屬(Rhodococcus)、鏈霉菌屬(Streptomyces)、埃希氏菌屬(Escherichia)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、曱基單胞菌屬(Methylomonas)、曱基纟田菌屬(Methylobacter)、產(chǎn)石威菌屬(Alcaligenes)、集胞藍(lán)細(xì)菌屬(Synechocystis)、魚腥藍(lán)細(xì)菌屬(Anabaena)、石克桿菌屬(Thiobacillus)、曱烷桿菌屬(Methanobacterium)、和克雷伯氏菌屬(Klebsiella)。可以使用多種表達(dá)系統(tǒng)來生產(chǎn)本發(fā)明的肽。這樣的載體包括但不限于，染色體型載體、附加型載體和病毒衍生型載體，如源自細(xì)菌質(zhì)粒、噬菌體、轉(zhuǎn)座子、插入元件、酵母附加體和病毒(如桿狀病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒)的載體，以及上述載體組合后得到的載體，如源自質(zhì)粒和噬菌體遺傳元件，如粘粒和噬菌粒的載體。表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建體可以包含調(diào)控區(qū)，其調(diào)節(jié)和引起表達(dá)。通常，在這點(diǎn)上來說，任何適合在宿主細(xì)胞中維持、繁殖或表達(dá)多核苷酸或多肽的系統(tǒng)或載體都可以用于表達(dá)。微生物表達(dá)系統(tǒng)和表達(dá)載體包含調(diào)控序列，該調(diào)控序列能夠指導(dǎo)外源蛋白相對(duì)于宿主細(xì)胞的生長(zhǎng)進(jìn)行高水平的表達(dá)。調(diào)控序列對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是公知的，實(shí)例包括但不限于，在對(duì)化學(xué)或物理刺激的反應(yīng)中造成基因表達(dá)開啟或關(guān)閉的調(diào)控序列，包括存在于載體中的調(diào)控元件，如增強(qiáng)子序列。可以使用它們中的任一種來構(gòu)建嵌合基因，用于生產(chǎn)本發(fā)明的任意結(jié)合肽。然后，將這些嵌合基因通過轉(zhuǎn)化引入到合適的微生物中，提供肽的高水平表達(dá)。用于轉(zhuǎn)化適當(dāng)宿主細(xì)胞的載體或盒是本領(lǐng)域公知的。典型地，載體或盒包含指導(dǎo)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯的序列、一個(gè)或多個(gè)選擇標(biāo)記、和允許自主復(fù)制或染色體整合的序列。適合的載體包含攜帶轉(zhuǎn)錄起始控制區(qū)的基因的5'區(qū)域，和控制轉(zhuǎn)錄終止的DNA片段的3'區(qū)域。盡管本領(lǐng)域技術(shù)人員均清楚，這樣的控制區(qū)沒有必要源自選為生產(chǎn)宿主的特定物種的天然基因，但是最優(yōu)選地，兩個(gè)控制區(qū)都源自與轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞同源的基因。選擇標(biāo)記基因會(huì)為轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞的選擇提供表型性狀，如大腸桿菌中的四環(huán)素或氨芐青霉素抗性。能夠用于驅(qū)動(dòng)嵌合基因在目標(biāo)宿主細(xì)胞中的表達(dá)的起始控制區(qū)或啟動(dòng)子有多種，并為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。幾乎任意能夠驅(qū)動(dòng)基因的啟動(dòng)子都適合用于生產(chǎn)本發(fā)明的結(jié)合肽，包括，但不限于CYC1、HIS3、GAL1、GALIO、ADH1、PGK、PH05、GAPDH、ADC1TRP1、URA3、LEU2、ENO、TPI(用于在糖酵母屬中的表達(dá))；AOXl(用于在畢赤氏酵母屬中的表達(dá))；和lac、ara、tet、trp、IPL、IPR、T7、tac和trc(用于在大腸桿菌中的表達(dá))；以及用于在芽孢桿菌屬中表達(dá)的amy、apr、npr啟動(dòng)子和各種噬菌體啟動(dòng)子。終止控制區(qū)也可以來自優(yōu)選宿主的各種天然基因。任選地，沒有必要必須包含終止位點(diǎn)，但是最優(yōu)選地包含終止位點(diǎn)?？梢允褂冒鲜龊线m的DNA序列以及合適的啟動(dòng)子或控制序列的載體，來轉(zhuǎn)化合適的宿主，以使宿主表達(dá)本發(fā)明的肽。也可以使用源自本發(fā)明DNA構(gòu)建體的RNA,使用無細(xì)胞翻譯系統(tǒng)來生產(chǎn)這樣的肽。任選地，可能需要以轉(zhuǎn)化的宿主的分泌產(chǎn)物的形式來生產(chǎn)本發(fā)明的基因產(chǎn)物。將所需的蛋白分泌到培養(yǎng)基中，有利于簡(jiǎn)化純化過程并降低成本。本領(lǐng)域熟知，分泌信號(hào)序列常被用于促進(jìn)可表達(dá)的蛋白穿過細(xì)胞膜的主動(dòng)運(yùn)輸。通過摻入編碼在生產(chǎn)宿主中起作用的分泌信號(hào)的DNA序列，可以建立能分泌的轉(zhuǎn)化的宿主。選擇合適的信號(hào)序列的方法在本領(lǐng)域中是已知的(參見例如EP546049和WO9324631)。分泌信號(hào)DNA或促進(jìn)子(facilitator)可以位于表達(dá)-控制DNA和本發(fā)明基因或基因片段之間，并且與后者處于相同的讀碼框中?；陔牡拿l(fā)有益試劑通過將抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽(HCP)與有益試劑(BA)如調(diào)理劑、著色劑、香料、防曬劑等偶聯(lián)，形成本發(fā)明的基于肽的毛發(fā)有益試劑。基于肽的有益試劑的抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽部分與毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)中的毛發(fā)強(qiáng)結(jié)合，由此使有益試劑保持附著于毛發(fā)，得到長(zhǎng)期持續(xù)的效果?？姑l(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽與有益試劑之間的偶聯(lián)相互作用可以是共價(jià)鍵或非共價(jià)相互作用，并且可以是通過任選的間隔基，如下文的描述。也可能需要將多個(gè)抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽偶聯(lián)于有益試劑，以便增強(qiáng)基于肽的有益試劑和毛發(fā)之間的相互作用，如Huang等人(共同未決和共同擁有的美國專利申請(qǐng)^^開No.2005/0050656)的描述。這可以通過將多個(gè)拷貝的單個(gè)抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽與有益試劑偶聯(lián)，或通過直接或經(jīng)間隔基將兩個(gè)或多個(gè)抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽序列連接在一起，然后將得到的多拷貝毛發(fā)結(jié)合肽序列與有益試劑偶聯(lián)而實(shí)現(xiàn)。此外，可以將多個(gè)拷貝的多拷貝抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽序列與有益試劑偶聯(lián)。在所有這些基于肽的毛發(fā)有益試劑中，可以使用多個(gè)拷貝的相同抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽或不同抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽的組合。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，基于肽的有益試劑是二嵌段組合物，其由抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽(HCP)和有益試劑(BA)組成，具有通式結(jié)構(gòu)(HCPm)n-BA,其中m是l-約IOO,優(yōu)選1-約10。當(dāng)有益試劑是分子種類時(shí)，n的范圍是1-約100,優(yōu)選1-約10。當(dāng)有益試劑是顆粒，如色素時(shí)，n的范圍是1-約50,000，優(yōu)選l-約10,000。在另一實(shí)施方案中，基于肽的有益試劑含有分隔抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽與有益試劑的間隔基(S)。可以將多個(gè)拷貝的抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽與單個(gè)間隔分子偶聯(lián)?；蛘撸梢杂啥鄠€(gè)間隔基分隔多個(gè)拷貝的抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽。在該實(shí)施方案中，基于肽的有益試劑是三嵌段組合物，其由抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽、間隔基和有益試劑組成，具有通式結(jié)構(gòu)[(HCPx-S)m]n-BA，其中x的范圍是l-約10,優(yōu)選x是l，并且m是l-約100,優(yōu)選l-約10。當(dāng)有益試劑是分子種類，如染料或非顆粒調(diào)理劑時(shí)，n的范圍是l-約100，優(yōu)選1-約10。當(dāng)有益試劑是顆粒，如色素時(shí)，n的范圍是1-約50,000，優(yōu)選1-約10,000。應(yīng)該理解，本文使用的HCP是通用命名，不意味著它表示單個(gè)抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽序列。當(dāng)上文使用的m、n或x大于l時(shí)，提供以下狀況是在本發(fā)明的范圍內(nèi)即一系列不同序列的毛發(fā)結(jié)合肽可以形成組合物的一部分。此外，S是通用命名，不意味著它表示單個(gè)間隔基。當(dāng)上文用于三嵌段組合物的m或n大于1時(shí)，提供以下狀況是在本發(fā)明的范圍內(nèi)即一系列不同序列的間隔基可以形成組合物的一部分。應(yīng)該理解，這些結(jié)構(gòu)不一定代表肽、有益試劑和任選間隔基之間的共價(jià)鍵。如下文所述，肽、有益試劑和任選間隔基之間的偶聯(lián)相互作用可以是共價(jià)的或非共價(jià)的。下文針對(duì)毛發(fā)調(diào)理劑和毛發(fā)著色劑描述了本發(fā)明的抗毛發(fā)調(diào)理劑的基于肽的有益試劑的制備。應(yīng)該理解，這些方法可以用于其它有益試劑，并且這些其它的抗毛發(fā)調(diào)理劑的基于肽的有益試劑屬于本發(fā)明的范圍內(nèi)。泉于肽的毛發(fā)調(diào)理劑肽(HCP)與毛發(fā)調(diào)理劑(HCA)偶聯(lián)而形成的。調(diào)理劑的抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽部分與毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)中的毛發(fā)強(qiáng)結(jié)合，由此使調(diào)理劑附著于毛發(fā)，得到長(zhǎng)期持續(xù)的調(diào)理效果?？姑l(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽是通過上文描述的方法選擇的，并且包括但不限于SEQIDNOs:l-5和SEQIDNO:12示出的毛發(fā)結(jié)合肽序列。在本文中定義的毛發(fā)調(diào)理劑指能夠改善毛發(fā)外觀、質(zhì)地和光澤度，以及增加毛發(fā)體或柔度的試劑。毛發(fā)調(diào)理劑，包括但不限于，發(fā)型輔助劑，毛發(fā)拉直輔助劑，毛發(fā)強(qiáng)化輔助劑，和膨脹(voluminizing)試劑，例如納米顆粒。在本發(fā)明的基于肽的毛發(fā)調(diào)理劑中，可以使用任何已知的毛發(fā)調(diào)理劑。毛發(fā)調(diào)理劑在本領(lǐng)域是公知的，參見例如本申請(qǐng)引作參考的文獻(xiàn)Green等(WO0107009),并且可以通過各種途徑購買到。合適的毛發(fā)調(diào)理劑的例子包括，但不限于陽離子聚合物，如陽離子化的瓜耳膠、二烯丙基季銨鹽/丙烯酰胺共聚物、季銨化的聚乙烯吡咯烷酮及其衍生物、和各種聚季銨化合物；陽離子表面活性劑，如硬脂基二曱基千基氯化銨(steralkoniumchloride)、centrimoniumchloride、和Sapaminhydrochloride;脂肪族醇，如二十二醇；脂肪族胺，如硬脂胺；蠟；酉旨；非離子聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、和聚乙二醇；硅酮；硅氧烷，如十曱基環(huán)戊硅氧烷；聚合物乳劑，如氨基封端的二曱基硅酮(amodimethicone);和納米顆粒，如二氧化硅納米顆粒和聚合物納米顆粒。本發(fā)明優(yōu)選的毛發(fā)調(diào)理劑包含胺或羥基官能團(tuán)，以促進(jìn)與毛發(fā)結(jié)合肽的偶聯(lián)，如在下面所述。優(yōu)選的調(diào)理劑的實(shí)例是辛胺(CASNo.lll-86-4)、硬月旨胺(CASNo.124-30-1)、二十二醇(CASNo.661-19-8,CognisCorp.,Cincinnati,OH)、乙烯基封端的娃氧烷、乙烯基封端的硅酮(CASNo.68083-19-2)、乙烯基封端的曱基乙烯基硅氧烷、乙烯基封端的曱基乙烯基硅酮(CASNo.68951-99-5)、羥基封端的硅氧烷、羥基封端的硅酮(CASNo.80801-30-5)、氨基修飾的硅酮衍生物、[(氨乙基)氨基]丙基羥基二甲基硅氧烷、[(氨乙基)氨基]丙基羥基二曱基硅酮、a-十三烷基-co-羥基-聚(氧基-1,2-乙烷二基)(CASNo.24938-91-8)。通過使特異性的抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽直接地或通過任選的間隔基偶聯(lián)到毛發(fā)調(diào)理劑上，可以制備本發(fā)明基于肽的毛發(fā)調(diào)理劑。偶聯(lián)相互作用可以是共價(jià)鍵或非共價(jià)相互作用，例如氬鍵，靜電相互作用，疏水相互作用，或范德華相互作用。在非共價(jià)相互作用的情況下，可以通過混合肽和調(diào)理劑以及任選的間隔基(如果使用)，并允許足以發(fā)生相互作用的時(shí)間，制備基于肽的毛發(fā)調(diào)理劑。使用本領(lǐng)域已知的方法，例如，凝膠滲透色譜，可以從得到的基于肽的毛發(fā)調(diào)理劑加合物分離未結(jié)合的物質(zhì)。間隔基^價(jià)地結(jié)合到毛發(fā)調(diào)理劑上，D制備本發(fā)明的基于肽的毛i調(diào)理劑，如Huang等人的描述(共同未決和共同擁有的美國專利申請(qǐng)/>開No.2005/0050656)。可以使用任意已知的肽或蛋白綴合化學(xué)，制備本發(fā)明的基于肽的毛發(fā)調(diào)理劑。綴合化學(xué)在本領(lǐng)域是已知的(參見例如Hermanson，BioconjugateTechniques,AcademicPress，NewYork(1996))。合適的偶聯(lián)劑包括但不限于，碳二亞胺偶聯(lián)劑、酸氯化物、異氰酸酯、環(huán)氧化物、馬來酰亞胺和其它功能性偶聯(lián)劑，其中功能性偶聯(lián)劑與肽的末端胺和/或羧酸基團(tuán)以及肽上的巰基反應(yīng)。另外，可能需要保護(hù)對(duì)肽上的反應(yīng)性胺或羧酸基團(tuán)，以產(chǎn)生基于肽的調(diào)理劑的預(yù)期結(jié)構(gòu)。本領(lǐng)域公知氨基酸的保護(hù)基團(tuán)、如叔丁氧羰基(t-Boc)的應(yīng)用(參見例如上述Stewart等的文獻(xiàn)；上述Bodanszky的文獻(xiàn)；和上述Pennington等的文獻(xiàn))。在某些情況下，可能需要在毛發(fā)調(diào)理劑上引入反應(yīng)基團(tuán)，如羧酸、醇、胺、異氰酸酯或醛基，以偶聯(lián)毛發(fā)結(jié)合肽?？梢允褂帽绢I(lǐng)域公知的常規(guī)化學(xué)方法，如氧化、還原等，完成這些修飾。也可能希望使抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽通過間隔基與毛發(fā)調(diào)理劑相偶聯(lián)。間隔基將肽和調(diào)理劑分隔開，以確保調(diào)理劑不干擾肽對(duì)毛發(fā)的結(jié)合。間隔基可以是任意類型的分子，如烷基鏈、苯基化合物、乙二醇、酰胺、酯等。優(yōu)選的間隔基是親水性的，鏈長(zhǎng)從l至約IOO個(gè)原子，更優(yōu)選地，鏈長(zhǎng)從2至約30個(gè)原子。優(yōu)選的間隔基的實(shí)例包括但不限于，乙醇胺、乙二醇、鏈長(zhǎng)為6個(gè)碳原子的聚乙烯、具有3-6個(gè)重復(fù)單元的聚乙二醇、苯氧乙醇、丙醇酰胺、丁二醇、丁二醇酰胺、丙基苯基鏈、和乙基烷基鏈、丙基烷基鏈、己基烷基鏈、甾醇基(steryl)烷基鏈、十六烷基烷基鏈和棕櫚酰基烷基鏈。可以使用任意上述的偶聯(lián)化學(xué)，使間隔基共價(jià)結(jié)合到肽和毛發(fā)調(diào)理劑上。為了促進(jìn)間隔基的摻入，可以使用雙功能交聯(lián)劑，其包含間隔基和處于兩末端的反應(yīng)基團(tuán)，以偶聯(lián)肽和調(diào)理劑。合適的雙功能交聯(lián)劑在本領(lǐng)域中是公知的，包括但不限于二胺，如1,6-二氨基己烷；二醛，如戊二醛；雙N-羥基琥珀酰亞胺酯，如乙二醇-雙(琥珀酸N-羥基琥珀酰亞胺酯)、雙琥珀酰亞胺基戊二酸酯、雙琥珀酰亞胺基辛二酸酯、和乙二醇-雙(琥珀酰亞胺基琥珀酸酯)；二異氰酸酯，如1,6-己二異氰酸酯；雙環(huán)氧乙烷，如1,4亞丁基二環(huán)氧甘油醚；二羧酸，如琥珀酰雙水楊酸酯等。也可以使用異雙功能交聯(lián)劑，其在每個(gè)末端含有一個(gè)不同的反應(yīng)基團(tuán)。異雙功能交聯(lián)劑的實(shí)例包括但不限于，具有如下結(jié)構(gòu)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage30</formula>其中R!是H或是取代基，如-S03Na、-N02、或-Br;R2是間隔基，如-CH2CH2(乙基)、-(CH2)3(丙基)或-(CH2)3QH5(丙基苯基)。這樣的異雙功能交聯(lián)劑的實(shí)例是3-馬來酰亞胺基丙酸N-羥基琥珀酰亞胺酯。這些試劑的N-羥基琥珀酰亞胺酯基團(tuán)與調(diào)理劑上的胺或醇基反應(yīng)，而馬來酰亞胺基團(tuán)與肽上的巰基反應(yīng)。通過在結(jié)合肽序列的至少一個(gè)末端(即，C-末端或N-末端)添加至少一個(gè)半胱氨酸基團(tuán)，可以將巰基摻入肽中?？梢栽诮Y(jié)合肽序列和末端半胱氨酸之間摻入幾種間隔氨基酸殘基，如甘氨酸，以將反應(yīng)性巰基與結(jié)合序列分隔開。此外，可以將至少一個(gè)賴氨酸殘基加至結(jié)合肽的至少一個(gè)末端，即C-末端或N-末端，以提供用于偶聯(lián)的胺基團(tuán)。另外，間隔基可以是包含任意氨基酸及其混合物的肽。優(yōu)選的肽間隔基包含脯氨酸、賴氨酸、甘氨酸、丙氨酸和絲氨酸及其混合物。另夕卜，肽間隔基可以包含特異性酶切割位點(diǎn)，如蛋白酶半胱天冬酶3位點(diǎn)(SEQIDNO:6所示)，其用于酶促地從毛發(fā)上去除調(diào)理劑。肽間隔基的長(zhǎng)度可以是從1至約50個(gè)氨基酸，優(yōu)選從1至約20個(gè)氨基酸。肽間隔基的實(shí)例包括但不限于SEQIDNOs:13-15?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域已知的任何方法，將這些肽間隔基連接到結(jié)合肽序列上。例如，可以使用前面所述的標(biāo)準(zhǔn)的肽合成技術(shù)，制備完整的結(jié)合肽-肽間隔基二嵌段物。另外，還可以<吏用碳二亞胺偶聯(lián)劑(參見例如Hermanson,BioconjugateTechniques,AcademicPress,NewYork(1996))、二價(jià)氯化物、二異氰酸酯和能與肽上的末端胺和/或羧酸基團(tuán)反應(yīng)的其它雙功能偶聯(lián)劑，連接結(jié)合肽序列和肽間隔基?；蛘撸梢允褂们懊嫠枋龅闹亟MDNA和分子克隆技術(shù)，制備完整的結(jié)合肽-肽間隔基二嵌段物。間隔基也可以是肽間隔基和有機(jī)間隔基分子的組合，其可以通過上述方法制備。還可能需要將多個(gè)抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽與毛發(fā)調(diào)理劑偶聯(lián)，以增強(qiáng)基于肽的毛發(fā)調(diào)理劑和毛發(fā)之間的相互作用?？梢允褂枚鄠€(gè)拷貝的相同毛發(fā)結(jié)合肽，或不同毛發(fā)結(jié)合肽的組合。例如，可以使用抗毛發(fā)調(diào)理劑和抗洗發(fā)液的組合的毛發(fā)結(jié)合肽。抗洗發(fā)液的毛發(fā)結(jié)合肽由Huang等人(共同未決和共同擁有的美國專利申請(qǐng)公開No.2005/0050656)和O'Brien等人(共同未決和共同擁有的美國專利申請(qǐng)No.11/251715)描述。多拷貝的抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽可以包含多個(gè)如上文所述的間隔基。在大調(diào)理顆粒(如顆粒乳液或納米顆粒)的情況下，可以在調(diào)理劑上偶聯(lián)大量的毛發(fā)結(jié)合肽，即至多約5,000個(gè)。可以將小量毛發(fā)結(jié)合肽偶聯(lián)到較小的調(diào)理劑分子上，即至多約100個(gè)。此外，多個(gè)毛發(fā)結(jié)合肽序列可以連接在一起，并且附著于調(diào)理劑。因此，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，基于肽的毛發(fā)調(diào)理劑是二嵌段組合物，其由抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽(HCP)和毛發(fā)調(diào)理劑(HCA)組成，通式結(jié)構(gòu)為(HCPm)n-HCA，其中m的范圍為1-約100，優(yōu)選1-約10。當(dāng)毛發(fā)調(diào)理劑是分子種類，即非顆粒調(diào)理劑時(shí)，n的范圍是l-約IOO，優(yōu)選1-約10。當(dāng)毛發(fā)調(diào)理劑是顆粒時(shí)，n的范圍是1-約50,000，優(yōu)選1-約10,000。在另一實(shí)施方案中，基于肽的毛發(fā)調(diào)理劑含有上文所述的將抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽與毛發(fā)調(diào)理劑分開的間隔基(s)。可以將多個(gè)拷貝的毛發(fā)結(jié)合肽與單個(gè)間隔基偶聯(lián)。此外，可以通過間隔基將多個(gè)拷貝的肽連接在一起，并且通過間隔基與毛發(fā)調(diào)理劑偶聯(lián)。在該實(shí)施方案中，基于肽的毛發(fā)調(diào)理劑是三嵌段組合物，其由抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽、間隔基和毛發(fā)調(diào)理劑組成，具有通式結(jié)構(gòu)[(HCPx-S)m]n-HCA,其中x的范圍是1-約10,x優(yōu)選是1,m的范圍是1-約100,優(yōu)選1-約10。當(dāng)毛發(fā)調(diào)理劑是分子種類，即非顆粒調(diào)理劑時(shí)，n的范圍是l-約100,優(yōu)選l-約10。當(dāng)毛發(fā)調(diào)理劑是顆粒時(shí)，n的范圍是l-約50,000,優(yōu)選1—約10,000。應(yīng)該理解，本文使用的HCP是通用命名，不意味著它表示單個(gè)抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽序列。當(dāng)上文使用的m、n或x大于l時(shí)，提供以下狀況是在本發(fā)明的范圍內(nèi)即一系列不同序列的毛發(fā)結(jié)合肽可以形成組合物的一部分。此外，S是通用命名，不意味著它表示單個(gè)間隔基。當(dāng)上文用于三嵌段組合物的m或n大于1時(shí)，提供以下狀況是在本發(fā)明的范圍內(nèi)即一系列不同序列的間隔基可以形成組合物的一部分。應(yīng)該理解，這些結(jié)構(gòu)不一定代表肽、有益試劑和任選間隔基之間的共價(jià)鍵。如下文所述，肽、有益試劑和任選間隔基之間的偶聯(lián)相互作用可以是共價(jià)的或非共價(jià)的。可以將本發(fā)明的基于肽的毛發(fā)調(diào)理劑用于毛發(fā)護(hù)理的產(chǎn)品中。還應(yīng)當(dāng)認(rèn)識(shí)到，抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽本身也能作為調(diào)理劑來處理毛發(fā)。在本文中將毛發(fā)護(hù)理產(chǎn)品組合物定義為用于處理毛發(fā)的組合物，包括但不限于調(diào)理劑、洗劑、氣霧劑、凝膠、摩絲和毛發(fā)著色劑。在一種實(shí)施方案中，毛發(fā)護(hù)理產(chǎn)品組合物是毛發(fā)調(diào)理產(chǎn)品。另一種實(shí)施方案中，毛發(fā)護(hù)理產(chǎn)品組合物是毛發(fā)著色產(chǎn)品。本發(fā)明的毛發(fā)護(hù)理產(chǎn)品組合物包含化妝上可接受的介質(zhì)中的有效量的基于肽的毛發(fā)調(diào)理劑或不同基于肽的毛發(fā)調(diào)理劑的混合物。在本文量定義為相對(duì)于組合物的,:重量，:換重量;十約0^01%至約10%:優(yōu)選約0.01%至約5%的比例。毛發(fā)護(hù)理產(chǎn)品組合物的化妝上可接受的介質(zhì)的成分是公知的，其例子記載在，P區(qū)ppe等，美國專利號(hào)6,280,747和Omura等，美國專利號(hào)6,139,851和Cannell等，美國專利號(hào)6,013,250。基于肽的毛發(fā)著色劑通過將抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽(HCP)與著色劑(C)相偶聯(lián)，形成本發(fā)明的基于肽的毛發(fā)著色劑?；陔牡拿l(fā)著色劑的抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽部分可以與毛發(fā)強(qiáng)結(jié)合，并且不被毛發(fā)調(diào)理劑的施用除去，從而能夠使著色劑在毛發(fā)上保持，產(chǎn)生長(zhǎng)期持續(xù)的毛發(fā)著色效果?？姑l(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽是通過上文描述的方法選擇的，并且包括但不限于SEQIDNOs:1-5和SEQIDNO:12示出的毛發(fā)結(jié)合肽序列。在本文中定義的著色劑是，能夠用于改變毛發(fā)的顏色的任何染料和色素等。在本發(fā)明的基于肽的毛發(fā)著色劑中，可以使用任何合適的著色劑。毛發(fā)著色劑在本領(lǐng)域是公知的(參見上述Green等的文獻(xiàn)，CFTAInternationalColorHandbook,2nded.，MicellePress,England(1992)和CosmeticHandbook,USFoodandDrugAdministration,FDA/IASBooklet(1992)),并且可以通過各種途徑購買到(例如Bayer,Pittsburgh,PA;Ciba-Geigy,Tarrytown，NY;ICI,Bridgewater,NJ;Sandoz，Vienna,奧地利；BASF,MountOlive，NJ;和Hoechst,Frankfurt,德國)。合適的毛發(fā)著色劑包括，但不限于染料，如4-羥丙基氨基-3-硝基苯酚、4-氨基-3-硝基苯酚、2-氨基-6-氯代_4-硝基苯酚、2-硝基-對(duì)苯二胺、N,N-羥乙基-2-硝基-苯二胺、4-硝基-口引p來、指曱花、HCBluel、HCBlue2、HCYellow4、HCRed3、HCRed5、DisperseViolet4、DisperseBlack9、HCBlue7、HCBlue12、HCYellow2、HCYellow6、HCYellow8、HCYellow12、HCBrown2、D&CYellow1、D&CYellow3、D&CBlue1、DisperseBlue3、Disperseviolet1、伊紅衍生物如D&CRedNo.21和鹵化熒光素衍生物如D&CRedNo.27、與D&CRedNo.21和D&COrangeNo.10組合的D&CRedOrangeNo.5;和色素，如D&CRedNo.36和D&COrangeNo.17、D&CRedNo.7、11、31和34的4丐色淀、D&CRedNo.12的鋇色淀、D&CRedNo.13的鍶色淀、FD&CYellowNo.5、FD&CYellowNo.6、D&CRedNo.27、D&CRedNo.21和FD&CBlueNo.1的鋁色淀、氧化鐵、錳紫(manganeseviolet)、氧化鉻、二氧化鈦、氧化鋅、氧化鋇、群青藍(lán)、檸檬酸鉍和炭黑顆粒。也可以將碳納米管(carbonnanotubes)用作染發(fā)的黑色素，如等人在共同未決和共同擁有的U.S.專利申請(qǐng)公開Nos.2005/0229334和2005/0229335中的描述，在此引入這兩篇文獻(xiàn)作為參考。本發(fā)明優(yōu)選的染料和色素包括D&CYellow1和3、HCYellow6和8、D&CBlue1、HCBluel、HCBrown2、HCRed5、2—^肖基只t苯二胺、N,N-輕乙基-2-硝基-苯二胺、二氧化鈦、4-硝基-p引咮、氧化鐵、炭黑和碳納米管。金屬和半導(dǎo)體納米顆粒也可以用作毛發(fā)著色劑，因?yàn)樗鼈兙哂袕?qiáng)發(fā)光作用(Vic等，美國專利申請(qǐng)公開號(hào)2004/0010864)。金屬納米顆粒包括，但不限于金、銀、柏、鈀、銥、銠、鋨、鐵、銅、鈷的顆粒和由上述金屬組成的合金。在本文中將"合金"定義為兩種或多種金屬的均一混合物。"半導(dǎo)體納米顆粒"包括，但不限于硒化鎘、^琉化鎘、石克化銀、硫化鎘、氧化鋅、疏化鋅、硒化鋅、碌u化鉛、砷化鎵、^圭、氧化錫、氧化鐵和磷化銦的顆粒。使用合適的有機(jī)包衣或單層，可以使納米顆粒穩(wěn)定并具備水溶性。如本文所使用的，單層-保護(hù)的納米顆粒是一類穩(wěn)定化的納米顆粒。制備穩(wěn)定化的、水溶的金屬和半導(dǎo)體納米顆粒的方法是本領(lǐng)域眾所周知的，且記載在在此引作參考的Huang等，共同未決的美國專利申請(qǐng)公開No.2004/0115345。納米顆粒的顏色取決于顆粒尺寸。因此，通過控制納米顆粒的尺寸，可以獲得不同的顏色。例如，ZnS-包衣的CdSe納米顆粒在粒度為2到6nm內(nèi)時(shí)，其顏色覆蓋整個(gè)可見光光譜。更具體地，CdSe納米顆粒核心尺寸分別為2.3、4.2、4.8和5.5nm時(shí)，其發(fā)射光的波長(zhǎng)分別集中為485、565、590和625nm。使用上述Huang等人(美國專利申請(qǐng)公開No.2004/0115345)的尺寸分級(jí)方法，可以從較寬尺寸分布的納米顆粒中，獲得不同尺寸的水溶的納米顆粒。該方法包含在存在電解質(zhì)的情況下，有調(diào)節(jié)地向納米顆粒溶液中加入易溶于水的有機(jī)溶劑。易溶于水的有機(jī)溶劑所加入的量越大，所得到的納米顆粒沉淀的尺寸就越小。金屬的和半導(dǎo)體納米顆粒也可以用作膨脹試劑，如上所述。另外，可以將附著、吸附或吸收了染料的有機(jī)和無機(jī)納米顆粒用作毛發(fā)著色劑。例如，毛發(fā)著色劑可以是有色的聚合物納米顆粒。示例性的聚合物納米顆粒包括但不限于，包含聚苯乙烯、聚曱基丙烯酸甲酯、聚乙烯基曱苯、苯乙烯/丁二烯共聚物和膠乳的微球。為了用于本發(fā)明，微球具有約10納米至約2微米的直徑。通過將任意的合適的染料(例如上述的那些)偶聯(lián)到微球上，可以使微球著色。可以將染料偶聯(lián)到微球的表面上，或吸附到多孔微球的孔結(jié)構(gòu)內(nèi)?？梢詮腂angLaboratories(Fishers,IN)等公司得到合適的微球，包括未染色和染色微球，其被官能化，以實(shí)現(xiàn)共價(jià)結(jié)合。偶聯(lián)到著色劑上，可以制備本發(fā)明的基于肽的毛發(fā)著色劑:、可以使用1述任意的偶聯(lián)方法。可能需要在著色劑上引入反應(yīng)基團(tuán)，如羧酸、醇、胺、醛或異氰酸酯基，以偶聯(lián)毛發(fā)結(jié)合肽。可以使用本領(lǐng)域^^知的常規(guī)化學(xué)，如氧化、還原和光氣化，實(shí)現(xiàn)上述修飾。例如，可以-使用硝酸、過氧化物如過氧化氫、或無機(jī)起始物如過硫酸銨，氧化炭黑顆粒的表面，產(chǎn)生官能團(tuán)。優(yōu)選地，使用Carrasco-Marin等描述的方法(J.Chem,Soc.,FaradayTrans.93:2211-2215(1997))用過硫酸銨氧化炭黑表面。使用無機(jī)起始物，如2，2'-偶氮二(2-曱基丙酰胺)-二鹽酸化物，可以在炭黑表面引入氨基官能團(tuán)。無機(jī)色素和納米顆粒也可以通過類似的方法進(jìn)行衍生化，以引入羧酸或氨基功能團(tuán)。還可能需要將多個(gè)抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽與著色劑偶聯(lián)，以增強(qiáng)基于肽的毛發(fā)著色劑和毛發(fā)之間的相互作用?？梢允褂枚鄠€(gè)拷貝的相同毛發(fā)結(jié)合肽，或不同毛發(fā)結(jié)合肽的組合。例如，可以使用如上文所述的抗毛發(fā)調(diào)理劑和抗洗發(fā)液的組合的毛發(fā)結(jié)合肽。在大色素顆粒的情況下，可以在色素上偶聯(lián)大量的毛發(fā)結(jié)合肽，即至多約5,000個(gè)?？梢詫⑿×棵l(fā)結(jié)合肽偶聯(lián)到較小的染料分子上，即至多約100個(gè)。此外，如上文所述，多個(gè)毛發(fā)結(jié)合肽序列可以連接在一起，并且附著于著色劑。因此，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，基于肽的毛發(fā)著色劑是二嵌段組合物，其由抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽(HCP)和著色劑(C)組成，通式結(jié)構(gòu)為(HCPm)n-C,其中m的范圍為1-約100，優(yōu)選1-約10。當(dāng)著色劑是分子種類，如染料時(shí)，n的范圍是l-約IOO，優(yōu)選1-約10。當(dāng)著色劑是顆粒，如色素或納米顆粒時(shí)，n的范圍是1-約50，000,優(yōu)選1-約10,000。在另一實(shí)施方案中，基于肽的毛發(fā)著色劑含有上文所述的將抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽與毛發(fā)著色劑分開的間隔基(s)。可以將多個(gè)拷貝的抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽與單個(gè)間隔基偶聯(lián)。此外，可以通過間隔基將多個(gè)拷貝的肽連接在一起，并且通過間隔基與著色劑偶聯(lián)。在該實(shí)施方案中，基于肽的毛發(fā)著色劑是三嵌段組合物，其由抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽、間隔基和著色劑組成，具有通式結(jié)構(gòu)[(HCPx-s:u]n-c，其中x的范圍是l-約10，x優(yōu)選是l,m的范圍是l-約IOO,優(yōu)選l-約10。當(dāng)著色劑是分子種類如染料時(shí)，n的范圍是1-約100,優(yōu)選1-約10。當(dāng)著色劑是顆粒，如色素或納米顆粒時(shí)，n的范圍是1-約50,000，優(yōu)選1—約10,000。應(yīng)該理解，本文使用的HCP是通用命名，不意味著它表示單個(gè)抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽序列。當(dāng)上文使用的m、n或x大于l時(shí)，提供以下狀況是在本發(fā)明的范圍內(nèi)即一系列不同序列的毛發(fā)結(jié)合肽可以形成組合物的一部分。此外，S是通用命名，不意p未著它表示單個(gè)間隔基。當(dāng)上文用于三嵌段組合物的m或n大于1時(shí)，提供以下狀況是在本發(fā)明的范圍內(nèi)即一系列不同序列的間隔基可以形成組合物的一部分。應(yīng)該理解，這些結(jié)構(gòu)不一定代表肽、有益試劑和任選間隔基之間的共價(jià)鍵。如下文所述，肽、有益試劑和任選間隔基之間的偶聯(lián)相互作用可以是共價(jià)的或非共價(jià)的。可以將本發(fā)明的基于肽的毛發(fā)著色劑用于染發(fā)的毛發(fā)著色產(chǎn)品中。本文定義的毛發(fā)著色產(chǎn)品組合物定義為用于對(duì)毛發(fā)進(jìn)行著色、染色或漂白的組合物，其中包含化妝上可接受的介質(zhì)中的有效量的基于肽的毛發(fā)著色劑或不同基于肽的毛發(fā)著色劑的混合物。在本文中將用于毛發(fā)著色產(chǎn)品組合物中的基于肽的毛發(fā)著色劑的有效量定義為相對(duì)于組合物的總重量，按重量計(jì)約0.001%至約20%的比例。用于毛發(fā)著色產(chǎn)品組合物的化妝上可接受的介質(zhì)的成分記載在Dias等，美國專利號(hào)6,398,821和Deutz等，美國專利號(hào)6,129,770，上述文獻(xiàn)在此引作參考。例如，毛發(fā)著色產(chǎn)品組合物可以包含螯合劑、穩(wěn)定劑、增稠劑、緩沖液、載體、表面活性劑、溶劑、抗氧化劑、聚合物和調(diào)理劑。調(diào)理劑可以包括本發(fā)明的基于肽的毛發(fā)調(diào)理劑和抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽，其按重量計(jì)占毛發(fā)著色組合物總重量的約0.01%至約10%,優(yōu)選約0.01%至約5%。本發(fā)明的基于肽的毛發(fā)著色劑還可以作為著色劑用于化妝組合物中，其中化妝組合物是施用到睫毛或眉毛上的，包括但不限于，睫毛膏和眉筆。它們可以是包含化妝上可接受介質(zhì)的無水化妝產(chǎn)品，該介質(zhì)所包含的脂肪物質(zhì)按重量計(jì)通常占組合物總重量的約10%至約90%,其中脂相包含至少一種液體、固體或半固體脂肪物質(zhì)，如上所述。脂肪物質(zhì)包括但不限于，油、蠟、樹膠和所謂的糊狀脂肪物質(zhì)?；蛘撸缟纤?，這些組合物可以是穩(wěn)定化的分散系形式，如油包水或水包油乳劑。在這些組合物中，基于肽的毛發(fā)著色劑的比例通常是按重量計(jì)占組合物總重量的約0.001%至約20%。處理毛發(fā)的方法在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了用本發(fā)明的基于肽的調(diào)理劑和著色劑處理毛發(fā)的方法。更具體地，本發(fā)明還包含如下在毛發(fā)上形成基于肽的調(diào)理劑的保護(hù)膜的方法將上述包含有效量的基于肽的毛發(fā)調(diào)理劑的組合物施用到毛發(fā)上，使之形成保護(hù)膜?？梢酝ㄟ^各種方法，包括但不限于，噴霧、刷涂和用手涂抹，將本發(fā)明的組合物施用到毛發(fā)上。使基于肽的調(diào)理劑組合物與毛發(fā)接觸足以形成保護(hù)膜的時(shí)間，優(yōu)選至少約0.1到60分鐘。本發(fā)明還提供了如下使毛發(fā)著色的方法通過上述的方法，將包含有效量基于肽的毛發(fā)著色劑的毛發(fā)著色組合物施用到毛發(fā)上。使毛發(fā)著色組合物與毛發(fā)接觸足以使毛發(fā)著色的時(shí)間，優(yōu)選約5到約50分鐘，然后將毛發(fā)著色組合物從毛發(fā)上洗掉。本發(fā)明還提供了如下對(duì)眉毛和睫毛進(jìn)行著色的方法通過上述的方法，將包含有效量基于肽的毛發(fā)著色劑的化妝組合物施用到眉毛和睫毛上。在下面的實(shí)施例中對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，這些實(shí)施例是本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案，僅用作實(shí)例。根據(jù)上述描述和這些實(shí)施例，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠確定本發(fā)明的基本特征，在不脫離本發(fā)明精神和范圍內(nèi)，能夠?qū)Ρ景l(fā)明作出各種改變和修改，以滿足各種應(yīng)用和需要。使用的縮寫的含義如下"min"表示分鐘，"sec"表示秒，"h，，表示小時(shí)，>L"表示微升，"mL"表示毫升，"L"表示升，"nm"表示納米，"mm"表示毫米，"cm"表示厘米，"jam"表示樣么米，"mM，，表示毫摩爾濃度，"M，，表示摩爾濃度，"mmol"表示毫摩爾，"pmole"表示微摩爾，"g，，表示克，"pg，，表示微克，"mg"表示亳克，"pfu，，表示噬斑形成單位，"BSA，，表示牛血清白蛋白，"ELISA，，表示酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法，"A"表示吸光度，"A45Q"表示在4S0nm波長(zhǎng)測(cè)得的吸光度，"TBS"表示Tris-緩沖鹽水，"TBST-X"表示包含Tween20的Tris緩沖鹽水，其中"X"是Tween20的重量百分比，"SEM，，表示平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤，"MALDI"表示基質(zhì)輔助的激光解吸電離，"NMR"表示核磁共振分光檢定法。一般方法實(shí)施例中所使用的標(biāo)準(zhǔn)重組DNA技術(shù)和分子克隆技術(shù)是本領(lǐng)域中7〉知的，JU己載在，Sambrook,J.,Fritsh,E.F,和Maniatis,T.，MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY1989;T丄Silhavy，M丄.Bennan，和L.V/.Enquist，實(shí)施例Experimentsw池GeneFusions,ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarbor,N.Y.，1984;和Ausubel,F.M.等，CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenePublishingAssoc.和Wiley-Interscience，N.Y.，1987。適用于細(xì)菌培養(yǎng)物的維持和生長(zhǎng)的材料和方法也是本領(lǐng)域中公知的。適用于下面實(shí)施例的技術(shù)參見ManualofMethodsforGeneralBacteriology,PhillippGerhardt,R.G.E.Murray,RalphN.Costilow,EugeneW.Nester,WillisA.Wood,NoelR,Kriey和G.BriggsPhillips,eds.,AmericanSocietyforMicrobiology,Washington,DC.，1994,或者ThomasD.Brock,Biotechnology:ATextbookofIndustrialMicrobiology,SecondEdition,Si腿erAssociates,Inc.,Sunderland,MA，1989。除非另有說明，所有的試劑和用于生長(zhǎng)和維持細(xì)菌細(xì)胞的材料均購自AldrichChemicals(Milwaukee,Wl)、BDDiagnosticSystems(Sparks，MD)、LifeTechnologies(Rockville，MD)、或SigmaChemicalCompany(St.Louis,MO)。噬菌體展示肽文庫以下實(shí)施例使用3種噬菌體展示肽文庫。Ph.D.-12TM噬菌體展示肽文庫購自NewEnglandBioLabs(Beverly,MA)。該試劑盒是基于隨機(jī)肽12聚體的組合文庫，所述隨機(jī)肽融合到噬菌體M13的一個(gè)較小的外殼蛋白(pIII)上。所展示的肽在pIII的N-末端表達(dá)，因此在切除信號(hào)肽后，外殼蛋白的首位殘基即是所展示的肽的第一位殘基。Ph.D.-12文庫分別由大約2.7x109個(gè)序列組成。用Kay等人4結(jié)述的方法(CombinatorialChemistry&HighThroughputScreening,Vol.8:545-551(2005))制備兩個(gè)噬菌體展示肽文庫，其中一個(gè)含有15聚體隨機(jī)肽序列，另一個(gè)含有20聚體隨機(jī)肽序列。該方法是Sidhu等人報(bào)道的方法(MethodsinEnzymology328:333-363(2000))的改進(jìn)，其中用大腸桿菌CJ236抹(dut—ung_)制備含有尿苷的單鏈?zhǔn)删NA(U-ssDNA)。這種DNA用作采用寡核苷酸合成第二鏈的模板，不僅作為第二鏈的引物，也用于插入編碼隨機(jī)氨基酸的序列。在完成第二鏈合成后，雙鏈DNA即轉(zhuǎn)化到野生型菌抹中。由宿主細(xì)胞降解任何U-ssDNA,由此僅僅留下重組鏈來產(chǎn)生噬菌體顆粒。這種方法可以用于制備M13外被蛋白的肽融合體或突變體。Kay等人的方法在基因m的起始處采用琥珀終止密碼子。將含有隨機(jī)化的DNA序列片段的寡核苷酸與單鏈?zhǔn)删w基因組退火，使得隨機(jī)化的區(qū)域與終止密碼子聯(lián)合。將ssDNA酶促轉(zhuǎn)化為共價(jià)封閉的、環(huán)狀dsDNA,隨后電穿孔到大腸桿菌的非阻抑菌林中。新合成的DNA鏈(負(fù)鏈)作為制備宿主細(xì)胞中的正鏈的模板，該正鏈用于轉(zhuǎn)錄/翻譯病毒基因，并且包裝到病毒顆粒中。得到的15聚體和20聚體文庫的滴度分別是4.1x10^pfu/mL和4.2x1012pfu/mL。每個(gè)實(shí)驗(yàn)中采用含有大約4x101Qpfu來自感興趣的文庫的噬菌體的樣品。首先將噬菌體文庫的樣品進(jìn)行預(yù)處理，以除去皮膚和塑料結(jié)合克隆。為了除去皮膚結(jié)合克隆，在獨(dú)特的以豬皮為底的96孔裝置上將噬菌體文庫的樣品在室溫下與豬皮的樣品一起溫育1小時(shí)，所述裝置是通過以下方法制備的在MinifoldIDot-BlotSystem(Schleicher&Schuell,Inc.，Keene,NH)的上層96孔區(qū)的下面加上一層Pamfilm,然后在該P(yáng)arafiln^層的上面加入一層無毛的豬皮，然后將該裝置繃緊。豬皮購自地區(qū)超市，并且在-80。C下儲(chǔ)存。使用前，將豬皮放置在去離子水中解凍，然后用紙巾將其吸千。用90%的異丙醇擦拭豬皮表面，然后用去離子水沖洗。暴露于豬皮后，將噬菌體樣品轉(zhuǎn)移到聚苯乙烯、6孔細(xì)胞培養(yǎng)簇(CorningInc.,Acton,MA;目錄號(hào)3526),在室溫下溫育l小時(shí)，以除去塑料結(jié)合克隆。實(shí)施例1-3抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽的鑒別這些實(shí)施例的目的是證明從三個(gè)隨機(jī)噬菌體展示肽文庫鑒別抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽的方法。采用的毛發(fā)才羊品是乂人InternationalHairImportersandProducts(Bellerose,NY)獲得的中等棕色人頭發(fā)的6英寸(bcm)長(zhǎng)的片段。將頭發(fā)在室溫下置于90%的異丙醇中30分鐘，然后用去離子水洗滌5次，每次10分鐘。室溫下將頭發(fā)晾干過夜。將頭發(fā)切成lcm長(zhǎng)，將10-20段頭發(fā)放置在微量離心管中。將按照上文預(yù)處理以除去皮膚和塑料結(jié)合克隆的噬菌體樣品加入含有毛發(fā)樣品的試管中，將混合物在室溫下溫育1小時(shí)。除去噬菌體溶液，將毛發(fā)樣品在未稀釋的毛發(fā)調(diào)理劑(DoveExtraVolumeConditioner;Unilever,購自地區(qū)超市)中室溫下溫育5分鐘。然后用TBST-0.5%緩沖液將毛發(fā)洗滌6次。洗滌后，將毛發(fā)轉(zhuǎn)移到含有由溶于0.2Mglycine-HC1,pH2.2的1mg/mLBSA組成的洗脫緩沖液中，將毛發(fā)溫育10分鐘。然后，在試管中加入由1MTris-HC1，pH9.2組成的中和緩沖液。洗脫噬菌體，通過加入新的宿主細(xì)胞(大腸桿菌ER2338)擴(kuò)增洗脫或仍然與皮膚結(jié)合的噬菌體。使擴(kuò)增和分離的噬菌體與新鮮的毛發(fā)樣品接觸，對(duì)于每個(gè)文庫，將生物淘選程序再重復(fù)2次。第3輪生物淘選后，選擇隨機(jī)單噬菌體克隆，按照制造商的說明書(NewEnglandBiolabs)制備單噬斑裂解物，用QIAprepSpinM13試劑盒(Qiagen;Valencia,CA)純化單鏈?zhǔn)删w基因組DNA,用SEQIDNO:7示出的-96gill測(cè)序引物(5，-CCCTCATAGTTAGCGTAACG—3，)在DuPont測(cè)序裝置中進(jìn)行測(cè)序。展示的肽緊接基因III的信號(hào)肽之后。三輪生物淘選后從三個(gè)噬菌體文庫鑒定的抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合噬菌體肽的氨基酸序列示于表1。表1抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合噬菌體肽的氨基酸序列<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>頻率代表在95個(gè)隨機(jī)測(cè)序的克隆中出現(xiàn)的相同序列的數(shù)目。實(shí)施例4抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽的特異性本實(shí)施例的目的是采用ELISA程序證明實(shí)施例1-3中鑒定的抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽的特異性。將毛發(fā)結(jié)合肽HCP.l(SEQIDNO:l)和HCP.6(SEQIDNO:4)與對(duì)照肽，即一種無關(guān)的皮膚結(jié)合肽Skin1(Huangetal.,美國專利申請(qǐng)公開No.2005/0050656)—起用于本實(shí)施例，所述對(duì)照肽如SEQIDNO:8所示。用添加的賴氨酸殘基合成所有的肽，所述賴氨酸殘基通過SynPep(Dublin,CA)在C末端用熒光標(biāo)記5-羧基熒光素-氨基己基amidite(5-FAM)衍生化。衍生化的毛發(fā)結(jié)合肽HCP.l(5-FAM)和HCP.6(5-FAM)的序列分別示于SEQIDNOs:9和10。衍生化的皮膚結(jié)合肽對(duì)照Skinl(5-FAM)的序列示于SEQIDNO:l1。對(duì)于該測(cè)定，在MinifoldIDot-BlotSystem(Schleicher&Schuell,Inc.,Keene,NH)的上層96孔板的下面加上一層Parafilm,在該P(yáng)arafiln^層的頂部加上毛發(fā)或一層無毛的豬皮，然后將該裝置繃緊，從而形成了獨(dú)特的以毛發(fā)或豬皮為底的96孔裝置。首先，通過將樣品在室溫溫育1小時(shí)，用SuperBlock封閉緩沖液(Tris-緩沖的；PierceBiotechnology,Rockford，IL)封閉96孔裝置中的毛發(fā)或皮膚樣品。然后，用洗滌緩沖液(TBST-0.5%)將毛發(fā)或皮膚樣品洗滌6次。將l.OmL結(jié)合緩沖液(含1mg/mLBSA的TBST-0.5%)中濃度為20的熒光素標(biāo)記的肽加入每個(gè)孔，37。C下溫育30分鐘。用TBST-0.5%將毛發(fā)或皮膚樣品洗滌6次，然后，每孔加入1.0mL抗熒光素/小鼠IgG(MolecularProbes,Inc.,Eugene,OR)溶液(在封閉緩沖液中1:1000稀釋)。將樣品在室溫下溫育1小時(shí)，然后用洗滌緩沖液洗滌6次。然后，每孔加入1.0mL抗小鼠IgG-HRP綴合物(PierceBiotechnology)溶液(在封閉緩沖液中1:1000稀釋)，將樣品在室溫下溫育1小時(shí)。用洗滌緩沖液洗滌樣品6次，每孔加入300|iLTMB底物(PierceBiotechnology)。將樣品在室溫下溫育10分鐘，然后從每孔取出100樣品，加入新的微量滴定板的孔中。然后，每孔加入100laL終止溶液(2M石克酸溶液)，在450nm的波長(zhǎng)測(cè)量每個(gè)樣品的吸光度。結(jié)果在表2中表示為重復(fù)的獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值土標(biāo)準(zhǔn)誤(SEM),每個(gè)實(shí)驗(yàn)由至少三次重復(fù)組成。從表中的數(shù)據(jù)可以看出，抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽HCP.l和HCP.6結(jié)合于毛發(fā)，但不結(jié)合于皮膚，證明了它們對(duì)毛發(fā)的結(jié)合特異性。如所預(yù)期的，用作陽性皮膚結(jié)合對(duì)照的Skin1肽具有高皮膚結(jié)合特異性，但具有低毛發(fā)結(jié)合活性。表2抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽的特異性的ELISA測(cè)定結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>實(shí)施例5抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽與毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)中的毛發(fā)的結(jié)合基質(zhì)中的毛發(fā)結(jié)合。采用了實(shí)施例4中描述的相同ELISA法，不同的是將毛發(fā)樣品集中成束，而不是在96孔裝置中制成孔。為了制備毛發(fā)樣品束，將100片lcm長(zhǎng)的毛發(fā)集中在一起，用窄膠帶(3M，St.Paul,MN)在一端粘住。按照實(shí)施例1-3的描述制備毛發(fā)，鋪板到平底板(QiagenScience,Germantown,MD;目錄號(hào))中。分另'J用高剪切混合器(Silverson,ModelL4R7A;SilversonMachines,EastLongmeadow,MA)單獨(dú)地將實(shí)施例4描述的HCP.l(5-FAM)和HCP.6(5-FAM)毛發(fā)結(jié)合肽與未稀釋的毛發(fā)調(diào)理劑(DoveExtraVolumeConditioner;Unilever)混合6分鐘，得到最終20jaM的肽濃度。按照實(shí)施例4的描述封閉毛發(fā)樣品，然后37。C下在肽-調(diào)理劑混合物中溫育30分鐘。然后按照實(shí)施例4的描述洗滌和處理毛發(fā)樣品。在加入抗小鼠IgG-HRP綴合物之后，進(jìn)行最后的洗滌步驟，然后將毛發(fā)束轉(zhuǎn)移到新試管中，加入TMB底物。將毛發(fā)束在室溫下溫育10分鐘，然后從每個(gè)試管取出100iiL樣品，加入微量滴定板的孔中。然后，將100pL終止溶液(2M好u酸溶液)加入每個(gè)孔，在450nm的波長(zhǎng)測(cè)量每個(gè)樣品的吸光度。用相同的程序確定HCP.l(5-FAM)和HCP.6(5-FAM)毛發(fā)結(jié)合肽與緩沖液中的毛發(fā)的結(jié)合。此外，用相同的程序進(jìn)行對(duì)照，但是在毛發(fā)調(diào)理劑和緩沖液中都不存在任何毛發(fā)結(jié)合肽。結(jié)果在表3中表示為重復(fù)的獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值士標(biāo)準(zhǔn)誤(SEM)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)由至少三次重復(fù)組成。結(jié)果證明，與緩沖液相比，毛發(fā)調(diào)理劑基，有顯著差異，表3抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽與毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)中的毛發(fā)的結(jié)合的ELISA測(cè)定結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>液的。對(duì)于這些實(shí)驗(yàn)，在毛發(fā)接觸毛發(fā)結(jié)合肽(HCP.l或HCP.6)后，用含有30%洗發(fā)液(PantenePro—V,SheerVolume,Proctor&Gamble,Cincinnati,OH)的溶液洗滌毛發(fā)，用上文描述的ELISA法確定結(jié)合活性，并且與用緩沖液洗滌獲得的結(jié)果進(jìn)行比較。洗發(fā)液洗滌導(dǎo)致結(jié)合活性幾乎完全喪失，表明抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽不是抗洗發(fā)液的。實(shí)施例6抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽在毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)中的穩(wěn)定性本實(shí)施例的目的是證明抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽在毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)中的穩(wěn)定性。按照實(shí)施例5中的描述，制備毛發(fā)結(jié)合肽HCP.l和HCP.6在毛發(fā)調(diào)理劑中的各自的混合物。為了比較，使用了毛發(fā)結(jié)合肽在緩沖液中的溶液。所有溶液都保存在室溫下，采用實(shí)施例5描述的ELISA程序確定肽的結(jié)合活性，其中在不同的時(shí)間釆集樣品。也用緩沖液和不含毛發(fā)結(jié)合肽的毛發(fā)調(diào)理劑作為對(duì)照。用肽HCP.l和HCP.6獲得的結(jié)果分別示于圖l和2。圖中的結(jié)果表明，在毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)中21天后，兩種抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽的毛發(fā)結(jié)合活性沒有顯著降低。實(shí)施例7(預(yù)示性)制備基于肽的毛發(fā)調(diào)理劑本預(yù)示性實(shí)施例的目的是描述如何制備基于肽的毛發(fā)調(diào)理劑，其中使用異雙功能交聯(lián)劑3-馬來酰亞胺基丙酸N-羥基琥珀酰亞胺酯將結(jié)合了半胱氨酸的HCP.l肽(如SEQIDNO:12所示)與辛胺偶聯(lián)。通過加入11.6mg辛胺(購自Aldrich)到0.3mL的DMF中進(jìn)行稀釋。將稀釋后的溶液加入到置于5mL圓底燒瓶中的攪拌著的下列溶液中，該溶液含有溶解在0.2mL的DMF中的25mg的3-馬來酰亞胺基丙酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(Aldrish)和5mg的二異丙基乙胺(Aldrish)。反應(yīng)混合物立即變渾濁，然后在幾分鐘之后變澄清。將溶液繼續(xù)攪拌4小時(shí)。然后將溶液在高度真空下干燥。使用柱層析純化產(chǎn)物，即辛胺偶聯(lián)的馬來酰亞胺基丙酸酯，所使用的柱子是Silicagel60(EMDChemicals,以前叫{故Science,Gibbstown，NJ)，洗脫液是DMF/醚。將約12mg的上述產(chǎn)物置于5mL的圓底燒瓶中，加入85mg結(jié)合了半胱氨酸的HCP.l肽(SynPep,Dublin,CA，示于SEQIDNO:12)和0.5mL0.1MpH7.2的磷酸鹽緩沖液。結(jié)合了半胱氨酸的HCP.l肽具有結(jié)合于毛發(fā)結(jié)合HCP.l肽(SEQIDNO:1)的C末端的半胱氨酸。室溫下將混合物攪拌6小時(shí)。通過用水/乙醚萃取，純化終產(chǎn)物。用液相色語-質(zhì)譜法(LC-MS)分析產(chǎn)物。實(shí)施例8(預(yù)示性)制備基于肽的毛發(fā)調(diào)理劑本預(yù)示性實(shí)施例的目的是描述如何制備基于肽的毛發(fā)調(diào)理劑，其中將毛發(fā)調(diào)理劑-毛發(fā)結(jié)合肽HCP.l偶聯(lián)于十八烷基鏈。將異氰酸十八烷酯(70mg，Aldrich,CASNo.l12-96-9)溶解于5mLN,N，-二甲基曱酰胺(DMF)中，加入在C末端添加了半胱氨酸殘基的未受保護(hù)的HCP.l肽(購自SynPep，示于SEQIDN0:12)的溶液中，該肽(150mg)溶解于10mLDMF中。加入三乙胺(30mg)，用于催化反應(yīng)。室溫下將溶液攪拌120小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，得到米色晶體粉末產(chǎn)物。通過液相色譜和ALDI質(zhì)譜法分析產(chǎn)物。實(shí)施例9(預(yù)示性)制備基于肽的毛發(fā)著色劑本實(shí)施例的目的是，通過使抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽HCP.l(SEQIDNO:l)共價(jià)結(jié)合到DisperseOrange3染料上，制備基于肽的毛發(fā)著色劑。首先用異氰酸酯官能化染料，然后與HCP.l肽反應(yīng)。DisperseOrange3的官能化在干燥箱中,將14.25gDisperseOrange3(Aldrich)懸浮于在加料漏斗中的400mL無水THF中。將200mL無水曱苯裝入含有磁力攪棒的2-升、四頸反應(yīng)燒瓶(CorningInc.,Coming,NY;批號(hào)1533—12)。給燒瓶配備冷的指形冷凝管(CorningInc.,批號(hào)1209-04)和具有加料漏斗的第二個(gè)冷的指形冷凝管，并置于通風(fēng)柜中的油浴上。在室溫，將光氣(25.4mL)濃縮在反應(yīng)燒瓶中。添加完光氣后，使油浴的溫度升高到80。C，經(jīng)2小時(shí)，以100mL的增量，將DisperseOrange3懸浮液逐滴加入反應(yīng)燒瓶，同時(shí)監(jiān)視反應(yīng)溫度和洗滌器排出的氣體。在加料過程中，將溫度維持在64。C或低于64°C。完成加料后，將反應(yīng)物在64r加熱l小時(shí)，然后攪拌過夜，冷卻至室溫。將反應(yīng)溶劑真空蒸餾至千燥，同時(shí)將內(nèi)容物維持在4(TC或低于40°C,并將真空另外維持1小時(shí)。將反應(yīng)燒瓶轉(zhuǎn)移至干燥箱；收集產(chǎn)物，過夜干燥。通過質(zhì)子NMR,證實(shí)目標(biāo)產(chǎn)物。將異氰酸酯官能化的染料與HCP.l毛發(fā)結(jié)合肽相偶聯(lián)將如上所述制備的異氰酸酯官能化的DisperseOrange3[(2-(4-異氰酸基苯基)-1-(4-硝基苯基)二氮烯)(16mg)溶于5mLDMF中，并加入含有75mg未保護(hù)的HCP.l肽(SEQIDNO:l)的溶液中，所述HCP.l肽購自SynPep,且溶解在10mLDMF中。加入三乙胺(30mg)以催化反應(yīng)。在室溫?cái)嚢枞芤?4小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生暗紅棕色粉末產(chǎn)物。通過MALDI質(zhì)譜法分析產(chǎn)物，以證實(shí)加合物形成。實(shí)施例10(預(yù)示性)用基于肽的毛發(fā)著色劑對(duì)毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)中的毛發(fā)進(jìn)行染色本預(yù)示性實(shí)施例的目的是描述如何測(cè)試對(duì)天然白發(fā)樣品進(jìn)行染色，其中使用毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)中的基于肽的毛發(fā)著色劑。通過混合按照實(shí)施例9的描述制備的基于肽的毛發(fā)著色劑與毛發(fā)調(diào)理劑，制備毛發(fā)著色組合物。用高剪切混合器將基于肽的毛發(fā)著色劑(100mg)與10mLDoveExtraVolume調(diào)理劑混合在一起。將一束天然白發(fā)(約100—1000才艮頭發(fā))(購自InternationalHairImportersandProductsInc)攪拌下浸入基于肽的毛發(fā)著色劑-調(diào)理劑混合物中10分鐘。然后通過與10mL50%PanteneProV洗發(fā)液混合5分鐘，清洗毛發(fā)，然后用蒸餾水沖洗，除去洗發(fā)液。在室溫下干燥毛發(fā)，用蒸餾水沖洗至少5次。毛發(fā)的顏色將是橙色。權(quán)利要求1.鑒定抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽的方法，包括a)提供DNA聯(lián)合的肽的組合文庫；b)使(a)的文庫與毛發(fā)樣品接觸，其中毛發(fā)與DNA聯(lián)合的肽復(fù)合，形成包含DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物的反應(yīng)溶液；c)從反應(yīng)溶液分離(b)的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物；d)使(c)的分離的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物與毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)接觸，形成調(diào)理溶液，其中毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)的濃度是完全強(qiáng)度濃度的至少約10％；e)從調(diào)理溶液分離(d)的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物；f)擴(kuò)增編碼(e)的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物中的肽部分的DNA；和g)對(duì)(f)的擴(kuò)增的編碼抗調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽的DNA進(jìn)行測(cè)序，其中鑒定出抗調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽。2.權(quán)利要求l的方法，其中在步驟(e)之后i)使DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物中的肽與洗脫劑接觸，從而從毛發(fā)洗脫一部分DNA聯(lián)合的肽，而一部分DNA聯(lián)合的肽保持復(fù)合；并且ii)使(ii)的洗脫或復(fù)合的DNA聯(lián)合的肽進(jìn)行步驟(f)和(g)。3.權(quán)利要求1或2的方法，其中編碼肽的DNA是通過選自下組的過程擴(kuò)增的a)通過聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增包含肽編碼區(qū)的DNA;和b)用包含編碼肽的DNA的噬菌體感染宿主細(xì)胞，并且使所述宿主細(xì)胞在合適的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。4.權(quán)利要求1或2的方法，其中由步驟(f)的擴(kuò)增的DNA編碼的肽與新鮮的毛發(fā)樣品接觸，并且重復(fù)步驟(b)-(f)—次或多次。5.權(quán)利要求l的方法，其中重復(fù)步驟(d)—次或多次。6.權(quán)利要求l的方法，其中在毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)中提供DNA聯(lián)合的肽的組合文庫，并且與毛發(fā)樣品接觸，以形成包含DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物的反應(yīng)溶液，其中毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)的濃度是完全強(qiáng)度濃度的至少約10%。7.權(quán)利要求l的方法，其中在毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)中提供DNA聯(lián)合的肽的組合文庫，并且與毛發(fā)樣品接觸，以形成包含DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物的反應(yīng)溶液，其中毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)的濃度是完全強(qiáng)度濃度的至少約10%，并且其中任選省略步驟(d)和(e)。8.權(quán)利要求1的方法，其中通過選自噬菌體展示、細(xì)菌展示和酵母展示的方法制備DNA聯(lián)合的肽的組合文庫。9.權(quán)利要求l的方法，其中在接觸毛發(fā)樣品之前或同時(shí)，使DNA聯(lián)合的肽的組合文庫任選與非靶接觸，以除去結(jié)合于非靶的肽。10.權(quán)利要求l的方法，其中毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)的濃度是完全強(qiáng)度濃度的至少約20%。11.權(quán)利要求l的方法，其中毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)的濃度是完全強(qiáng)度濃度的至少約50%。12.權(quán)利要求l的方法，其中毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)的濃度是完全強(qiáng)度濃度的至少約75%。13.權(quán)利要求l的方法，其中毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)是未稀釋的。14.權(quán)利要求2的方法，其中洗脫劑選自酸、堿、鹽溶液、水、乙二醇、二嚙烷、疏氰酸鹽、胍和脲。15.a)提供DNA聯(lián)合的肽的組合文庫；b)使(a)的文庫與毛發(fā)樣品接觸，其中毛發(fā)與DNA聯(lián)合的肽復(fù)合，形成包含DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物的反應(yīng)溶液；c)從反應(yīng)溶液分離(b)的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物；d)使(c)的分離的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物與毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)接觸，形成調(diào)理溶液，其中毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)的濃度是完全強(qiáng)度濃度的至少約10%;e)從調(diào)理溶液分離(d)的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物；f)擴(kuò)增編碼(e)的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物中的肽部分的DNA;和其中鑒定出抗調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽。''''16.抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽，選自SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNQ:5和SEQIDNO:12。17.二嵌段的、基于肽的毛發(fā)有益試劑，其具有通式結(jié)構(gòu)(HCPnOn-BA,其中a)HCP是抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽；b)BA是有益試劑；c)m的范圍是l-約100;并且d)n的范圍是1-約50,000。18.三嵌段的、基于肽的毛發(fā)有益試劑，其具有通式結(jié)構(gòu)[(HCPx-S)m]n-BA,其中a)HCP是抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽；b)BA是有益試劑；c)S是間隔基；d)x的范圍是l-約10;e)m的范圍是1-約100;并且f)n的范圍是1-約50,000。19.權(quán)利要求17的二嵌段的、基于肽的有益試劑，其中所述有益試劑是毛發(fā)調(diào)理劑。20.權(quán)利要求18的三嵌段的、基于肽的有益試劑，其中所述有益試劑是毛發(fā)調(diào)理劑。21.權(quán)利要求17的二嵌段的、基于肽的有益試劑，其中所述有益試劑是著色劑。22.權(quán)利要求18的三嵌段的、基于肽的有益試劑，其中所述有益試劑是著色劑。23.權(quán)利要求17-22的任一項(xiàng)的基于肽的有益試劑，其中所述抗a)提供DNA聯(lián)合的肽的組合文庫；b)使(a)的文庫與毛發(fā)樣品接觸，其中毛發(fā)與DNA聯(lián)合的肽復(fù)合，形成包含DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物的反應(yīng)溶液；c)從反應(yīng)溶液分離(b)的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物；d)使(c)的分離的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物與毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)接觸，形成調(diào)理溶液，其中毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)的濃度是完全強(qiáng)度濃度的至少約10%;e)從調(diào)理溶液分離(d)的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物；f)擴(kuò)增編碼(e)的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物中的肽部分的DNA;和g)對(duì)(f)的擴(kuò)增的編碼抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽的DNA進(jìn)行測(cè)序，其中鑒定出抗調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽。24.權(quán)利要求17-22的任一項(xiàng)的基于肽的有益試劑，其中抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽的長(zhǎng)度是約7個(gè)氨基酸-約25個(gè)氨基酸。25.權(quán)利要求17-22的任一項(xiàng)的基于肽的有益試劑，其中抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽的長(zhǎng)度是約12個(gè)氨基酸-約20個(gè)氨基酸。26.權(quán)利要求17-22的任一項(xiàng)的基于肽的有益試劑，其中抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽進(jìn)一步包含至少一個(gè)位于肽的至少一個(gè)末端的半胱氨酸殘基，所述末端選自a)N末端；和b)C末端。27.權(quán)利要求17-22的任一項(xiàng)的基于肽的有益試劑，其中抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽進(jìn)一步包含至少一個(gè)位于肽的至少一個(gè)末端的賴氨酸殘基，所述末端選自a)N末端；和b)C末端。28.權(quán)利要求17-22的任一項(xiàng)的基于肽的有益試劑，其中所述抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽具有選自SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5和SEQIDNO:12的氨基酸序列。29.權(quán)利要求19或20的基于肽的有益試劑，其中所述毛發(fā)調(diào)理劑選自辛胺、硬脂胺、二十二醇、乙烯基封端的硅氧烷、乙烯基封端的硅酮、乙烯基封端的曱基乙烯基硅氧烷、乙烯基封端的曱基乙烯基硅酮、羥基封端的硅氧烷、羥基封端的硅酮、氨基修飾的硅酮衍生物、[(氨乙基)氨基]丙基羥基二甲基硅氧烷、[(氨乙基)氨基]丙基羥基二曱基硅酮、a-十三烷基-co-羥基-聚(氧基-1,2-乙烷二基)、氨基封端的二曱基硅酮和納米顆粒。30.權(quán)利要求21或22的基于肽的有益試劑，其中所述著色劑選自D&CYellow1、D&CYellow3、HCYellow6、HCYellow8、D&CBlue1、HCBluel、HCBrown2、HCRed5、2-硝基對(duì)苯二胺、N,N-羥乙基-2-硝基-苯二胺、4-硝基-吲咮、氧化鐵、二氧化鈦、炭黑、碳納米管、金屬納米顆粒、半導(dǎo)體納米顆粒和有色微球。31.權(quán)利要求30的基于肽的有益試劑，其中所述有色微球包含選自下組的材料聚苯乙烯、聚曱基丙烯酸曱酯、聚乙烯基曱苯、苯乙烯/丁二烯共聚物和膠乳，并且微球具有約10納米至約2微米的直徑。32.權(quán)利要求18、20或22的基于肽的有益試劑，其中所述間隔基選自乙醇胺、乙二醇、鏈長(zhǎng)為6個(gè)碳原子的聚乙烯、具有3-6個(gè)重復(fù)單元的聚乙二醇、苯氧乙醇、丙醇酰胺、丁二醇、丁二醇酰胺、丙基苯基、乙基烷基鏈、丙基烷基鏈、己基烷基鏈、留醇基烷基鏈、十六烷基烷基鏈和椋櫚?；榛?。33.權(quán)利要求18、20或22的基于肽的有益試劑，其中所述間隔基是包含氨基酸的肽，所述氨基酸選自脯氨酸、賴氨酸、甘氨酸、丙氨酸、絲氨酸及其混合物。34.權(quán)利要求18、20或22的基于肽的有益試劑，其中所述間隔基是包含氨基酸序列的肽，所述氨基酸序列選自SEQIDNO:6、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14和SEQIDNO:15。35.毛發(fā)護(hù)理產(chǎn)品組合物，包含有效量的權(quán)利要求17或18的基于肽的有益試劑。36.毛發(fā)著色產(chǎn)品組合物，包含有效量的權(quán)利要求21或22的基于肽的有益試劑。37.化妝產(chǎn)品組合物，包含有效量的權(quán)利要求21或22的基于肽的有益試齊'J。38.毛發(fā)著色產(chǎn)品組合物，包含有效量的權(quán)利要求19或20的基于肽的有益試劑。39.毛發(fā)調(diào)理產(chǎn)品組合物，包含有效量的權(quán)利要求19或20的基于肽的有益試劑。40.在毛發(fā)上形成基于肽的調(diào)理劑的保護(hù)層的方法，包括將權(quán)利要求39的組合物施用于毛發(fā)，使得形成所述保護(hù)層。41.使毛發(fā)著色的方法，包括將權(quán)利要求38的組合物施用于毛發(fā)，持續(xù)足夠?qū)е旅l(fā)著色的時(shí)間。42.使眉毛或睫毛著色的方法，包括將權(quán)利要求37的組合物施用于眉毛或睫毛。43.使毛發(fā)、眉毛或睫毛著色的方法，包括以下步驟a)提供包含選自下組的毛發(fā)著色劑的毛發(fā)著色組合物i)(HCPm)n-C;和<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>其中1)HCP是抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽；2)C是著色劑；3)n的范圍是l-約50,000;4)S是間隔基；5)m的范圍是l-約100;并且6)x的范圍是l-約10;并且其中抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽是通過包含以下步驟的方法選擇的A)提供DNA聯(lián)合的肽的組合文庫；B)使(A)的文庫與毛發(fā)樣品接觸，其中毛發(fā)與DNA聯(lián)合的肽復(fù)合，形成包含DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物的反應(yīng)溶液；C)從反應(yīng)溶液分離(B)的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物；D)使(C)的分離的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物與毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)接觸，形成調(diào)理溶液，其中毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)的濃度是完全強(qiáng)度濃度的至少約10%;E)從調(diào)理溶液分離(D)的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物；F)擴(kuò)增編碼(E)的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物中的肽部分的DNA;和G)對(duì)(F)的擴(kuò)增的編碼抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽的DNA進(jìn)行測(cè)序，其中鑒定出抗調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽；和b)將(a)的毛發(fā)著色組合物施用于毛發(fā)、眉毛或睫毛，持續(xù)足以使毛發(fā)著色劑結(jié)合于毛發(fā)、眉毛或睫毛的一段時(shí)間。44.在毛發(fā)上形成基于肽的調(diào)理劑的保護(hù)層的方法，包括以下步驟a)提供包含選自下組的毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)護(hù)理組合物i)(HCPm)n-HCA;和<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>其中1)HCP是抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽；2)HCA是毛發(fā)調(diào)理劑；3)n的范圍是l-約50,000;4)S是間隔基；5)m的范圍是l-約100;并且6)x的范圍是l-約10;并且其中抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽是通過包含以下步驟的方法選擇的A)提供DNA聯(lián)合的肽的組合文庫；B)使(A)的文庫與毛發(fā)樣品接觸，其中毛發(fā)與DNA聯(lián)合的肽復(fù)合，形成包含DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物的反應(yīng)溶液；C)從反應(yīng)溶液分離(B)的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物；D)使(C)的分離的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物與毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)接觸，形成調(diào)理溶液，其中毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)的濃度是完全強(qiáng)度濃度的至少約10%;E)從調(diào)理溶液分離(D)的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物；F)擴(kuò)增編碼(E)的DNA聯(lián)合的肽-毛發(fā)復(fù)合物中的肽部分的DNA;和G)對(duì)(F)的擴(kuò)增的編碼抗調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽的DNA進(jìn)行測(cè)序，其中鑒定出抗調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽；和b)將(a)的毛發(fā)護(hù)理組合物施用于毛發(fā)，使得形成所述保護(hù)層。全文摘要描述了一種鑒定抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽的方法。這種抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽與毛發(fā)調(diào)理劑基質(zhì)中的毛發(fā)強(qiáng)結(jié)合并且在其中穩(wěn)定。描述了基于抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽的基于肽的有益試劑，如毛發(fā)調(diào)理劑和著色劑?；陔牡拿l(fā)調(diào)理劑和毛發(fā)著色劑由直接或通過任選的間隔基與毛發(fā)調(diào)理劑或著色劑偶聯(lián)的抗毛發(fā)調(diào)理劑的毛發(fā)結(jié)合肽組成。還描述了包含這些基于肽的毛發(fā)調(diào)理劑和著色劑的毛發(fā)護(hù)理和毛發(fā)著色產(chǎn)品組合物。文檔編號(hào)G01N33/53GK101563608SQ200680014955公開日2009年10月21日申請(qǐng)日期2006年2月28日優(yōu)先權(quán)日2005年3月1日發(fā)明者H·王,J·P·奧布賴恩,Y·吳申請(qǐng)人:納幕爾杜邦公司