一種環(huán)瓜氨酸肽抗體酶聯(lián)免疫檢測試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型涉及一種環(huán)瓜氨酸肽抗體酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，屬于診斷試劑領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)是一種病因未明的慢性、以炎性滑膜炎為主的系統(tǒng)性疾病。其特征是手、足小關(guān)節(jié)的多關(guān)節(jié)、對稱性、侵襲性關(guān)節(jié)炎癥，經(jīng)常伴有關(guān)節(jié)外器官受累及血清類風(fēng)濕因子陽性，可以導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形及功能喪失。RA的發(fā)病可能與遺傳、感染、性激素等有關(guān)。RA關(guān)節(jié)炎的病理主要有滑膜襯里細(xì)胞增生、間質(zhì)大量炎性細(xì)胞浸潤，以及微血管的新生、血管翳的形成及軟骨和骨組織的破壞等。
[0003]抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(CCP)是環(huán)狀聚絲蛋白的多肽片段，是以IgG型為主的抗體，對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)具有很好的敏感性和特異性，且抗CCP抗體陽性的RA病人骨破壞較抗CCP抗體陰性者嚴(yán)重。通過檢測患者樣本中抗環(huán)瓜胺酸肽抗體，能診斷出約80%的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人，而在非患有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的病人中則很少呈陽性反應(yīng)，專一性達(dá)至98%。另外，這些抗體在早期病患時，甚至比發(fā)病前更早亦能測得。
[0004]目前，實(shí)驗(yàn)室檢測方法分為膠乳凝集法、散射比濁法和ELISA法等。目前國內(nèi)主要采用乳膠凝集法，此法操作簡便，不需要特殊儀器，試劑成本較低，但只能檢測IgM類抗體，且靈敏度及特異性較差，易受多種因素影響，如乳膠顆粒的大小、濃度、實(shí)驗(yàn)溫度、稀釋液的Ph值，致敏時γ球蛋白含量等，重復(fù)性較差，且只能進(jìn)行半定量結(jié)果分析，手工操作費(fèi)時費(fèi)力，對臨床的測定有一定的局限。國外主要采用比濁法、酶聯(lián)免疫法等。酶聯(lián)免疫法所采用的的是抗原抗體反應(yīng)，較比濁法特異性較高，重復(fù)性好，試劑穩(wěn)定，敏感性好，不需特殊儀器設(shè)備，還可對各抗體型別進(jìn)行檢測，目前是臨床檢測的優(yōu)選方法。
【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0005]本實(shí)用新型要解決的技術(shù)問題是提供一種環(huán)瓜氨酸肽抗體酶聯(lián)免疫檢測試劑盒。
[0006]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本實(shí)用新型采用以下設(shè)計(jì)方案:
[0007]一種環(huán)瓜氨酸肽抗體酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，由盒體及試劑固定件、包被環(huán)瓜氨酸肽抗原的酶標(biāo)板、封板膜、標(biāo)準(zhǔn)品、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品、底物液Α、底物液B、酶標(biāo)抗原工作液、樣品稀釋液、洗滌液和終止液組成。
[0008]所述試劑固定件為紙質(zhì)固定件或高分子材質(zhì)固定件，例如塑料泡沫固定件。固定件上設(shè)有試劑固定位，例如孔洞或凹槽，用于固定各種試劑，便于運(yùn)輸和貯藏。
[0009]所述包被環(huán)瓜氨酸肽抗原的酶標(biāo)板為96孔酶聯(lián)免疫試劑板，優(yōu)選可拆96孔酶聯(lián)免疫試劑板。酶標(biāo)板采用可拆96孔酶聯(lián)免疫試劑板作為固相載體，在微孔板條上預(yù)包被環(huán)瓜氨酸肽抗原制成檢測板。96孔可拆酶標(biāo)板置于鋁箔袋內(nèi)。可拆酶標(biāo)板是由外框及卡在內(nèi)框上的12條酶標(biāo)反應(yīng)微孔條組成，每個可拆微孔條有8個反應(yīng)孔，每孔預(yù)先包被環(huán)瓜氨酸肽抗原。
[0010]所述封板膜為有數(shù)位標(biāo)記的塑料硬膜，封板膜大小與酶標(biāo)板一致。
[0011]所述環(huán)瓜氨酸肽抗原為根據(jù)絲聚蛋白(Filaggrin)的cDNA序列合成一條含瓜氨酸的環(huán)肽或市售商品化的環(huán)瓜氨酸肽。
[0012]所述標(biāo)準(zhǔn)品為6個不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，可依濃度梯度置于固定件相應(yīng)位置。
[0013]所述陽性質(zhì)控品是確診含有抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的患者血清；
[0014]所述陰性質(zhì)控品是臨床非內(nèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎正常人血清；
[0015]所述底物液A是含有1.2ml冰醋酸、0.37g過氧化氫脲的混合溶液；
[0016]所述底物液B是四甲基聯(lián)苯胺(TMB)工作液；
[0017]所述酶標(biāo)抗原工作液是酶稀釋液稀釋過的已標(biāo)記辣根過氧化物酶(HRP酶)的環(huán)瓜氨酸肽；
[0018]所述樣品稀釋液是含有4.7g/L酪蛋白、Proclin3000.34ml/L、肽牛血清100ml/L的磷酸鹽緩沖溶液(PBS溶液);
[0019]所述洗滌液是PBST溶液；
[0020]所述終止液是3M濃硫酸稀釋液。
[0021 ] 所述標(biāo)準(zhǔn)品、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品、底物液A、底物液B、酶標(biāo)抗原工作液、樣品稀釋液、洗滌液和終止液可以用不同顏色的容器進(jìn)行區(qū)分，以便于使用者操作。例如，標(biāo)準(zhǔn)品置于藍(lán)色瓶蓋玻璃瓶內(nèi)，陽性質(zhì)控品置于紅色瓶蓋玻璃瓶內(nèi)，陰性質(zhì)控品置于黃色瓶蓋玻璃瓶內(nèi)，底物A液置于白色瓶蓋的白塑料瓶內(nèi)，底物B液置于棕色瓶蓋的蓋棕色瓶內(nèi)，酶標(biāo)抗原工作液置于紅蓋白塑料瓶內(nèi)，樣品稀釋液置于紅蓋白色瓶內(nèi)，洗滌液置于藍(lán)蓋白色瓶內(nèi)，終止液置于藍(lán)蓋白色瓶內(nèi)。
[0022]每個試劑盒中的預(yù)裝試劑可以進(jìn)行96樣本量測定(包括標(biāo)準(zhǔn)品及陰陽性對照品)，即可一次滿板大樣本量檢測，也可以通過可拆卸微孔板條分批多次檢測。鋁箔袋一端膠封一端拉鏈?zhǔn)胶峡冢梢员ＷC未使用板條的存放。檢測時，待檢血清中目標(biāo)抗體與包被抗原發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，加入標(biāo)記有辣根過氧化物酶(HRP酶)的抗原形成結(jié)合物，用TMB (3，3’，5，5’ -四甲基聯(lián)苯胺)底物顯色，其待檢血清中抗體含量與底物顯色吸光度成線性關(guān)系，與標(biāo)準(zhǔn)曲線方程式代入計(jì)算即可得出血清中所測抗體含量。
[0023]經(jīng)樣本實(shí)驗(yàn)表明，本試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R2值，大于等于0.990，靈敏度0.5U/ml，批內(nèi)差小于10%。本試劑盒操作無須特殊實(shí)驗(yàn)儀器，僅需酶標(biāo)儀、移液器、振蕩器等實(shí)驗(yàn)室基本儀器，操作簡便快捷。
[0024]本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn)是:環(huán)瓜氨酸肽抗體酶聯(lián)免疫檢測試劑盒靈敏度高、檢測快速可量化，穩(wěn)定性好，并可同時對多個樣本進(jìn)行檢測，減少了檢測樣本所需要的時間；該試劑盒操作簡便，不需要特殊實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備，可廣泛應(yīng)用于環(huán)瓜氨酸肽抗體的實(shí)驗(yàn)室檢測，準(zhǔn)確檢測血清樣本中環(huán)瓜氨酸肽抗體的含量。
[0025]以下通過附圖和【具體實(shí)施方式】詳細(xì)說明本實(shí)用新型的技術(shù)方案，并不以此限定本實(shí)用新型的實(shí)施范圍，凡依照本實(shí)用新型披露內(nèi)容所進(jìn)行的本領(lǐng)域等同替換，均屬于本實(shí)用新型的保護(hù)范圍。
【附圖說明】
[0026]圖1為本實(shí)用新型的結(jié)構(gòu)示意圖
[0027]圖2為