Egfr結(jié)合肽的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供特異地且高親和性地結(jié)合于EGFR的物質(zhì)以及含有其的藥物。該物質(zhì)為一種氨基酸數(shù)為12至50的肽，其至少具有下式(1)、(2)或(3)表示的氨基酸序列。X1-His-X2-X3-Asp-X4-X5-X6-X7-X8-Trp-His(1)(式(1)中，X1表示Trp或Phe，X2表示Leu、Met、Ile或Val，X3表示Ser、Ala、Thr、Gly、Asn、Asp、Glu、Arg或Lys，X4表示Leu、Met、Ile、Val、Ala、Phe、Tyr、Trp、His或Cys，X5表示Trp、Phe或Tyr，X6表示Gln、Asn、Asp、Glu、Ala、Ser、Thr、Leu、Met、Lys或Arg，X7表示Asn、Gln、Asp、Glu、Ser、Thr、Ala、Gly、Lys或Arg，X8表示Ala、Gly、Ser、Thr、Asn、Val或者Cys。)Phe-His-Asp-Trp-X11-Pro-X12-X13-X14-X15-X16-X17(2)(式(2)中、X11表示Leu、Met、Ile、Val、Ala、Phe、Tyr、Trp、His或Cys，X12表示Glu、Asp、Gln、Asn、Ala、Ser、Thr、Lys、Arg或His，X3表示Val、Ala、Leu、Ile、Met、Thr、Cys或Asn，X14表示Ser、Ala、Thr、Gly、Asn、Asp、Glu、Arg或Lys，X5表示Pro、Val、Ile、Lys、Ala、Met、Trp、Tyr、Ser、Thr、Cys或Phe，X16表示Pro、Val、Ile、Lys、Ala、Met、Trp、Tyr、Ser、Thr、Cys或Phe，X17表示Asp、Glu、Asn、Gln、Ala、Ser、Thr、Lys、Arg或His。)Leu-His-X21-Ser-X22-Trp-Met-X23-X24-X25-X26-X27(3)(式(3)中、X21表示Gln、Asn、Asp、Glu、Ala、Ser、Thr、Leu、Met、Lys或Arg，X22表示Glu、Asp、Gln、Asn、Ala、Ser、Thr、Lys、Arg或His，X23表示Tyr、Phe、Trp、His、Leu、Met、Ile、Val、Cys或Ala，X24表示Val、Ala、Leu、Ile、Met、Thr、Cys或Asn，X25表示Asp、Glu、Asn、Gln、Ala、Ser、Thr、Lys、Arg或His，X26表示Ile、Val、Leu、Met、Ala、Phe、Tyr、Trp或Gly，X27表示His、Tyr、Phe、Lys、Arg、Leu、Met或Ala)。
【專利說(shuō)明】EGFR結(jié)合肽

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及表皮生長(zhǎng)因子受體（Epidermal Growth Factor Receptor :EGFR)特異 性結(jié)合肽以及含有其的藥物。

【背景技術(shù)】
[0002] EGFR為識(shí)別調(diào)控細(xì)胞增殖和生長(zhǎng)的表皮生長(zhǎng)因子，進(jìn)行信號(hào)傳導(dǎo)的受體，其在細(xì) 胞增殖、分化、移動(dòng)等細(xì)胞功能中具有重要的作用。EGFR的信號(hào)傳導(dǎo)促進(jìn)細(xì)胞增殖，抑制細(xì) 胞凋亡，增加腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)性和血管新生。EGFR是腫瘤特異性的，在包括非小細(xì)胞肺癌 (NSCLC)、乳癌、頭頸部癌（SCCHN)、胃癌、大腸癌、食道癌、前列腺癌、膀胱癌、腎癌、脾臟、卵 巢癌的人上皮組織腫瘤中廣泛的范圍內(nèi)觀察到其強(qiáng)烈的表達(dá)。
[0003] 根據(jù)這些發(fā)現(xiàn)，EGFR被定位為癌癥治療中對(duì)于經(jīng)由藥物和基因受體的遞送系統(tǒng)的 重要靶標(biāo)。但是，作為EGFR配體的EGF具有很強(qiáng)的有絲分裂和血管新生能力，因此，尋找 EGF樣的基質(zhì)是重要的。具有如容易擴(kuò)散的優(yōu)點(diǎn)和低免疫原性，并具有容易地并入基因遞送 載體能力的配體肽，已被研究作為用于選擇性遞送放射性核素、細(xì)胞因子、化學(xué)藥物、抗腫 瘤治療基因的目的物。最近已經(jīng)報(bào)道了利用噬菌體文庫(kù)篩選得到的肽配體的研究結(jié)果（非 專利文獻(xiàn)1)。
[0004] 另一方面，受體蛋白EGFR家族成員是癌細(xì)胞最好地表征的靶標(biāo)之一。包括已知為 HERl、ErbBl 的 EGFR、已知為 ErbB2 或 neu 的 HER2、HER3 (ErbB3)、HER4 (ErbB4)的 EGF 家族 在細(xì)胞存活、分化、增殖中是重要的。特別是，EGFR信號(hào)增加與致癌性轉(zhuǎn)化相關(guān)，導(dǎo)致誘導(dǎo) 自發(fā)的細(xì)胞存活、腫瘤侵襲、血管新生、轉(zhuǎn)移。EGFR的表達(dá)和強(qiáng)烈表達(dá)報(bào)道在各種腫瘤類型 中，已知在三分之一的上皮癌中EGFR表達(dá)水平高，EGFR的強(qiáng)烈表達(dá)常常與預(yù)后不良相關(guān)。 此外，由于已知EGFR與癌癥的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)，因此已經(jīng)進(jìn)行了以EGFR為靶標(biāo)的化療藥物 的開(kāi)發(fā)。EGFR抑制劑之一的西妥昔單抗（MC-C225,愛(ài)必妥）是FDA批準(zhǔn)作為轉(zhuǎn)移性大腸 癌的治療藥物的單克隆抗體。西妥昔單抗是嵌合的人-鼠抗體，其以EGFR的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域 作為靶標(biāo)。西妥昔單抗比作為天然配體的EGF或TGF-a以更強(qiáng)的親和力結(jié)合EGFR，競(jìng)爭(zhēng)性 抑制EGFR的結(jié)合，抑制活性（非專利文獻(xiàn)2、專利文獻(xiàn)1)。作為其他的人類抗EGFR單克隆 抗體，有帕尼單抗（維克替比（注冊(cè)商標(biāo)））（專利文獻(xiàn)2)。
[0005] 現(xiàn)有技術(shù)
[0006] 專利文獻(xiàn)
[0007] 專利文獻(xiàn)1 :國(guó)際公開(kāi)第1996/040210號(hào)小冊(cè)子
[0008] 專利文獻(xiàn)2 :專利第4808412號(hào)公報(bào) [0009] 非專利文獻(xiàn)
[0010] 非專利文獻(xiàn) I :The FASEB Journal, 2005 ; 19, 1978-1985
[0011] 非專利文獻(xiàn) 2 :Journal of the National Cancer Institute, 2005 ; 97(22)，1663-1670


【發(fā)明內(nèi)容】

[0012] 發(fā)明所要解決的問(wèn)題
[0013] 然而，已經(jīng)報(bào)道的EGFR肽配體對(duì)EGFR的結(jié)合力不足，并且抗EGFR的抗體分子量 大，存在施用方法有限，產(chǎn)生副作用等問(wèn)題。
[0014] 因此，本發(fā)明的課題是提供特異地且高親和性地結(jié)合于EGFR的新物質(zhì)以及含有 其的藥物。
[0015] 解決問(wèn)題的方法
[0016] 因此，本發(fā)明人使用噬菌體展示方法搜索展示特異地結(jié)合于EGFR的肽的噬菌體 時(shí)，發(fā)現(xiàn)了具有特定氨基酸序列的肽特異地結(jié)合于重組人EGFR蛋白，和使用該肽或其標(biāo)記 體能夠特異地檢測(cè)出表達(dá)EGFR的細(xì)胞或組織。此外，由于該肽或其標(biāo)記體競(jìng)爭(zhēng)性地抑制 EGFR與EGF的結(jié)合，所以發(fā)現(xiàn)該肽或其標(biāo)記體作為癌癥治療劑是有用的，從而完成了本發(fā) 明。
[0017] SP，本發(fā)明提供了以下（1)至（19)。
[0018] (1) 一種氨基酸數(shù)為12至50的肽，其至少具有下式（1)、（2)或（3)表示的氨基 酸序列。
[0019] X1-His-X2-X3-Asp-X 4-X5-X6-X7-X8-Trp-His(I)
[0020] (式（1)中，X1 表示 Trp 或者 Phe，
[0021] X2 表示 Leu、Met、Ile 或者 Val，
[0022] X3 表不 Ser、Ala、Thr、Gly、Asn、Asp、Glu、Arg 或者 Lys，
[0023] X4 表不 Leu、Met、lie、Val、Ala、Phe、Tyr、Trp、His 或者 Cys，
[0024] X5 表示 Trp、Phe 或者 Tyr，
[0025] X6 表不 Gin、Asn、Asp、Glu、Ala、Ser、Thr、Leu、Met、Lys 或者 Arg，
[0026] X7 表不 Asn、Gin、Asp、Glu、Ser、Thr、Ala、Gly、Lys 或者 Arg，
[0027] X8 表不 Ala、Gly、Ser、Thr、Asn、Val 或者 Cys)
[0028] Phe-His-Asp-Trp-Xll-Pro-X12-X 13-X14-X15-X16-X17 (2)
[0029] (式（2)中、X11 表不 Leu、Met、lie、Val、Ala、Phe、Tyr、Trp、His 或 Cys，
[0030] X12 表不 Glu、Asp、Gin、Asn、Ala、Ser、Thr、Lys、Arg 或 His，
[0031] X13 表不 Val、Ala、Leu、lie、Met、Thr、Cys 或 Asn，
[0032] X14 表不 Ser、Ala、Thr、Gly、Asn、Asp、Glu、Arg 或 Lys，
[0033] X15 表不 Pro、Val、lie、Lys、Ala、Met、Trp、Tyr、Ser、Thr、Cys 或 Phe，
[0034] X16 表不 Pro、Val、lie、Lys、Ala、Met、Trp、Tyr、Ser、Thr、Cys 或 Phe，
[0035] X17 表不 Asp、Glu、Asn、Gin、Ala、Ser、Thr、Lys、Arg 或 His〇)
[0036] Leu-His-X21-Ser-X22-Trp-Met-X 23-X24-X25-X26-X27 (S)
[0037] (式（3)中、X21 表不 Gin、Asn、Asp、Glu、Ala、Ser、Thr、Leu、Met、Lys 或 Arg，
[0038] X22 表不 Glu、Asp、Gin、Asn、Ala、Ser、Thr、Lys、Arg 或 His，
[0039] X23 表不 Tyr、Phe、Trp、His、Leu、Met、lie、Val、Cys 或 Ala，
[0040] X24 表不 Val、Ala、Leu、lie、Met、Thr、Cys 或 Asn，
[0041] X25 表不 Asp、Glu、Asn、Gin、Ala、Ser、Thr、Lys、Arg 或 His，
[0042] X26 表不 lie、Val、Leu、Met、Ala、Phe、Tyr、Trp 或 Gly，
[0043] X27 表不 His、Tyr、Phe、Lys、Arg、Leu、Met 或 Ala。）
[0044] (2)根據(jù)⑴所述的肽，其中，式⑴中X1是Trp或Phe，X2是Leu、Met、lie或 Val，X3 是 Ser、Ala、Thr、Gly 或 Asn，X4 是 Leu、Met、lie、Val 或 Ala，X5 是 Trp 或 Phe，X6 是 Gin、Asn 或 Ala，X7 是 Asn、Gln 或 Ala，X8 是 Ala、Gly、Ser 或 Thr。
[0045] (3)根據(jù)（1)所述的肽，其中，式（1)中 X1 是 Trp 或 Phe，X2 是 Leu、Met、Ile 或 Val， X3 是 Ser 或 Ala，X4 是 Leu 或 Ala，X5 是 Trp，X6 是 Gln 或 Ala，X7 是 Asn 或 Ala，X8 是 Ala。
[0046] (4)根據(jù)⑴所述的肽，其中，式⑵中X11是Leu、Met、Ile、Val或Ala，X 12是Glu、 Asp、Gin、Asn 或 Ala，X13 是 Val、Ala、Leu 或 lie，X14 是 Ser、Ala、Thr、Gly 或 Asn，X15 是 Pro、Val、lie 或 Ala，X16 是 Pro、Val、lie 或 Ala，X17 是 Asp、Glu、Asn、Gln 或 Ala。
[0047] (5)根據(jù)⑴所述的肽，其中，式⑵中X11是Leu或Ala，X12是Glu或Ala，X 13是 Val 或 Ala，X14 是 Ser 或 Ala，X15 是 Pro 或 Ala，X16 是 Pro 或 Ala，X17 是 Asp 或 Ala。
[0048] (6)根據(jù)（1)所述的肽，其中，式（3)中X21是GlruAsn或△1 &，儼是6111、六8?、6111 或 Ala，X23 是 Tyr、Phe、Trp、His 或 Ala，Xm 是 Val、Ala、Leu 或 lie，X25 是 Asp、Glu、Asru Gln 或 Ala，X26 是 lie、Val、Leu、Met 或 Ala，X27 是 His、Tyr、Phe、Lys、Arg 或 Ala。
[0049] (7)根據(jù)⑴所述的肽，其中，式⑶中X21是Gln或Ala，X22是Glu或Ala，X 23是 Tyr 或 Ala，Xm 是 Val 或 Ala，X25 是 Asp 或 Ala，X26 是 Ile 或 Ala，X27 是 His 或 Ala。
[0050] (8)根據(jù)⑴至（7)任一項(xiàng)所述的肽，其中氨基酸數(shù)的上限是30。
[0051] (9)根據(jù)⑴至⑶任一項(xiàng)所述的肽，其具有EGFR結(jié)合性。
[0052] (10)含有根據(jù)⑴至（9)任一項(xiàng)所述的肽或其標(biāo)記體的藥物。
[0053] (11)含有根據(jù)（1)至（9)任一項(xiàng)所述的肽或其標(biāo)記體的癌細(xì)胞或癌組織檢測(cè)劑。
[0054] (12)含有根據(jù)（1)至（9)任一項(xiàng)所述的肽或其標(biāo)記體的癌癥診斷劑。
[0055] (13)含有根據(jù)（1)至（9)任一項(xiàng)所述的肽或其標(biāo)記體的癌癥治療劑。
[0056] (14)根據(jù)（1)至（9)任一項(xiàng)所述的肽或其標(biāo)記體，其用于檢測(cè)癌細(xì)胞或癌組織。
[0057] (15)根據(jù)（1)至（9)任一項(xiàng)所述的肽或其標(biāo)記體，其用于癌癥診斷或癌癥治療。
[0058] (16)根據(jù)（1)至（9)任一項(xiàng)所述的肽或其標(biāo)記體在制備癌細(xì)胞或癌組織檢測(cè)劑中 的用途。
[0059] (17)根據(jù)（1)至（9)任一項(xiàng)所述的肽或其標(biāo)記體在制備癌癥診斷劑或癌癥治療劑 中的用途。
[0060] (18) -種癌細(xì)胞或癌組織的檢測(cè)方法，其特征在于使用根據(jù)（1)至（9)任一項(xiàng)所 述的肽或其標(biāo)記體。
[0061] (19) 一種癌癥的診斷或治療方法，其特征在于使用根據(jù)（1)至（9)任一項(xiàng)所述的 肽或其標(biāo)記體。
[0062] 發(fā)明的效果
[0063] 由于本發(fā)明的肽具有對(duì)EGFR特異的和強(qiáng)的結(jié)合性，因此該肽或其標(biāo)記體作為表 達(dá)EGFR的細(xì)胞或組織，特別是各種癌細(xì)胞或癌組織的檢測(cè)劑，即癌癥的診斷劑是有用的。 另外，由于本發(fā)明的肽競(jìng)爭(zhēng)性地抑制EGFR與EGF的結(jié)合，因此其作為表達(dá)EGFR的癌癥治療 劑是有用的。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0064] 圖1顯示D12文庫(kù)中篩選（パ二 > 夕'' )實(shí)驗(yàn)的輸出滴度/輸入滴度比。
[0065] 圖2顯示C7C文庫(kù)中篩選實(shí)驗(yàn)的輸出滴度/輸入滴度比。
[0066] 圖3顯示經(jīng)3輪EGFR靶標(biāo)篩選回收的噬菌體展示的肽序列。
[0067] 圖4顯示1-1010、1-1012和1-1015噬菌體對(duì)固定的蛋白的結(jié)合試驗(yàn)結(jié)果。
[0068] 圖5顯示1-1010、1-1012和1-1015噬菌體對(duì)固定的蛋白的結(jié)合試驗(yàn)結(jié)果。
[0069] 圖6顯示1-1010噬菌體與肽P印055或肽P印018的競(jìng)爭(zhēng)試驗(yàn)的結(jié)果。
[0070] 圖7顯示1-1012噬菌體與肽P印056或肽P印018的競(jìng)爭(zhēng)試驗(yàn)的結(jié)果。
[0071] 圖8顯示1-1015噬菌體與肽P印057或肽P印018的競(jìng)爭(zhēng)試驗(yàn)的結(jié)果。
[0072] 圖9顯示丙氨酸取代的1-1010噬菌體展示的肽序列。
[0073] 圖10顯示丙氨酸取代的1-1012噬菌體展示的肽序列。
[0074] 圖11顯示丙氨酸取代的1-1015噬菌體展示的肽序列。
[0075] 圖12顯示丙氨酸取代的1-1010噬菌體對(duì)rhEGFR的結(jié)合試驗(yàn)結(jié)果。
[0076] 圖13顯示丙氨酸取代的1-1012噬菌體對(duì)rhEGFR的結(jié)合試驗(yàn)結(jié)果。
[0077] 圖14顯示丙氨酸取代的1-1015噬菌體對(duì)rhEGFR的結(jié)合試驗(yàn)結(jié)果。
[0078] 圖15顯示氨基酸取代的1-1010噬菌體展示的肽序列。
[0079] 圖16顯示一個(gè)氨基酸取代的1-1010噬菌體對(duì)rhEGFR的結(jié)合試驗(yàn)結(jié)果。
[0080] 圖17顯示兩個(gè)氨基酸取代的1-1001噬菌體對(duì)rhEGFR的結(jié)合試驗(yàn)結(jié)果。
[0081] 圖18顯示A-431細(xì)胞和MCF7細(xì)胞的EGFR表達(dá)水平（Western印跡）。
[0082] 圖19顯示1-1010噬菌體對(duì)A-431細(xì)胞的結(jié)合試驗(yàn)結(jié)果。
[0083] 圖20顯示P印055-F對(duì)A-431細(xì)胞的染色。
[0084] 圖21顯示P印032-F對(duì)A-431細(xì)胞的染色。
[0085] 圖22顯示p055-F對(duì)MCF7細(xì)胞的染色。
[0086] 圖23顯示P印032-F對(duì)MCF7細(xì)胞的染色。
[0087] 圖24顯示rhEGF與1-1010噬菌體的競(jìng)爭(zhēng)試驗(yàn)結(jié)果。

【具體實(shí)施方式】
[0088] 本發(fā)明的肽是至少具有以下式（1)、（2)或（3)表示的氨基酸序列的氨基酸數(shù)為 12-50的肽。
[0089] X1-Hi S-X2-X3-Asp-X4-X5-X 6-X7-X8-Trp-Hi s (1)
[0090] Phe-Hi S-Asp-Trp-Xll-Pro-X12-X13-X14-X 15-X16-X17 (2)
[0091] Leu-His-X21-Ser-X22-Trp-Met-X23-X 24-X25-X26-X27 (3)
[0092] 在上式（1)中，X1 表示 Trp 或 Phe。X2 表示 Leu、Met、Ile 或 Val。X3 表示 Ser、Ala、 Thr、Gly、Asn、Asp、Glu、Arg 或 Lys，優(yōu)選 Ser、Ala、Thr、Gly 或 Asn、更優(yōu)選 Ser 或 Ala。X4表不 Leu、Met、lie、Val、Ala、Phe、Tyr、Trp、His 或 Cys，優(yōu)選 Leu、Met、lie、Val 或 Ala，更 優(yōu)選Leu或Ala。X5表示Trp、Phe或Tyr，優(yōu)選Trp或Phe，更優(yōu)選Trp。X6表示Gln、Asn、 Asp、Glu、Ala、Ser、Thr、Leu、Met、Lys 或 Arg，優(yōu)選 Gin、Asn 或 Ala，更優(yōu)選 Gln 或 Ala。X7表不 Asn、Gin、Asp、Glu、Ser、Thr、Ala、Gly、Lys 或 Arg,優(yōu)選 Asn、Gln 或 Ala,更優(yōu)選 Asn 或 Ala。X8 表不 Ala、Gly、Ser、Thr、Asn、Val 或 Cys，優(yōu)選 Ala、Gly、Ser 或 Thr，更優(yōu)選 Ala。
[0093] 優(yōu)選，式（I)的肽中，X1 是 Trp 或 Phe、X2 是 Leu、Met、lie 或 Val、X3 是 Ser、Ala、 Thr、Gly 或 Asn、X4 是 Leu、Met、lie、Val 或 Ala、X5 是 Trp 或 Phe、X6 是 Gin、Asn 或 Ala、X7是 Asn、Gln 或 Ala、X8 是 Ala、Gly、Ser 或 ThiN氨基酸數(shù)是 12-50 的肽。
[0094] 并且，更優(yōu)選，在式（1)的肽中，X1是Trp或Phe、X2是Leu、Met、Ile或Val、X 3是 Ser 或 Ala、X4 是 Leu 或 Ala、X5 是 Trp、X6 是 Gln 或 Ala、X7 是 Asn 或 Ala、X8 是 Ala、氨基酸 數(shù)是12-50的肽。
[0095] 在上式（2)中，X11 表示 Leu、Met、lie、Val、Ala、Phe、Tyr、Trp、His 或 Cys，優(yōu)選 Leu、Met、lie、Val 或 Ala，更優(yōu)選 Leu 或 Ala。X12 表不 Glu、Asp、Gin、Asn、Ala、Ser、Thr、 Lys、Arg 或 His，優(yōu)選 Glu、Asp、Gin、Asn 或 Ala，更優(yōu)選 Glu 或 Ala。X13 表不 Val、Ala、Leu、 IIe、Met、Thr、Cys 或 Asn，優(yōu)選 Val、Ala、Leu 或 lie，更優(yōu)選 Val 或 Ala。X14 表不 Ser、Ala、 Thr、Gly、Asn、Asp、Glu、Arg 或 Lys，優(yōu)選 Ser、Ala、Thr、Gly 或 Asn，更優(yōu)選 Ser 或 Ala? X15表不 Pro、Val、lie、Lys、Ala、Met、Trp、Tyr、Ser、Thr、Cys 或 Phe，優(yōu)選 Pro、Val、Ile 或 Ala， 更優(yōu)選 Pro 或 Ala。X16 表不 Pro、Val、lie、Lys、Ala、Met、Trp、Tyr、Ser、Thr、Cys 或 Phe， 優(yōu)選 Pro、Val、lie 或 Ala，更優(yōu)選 Pro 或 Ala。X17 表不 Asp、Glu、Asn、Gin、Ala、Ser、Thr、 Lys、Arg 或 His，優(yōu)選 Asp、Glu、Asn、Gln 或 Ala，更優(yōu)選 Asp 或 Ala。
[0096] 優(yōu)選，在式（2)的肽中，X11 是 Leu、Met、lie、Val 或 Ala、X12 是 Glu、Asp、Gln、Asn 或 Ala、X13 是 Val、Ala、Leu 或 lie、X14 是 Ser、Ala、Thr、Gly 或 Asn、X15 是 Pro、Val、lie 或 Ala、X16 是 Pro、Val、lie 或 Ala、X17 是 Asp、Glu、Asn、Gln 或 Ala，氨基酸數(shù)為 12-50 的肽。
[0097] 更優(yōu)選，在式⑵的肽中，X11是Leu或Ala、X12是Glu或Ala、X 13是Val或Ala、X14是Ser或Ala、X15是Pro或Ala、X16是Pro或Ala、X17是Asp或Ala、氨基酸數(shù)為12-50的 肽。
[0098] 在上述式（3)中，X21 表不 Gin、Asn、Asp、Glu、Ala、Ser、Thr、Leu、Met、Lys 或 Arg， 優(yōu)選 Gin、Asn 或 Ala，更優(yōu)選 Gln 或 Ala。X22 表不 Glu、Asp、Gin、Asn、Ala、Ser、Thr、Lys、 Arg 或 His，優(yōu)選 Glu、Asp、Gln 或 Ala，更優(yōu)選 Glu 或 Ala。X23 表示 Tyr、Phe、Trp、His、Leu、 Met、lie、Val、Cys 或 Ala，優(yōu)選 Tyr、Phe、Trp、His 或 Ala，更優(yōu)選 Tyr 或 Ala。X24 表示 Val、 Ala、Leu、lie、Met、Thr、Cys 或 Asn，優(yōu)選 Val、Ala、Leu 或 lie，更優(yōu)選 Val 或 Ala。X25 表 不 Asp、Glu、Asn、Gin、Ala、Ser、Thr、Lys、Arg 或 His，優(yōu)選 Asp、Glu、Asn、Gln 或 Ala，更優(yōu) 選 Asp 或 Ala。X26 表不 lie、Val、Leu、Met、Ala、Phe、Tyr、Trp 或 Gly，優(yōu)選 lie、Val、Leu、 Met 或 Ala，更優(yōu)選 lie 或 Ala。X27 表不 His、Tyr、Phe、Lys、Arg、Leu、Met 或 Ala，優(yōu)選 His、 Tyr、Phe、Lys、Arg 或 Ala，更優(yōu)選 His 或 Ala。
[0099] 在式（3)的肽中，X21 是 Gin、Asn 或 Ala、X22 是 Glu、Asp、Gln 或 Ala、X23 是 Tyr、 Phe、Trp、His 或 Ala、X24 是 Val、Ala、Leu 或 lie、X25 是 Asp、Glu、Asn、Gln 或 Ala、X26 是 lie、Val、Leu、Met 或 Ala、X27 是 His、Tyr、Phe、Lys、Arg 或 Ala、氨基酸數(shù)為 12-50 的肽。
[0100] 更優(yōu)選，在式⑶的肽中，X21是Gln或Ala、X22是Glu或Ala、X 23是Tyr或Ala、X24是Val或Ala、X25是Asp或Ala、X26是Ile或Ala、X27是His或Ala、氨基酸數(shù)為12-50的 肽。
[0101] 并且，盡管本發(fā)明肽的氨基酸數(shù)是12-50,但優(yōu)選該氨基酸數(shù)的上限是40、更優(yōu)選 是30、進(jìn)一步優(yōu)選是20、最優(yōu)選是18。此外，在式（1)、式（2)或式（3)的N末端或C末端 的任一側(cè)可以添加任意的氨基酸。
[0102] 本發(fā)明肽的X1U1-X17以及X21-X 27的取代是基于下述實(shí)施例記載的結(jié)合試驗(yàn)結(jié) 果所表明的只要是保守取代或半保守取代，均顯示出同樣的活性進(jìn)行的。在本文的表1中 顯示表明了典型的保守取代和半保守取代。
[0103] [表 1]
[0104]

【權(quán)利要求】
1.一種氨基酸數(shù)為12至50的肽，其至少具有下式（1)、（2)或（3)表示的氨基酸序列：X'-His-X2-X3-Asp-X4-X5-X6-X7-X8-Trp-His(1) (式⑴中，X1表示Trp或者Phe， X2 表示Leu、Met、lie或者Val， X3 表不Ser、Ala、Thr、Gly、Asn、Asp、Glu、Arg或者Lys， X4 表不Leu、Met、lie、Val、Ala、Phe、Tyr、Trp、His或者Cys， X5 表示Trp、Phe或者Tyr， X6 表不Gin、Asn、Asp、Glu、Ala、Ser、Thr、Leu、Met、Lys或者Arg， X7 表不Asn、Gin、Asp、Glu、Ser、Thr、Ala、Gly、Lys或者Arg， X8表不Ala、Gly、Ser、Thr、Asn、Val或者Cys。）Phe-His-Asp-Trp-Xn-Pr〇-X12-X 13-X14-X15-X16-X17 (2) (式（2)中、X11 表不 1^11、]^七、116、/81、八1&、？116、丁71'、1'印、1118或〇78， X12 表不Glu、Asp、Gin、Asn、Ala、Ser、Thr、Lys、Arg或His， X3 表不Val、Ala、Leu、lie、Met、Thr、Cys或Asn， X14 表不Ser、Ala、Thr、Gly、Asn、Asp、Glu、Arg或Lys， X5 表不Pro、Val、lie、Lys、Ala、Met、Trp、Tyr、Ser、Thr、Cys或Phe， X16 表不Pro、Val、lie、Lys、Ala、Met、Trp、Tyr、Ser、Thr、Cys或Phe， X17 表不Asp、Glu、Asn、Gin、Ala、Ser、Thr、Lys、Arg或His〇 )Leu-His-X21-Ser-X22-Trp-Met-X23-X24-X25-X26-X27 (3) (式⑶中、X21 表不 6111、八811、八8卩、6111、八1&、361'、1'111'、1^11、]^七、1^8或八作， X22 表不Glu、Asp、Gin、Asn、Ala、Ser、Thr、Lys、Arg或His， X23 表不Tyr、Phe、Trp、His、Leu、Met、lie、Val、Cys或Ala， X24 表不Val、Ala、Leu、lie、Met、Thr、Cys或Asn， X25 表不Asp、Glu、Asn、Gin、Ala、Ser、Thr、Lys、Arg或His， X26 表不lie、Val、Leu、Met、Ala、Phe、Tyr、Trp或Gly， X27 表不His、Tyr、Phe、Lys、Arg、Leu、Met或Ala〇 ) 〇
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中，式（1)中X1是Trp或Phe，X2是Leu、Met、lie或Val，X3 是Ser、Ala、Thr、Gly或Asn，X4 是Leu、Met、lie、Val或Ala，X5 是Trp或Phe，X6 是 Gin、Asn或Ala，X7 是Asn、Gin或Ala，X8 是Ala、Gly、Ser或Thr。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中，式（1)中X1是Trp或Phe，X2是Leu、Met、lie或Val，X3 是Ser或Ala，X4 是Leu或Ala，X5 是Trp，X6 是Gin或Ala，X7 是Asn或Ala，X8 是 Ala。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中，式⑵中X11是Leu、Met、lie、Val或Ala，X12是 Glu、Asp、Gin、Asn或Ala，X13 是Val、Ala、Leu或lie，X14 是Ser、Ala、Thr、Gly或Asn，X15 是Pro、Val、lie或Ala，X16 是Pro、Val、lie或Ala，X17 是Asp、Glu、Asn、Gin或Ala。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中，式⑵中X11是Leu或Ala，X12是Glu或Ala，X13是 Val或Ala，X14 是Ser或Ala，X15 是Pro或Ala，X16 是Pro或Ala，X17 是Asp或Ala。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中，式（3)中X21是Gln、Asn或Ala，X22是Glu、Asp、Gln 或Ala，X23 是Tyr、Phe、Trp、His或Ala，X24 是Val、Ala、Leu或lie，X25 是Asp、Glu、Asn、 Gin或Ala，X26 是lie、Val、Leu、Met或Ala，X27 是His、Tyr、Phe、Lys、Arg或Ala。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中，式⑶中X21是Gin或Ala，X22是Glu或Ala，X23是 Tyr或Ala，X24 是Val或Ala，X25 是Asp或Ala，X26 是lie或Ala，X27 是His或Ala。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)所述的肽，其中氨基酸數(shù)的上限是30。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1至8任一項(xiàng)所述的肽，其具有EGFR結(jié)合性。
10. 含有根據(jù)權(quán)利要求1至9任一項(xiàng)所述的肽或其標(biāo)記體的藥物。
11. 含有根據(jù)權(quán)利要求1至9任一項(xiàng)所述的肽或其標(biāo)記體的癌細(xì)胞或癌組織檢測(cè)劑。
12. 含有根據(jù)權(quán)利要求1至9任一項(xiàng)所述的肽或其標(biāo)記體的癌癥診斷劑。
13. 含有根據(jù)權(quán)利要求1至9任一項(xiàng)所述的肽或其標(biāo)記體的癌癥治療劑。
14. 根據(jù)權(quán)利要求1至9任一項(xiàng)所述的肽或其標(biāo)記體，其用于檢測(cè)癌細(xì)胞或癌組織。
15. 根據(jù)權(quán)利要求1至9任一項(xiàng)所述的肽或其標(biāo)記體，其用于癌癥診斷或癌癥治療。
16. 根據(jù)權(quán)利要求1至9任一項(xiàng)所述的肽或其標(biāo)記體在制備癌細(xì)胞或癌組織檢測(cè)劑中 的用途。
17. 根據(jù)權(quán)利要求1至9任一項(xiàng)所述的肽或其標(biāo)記體在制備癌癥診斷劑或癌癥治療劑 中的用途。
18. -種癌細(xì)胞或癌組織的檢測(cè)方法，其特征在于使用根據(jù)權(quán)利要求1至9任一項(xiàng)所述 的肽或其標(biāo)記體。
19. 一種癌癥的診斷或治療方法，其特征在于使用根據(jù)權(quán)利要求1至9任一項(xiàng)所述的肽 或其標(biāo)記體。
【文檔編號(hào)】G01N33/574GK104379595SQ201380031904
【公開(kāi)日】2015年2月25日 申請(qǐng)日期:2013年6月18日 優(yōu)先權(quán)日:2012年6月25日
【發(fā)明者】飯森祐介, 山形瑞惠, 塩野智隆 申請(qǐng)人:Hoya株式會(huì)社