專利名稱：一種檢測(cè)柑橘皮、籽原料中檸檬苦素類化合物含量的樣品前處理方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測(cè)柑橘皮、籽原料中檸檬苦素類化合物含量的樣品前處理方法。
背景技術(shù)：
蕓香科植物(如柑橘等)中檸檬苦素類化合物的生物活性受到越來(lái)越多的關(guān)注，其在食品醫(yī)藥等領(lǐng)域的應(yīng)用也越來(lái)越廣泛。檸檬苦素類化合物的分離、純化、檢測(cè)技術(shù)也在不斷發(fā)展中。獲得原料后首先要檢測(cè)其含量，以利于開(kāi)展后面的提取純化和產(chǎn)品品質(zhì)控制工作。因此，能否快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)原料中的檸檬苦素類化合物的含量將直接影響到檸檬苦素的生產(chǎn)效率。
目前，檸檬苦素類化合物的研究工作大都圍繞其物質(zhì)結(jié)構(gòu)及功能活性研究，對(duì)檸檬苦素類化合物檢測(cè)技術(shù)改進(jìn)甚少。檢測(cè)柑橘皮、籽原料中檸檬苦素類化合物含量的樣品前處理方法，一般是將100g～500g原料進(jìn)行粉碎后用石油醚或者乙醚提取多次，之后再以丙酮提取多次。丙酮提取物濃縮后溶于二氯甲烷，收集可溶的那一部分定容，測(cè)定目標(biāo)化合物含量。這一類樣品前處理方法主要存在以下幾個(gè)問(wèn)題1)樣品的粉碎一般的化合物檢測(cè)，樣品都要作一定程度的破碎處理。理論上，破碎處理可以增大原料的比表面積。事實(shí)上，在提取過(guò)程中，破碎的原料并不是均勻地分散在溶媒中，而是沉積到提取容器的底部，傳質(zhì)阻力較大，同樣也會(huì)造成提取時(shí)間長(zhǎng)，溶劑用量大，提取不徹底等問(wèn)題。
2)環(huán)保問(wèn)題一般前處理方法所用到的溶劑都是沸點(diǎn)較低，且有一定毒害作用的有機(jī)溶劑。多次加熱提取，濃縮，會(huì)帶來(lái)部分溶劑的泄露，長(zhǎng)期使用對(duì)操作者的健康將產(chǎn)生危害。
3)操作流程和成本一般方法樣品前處理過(guò)程復(fù)雜，費(fèi)時(shí)費(fèi)試劑，成本較高。由于濃縮溶劑量較大，在有條件的實(shí)驗(yàn)室尚可用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀來(lái)完成，但大多數(shù)基層工廠實(shí)驗(yàn)室難以達(dá)到。目前，國(guó)內(nèi)試劑丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷和石油醚的價(jià)格都不低，因此，在樣品的前處理上作一些改進(jìn)，使其向低毒、低成本、高效方向發(fā)展，是原料中檸檬苦素類化合物含量檢測(cè)方法的發(fā)展方向。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種檢測(cè)柑橘皮、籽原料中檸檬苦素類化合物含量的樣品前處理方法，該方法處理后的原料提取物經(jīng)檢測(cè)能穩(wěn)定準(zhǔn)確地反映檸檬苦素類化合物的含量水平。
本發(fā)明提供的一種檢測(cè)柑橘皮、籽原料中檸檬苦素類化合物含量的樣品前處理方法，包括下列步驟(1)將待測(cè)樣品干燥后粉碎至60～80目；(2)稱取粉碎樣品0.200～0.500g，然后加入有機(jī)溶劑2～5ml，于高速混勻器上振蕩提取2～3min，4000r/min離心5～10min，吸走上清液，物料重復(fù)以上操作3～5次，剩余物進(jìn)行下一步操作；(3)加入丙酮2～5ml，振蕩提取2～3min，4000r/min離心5～10min，收集丙酮提取物，重復(fù)此操作3～5次，提取物合并且予以吹干，得到丙酮提取物；(4)丙酮提取物中加入有機(jī)溶劑1～2ml，超聲或者振蕩溶解，4000r/min離心5～10min，收集溶解液，重復(fù)此操作3～5次，將溶解液合并，定容，檢測(cè)。
上述技術(shù)方案中步驟(2)所述的有機(jī)溶劑為石油醚或乙醚；步驟(4)所述的有機(jī)溶劑為二氯甲烷或三氯甲烷。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下特點(diǎn)1.高速振蕩提取粉碎樣品，可以最大可能地使樣品與提取溶劑接觸，樣品有效比表面積加大，提取效率得到提高。
2.少量多次提取利用了濃度差，使提取更徹底，結(jié)果更可靠。
3.前處理行為是在常溫下進(jìn)行，可有效地保護(hù)被測(cè)物免遭破壞。
4.樣品前處理過(guò)程操作簡(jiǎn)單，溫度低，有機(jī)溶劑用量少，使得操作過(guò)程毒性低，同時(shí)實(shí)驗(yàn)材料與試劑耗費(fèi)少，實(shí)驗(yàn)成本也低。
5.樣品前處理操作簡(jiǎn)單，工作量小，且占地少，一次能處理多個(gè)樣品，大大提高了工作效率。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明通過(guò)以上所記載的有關(guān)工藝參數(shù)及試劑均可實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，而不僅僅局限于以下實(shí)施例。
實(shí)施例1取橘籽100g，干燥粉碎至80目，取9個(gè)平行樣品，每個(gè)樣品0.2g(精確到0.001g)，在其中3個(gè)樣品中分別加入0.5ml濃度為100ug/ml的檸檬苦素標(biāo)準(zhǔn)液，按下列方法進(jìn)行樣品預(yù)處理樣品先以3ml石油醚高速振蕩脫脂2min，然后在4000r/min速度下離心10min，吸走上清液，再向樣品中加入3ml石油醚，重復(fù)此操作2次；脫脂后的樣品加入3ml丙酮高速振蕩提取2min，4000r/min速度下離心10min，收集上清液，重復(fù)提取3次，合并丙酮提取液，40℃條件下將丙酮提取液吹干；丙酮提取物中加入1ml二氯甲烷，超聲溶解，4000r/min速度下離心5min，收集上清液，重復(fù)溶解3次，合并二氯甲烷溶解液，并定容到10ml，待測(cè)。待測(cè)溶液經(jīng)相同條件下的分光光度法檢測(cè)(即一定量的待測(cè)溶液加無(wú)水乙醇到2ml，分別加濃度為0.125％的對(duì)-二甲氨基苯甲醛—硫酸乙醇溶液5ml，搖勻靜置，30min后于500nm波長(zhǎng)下測(cè)吸光值，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算樣品中檸檬苦素類物質(zhì)的含量)。結(jié)果為6個(gè)平行樣的含量分別為13.12mg/g，13.09mg/g，13.15mg/g，13.07mg/g，13.11mg/g，13.16mg/g，平均值13.12mg/g；3個(gè)加標(biāo)回收率分別是87.6％，89.1％，88.9％。
實(shí)施例2取橘籽原料500g，干燥粉碎至60目，平行取3個(gè)樣品，每個(gè)樣品0.2g(精確到0.001g)，先以3ml石油醚高速振蕩脫脂2min，然后在4000r/min速度下離心10min，吸走上清液，再向樣品中加入3ml石油醚，重復(fù)此操作2次；脫脂后的樣品加入3ml丙酮高速振蕩提取2min，4000r/min速度下離心10min，收集上清液，重復(fù)提取3次，合并丙酮提取液，40℃條件下將丙酮提取液吹干；丙酮提取物中加入1ml三氯甲烷，高速振蕩溶解，4000r/min速度下離心5min，收集上清液，重復(fù)溶解3次，合并三氯甲烷溶解液，并定容到10ml，待測(cè)。如實(shí)施例1的分光光度法檢測(cè)結(jié)果分別為13.02％，12.95％，13.07％，平均為13.01％。
權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)柑橘皮、籽原料中檸檬苦素類化合物含量的樣品前處理方法，其特征在于包括下列步驟(1)將待測(cè)樣品干燥后粉碎至60～80目；(2)稱取粉碎樣品0.200～0.500g，然后加入有機(jī)溶劑2～5ml，于高速混勻器上振蕩提取2～3min，4000r/min離心5～10min，吸走上清液，物料重復(fù)以上操作3～5次，剩余物進(jìn)行下一步操作；(3)加入丙酮2～5ml，振蕩提取2～3min，4000r/min離心5～10min，收集丙酮提取物，重復(fù)此操作3～5次，提取物合并且予以吹干，得到丙酮提取物；(4)丙酮提取物中加入有機(jī)溶劑1～2ml，超聲或者振蕩溶解，4000r/min離心5～10min，收集溶解液，重復(fù)此操作3～5次，將溶解液合并，定容，檢測(cè)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)柑橘皮、籽原料中檸檬苦素類化合物含量的樣品前處理方法，其特征在于步驟(2)所述的有機(jī)溶劑為石油醚或乙醚。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)柑橘皮、籽原料中檸檬苦素類化合物含量的樣品前處理方法，其特征在于步驟(4)所述的有機(jī)溶劑為二氯甲烷或三氯甲烷。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種檢測(cè)柑橘皮、籽原料中檸檬苦素類化合物含量的樣品前處理方法，該方法包括下列步驟(1)將待測(cè)樣品干燥后粉碎至60～80目；(2)稱取粉碎樣品0.200～0.500g，然后加入有機(jī)溶劑2～5ml，于高速混勻器上振蕩提取2～3min，4000r/min離心5～10min，吸走上清液，物料重復(fù)以上操作3～5次，剩余物進(jìn)行下一步操作；(3)加入丙酮2～5ml，振蕩提取2～3min，4000r/min離心5～10min，收集丙酮提取物，重復(fù)此操作3～5次，提取物合并且予以吹干，得到丙酮提取物；(4)丙酮提取物中加入有機(jī)溶劑1～2ml，超聲或者振蕩溶解，4000r/min離心5～10min，收集溶解液，重復(fù)此操作3～5次，將溶解液合并，定容，檢測(cè)。用本發(fā)明方法處理后的原料提取物經(jīng)檢測(cè)可穩(wěn)定準(zhǔn)確地反映檸檬苦素類化合物的含量水平。
文檔編號(hào)G01N1/34GK1793821SQ200510101198
公開(kāi)日2006年6月28日 申請(qǐng)日期2005年11月14日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月14日
發(fā)明者徐玉娟, 施英, 肖更生, 陳衛(wèi)東, 張友勝, 吳娛明, 鄒宇曉, 劉學(xué)銘 申請(qǐng)人:廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)與農(nóng)產(chǎn)品加工研究所, 廣東寶桑園健康食品研究發(fā)展中心