專利名稱：三聚氰胺分子印跡固相萃取小柱及制備方法和應(yīng)用的制作方法
三聚m^ 印跡固^^小股鬼恪雄和細(xì)
獄領(lǐng)域
本發(fā)明涉及分析化學(xué)、食品安封頁域，具體地說，是涉^H聚,分子印跡固禾,小tt^帝恪方
法和，，并主要用于^^品中三聚mH，留的高選擇性分離、富集和純化。 背景獄
三聚離(melamine)，是一種三麟^M^有機(jī)化她觀的M^T有機(jī)虹原J斗，簡稱HI安， 俗總胺、蛋白精。由于我國翻偶則食品和i^斗IQlk蛋白質(zhì)賴的方法，導(dǎo)致裕商人將三聚飼嫌 雜在食品或t^斗中，以提將品或^N^測中的蛋白質(zhì)含量撤示。作為一種常見的《紅原J斗，三聚齣安 被認(rèn)為毒性輕微，但是長WAH聚劇^t^纏、泌尿系統(tǒng)的損害，膀胱、腎部結(jié)石，并可進(jìn)""^ 誘^li胱癌。2007年，美國爆發(fā)寵trt品受污染事件，事后調(diào)鼓明矛錄了^6.6%三聚離的小魏 白粉是寵物食品導(dǎo)致中毒的原因。2008年9月，中國爆^E^嬰幼JWy受污染事件，導(dǎo)致食用了受污 染奶粉的嬰幼jl^生腎結(jié)石病癥，其原因也是奶粉中含有三聚氰胺。2008年10月8日，衛(wèi)生部、， 和信息化部、 部、國紅商行政管理總局和國家質(zhì)離督檢驗(yàn)^^、局耳^^發(fā)布公告，制^H聚氰 月銥乳與乳制品中的臨日措理值:嬰幼兒配方乳粉中三聚割安的限量m^ lm^kg，液態(tài)奶(包括原料乳)、 鵬、其它配方孚im中三聚飼安的限量働2.5m^kg，含乳15%以上的其它食品中三聚観安的限量戯 2.5mg^g，高于限量值的產(chǎn)品一軒得銷售。目前，X寸于鵬'j品中三聚割鈔戔留含量的檢測是一個(gè)及其 復(fù)雜的過程，由于鵬榀中基質(zhì)非常鋭，樣品的前處Sii程非f^。用固才,、 敘彌脇中的三
聚ftl安謝ff^b理，方法簡單、方便、十娥。但是，現(xiàn)有固+,小柱均是一次幽柳，價(jià)格昂貴；三 聚mi安屬于強(qiáng)極性化糊，在傳統(tǒng)的Q8固相魏小肚的保節(jié)蹉；鵬子交換跟,小柱不能很 好地分離三聚籠安與鵬U品中的內(nèi)源性小^^成分的干擾。同時(shí)，普通固相魏方法予Mb理的樣品由于 背景依然鄉(xiāng)鋭，必須結(jié)^t相質(zhì)譜糊儀、液相質(zhì)譜糊儀等，需要專業(yè)人員操作，檢測費(fèi)用髙昂， 無法在常規(guī)檢測中進(jìn)行普及。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，亂共一種三聚籂5^印跡固相靴小極制備方法和細(xì)，
以方便、個(gè)娥、高效i雌擇性純化和富ft^粉、牛奶等鵬脇提取液中的三聚ms勢戔留，結(jié)合高效液相 色譜即可實(shí)aiBfiu品中三聚割安鵬的分析，便于在例行分析樹則中普及與mr。
本發(fā)明^iii以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的
三聚割^r印跡固才,小柱，期寺征是內(nèi)底有一石^f^満板的鵬小柱中填i有三聚割安舒 印跡聚激顆粒。本發(fā)明中三聚m^^印跡固ffiw小柱的第恪方法，^mE在^s以下步驟
(1) 首先制備含有三聚離的針印跡聚糊,
將三聚mi安、甲基丙烯酸、乙二醇二甲基雙丙烯酸酉^S照1: 6~18: 3(M00的比例超聲分散于甲醇 棘乙醇的7JC溶液中，在3(^80度^{牛下 過夜；力口入偶iU異丁腈之后，氮吹織10併中密封反 應(yīng)器，在氮?dú)鈄^下油浴60度SiS24小時(shí)，得到塊狀^T印跡聚^t);辦央狀^T印跡聚^tl用石琳 磨碎，過10(M000目篩，得到大小為15(M3 f魷且含有三聚離的籽印跡聚^/PF立；
(2) 將J^含有三聚W安的好印跡聚^tl^^體矜10%乙酸的甲^§液中，在索氏提取器中 提取48小時(shí)以除去三聚 ^*鵬的化^#/;再經(jīng)j^fe滌并反復(fù)沉降，濾去,，將獲得階沉M
粒物真空千鵬亙重，即為三聚mjK^印跡聚激顆稱
(3) 最后制備三聚割安肝印跡固才m(小柱
繊5(M0(X) mg ±^^聚飼安好印跡聚^/顆粒，以乙腈為勻漿液填充于麟為^^僻板的 1~5 mL鵬小柱內(nèi)，自然涼干或氮?dú)獯蹈声i小柱制得三聚tl安好印跡固相魏小柱。
以上步驟戶;M試劑中，三聚離、甲基丙烯酸、乙二醇二甲基雙丙烯酸酉鵬自Sigma公司，甲醇、 乙腈購自Merck公司。
本發(fā)明中戶脫的三聚割^ 印跡固相魏小ffi^于鵬榀中三聚WW留樣品提取液的高選擇 性分離、富集、純化，其特征包括以下步驟-
(1) 將J^三聚i^分子印跡固相,小柱依次用水l 10mL、甲醇l 10mL活化，最終用氮?dú)?吹干備用；
(2) 鵬ij品三聚fftff安提取液1 5 mL滴加SH聚MI安好印跡固相魏小柱，以0.1~0.5 mL/min 的mi固相魏小柱，并用氮?dú)獯蹈晒滔郙小法
(3) 依7細(xì)去離子水l 10mL和甲醇W0mU概固相魏小柱，i/1BI》0.W).5mL/min，并用
氮?dú)獯蹈晒滔辔盒≈?br> (4) 驗(yàn)用l 10mL含5。/^5(f/o^ifeK的甲瞎娜，》腿為0.M).5mL/min，收^^I^液；
(5) 淵兌液氮吹M至干，用甲醇定容至lmL， ^mM高效液相色衞義測^H聚mB安的^M。
本發(fā)明戶;ffi幌的三聚M針印跡聚創(chuàng)勿顆粒是具有一定大小、m^和的特定的功自感團(tuán)的高好
聚^tl顆粒，對三聚錮安的針結(jié)構(gòu)具有特定的'H己憶"功能。戶満i恪的三聚割安好印跡固相靴小柱 實(shí)現(xiàn)了鵬U品中三聚齣安的高效分離、富鮮純化，與以往普通激MS(法、d8固相^^法、離子交 換固相^(S"等相^S樹目比，富集、凈化效率高，并_§^聚,^> 印跡固相魏小柱可以鼓使用，
^*低，可Mi^為，ij品中三聚iWM留前^a的必備的手段。
本發(fā)明的三聚節(jié)安舒印跡固相魏小柱，^#征是內(nèi)底有一石^!#板的鵬小柱中±真棘三聚 繊好印跡聚^t^l立。取5(M000mg的Jd^H聚割^H"印跡聚^/P^立，以乙腈為勻漿液填充于麟為石^^m的s^小柱內(nèi)，自然晾干鋼氮?dú)獯蹈声i小柱鵬尋三聚齙安肝印跡固t,小柱。
鵬小柱的容積為l~5mL。
i^H聚繊、甲基丙烯酸、乙二醇二甲基丙烯翻旨為分WMi敘y，最佳比例范圍為1: 9~15: 40~80， 舒印跡聚^J^fe大小范圍最佳為100~30 ，石^^僻lfcS佳孔徑范圍為10~20 。
實(shí)施例1.
一.三聚W^ 印跡固相魏小柱制備
(1) 含有三聚W安的針印跡聚^/^^立的制備
將三聚 安、甲基丙烯酸、乙二醇二甲基雙丙烯翻淑照l: 12: 60的比例超聲分散于50%的甲醇 水溶液中；50度斜牛下^Nii夜；力口入偶fc異丁腈之后，氮吹驗(yàn)10倂中密封S^器，在氮?dú)庾?下油浴60度鵬24小時(shí)，得到跌狀舒印跡聚^t/;將塊狀好印跡聚^tl用石il^離，過400目篩， 得到PK大小為35 m^且含^"三聚mjK的^ 印跡聚^^4;
(2) 聚激鵬中三聚繊的薩 將J^含有三聚鑭安的OT印跡聚^t/顆^g^ 10%乙酸的甲^^液中，在索氏提取器中提取48
小時(shí)，除去三聚割安誠鵬的化溯；經(jīng)翻洗滌并反復(fù)沉降，濾去翻'將獲得的沉〖^i粒物真空 千鵬隨'即為三聚割安好印跡^tJ顆粒；
(3) 三聚ty安針印跡固相魏小柱的制備
稱觀100 mg i^^聚tlB安分子印跡聚糊^l立，以乙腈為勻漿液i真JS于底端為石5^錦板的1 mL ^i駕小柱內(nèi)，自然涼干或氮?dú)獯蹈声i小柱制得三聚観安^^印跡固相魏小柱。
二三聚簡^^印跡固相,小ttlSffl于奶粉中三fm8安殘留樣品提取液的高選擇性分離、富集、
純化
(1) 0.5 5WWJ卩入甲醇5mL，漩f賺蕩一倂中，超聲提取30倂屮。以10000 ^Ht離心5併屮， 上清液作為娜提取液；
(2) 三聚,^ 印跡固相，小柱依次用水2mL、甲醇2mL活化，用氮?dú)獯蹈蓚溆茫?br> (3) 鵬臨三聚fll^l取液1 mL滴加M^聚^^印跡固W^小柱，以0.25 mL/min的 31固 fflM小柱，用氮?dú)獯蹈晒棠?小柱；
(4) 做鄉(xiāng)去離子水2mL和甲醇2mL鵬固+,小柱，？繊為0.25 m]7min，用氮?dú)獯蹈晒滔噍?取小柱；
(5) 蔬用3mL含KP/omE7jC的甲B iM，》iBI為025ml7min， tB^fel^液；
(6) M液氮吻鄉(xiāng)至干，用甲醇定容至lmL，灘柳高效液相色i靴測^H聚繊的賴。 戶顧?quán)说墓蘜 小根 ^沖的三聚翻安具有專^￡掛魁也富鮮純化，5! &樣品提取働口標(biāo)
2.5mg^三聚tU3安，三聚mi安的回收率為91.2%。實(shí)施例2.
一.三聚 3$^印跡固才,小柱制備
(1) 含有三聚WI安的好印跡聚^t^粒的諱恪
將三聚節(jié)安、甲基丙烯酸、乙二醇二甲基雙丙烯酸酉敏照1: 9: 45的比例超聲分散于75%乙醇的 7R溶液中；60度斜牛下 *過私加入偶氮二異丁fl青之后，氮吹麟10倂中密務(wù)1S^器，在氮?dú)鈌W 下油浴60度鵬24小時(shí)，得到塊狀針印跡聚彌；將塊狀好印跡聚^t/用石if^磨碎，過200目篩， 得到Sf立大小為75旨且含有^^mi安的W印跡聚^t)^f立；
(2) 聚溯顆粒中三聚離的灘 將±^含有三聚 3安的好印跡聚^ *立置矜10%乙酸的甲^#液中,在索氏提取器中提取48
小時(shí)以除去三聚 3^*鵬的化激；鞭^ 先滌并反復(fù)沉降，濾去剛，^^得盼沉i^^粒物真
空^pbm恒重，即為三聚mi^t印跡聚^ti^^;
(3) 三聚mis^印跡固ffiw小柱的條恪
稱艱1000 mg J^H聚WS^印跡聚^tl顆粒，以乙腈為勻漿液填充于麟為石^^僻板的5 mL 玻璃小柱內(nèi)，自然涼千或氮?dú)獯蹈刹ｋy小柱制得三聚観安好印跡固木@ 小柱。
二三聚 安^印跡固相 小|±^于液態(tài)奶中三聚鐘安殘留樣品提取液的高選擇性分離、富
集、純化
(1) 1 mL液態(tài)奶加入乙腈3 mL，靜置3她以讓0 t^H中離心5併中，上清液作為液態(tài)鵬 取液。
(2) 三聚割安分子印跡固相，小禾挑次用水5mL、甲醇5mL活化，用氮?dú)獯蹈蓚溆茫?br> (3) 鵬ij品三聚itl安提取液3 mL滴加至三聚WK^ 印跡固相魏小柱，以0.5 mL/min的MS固 豐IW小柱，用氮?dú)獯蹈晒滔辔盒≈?br> (4) 依 細(xì)去離了水5mL和甲醇5mUm固相,小柱，$臓為0.5 mL/min，用氮?dú)獯蹈晒蘤fi^ 小法
(5) 最后用5raL含10y。濃M7jC的甲瞎艦，i^IA0.5mL/min，收* 液；
(6) ^K液氮吻鄉(xiāng)至干，用甲醇定容至lmL， ^^M高效液相色itft測^H聚m^安的含量。 戶賴幌的固相靴小敏中液態(tài)奶中的三聚割安具有專^^擇性地富te純化，對應(yīng) 樣品提取液
中力口標(biāo)2.5mg/L三聚劉安，三聚劉安的回收率為95.1%。
權(quán)利要求
1、三聚氰胺分子印跡固相萃取小柱，其特征是內(nèi)底有一石英砂篩板的玻璃小柱中填充有三聚氰胺分子印跡聚合物顆粒。
2、 如權(quán)利要求1所述的三聚氰胺分子印跡固相萃取小柱，其特征在于 上述三聚氰胺分子印跡聚合物顆粒大小為150~13微米。
3、 如權(quán)利要求1所述的三聚氰胺分子印跡固相萃取小柱，其特征在于 上述石英砂篩板的孔徑范圍為10~20微米。
4、 三聚氰胺分子印跡固相萃取小柱的制備方法，其特征在于包括以下 步驟(1)首先制備含有三聚氰胺的分子印跡聚合物顆粒將三聚氰胺、甲基丙烯酸、乙二醇二甲基雙丙烯酸酯按照l: 6~18:30 100的比例超聲分散于甲醇或者乙醇的水溶液中，在30 80度條件下攪 拌過夜；加入偶氮二異丁腈之后，氮吹除氧10分鐘密封反應(yīng)器，在氮?dú)獗?護(hù)下油浴60度反應(yīng)24小時(shí)，得到塊狀分子印跡聚合物；將塊狀分子印跡聚 合物用研缽磨碎，過100 1000目篩，得到大小為150 13微米，含有三聚氰 胺的分子印跡聚合物顆粒；(2) 將上述含有三聚氰胺的分子印跡聚合物顆粒置于含10%乙酸的甲 醇溶液中，在索氏提取器中提取48小時(shí)以除去三聚氰胺及未反應(yīng)的化合物； 再經(jīng)丙酮洗滌并反復(fù)沉降，濾去丙酮，將獲得的沉淀顆粒物真空干燥至恒 重，即為三聚氰胺分子印跡聚合物顆粒；(3) 最后制備三聚氰胺分子印跡固相萃取小柱稱取50~1000 mg上述三聚氰胺分子印跡聚合物顆粒，以乙腈為勻漿 液填充于底端為石英砂篩板的1~5 mL玻璃小柱內(nèi)，自然涼干或氮?dú)獯蹈?玻璃小柱制得三聚氰胺分子印跡固相萃取小柱。
5、 如權(quán)利要求4所述的三聚氰胺分子印跡固相萃取小柱的制備方法， 其特征在于上述甲醇或者乙醇的水溶液是甲醇或者乙醇與水的體積比為 1 10: 1的混合溶液。
6、 三聚氰胺分子印跡固相萃取小柱應(yīng)用于奶制品提取液中三聚氰胺殘 留樣品的選擇性分離、富集、純化，其特征包括以下步驟(1) 將上述三聚氰胺分子印跡固相萃取小柱依次用水1 10 mL、甲醇 1 10mL活化，用氮?dú)獯蹈蓚溆茫?2) 奶制品三聚氰胺提取液1~5 mL滴加至三聚氰胺分子印跡固相萃取 小柱，以0.1 0.5mL/min的速度過固相萃取小柱，用氮?dú)獯蹈晒滔噍?取小柱；(3) 依次用去離子水1 10mL和甲醇1 10mL淋洗固相萃取小柱，流速 為0.1-0.5 mL/min，用氮?dú)獯蹈晒滔噍腿⌒≈?4) 最后用1 10 mL含5 % 50%濃氨水的甲醇洗脫，流速為0.1~0.5 mL/min，收集洗脫液；(5) 洗脫液氮吹濃縮至干，用甲醇定容至lmL，洗脫液用高效液相色譜 儀測定三聚氰胺的含量。
7、 如權(quán)利要求6所述三聚氰胺分子印跡固相萃取小柱應(yīng)用于奶制品提 取液中，其特征在于上述奶制品三聚氰胺提取液制備方法是1克奶粉加入 甲醇5 10mL，漩渦振蕩一分鐘，超聲提取30分鐘，以10000轉(zhuǎn)每分鐘離 心5分鐘，上清液作為固態(tài)奶提取液。
8、 如權(quán)利要求6所述三聚氰胺分子印跡固相萃取小柱應(yīng)用于奶制品提 取液中，其特征在于上述奶制品三聚氰胺提取液制備方法是1mL液態(tài)奶， 加入乙腈1 5 mL以除去蛋白，并以10000轉(zhuǎn)每分鐘離心5分鐘，上清液 作為液態(tài)奶提取液。
全文摘要
本發(fā)明公開了三聚氰胺分子印跡固相萃取小柱及制備方法和應(yīng)用。三聚氰胺分子印跡固相萃取小柱，其特征是內(nèi)底有一石英砂篩板的玻璃小柱中填充有三聚氰胺分子印跡聚合物顆粒。將三聚氰胺、甲基丙烯酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯混合分散于甲醇或者乙醇的水溶液中，制得三聚氰胺分子印跡聚合物顆粒填充于玻璃小柱內(nèi)，得到三聚氰胺分子印跡固相萃取小柱。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了對奶制品中三聚氰胺的高效分離、富集與純化，與以往普通溶劑萃取法、C₁₈固相萃取法、離子交換固相萃取法等相關(guān)技術(shù)相比，富集、凈化效率高，并且三聚氰胺分子印跡固相萃取小柱可以重復(fù)使用，成本低，可望成為奶制品中三聚氰胺殘留前處理的必備的手段。
文檔編號B01J20/285GK101513577SQ200910014658
公開日2009年8月26日 申請日期2009年3月1日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月1日
發(fā)明者周文輝, 楊黃浩, 林黎明, 王小如, 郭秀春 申請人:國家海洋局第一海洋研究所