專利名稱：朝鮮薊天然抗氧化劑及其提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及天然抗氧化劑提取技術(shù)，特別是一種朝鮮薊提取物作為天然抗氧化劑的新用途及其提取方法。
背景技術(shù)：
朝鮮薊(Cynara scolymus L.)，別名洋薊，洋百合，法國(guó)百合、荷花百合。菊科多年生大型草本，植株高達(dá)1.5米，葉大、羽狀深裂，夏季在莖頂著生直徑為15厘米左右的頭狀花，總苞片卵形呈覆瓦狀排列?；ò墒秤?。富含蛋白質(zhì)(3.6％)、糖類(16％)、維生素A、B、C及Ca、P、Fe、Na等元素，營(yíng)養(yǎng)很豐富。
研究表明朝鮮薊葉含有多種活性成份。如咖啡?？鼘幩犷愌苌?包括綠原酸(chlorogenic acid)、菜薊素(cynarin)、1，5二咖啡酰奎寧酸、3，5二咖啡?？鼘幩岬?和黃酮類化合物(包括木犀草素(cynaroside)、菜薊苦素(cynaropicrin)、藤黃菌素(luteolin)等)。中草藥藥用成分研究表明，上述成分具有1)保護(hù)和恢復(fù)肝臟機(jī)能；2)降低膽固醇和血脂濃度，促進(jìn)脂肪的消化；3)預(yù)防疾病、增強(qiáng)免疫力、延緩衰老等保健作用。然而，朝鮮薊葉上述成分除具有以上活性外，還具有其它方面的有價(jià)值的活性和用途。
用DPPH·自由基分析法，即通過(guò)檢測(cè)樣品對(duì)自由基DPPH·的清除能力來(lái)評(píng)價(jià)該物質(zhì)的抗氧化能力的方法去檢測(cè)朝鮮薊提取物的抗氧化性。其抗氧化能力用抑制率表示，抑制率越大，抗氧化能力越強(qiáng)。
對(duì)朝鮮薊提取物分離成分的抗氧化性能進(jìn)行測(cè)定，并與天然抗氧化劑維生素C(Vc)和化學(xué)合成抗氧化劑特丁基對(duì)苯二酚(TBHQ)的50％時(shí)的濃度(IC50)值進(jìn)行比較，朝鮮薊提取物各分離成分的抗氧化性能均比兩對(duì)照Vc和TBHQ高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種朝鮮薊提取物作為天然抗氧化劑的新用途及其提取方法。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)解決方案是提供一種朝鮮薊天然抗氧化劑的提取方法，其包括下列步驟步驟1.稱取100g干粉原料置于1000ml75％乙醇溶液的索氏提取器中，于沸水浴中提取，至索氏提取器內(nèi)的溶液近乎無(wú)色為止；步驟2.往提取后的約1000ml溶液中加入400ml的氯仿液進(jìn)行萃取，分層后，棄去下層的氯仿相，保留水相；步驟3.往上次萃取后的水相中加入400ml的乙酸乙酯液進(jìn)行萃取，分層后，棄去上層的乙酸乙酯相，保留水相；步驟4.往第二次萃取后的水相中加入400ml的正丁醇液進(jìn)行萃取，分層后，棄去下層的水相，保留正丁醇相；步驟5.將萃取后的正丁醇溶液置于Sephadex LH-20的凝膠柱上，用70％的甲醇洗脫，自動(dòng)部份收集器收集，得60個(gè)分離試管，分為3個(gè)不同的組分，分別進(jìn)行硅膠板分離鑒定和抗氧化活性測(cè)定；步驟6.將三種組分的分離液各自合并，濃縮5～10倍，用0.45μm膜過(guò)濾后，進(jìn)入HPLC9.4×250mm Zorbax ODS制備柱分離；步驟7.得到成品朝鮮薊天然抗氧化劑。
所述的提取方法，其步驟1中，于沸水浴中提取的時(shí)間為9.5～10.5小時(shí)之間。
所述的提取方法，其步驟5中，所述分為3個(gè)不同的組分，是24～35管為第一組分，15～21管為第二組分，37～59管為第三組分。
所述的提取方法，其步驟7得到的天然抗氧化劑成品分別是，第一組分得到1-咖啡?？鼘幩?1-CA)、3-咖啡?？鼘幩?3-CA)；第二組分得到藤黃菌素-7-蕓香糖苷(LTR)；第三組分得到1，3-二咖啡酰奎寧酸(1，3-DCA)、3，5-二咖啡?？鼘幩?3，5-DCA)、1，5-二咖啡?？鼘幩?1，5-DCA)、3，4-二咖啡?？鼘幩?3，4-DCA)。
所述的提取方法，其步驟7得到天然抗氧化劑成品后，需對(duì)朝鮮薊提取物的抗氧化性進(jìn)行測(cè)定。
所述的提取方法，其所述抗氧化性測(cè)定，方法是精確吸取2mL2×10-4mol/L的DPPH·溶液與2mL朝鮮薊分離樣品溶液混合均勻后，以溶劑為對(duì)照，用分光光度計(jì)測(cè)定該混合液在波長(zhǎng)517nm處的吸光值(ABS)；將所得數(shù)據(jù)代入下列公式計(jì)算其抑制率抑制率＝[1-(Ai-Aj)/Ac]×100％其中Ai為待測(cè)樣品液與等體積的DPPH·溶液混合后在波長(zhǎng)517nm處的ABS值；Aj為待測(cè)樣品液與等體積的溶劑混合后在波長(zhǎng)517nm處的ABS值；Ac為DPPH·溶液與等體積的溶劑混合后在波長(zhǎng)517nm處的ABS值。
一種朝鮮薊天然抗氧化劑，包括1-咖啡酰奎寧酸、3-咖啡?？鼘幩?綠原酸)、1，3-二咖啡?？鼘幩?、藤黃菌素-7-蕓香糖苷、3，5-二咖啡?？鼘幩帷?，5-二咖啡酰奎寧酸、3，4-二咖啡?？鼘幩帷?br> 本發(fā)明朝鮮薊干粉提液工藝流程，主要得到抗氧化提取物7種，此7種具有抗氧化活性的天然提取物與其它天然和合成抗氧化劑(Vc和TBHQ)比較具有明顯優(yōu)勢(shì)，分別是Vc的1.2～7倍、TBHQ的2～10倍。


圖1本發(fā)明朝鮮薊提取物活性成分分離制備圖。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1分離提取方法，如附圖1所示步驟1.索氏提取稱取100g干粉原料置于1000ml75％乙醇溶液的索氏提取器中，于沸水浴中提取10小時(shí)左右，至索氏提取器內(nèi)的溶液近乎無(wú)色為止。
步驟2.第一次萃取分離往提取后的約1000ml溶液中加入400ml的氯仿液進(jìn)行萃取，分層后，棄去下層的氯仿相，保留水相。
步驟3.第二次萃取分離往上次萃取后的水相中加入400ml的乙酸乙酯液進(jìn)行萃取，分層后，棄去上層的乙酸乙酯相，保留水相。
步驟4.第二次萃取分離往第二次萃取后的水相中加入400ml的正丁醇液進(jìn)行萃取，分層后，棄去下層的水相，保留正丁醇相。
步驟5.Sephadex LH-20柱層析分離將萃取后的正丁醇溶液置于Sephadex LH-20的凝膠柱上，用70％的甲醇洗脫，自動(dòng)部份收集器收集，得60個(gè)分離試管，分別進(jìn)行硅膠板分離鑒定和抗氧化活性測(cè)定，分為3個(gè)不同的組分24～35管為第一組分，15～21管為第二組分，37～59為第三組分。
步驟6.制備柱分離將三種組分的分離液各自合并，濃縮5～10倍，0.45μm膜過(guò)濾后，進(jìn)入HPLC9.4×250mm Zorbax ODS制備柱分離，得到天然抗氧化劑成品。其中24～35管的第一組分得到1-咖啡酰奎寧酸(1-CA)、3-咖啡酰奎寧酸(3-CA)；15～21管的第二組分得到藤黃菌素-7-蕓香糖苷(LTR)；37～59管的第三組分得到1，3-二咖啡?？鼘幩?1，3-DCA)、3，5-二咖啡?？鼘幩?3，5-DCA)、1，5-二咖啡?？鼘幩?1，5-DCA)、3，4-二咖啡?？鼘幩?3，4-DCA)。
步驟7.朝鮮薊提取物的抗氧化性的測(cè)定精確吸取2mL2×10-4mol/L的DPPH·溶液與2mL樣品溶液混合均勻后，以溶劑為對(duì)照，用分光光度計(jì)測(cè)定該混合液在波長(zhǎng)517nm處的吸光值(ABS)。將所得數(shù)據(jù)代入下列公式計(jì)算其抑制率，從而評(píng)價(jià)其抗氧化能力。
抑制率＝[1-(Ai-Aj)/Ac]×100％其中Ai為待測(cè)樣品液與等體積的DPPH·溶液混合后在波長(zhǎng)517nm處的ABS值；Aj為待測(cè)樣品液與等體積的溶劑混合后在波長(zhǎng)517nm處的ABS值；Ac為DPPH·溶液與等體積的溶劑混合后在波長(zhǎng)517nm處的ABS值。
對(duì)朝鮮薊提取物分離成分的抗氧化性能，經(jīng)測(cè)定各分離成分對(duì)DPPH·自由基的抑制率為50％時(shí)的濃度(IC50)，并與天然抗氧化劑維生素C(Vc)和化學(xué)合成抗氧化劑特丁基對(duì)苯二酚(TBHQ)的IC50值進(jìn)行比較。如表1。
表1樣品IC50(mg/ml)1-CA0.083-CA0.03LTR 0.031，3-DCA0.083，5-DCA0.0151，5-DCA0.0253，4-DCA0.05對(duì)照Vc 0.1TBHQ0.15從表1可以看出朝鮮薊提取物各分離成分的抗氧化性能均比兩對(duì)照Vc和TBHQ高，分別是Vc的1.2～7倍、TBHQ的2～10倍。
權(quán)利要求
1.一種朝鮮薊天然抗氧化劑的提取方法，其特征在于，包括下列步驟步驟1.稱取100g干粉原料置于1000ml 75％乙醇溶液的索氏提取器中，于沸水浴中提取，至索氏提取器內(nèi)的溶液近乎無(wú)色為止；步驟2.往提取后的約1000ml溶液中加入400ml的氯仿液進(jìn)行萃取，分層后，棄去下層的氯仿相，保留水相；步驟3.往上次萃取后的水相中加入400ml的乙酸乙酯液進(jìn)行萃取，分層后，棄去上層的乙酸乙酯相，保留水相；步驟4.往第二次萃取后的水相中加入400ml的正丁醇液進(jìn)行萃取，分層后，棄去下層的水相，保留正丁醇相；步驟5.將萃取后的正丁醇溶液置于Sephadex LH-20的凝膠柱上，用70％的甲醇洗脫，自動(dòng)部份收集器收集，得60個(gè)分離試管，分為3個(gè)不同的組分，分別進(jìn)行硅膠板分離鑒定和抗氧化活性測(cè)定；步驟6.將三種組分的分離液各自合并，濃縮5～10倍，用0.45μm膜過(guò)濾后，進(jìn)入HPLC 9.4×250mm Zorbax ODS制備柱分離；步驟7.得到成品朝鮮薊天然抗氧化劑。
2.如權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟1中，于沸水浴中提取的時(shí)間為9.5～10.5小時(shí)之間。
3.如權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟5中，所述分為3個(gè)不同的組分，是24～35管為第一組分，15～21管為第二組分，37～59管為第三組分。
4.如權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟7得到的天然抗氧化劑成品分別是，第一組分得到1-咖啡?？鼘幩?1-CA)、3-咖啡?？鼘幩?3-CA)；第二組分得到藤黃菌素-7-蕓香糖苷(LTR)；第三組分得到1，3-二咖啡?？鼘幩?1，3-DCA)、3，5-二咖啡?？鼘幩?3，5-DCA)、1，5-二咖啡?？鼘幩?1，5-DCA)、3，4-二咖啡?？鼘幩?3，4-DCA)。
5.如權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟7得到天然抗氧化劑成品后，需對(duì)朝鮮薊提取物的抗氧化性進(jìn)行測(cè)定。
6.如權(quán)利要求5所述的提取方法，其特征在于，所述抗氧化性測(cè)定，方法是精確吸取2mL 2×10-4mol/L的DPPH·溶液與2mL朝鮮薊分離樣品溶液混合均勻后，以溶劑為對(duì)照，用分光光度計(jì)測(cè)定該混合液在波長(zhǎng)517nm處的吸光值(ABS)；將所得數(shù)據(jù)代入下列公式計(jì)算其抑制率抑制率＝[1-(Ai-Aj)/Ac]×100％其中Ai為待測(cè)樣品液與等體積的DPPH溶液混合后在波長(zhǎng)517nm處的ABS值；Aj為待測(cè)樣品液與等體積的溶劑混合后在波長(zhǎng)517nm處的ABS值；Ac為DPPH·溶液與等體積的溶劑混合后在波長(zhǎng)517nm處的ABS值。
7.一種朝鮮薊天然抗氧化劑，其特征在于，包括1-咖啡?？鼘幩?、3-咖啡?？鼘幩?綠原酸)、1，3-二咖啡酰奎寧酸、藤黃菌素-7-蕓香糖苷、3，5-二咖啡?？鼘幩?、1，5-二咖啡?？鼘幩?、3，4-二咖啡?？鼘幩帷?br> 全文摘要
本發(fā)明涉及天然抗氧化劑提取技術(shù)，特別是一種朝鮮薊提取物作為天然抗氧化劑的新用途及其提取方法。本發(fā)明將朝鮮薊干粉通過(guò)索氏提取得到的原提取液，分別進(jìn)行氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到的正丁醇相進(jìn)行Sephadex LH－20柱層析分離，得到三個(gè)不同組分，再分別進(jìn)行高壓液相制備柱分離，得到7種不同的天然抗氧化劑。此7種天然抗氧化劑與其它天然和合成抗氧化劑(Vc和TBHQ)比較具有明顯優(yōu)勢(shì)，分別是Vc的1.2～7倍、TBHQ的2～10倍。
文檔編號(hào)C09K15/34GK1570020SQ03150268
公開(kāi)日2005年1月26日 申請(qǐng)日期2003年7月23日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月23日
發(fā)明者張洪勛, 朱顯峰, 羅國(guó)添 申請(qǐng)人:昆明英之源農(nóng)業(yè)科技開(kāi)發(fā)有限公司