本發(fā)明涉及一種鱘魚魚油及其制備方法，尤其涉及一種具有抗氧化以及皮膚修復(fù)功能的鱘魚魚油及其制備方法。
背景技術(shù)：
：各種活性氧自由基是生物體在氧化代謝的生命活動(dòng)過(guò)程中不斷產(chǎn)生，在機(jī)體各種酶體系作用下又不斷被還原，清除，維系細(xì)胞的正常功能。衰老和疾病的產(chǎn)生與氧化密切相關(guān)，不間斷地產(chǎn)生羥自由基、超氧陰離子、無(wú)機(jī)過(guò)氧化物、有機(jī)過(guò)氧化物等各種活性氧自由基。脂質(zhì)過(guò)氧化,蛋白質(zhì)變性,DNA鏈斷裂,酶失活,生物膜結(jié)構(gòu)損傷引起機(jī)體發(fā)生病變。通過(guò)補(bǔ)充天然抗氧化劑可抑制機(jī)體氧自由基的產(chǎn)生，清除過(guò)多的氧自由基保持身體健康，延緩機(jī)體的衰老過(guò)程。魚油中富含多不飽和脂肪酸，具有抗氧化作用，可用于心腦血管等保健，也可用于皮膚修復(fù)。但在實(shí)際應(yīng)用中因其存在異味并且卻少顯著的功能指向，其應(yīng)用受到了限制。因此，本領(lǐng)域的技術(shù)人員致力于開發(fā)一種無(wú)異味、具有抗氧化以及皮膚修復(fù)功能的鱘魚魚油以及制備方法。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：有鑒于現(xiàn)有技術(shù)的上述缺陷，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種無(wú)異味、具有抗氧化以及皮膚修復(fù)功能的鱘魚魚油。本發(fā)明提供的鱘魚魚油由鱘魚的卵巢或精巢提取得到。本發(fā)明還提供一種鱘魚魚油的粗制備方法，其特征在于，包括以下步驟：a.取鱘魚卵巢或精巢解凍，按料液比1:1.5加入水，使用勻漿器勻漿，得到組織勻漿；b.將步驟a中的組織勻漿加溫至45℃；c.向驟b中已加溫至45℃的組織勻漿加入10％氫氧化鈉液，直至組織勻漿的pH至8，保溫8min，按質(zhì)量比1.5％的比例向組織勻漿中加入氯化鈉，繼續(xù)在45℃下保溫15分鐘；d.將步驟c中的組織勻漿離心，取上清液，得到分離的粗鱘魚魚油。本發(fā)明還提供一種鱘魚魚油精制方法，其特征在于，包括以下步驟：a.脫膠；b.脫酸；c.脫色；d.脫臭。進(jìn)一步地，步驟a采用磷酸脫膠法，將粗鱘魚魚油加熱至80℃，向魚油中加入60％磷酸，攪拌后，離心分離除去膠質(zhì)的沉淀，得到上清液，即為脫膠鱘魚魚油，其中60％磷酸與粗鱘魚魚油的質(zhì)量比為1：100。進(jìn)一步地，步驟b采用氫氧化鈉脫酸法，包括以下步驟：(1)測(cè)定鱘魚魚油酸價(jià)，計(jì)算用堿量，按照所需的用堿量配制15％NaOH溶液，將鱘魚魚油加熱至40℃，在20min-30min內(nèi)緩慢加入計(jì)算得出的所需的15％NaOH溶液；(2)繼續(xù)將鱘魚魚油攪拌、升溫至60℃，靜置分層后離心，沉淀；(3)向鱘魚魚油加入8％的淡鹽水，洗滌至中性,4000r/min離心15分鐘,收集上清液，得到脫酸鱘魚魚油，其中8％的淡鹽水與鱘魚魚油的比例為20:100。進(jìn)一步地，步驟c包括將鱘魚魚油加熱至60℃,加入脫色劑，攪拌30min后抽濾，得到濾液，其中脫色劑與鱘魚魚油的質(zhì)量比為10：100。進(jìn)一步地，脫色劑為凹凸棒土Palygorskite。進(jìn)一步地，步驟d采用減壓通氮脫臭法，在真空度0.095MPa條件下,向步驟c中的脫色鱘魚魚油平穩(wěn)地通入氮?dú)?升溫至85℃，保持50min后完成。魚油是一種從多脂魚類提取的油脂，富含ω-3系多不飽和脂肪酸(DHA和EPA)，具有抗炎、調(diào)節(jié)血脂等健康益處。但是，由于魚普遍具有腥味，使從魚中提取的魚油具有腥味，而不同品種的魚腥味程度不同，并且從魚的不同部位提取的魚油腥味程度也不同，因此選擇合適的魚的品種，以及提取部位有利于減小魚的腥味。經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，具有洄游特性的三文魚、虹鱒、鱘魚、雅魚、華子魚腥味較小，鱘魚尤其突出，因此，本發(fā)明選用鱘魚作為原料制備魚油，可有效地減小制得魚油的腥味。鱘魚魚油中ω-3系多不飽和脂肪酸具有自由基基清除能力,抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞增殖，保護(hù)生物膜參與組織創(chuàng)傷后的愈合過(guò)程，現(xiàn)在的市場(chǎng)應(yīng)用中，魚油常用于食用保健，而本發(fā)明通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，證明了鱘魚魚油對(duì)皮膚修復(fù)的作用，可用于外敷，修復(fù)皮膚淺度燙傷。鱘魚魚油具有抗氧化性，其自身容易被氧化而失效，因此，在制備過(guò)程中，加入抗氧化組分可有效降低其自身氧化的速度，增長(zhǎng)保質(zhì)期。本發(fā)明選用的冷水魚油具有低腥味，高抗氧化性以及修復(fù)皮膚的功能。以下將結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的構(gòu)思、具體結(jié)構(gòu)及產(chǎn)生的技術(shù)效果作進(jìn)一步說(shuō)明，以充分地了解本發(fā)明的目的、特征和效果。附圖說(shuō)明圖1是本發(fā)明的一個(gè)較佳實(shí)施例的中鱘魚魚油和抗壞血酸DPPH自由基清除效果的對(duì)比圖；圖2是本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例中皮膚燙傷后1天各組創(chuàng)面組織的光鏡觀察結(jié)果，其中a為單純燙傷組，b為銀鋅霜組，c為鱘魚魚油組；圖3是本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例中皮膚燙傷后3天各組創(chuàng)面組織的光鏡觀察結(jié)果，其中a為單純燙傷組，b為銀鋅霜組，c為鱘魚魚油組；圖4是本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例中皮膚燙傷后18天各組創(chuàng)面組織的光鏡觀察結(jié)果，其中a為單純燙傷組，b為銀鋅霜組，c為鱘魚魚油組。具體實(shí)施方式實(shí)施例1鱘魚魚油抗氧化活性的研究1、淡堿水法提取鱘魚卵巢魚油取鱘魚卵巢若干解凍后，料液比1:1.5加入自來(lái)水，組織勻漿器勻漿，加溫45℃用10％氫氧化鈉液調(diào)pH至8，保溫8min，按1.5％比例加入氯化鈉，繼續(xù)保溫15分鐘后，離心(5000r/min，15min)分離的粗魚油。2、鱘魚卵巢魚油精制脫膠:采用磷酸脫膠法。主要除去磷醋和雜質(zhì),將鱘魚魚油加熱至80℃,按1％質(zhì)量比加入60％磷酸,充分?jǐn)嚢韬?離心分離除去膠質(zhì)。脫酸:采用氫氧化鈉脫酸法,測(cè)定鱘魚魚油酸價(jià),計(jì)算用堿量,配制成15％NaOH溶液，將魚油加熱至40℃,20min-30min內(nèi)緩慢加入。攪拌、升溫至60℃,靜置分層并離心分離除去皂腳沉淀。按魚油20％比例加入淡鹽水(8％)洗滌至中性,4000r/min離心15分鐘,收集上清液即為脫酸鱘魚魚油。脫色:將鱘魚魚油加熱至60℃,按比例加入10％脫色劑(凹凸棒土Palygorskite),不斷攪拌30min抽濾。脫臭:采用減壓通氮脫臭法，在真空度0.095MPa條件下,平穩(wěn)地通入氮?dú)?升溫至85℃50min完成。3、測(cè)定指標(biāo)方法脂肪酸組成分析Ge-MS法。4、結(jié)果5、鱘魚魚油DPPH自由基清除能力測(cè)定各種活性氧自由基是生物體在氧化代謝的生命活動(dòng)過(guò)程中不斷產(chǎn)生，在機(jī)體各種酶體系作用下又不斷被還原，清除，維系細(xì)胞的正常功能。衰老和疾病的產(chǎn)生與氧化密切相關(guān)，不間斷地產(chǎn)生羥自由基、超氧陰離子、無(wú)機(jī)過(guò)氧化物、有機(jī)過(guò)氧化物等各種活性氧自由基。脂質(zhì)過(guò)氧化,蛋白質(zhì)變性,DNA鏈斷裂,酶失活,生物膜結(jié)構(gòu)損傷引起機(jī)體發(fā)生病變。希望能通過(guò)補(bǔ)充天然抗氧化劑抑制機(jī)體氧自由基的產(chǎn)生，清除過(guò)多的氧自由基保持身體健康，延緩機(jī)體的衰老過(guò)程。魚油富含不飽和脂肪酸具有抗氧化活性已見報(bào)道。鱘魚卵巢魚油相關(guān)研究鮮有報(bào)道。常見體外抗氧化活性研究方法有硫氰酸鹽法、硫代巴比妥酸法、抗氧化能力指數(shù)法等，1,1-二苯基-2-苦基苯肼法(DPPH)因簡(jiǎn)便、快速、靈敏等特點(diǎn)常為首選。故采用DPPH自由基清除法并與抗壞血酸比較測(cè)試鱘魚魚油的自由基清除能力,為鱘魚魚油在抗氧化活性上提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。儀器與試劑實(shí)驗(yàn)方法：無(wú)水乙醇配制DPPH溶液0.04mg/ml；配制抗壞血酸1mg/ml儲(chǔ)備液,稀釋成系列濃度(40、50、60、70和80μg/ml)；鱘魚魚油配制系列濃度(2、6、10、14、18mg/m)。各取2ml抗壞血酸和鱘魚魚油加入2mlDPPH溶液,混勻,室溫放置30min后,5000r/min離心10min,取上清液于517nm處測(cè)吸光值。DPPH自由基清除率按下列公式計(jì)算:A0：無(wú)水乙醇+DPPH溶液吸光值；A1：樣品溶液+DPPH溶液吸光值；A2：樣品溶液+無(wú)水乙醇吸光值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：以鱘魚魚油濃度對(duì)DPPH自由基清除率進(jìn)行擬合,如圖1所示(Y為DPPH自由基清除率,X為魚油濃度)。表1鱘魚魚油的DPPH自由基的清除效果其清除能力均隨著魚油質(zhì)量濃度的增大而增加，質(zhì)量濃度越大，清除能力越強(qiáng)，2mg/ml-10mg/ml上升明顯，較好的劑量-效率相關(guān)性，10mg/ml有一個(gè)平緩過(guò)程，但質(zhì)量濃度越大清除能力越強(qiáng)趨勢(shì)明顯。表1鱘魚魚油和抗壞血酸DPPH自由基清除效果鱘魚魚油mg/ml2.06.010.014.018.0抗壞血酸μg/ml4050607080鱘魚魚油清除率％11.5328.3160.4264.8569.58抗壞血酸清除率％17.5331.8640.2360.5578.2鱘魚魚油對(duì)DPPH自由基有明顯的清除作用(LC50＝10.03mg/ml)與魚油濃度呈線性關(guān)系,即魚油濃度越大,清除率越強(qiáng)。說(shuō)明鱘魚魚油的超氧自由基有一定的清除能力。實(shí)施例2鱘魚魚油對(duì)燙傷大鼠創(chuàng)面的影響鱘魚魚油從鱘魚卵巢提煉而來(lái)，富含ω-3多不飽和脂肪酸。ω-3多不飽和脂肪酸具有自由基基清除能力,抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞增殖，保護(hù)生物膜參與組織創(chuàng)傷后的愈合過(guò)程。本實(shí)驗(yàn)初步觀察了鱘魚魚油對(duì)淺Ⅱ度燙傷創(chuàng)面愈合的影響,旨在為鱘魚魚油應(yīng)用于燙傷組織修復(fù)提供理論依據(jù)。1.材料和方法Wistar雄性大鼠,體重約250-300g武漢大學(xué)動(dòng)物中心；鱘魚卵巢魚油,上海墣優(yōu)公司；銀鋅霜新鄉(xiāng)市華信生化醫(yī)用敷料有限責(zé)任公司；動(dòng)物模型Wistar大鼠66只動(dòng)物自由進(jìn)食、水。實(shí)驗(yàn)前觀察一周。隨機(jī)分為單純燙傷組、銀鋅霜治療組和鱘魚魚油治療組,每組22只。動(dòng)物燙傷前1d背部脫毛,實(shí)驗(yàn)時(shí)戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉,脫毛區(qū)置于70℃恒溫水浴中15s,制成2cmx3cm(10％TBSA)淺Ⅱ度燙傷模型(經(jīng)病理切片證實(shí))。各組創(chuàng)面分別用生理鹽水紗布、銀鋅霜紗布、鱘魚魚油紗布覆蓋,各創(chuàng)面分別于傷后即刻給藥,第ld-3d每8h換藥一次,此后每d換藥一次,直至創(chuàng)面愈合。創(chuàng)面愈合觀察:以創(chuàng)面癡皮脫落,新上皮生成為愈合標(biāo)準(zhǔn)。2檢測(cè)指標(biāo)每天換藥時(shí)觀察創(chuàng)面情況,，紅腫變化情況，是否干燥、創(chuàng)面水腫滲出程度、有無(wú)分泌物、是否出現(xiàn)炎性創(chuàng)面；觀察創(chuàng)面愈合情況,以鏡下觀察是否存在完全上皮覆蓋作為創(chuàng)面愈合判斷標(biāo)準(zhǔn),記錄創(chuàng)面愈合時(shí)間。創(chuàng)面愈合率大鼠于傷后3d、6d、9d、12d、15d和18d記錄創(chuàng)面愈合率。按下列公式計(jì)算創(chuàng)面愈合率:創(chuàng)面愈合率＝(原始創(chuàng)面面積-未愈合創(chuàng)面面積)/原始創(chuàng)面面積×100％。組織病理學(xué)觀察：各組動(dòng)物分別于傷后1、3、18d(n＝6)麻醉后從創(chuàng)面切取約1cm×1cm的創(chuàng)面組織,取材后即用37％甲醛固定，石蠟包埋切片，蘇木精-伊紅染色(H-E)光鏡下觀察組織病理學(xué)變化。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析數(shù)據(jù)以x±s表示,采用SPSS11.0進(jìn)行方差分析,P<0.05為差異具有顯著性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果傷后1d-3d燙傷組創(chuàng)面紅腫明顯，真皮顯著腫脹,皮膚創(chuàng)面有少量液體滲出，創(chuàng)面周邊明顯高出，銀鋅霜組次之，鱘魚魚油組最輕；3d后淺II度燙傷三個(gè)組創(chuàng)面均干燥，先后形成干痂。早期燙單純傷組鏡下可見真皮乳頭層有明顯充血、水腫和白細(xì)胞浸潤(rùn)，膠原纖維離散(圖2，圖3)。早期銀鋅霜組和鱘魚魚油組鏡下炎癥表現(xiàn)類似于單純燙傷組，傷后3d兩治療組與燙傷組比較明顯恢復(fù)。大鼠淺II度燙傷后第3天起,治療組創(chuàng)面出現(xiàn)明顯的肉芽組織增生,單純燙傷組創(chuàng)面?zhèn)?d肉芽少量組織增生現(xiàn)象。18d各組大白鼠創(chuàng)面基本愈合,愈合創(chuàng)面有鼠毛長(zhǎng)出(圖4)。大鼠創(chuàng)面愈合率見表2。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:淺II度創(chuàng)面治療組與單純燙傷組愈合率比較,于傷后第3、6、9、12、15、18d愈合百分率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。使用鱘魚魚油和銀鋅霜治療組與對(duì)照組組相比具有顯著促進(jìn)創(chuàng)面愈合的作用,未出現(xiàn)創(chuàng)面皮膚壞死,局部創(chuàng)面炎癥反應(yīng)或增加肉芽組織過(guò)度生長(zhǎng)現(xiàn)象。。氧自由基損傷在燒傷創(chuàng)面損害中的作用已得到廣泛重視。在創(chuàng)面的缺血再灌注過(guò)程中,由受損的內(nèi)皮細(xì)胞、血小板,以及激活的中性粒細(xì)胞產(chǎn)生大量的氧自由基。燒傷組織清除氧自由基的能力降低,使局部氧自由基濃度過(guò)高,引起組織損傷。氧自由基對(duì)組織的損傷主要是引發(fā)生物膜中的脂質(zhì)過(guò)氧化和蛋白變性。從鱘魚卵巢提煉出來(lái)的鱘魚魚油，富含ω-3多不飽和脂肪酸。ω-3多不飽和脂肪酸具有自由基基清除能力,抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞增殖，保護(hù)生物膜參與組織創(chuàng)傷后的愈合過(guò)程。表2各組創(chuàng)面愈合率比較(x±s，％，n＝10)*:與單純燙傷組比較P<0.01本研究結(jié)果顯示淺II度創(chuàng)面燙傷創(chuàng)面應(yīng)用鱘魚魚油后相對(duì)于單純燙傷組創(chuàng)面組織水腫明顯減輕，充血紅腫等炎性反應(yīng)程度降低，病理形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)其能減輕局部組織充血，水腫和白細(xì)胞浸潤(rùn)等表明鱘魚魚油能減輕氧自由基對(duì)組織損傷，有一定抗炎作用，促進(jìn)皮膚組織的修復(fù)功能，對(duì)促進(jìn)燒傷創(chuàng)面愈合有一定意義。以上詳細(xì)描述了本發(fā)明的較佳具體實(shí)施例。應(yīng)當(dāng)理解，本領(lǐng)域的普通技術(shù)無(wú)需創(chuàng)造性勞動(dòng)就可以根據(jù)本發(fā)明的構(gòu)思作出諸多修改和變化。因此，凡本
技術(shù)領(lǐng)域：
中技術(shù)人員依本發(fā)明的構(gòu)思在現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)上通過(guò)邏輯分析、推理或者有限的實(shí)驗(yàn)可以得到的技術(shù)方案，皆應(yīng)在由權(quán)利要求書所確定的保護(hù)范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3