輔助鑒別具有不同胸肌系水力雞的方法及其專用引物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種輔助鑒別具有不同胸肌系水力雞的方法及其專用引物。本發(fā)明首先提供了一種輔助鑒別具有不同胸肌系水力的雞方法，是檢測(cè)待測(cè)雞基于特異SNP的基因型為CC基因型、CT基因型還是TT基因型，CT基因型雞的胸肌系水力高于CC基因型；所述特異SNP為如下(a1)或(a2)：(a1)雞基因組中序列表的序列3所示DNA自5’末端第337位核苷酸；(a2)雞基因組中引物F和引物R的靶序列中自5’末端第337位核苷酸；引物F為序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；引物R為如下(b3)或(b4)：(b3)序列表的序列2所示的單鏈DNA分子。本發(fā)明對(duì)于雞的育種具有重要意義，也對(duì)于進(jìn)一步研究雞的系水力形成機(jī)理具有重要意義。
【專利說(shuō)明】
輔助鑒別具有不同胸肌系水力雞的方法及其專用引物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種輔助鑒別具有不同胸肌系水力雞的方法及其專用引物。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著生活水平的提高、經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人們對(duì)于雞肉的品質(zhì)和口味的要求越來(lái)越高。 我國(guó)作為雞肉的生產(chǎn)和消費(fèi)大國(guó)，在一味追求產(chǎn)肉能力的家禽產(chǎn)業(yè)在發(fā)展的同時(shí)，也面臨 著產(chǎn)肉量增加的同時(shí)所帶來(lái)的肉質(zhì)品質(zhì)下降的觸尬境地。Andersen指出，在肌肉的加工過(guò) 程中，系水力是最重要的肉品質(zhì)指標(biāo)之一。Otto等人也認(rèn)為系水力是衡量肉品質(zhì)的最重要 指標(biāo)。水分損失的同時(shí)會(huì)帶來(lái)可溶性蛋白質(zhì)的損失，Savage等人報(bào)道每毫升流失的水中約 含有112mg的蛋白質(zhì)，同時(shí)水分損失也會(huì)造成可溶性風(fēng)味物質(zhì)的流失。而Luciano等指出水 分流失會(huì)帶走肌肉中的血紅素，對(duì)肉色造成影響。因此，水分的存在對(duì)肌肉的物理形態(tài)、風(fēng) 味、肉色等都具有重要的意義。
[0003] 鑒于系水力對(duì)肌肉肉質(zhì)的影響至關(guān)重要，在家禽育種工作中，希望選擇系水力高 的個(gè)體留種。但雞胸肉的系水力在活體時(shí)難以度量，只能依靠同胞或后裔測(cè)定選種。測(cè)定耗 時(shí)，且資金投入大，難應(yīng)用于育種實(shí)踐。因此分子標(biāo)記的快速發(fā)展，為標(biāo)記輔助選擇的應(yīng)用 提供了有利條件。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種輔助鑒別具有不同胸肌系水力雞的方法及其專用引物。
[0005] 本發(fā)明首先提供了一種輔助鑒別具有不同胸肌系水力的雞方法，是檢測(cè)待測(cè)雞基 于特異SNP的基因型為CC基因型、CT基因型還是TT基因型，CT基因型雞的胸肌系水力高于CC 基因型；
[0006] 所述特異SNP為如下(al)或(a2):
[0007] (al)雞基因組中序列表的序列3所示DNA自5 '末端第337位核苷酸；
[0008] (a2)雞基因組中引物F和引物R的靶序列中自5'末端第337位核苷酸；
[0009] 引物F為如下(bl)或(b2):
[0010] (bl)序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；
[0011] (b2)將序列1經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有 相同功能的DNA分子；
[0012] 弓丨物R為如下(b3)或(b4):
[0013] (b3)序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；
[0014] (b4)將序列2經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有 相同功能的DNA分子。
[0015] 所述方法中，具體可采用引物F和引物R組成的特異引物對(duì)檢測(cè)待測(cè)雞基于特異 SNP的基因型。
[0016]所述方法中，具體可采用如下步驟檢測(cè)待測(cè)雞基于特異SNP的基因型：
[0017] (1)以待測(cè)雞的基因組DNA為模板，用引物F和引物R組成的特異引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò) 增，得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；
[0018] (2)用限制性內(nèi)切酶Bfal酶切步驟(1)得到的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，得到酶切產(chǎn)物;如果酶 切產(chǎn)物只有一種，且為794bp-814bp(具體可為804bp)，待測(cè)雞為CC基因型；如果酶切產(chǎn)物為 兩種，分別為463bp-473bp(具體可為468bp)和331bp-341bp(具體可為336bp)，待測(cè)雞為TT 基因型；如果酶切產(chǎn)物為三種，分別為794bp-814bp (具體可為804bp)、463bp-473bp (具體可 為468bp)和331bp-341bp (具體可為336bp)，待測(cè)雞為CT基因型。
[0019]所述方法中，具體可采用如下步驟檢測(cè)待測(cè)雞基于特異SNP的基因型：
[0020] (1)以待測(cè)雞的基因組DNA為模板，用引物F和引物R組成的特異引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò) 增，得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；
[0021] (2)用限制性內(nèi)切酶Bfal酶切步驟（1)得到的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，然后進(jìn)行瓊脂糖凝膠 電泳;如果僅在750-1000bp之間顯示一條帶(在250-500bp之間不顯示條帶），待測(cè)雞為CC基 因型；如果僅在250-500bp之間顯示一條帶或兩條帶(在750-1000bp之間不顯示條帶），待測(cè) 雞為TT基因型；如果在750-1000bp之間顯示一條帶且在250-500bp之間顯示一條帶或兩條 帶，待測(cè)雞為CT基因型。
[0022]所述瓊脂糖凝膠電泳具體可為3%瓊脂糖凝膠電泳。
[0023]本發(fā)明還保護(hù)特異引物對(duì)甲，由兩條引物組成，其擴(kuò)增產(chǎn)物包括特異DNA分子;所 述特異DNA分子為雞基因組中引物F和引物R的靶序列。
[0024]本發(fā)明還保護(hù)特異引物對(duì)乙，由兩條引物組成，其擴(kuò)增產(chǎn)物包括特異DNA分子;所 述特異DNA分子如序列表的序列3所示。
[0025] 本發(fā)明還保護(hù)特異引物對(duì)丙，由引物F和引物R組成。
[0026] 所述特異引物對(duì)甲、所述特異引物對(duì)乙或所述特異引物對(duì)丙的用途為:輔助鑒別 具有不同胸肌系水力的雞。
[0027] 本發(fā)明還保護(hù)一種試劑盒，所述特異引物對(duì)甲、特異引物對(duì)乙或特異引物對(duì)丙。所 述試劑盒還可包括限制性內(nèi)切酶Bfal。所述試劑盒的用途為:輔助鑒別具有不同胸肌系水 力的雞。
[0028] 本發(fā)明還保護(hù)特異引物對(duì)甲、特異引物對(duì)乙、特異引物對(duì)丙或所述試劑盒的應(yīng)用， 所述應(yīng)用為輔助鑒別具有不同胸肌系水力的雞。
[0029] 本發(fā)明還保護(hù)一種雞的育種方法，是選擇以上任一所述方法鑒別得到的CT基因型 的雞進(jìn)行育種。
[0030] 本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了一個(gè)和雞的胸肌系水力緊密相關(guān)的單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)，并基于該多 態(tài)設(shè)計(jì)了特異性引物對(duì)以及用該引物對(duì)檢測(cè)該多態(tài)的PCR-RFLP方法。基于該單核苷酸多態(tài) 位點(diǎn)的基因型與雞的胸肌系水力顯著相關(guān)。用本發(fā)明的方法，可以快速簡(jiǎn)便的鑒定待測(cè)雞 基于該單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)的基因型。應(yīng)用本發(fā)明的方法可以輔助篩選具有高胸肌系水力的 雞，具有快速、簡(jiǎn)便、可以早期篩選等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)于雞的育種具有重要意義，也對(duì)于進(jìn)一步研究 雞的系水力形成機(jī)理具有重要意義。
【附圖說(shuō)明】
[0031] 圖1為部分PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳圖。
[0032] 圖2為部分Bfal酶切產(chǎn)物的電泳圖。
【具體實(shí)施方式】
[0033] 以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn) 方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為自 常規(guī)生化試劑商店購(gòu)買得到的。以下實(shí)施例中的定量試驗(yàn)，均設(shè)置三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果取平 均值。
[0034] 明星肉雞：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院實(shí)驗(yàn)雞場(chǎng)。壽光雞：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技 學(xué)院實(shí)驗(yàn)雞場(chǎng)。北京油雞：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院實(shí)驗(yàn)雞場(chǎng)。農(nóng)大褐蛋雞：中國(guó)農(nóng)業(yè)大 學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院實(shí)驗(yàn)雞場(chǎng)。藏雞：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院實(shí)驗(yàn)雞場(chǎng)。青腳矮小型隱性白 羽雞：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院實(shí)驗(yàn)雞場(chǎng)。提及明星肉雞的文獻(xiàn):楊永升、鄧學(xué)梅、李寧、 傅衍、朱睦元、吳常信，MC1R是控制雞黑色素形成的候選主效基因，生物化學(xué)與生物物理進(jìn) 展，2004,31(6)，500-505。提及農(nóng)大褐蛋雞的文獻(xiàn):寧中華、吳常信，矮小型褐殼蛋雞育種的 理論與實(shí)踐。
[0035]實(shí)施例1、檢測(cè)雞胸肌系水力的方法的建立及其效果驗(yàn)證
[0036] 試驗(yàn)雞群為(共計(jì)120只）：明星肉雞雞群(40只母雞）、壽光雞雞群(20只母雞）、北 京油雞雞群(20只母雞）、農(nóng)大褐蛋雞雞群(20只母雞)和藏雞雞群(20只母雞）。
[0037] 一、雞胸肌滴水損失的測(cè)定
[0038]分別檢測(cè)試驗(yàn)雞群中的每個(gè)個(gè)體的胸肌的滴水損失率，具體如下：
[0039] 在140日齡時(shí)進(jìn)行屠宰，取其右側(cè)胸大肌約80-100g，稱取重量(失水前的重量W1)， 再將肉樣放入一個(gè)小網(wǎng)兜之中，將裝有肉樣的網(wǎng)兜放入一只塑料袋中并使塑料袋充滿空 氣，然后扎好袋口并懸掛24小時(shí)（網(wǎng)兜需要處于懸空狀態(tài)，不能讓它碰到塑料袋內(nèi)壁），然后 取出肉樣(取出過(guò)程同樣不能使肉樣碰到塑料袋內(nèi)壁)稱取重量(失水后重量W2)。滴水損失 率(DL) = (W1-W2)/W1 X 100%。
[0040]系水力用滴水損失率數(shù)據(jù)體現(xiàn)。滴水損失率越高，表示系水力越低。滴水損失率越 低，表示系水力越高。
[0041 ] 二、基因型分型
[0042]分別檢測(cè)試驗(yàn)雞群中的每個(gè)個(gè)體基于特異SNP的基因型，具體如下：
[0043] 1、取靜脈血，提取基因組DNA。
[0044] 2、以步驟1得到的基因組DNA為模板，采用F和R組成的引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。
[0045] F(序列表中序列1): 5 ' -TGGCATTAAGAGCGTGTAAC-3 ' ；
[0046] R(序列表中序列2) :5'-ATGAATCTCGCTGAGGTGA-3'。
[0047] PCR擴(kuò)增的反應(yīng)條件:95°C預(yù)變性5min;95°C變性3〇8、60°(：退火3〇8、72°(：延伸3〇8， 35個(gè)循環(huán);72°C延伸7min;4°C保存。
[0048]結(jié)果表明，以120個(gè)個(gè)體的基因組DNA為模板均擴(kuò)增得到約804bp的DNA片段。部分 個(gè)體的結(jié)果見圖1，泳道M為DM2000Plus Marker，泳道1~8分別為不同個(gè)體的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。 [0049]將各個(gè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，均為804bp。測(cè)序結(jié)果表明，120個(gè)個(gè)體的PCR擴(kuò)增產(chǎn) 物均如序列表的序列3所示。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中，存在一個(gè)單核苷酸多態(tài)(存在于序列3自5'末 端第337位核苷酸），為C/T變異，將該SNP命名為特異SNP?；谠撎禺怱NP，120個(gè)個(gè)體中，54 只雞為CC基因型，30只雞為TT基因型，36只雞為CT基因型。
[0050] 3、取步驟2得到的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，用限制性內(nèi)切酶Bf al進(jìn)行酶切(限制性內(nèi)切酶Bfa I的識(shí)別序列與切割位點(diǎn)為:C/TAG)，然后進(jìn)行3%瓊脂糖凝膠電泳。
[0051 ] 酶切的反應(yīng)體系:PCR擴(kuò)增產(chǎn)物10yL，BfaI內(nèi)切酶(NEB)0.5此，10 Xbuffer 2此，加 雙蒸水至20此。酶切的反應(yīng)條件:37°C、4~6h。
[0052]結(jié)果表明，120個(gè)個(gè)體的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物酶切后顯示三種帶型。部分個(gè)體的結(jié)果見圖 2，M為DM2000plus; 1~3分別為不同個(gè)體的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的酶切產(chǎn)物。
[0053] 4、步驟2的結(jié)果和步驟3的結(jié)果的聯(lián)合分析
[0054] CC基因型雞的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物只有一種，不能被Bfal酶切，電泳顯示804bp的一條帶 (位于750bp-1000bp的分子量標(biāo)記之間），帶型如圖2的泳道2所示。TT基因型雞的PCR擴(kuò)增產(chǎn) 物只有一種，可以被Bfal酶切，電泳顯示468bp和336bp的兩條帶（由于瓊脂糖檢測(cè)的分辨率 低，兩條帶并未分開，只在250_500bp的分子量標(biāo)記之間出現(xiàn)一條帶），帶型如圖2的泳道3所 示。CT基因型雞的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物有兩種，一種可以被Bfal酶切（電泳顯示468bp和336bp的兩 條帶），另一種不能被Bfal酶切（電泳顯示804bp的一條帶），帶型如圖2的泳道1所示。
[0055]三、關(guān)聯(lián)分析
[0056]對(duì)基因型與滴水損失率進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，結(jié)果如表1所示。
[0057]表1不同基因型之間滴水損失率均值的多重比較結(jié)果
[0059] 注：同行肩注無(wú)相同字母代表差異顯著(p〈0.01)，有相同字母表示差異不顯著(p> 0.05);結(jié)果均為該基因型所有樣本的平均值。
[0060] 不同基因型的效應(yīng)差異顯著。CC基因型的滴水損失率顯著高于CT基因型（P〈 0.01)，而TT基因型的滴水損失率與CC基因型和CT基因型的差異不顯著（P>0.05)。結(jié)果表 明，CT基因型個(gè)體的胸肌系水力大于CC基因型個(gè)體。
[0061 ]實(shí)施例2、壽光雞母雞胸肌系水力與SNP基因型關(guān)聯(lián)的檢驗(yàn) [0062]試驗(yàn)雞群為(共計(jì)20只）：壽光雞母雞。
[0063] 一、雞胸肌滴水損失的測(cè)定
[0064] 分別檢測(cè)試驗(yàn)雞群中的每個(gè)個(gè)體的胸肌的滴水損失率，方法同實(shí)施例1的步驟一。
[0065] 二、基因型分型
[0066]分別檢測(cè)試驗(yàn)雞群中的每個(gè)個(gè)體基于特異SNP的基因型，具體如下：
[0067] 1、取靜脈血，提取基因組DNA。
[0068] 2、同實(shí)施例1的步驟二的2。
[0069] 結(jié)果表明，以20個(gè)個(gè)體的基因組DNA為模板均擴(kuò)增得到約804bp的DNA片段。
[0070]將各個(gè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，均為804bp。測(cè)序結(jié)果表明，20個(gè)個(gè)體的PCR擴(kuò)增產(chǎn) 物均如序列表的序列3所示?；谒鎏禺怱NP，20個(gè)個(gè)體中，5只雞為CC基因型，5只雞為TT 基因型，10只雞為CT基因型。
[0071] 3、同實(shí)施例1的步驟二的3。
[0072] 結(jié)果表明：CC基因型雞的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物只有一種，不能被Bfal酶切，電泳顯示804bp 的一條帶(位于750bp-1000bp的分子量標(biāo)記之間）；TT基因型雞的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物只有一種，可 以被Bfal酶切，電泳顯示468bp和336bp的兩條帶（由于瓊脂糖檢測(cè)的分辨率低，兩條帶并未 分開，只在250-500bp的分子量標(biāo)記之間出現(xiàn)一條帶）；CT基因型雞的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物有兩種， 一種可以被Bfal酶切（電泳顯示468bp和336bp的兩條帶），另一種不能被Bfal酶切（電泳顯 示804bp的一條帶）。
[0073]三、關(guān)聯(lián)分析
[0074]對(duì)基因型與滴水損失率進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，結(jié)果如表2所示。
[0075]表2壽光雞母雞群體中不同基因型之間滴水損失率均值的多重比較結(jié)果
[0077]注：同行肩注無(wú)相同字母代表差異顯著(p〈0.05)，有相同字母表示差異不顯著(p> 0.05);結(jié)果均為該基因型所有樣本的平均值。
[0078]在壽光雞母雞群體中所述特異SNP的不同基因型對(duì)胸肌系水力的效應(yīng)差異顯著。 CC基因型的滴水損失率顯著高于CT基因型(？〈0.05)，1'1'基因型的滴水損失率與0：基因型和 CT基因型的差異不顯著(P>0.05)。結(jié)果表明，可以在群體中選擇CT型個(gè)體，減少胸肌的滴水 損失，即提高胸肌的系水力，獲得更好的胸肌品質(zhì)。
[0079]實(shí)施例3、青腳矮小型隱性白羽雞公雞胸肌系水力與SNP基因型關(guān)聯(lián)的檢驗(yàn) [0080]試驗(yàn)雞群為(共計(jì)30只）：青腳矮小型隱性白羽雞公雞。
[0081] -、雞胸肌滴水損失的測(cè)定
[0082] 分別檢測(cè)試驗(yàn)雞群中的每個(gè)個(gè)體的胸肌的滴水損失率，方法同實(shí)施例1的步驟一。 [0083] 二、基因型分型
[0084]分別檢測(cè)試驗(yàn)雞群中的每個(gè)個(gè)體基于特異SNP的基因型，具體如下：
[0085] 1、取靜脈血，提取基因組DNA。
[0086] 2、同實(shí)施例1的步驟二的2。
[0087]結(jié)果表明，以30個(gè)個(gè)體的基因組DNA為模板均擴(kuò)增得到約804bp的DNA片段。
[0088]將各個(gè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，均為804bp。測(cè)序結(jié)果表明，30個(gè)個(gè)體的PCR擴(kuò)增產(chǎn) 物均如序列表的序列3所示?；谒鎏禺怱NP，30個(gè)個(gè)體中，10只雞為CC基因型，10只雞為 TT基因型，10只雞為CT基因型。
[0089] 3、同實(shí)施例1的步驟二的3。
[0090] 結(jié)果表明：CC基因型雞的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物只有一種，不能被Bfal酶切，電泳顯示804bp 的一條帶(位于750bp-1000bp的分子量標(biāo)記之間）；TT基因型雞的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物只有一種，可 以被Bfal酶切，電泳顯示468bp和336bp的兩條帶（由于瓊脂糖檢測(cè)的分辨率低，兩條帶并未 分開，只在250-500bp的分子量標(biāo)記之間出現(xiàn)一條帶）；CT基因型雞的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物有兩種， 一種可以被Bfal酶切（電泳顯示468bp和336bp的兩條帶），另一種不能被Bfal酶切（電泳顯 示804bp的一條帶）。
[0091] 三、關(guān)聯(lián)分析
[0092] 對(duì)基因型與滴水損失率進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，結(jié)果如表3所示。
[0093] 表3青腳矮小型隱性白羽雞公雞群體不同基因型之間滴水損失率均值的多重比較 結(jié)果
[0095]注：同行肩注無(wú)相同字母代表差異顯著(p〈0.05)，有相同字母表示差異不顯著(p> 0.05);結(jié)果均為該基因型所有樣本的平均值。
[0096]在青腳矮小型隱性白羽雞公雞群體中所述SNP的不同基因型對(duì)胸肌系水力的效應(yīng) 差異顯著。CC基因型的滴水損失率顯著高于CT基因型(P〈0.05)，TT基因型的滴水損失率與 CC基因型和CT基因型的差異不顯著(P>0.05)。結(jié)果表明，可以在群體中選擇CT型個(gè)體，減少 胸肌的滴水損失，即提高胸肌的系水力，獲得更好的胸肌品質(zhì)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種輔助鑒別具有不同胸肌系水力的雞方法，是檢測(cè)待測(cè)雞基于特異SNP的基因型 為CC基因型、CT基因型還是TT基因型，CT基因型雞的胸肌系水力高于CC基因型； 所述特異SNP為如下(a 1)或(a2): (al)雞基因組中序列表的序列3所示DNA自5 '末端第337位核苷酸； (a2)雞基因組中引物F和引物R的靶序列中自5 '末端第337位核苷酸； 所述引物F為如下(bl)或(b2): (bl)序列表的序列1所示的單鏈DNA分子； (b2)將序列1經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有相同 功能的DNA分子； 所述引物R為如下(b3)或(b4): (b3)序列表的序列2所示的單鏈DNA分子； (b4)將序列2經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相同 功能的DNA分子。2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述方法中，采用所述引物F和所述引物R組 成的特異引物對(duì)檢測(cè)待測(cè)雞基于所述特異SNP的基因型。3. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述方法中，采用如下步驟檢測(cè)待測(cè)雞基于 所述特異SNP的基因型： (1) 以待測(cè)雞的基因組DNA為模板，用所述引物F和所述引物R組成的特異引物對(duì)進(jìn)行 PCR擴(kuò)增，得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物； (2) 用限制性內(nèi)切酶Bfal酶切PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，得到酶切產(chǎn)物;如果酶切產(chǎn)物只有一種，且 為794bp-814bp，待測(cè)雞為CC基因型；如果酶切產(chǎn)物為兩種，分別為463bp-473bp和331bp-341bp，待測(cè)雞為TT基因型；如果酶切產(chǎn)物為三種，分別為794bp-814bp、463bp-473bp和 331bp-341bp，待測(cè)雞為CT基因型。4. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述方法中，采用如下步驟檢測(cè)待測(cè)雞基于 所述特異SNP的基因型： (1) 以待測(cè)雞的基因組DNA為模板，用所述引物F和所述引物R組成的特異引物對(duì)進(jìn)行 PCR擴(kuò)增，得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物； (2) 用限制性內(nèi)切酶Bfal酶切PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，然后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳；如果僅在750-lOOObp之間顯示一條帶，待測(cè)雞為CC基因型；如果僅在250-500bp之間顯示一條帶，待測(cè)雞 為TT基因型；如果在750-1000bp之間顯示一條帶且在250-500bp之間顯示一條帶，待測(cè)雞為 CT基因型。5. 特異引物對(duì)甲，由兩條引物組成，其擴(kuò)增產(chǎn)物包括特異DNA分子;所述特異DNA分子為 雞基因組中引物F和引物R的靶序列； 所述引物F為如下(bl)或(b2): (bl)序列表的序列1所示的單鏈DNA分子； (b2)將序列1經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有相同 功能的DNA分子； 所述引物R為如下(b3)或(b4): (b3)序列表的序列2所示的單鏈DNA分子； (b4)將序列2經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相同 功能的DNA分子。6. 特異引物對(duì)乙，由兩條引物組成，其擴(kuò)增產(chǎn)物包括特異DNA分子;所述特異DNA分子如 序列表的序列3所示。7. 特異引物對(duì)丙，由引物F和引物R組成； 所述引物F為如下(bl)或(b2): (bl)序列表的序列1所示的單鏈DNA分子； (b2)將序列1經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有相同 功能的DNA分子； 所述引物R為如下(b3)或(b4): (b3)序列表的序列2所示的單鏈DNA分子； (b4)將序列2經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相同 功能的DNA分子。8. -種試劑盒，包括權(quán)利要求5所述特異引物對(duì)甲、權(quán)利要求6所述所述特異引物對(duì)乙 或權(quán)利要求7所述所述特異引物對(duì)丙。9. 權(quán)利要求5所述特異引物對(duì)甲、權(quán)利要求6所述所述特異引物對(duì)乙、權(quán)利要求7或權(quán)利 要求8所述試劑盒的應(yīng)用，所述應(yīng)用為輔助鑒別具有不同胸肌系水力的雞。10. -種雞的育種方法，包括如下步驟:選擇權(quán)利要求1至4中任一所述方法鑒別得到的 CT基因型的雞進(jìn)行育種。
【文檔編號(hào)】C12N15/11GK105821142SQ201610347688
【公開日】2016年8月3日
【申請(qǐng)日】2016年5月24日
【發(fā)明人】鄧學(xué)梅, 葛雅瓊, 秦昊, 高強(qiáng)
【申請(qǐng)人】中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)