一種雞傳染性法氏囊病毒稀釋液及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于獸用生物制品技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種雞傳染性法氏囊病毒稀釋液及 其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 雞傳染性法氏囊?。↖nfection bursal disease, IBD)是由傳染性法氏囊病毒 (Infection bursal disease virus, I抓V)引起危害幼雞的一種急性、高度接觸性傳染 病。I抓V主要感染雞和火雞，易發(fā)生于3-12周齡，該病毒在法氏囊的淋己細(xì)胞內(nèi)增殖，并且 對其它免疫器官造成不同程度的損傷，最終會導(dǎo)致雞的法氏囊萎縮而引起免疫抑制。雞傳 染性法氏囊病突然發(fā)生，無明顯的季節(jié)性，傳播非常迅速，常通過被污染的飼料、飲水、糞 便、雞舍用具、人員衣服等途徑而傳播，潛伏期為1-5天，出現(xiàn)癥狀后第3天開始死亡，4-6天 是死亡高峰期，W后逐漸停止死亡，發(fā)病率可達(dá)90%W上，死亡率高達(dá)10%-50%。本病在臨床 上表現(xiàn)為體重減輕、生長緩慢和骨骼肌出血等癥狀，衛(wèi)生條件較差的情況下常伴發(fā)其他疾 病，死亡率進(jìn)一步提高，雞個(gè)體小，抗病力差，一旦發(fā)生疫病，則傳染快，死亡率高，死亡率達(dá) 80%W上，損失更大，給養(yǎng)雞業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。除此之外，還會降低發(fā)病后的雞群對 新城疫疫苗、馬立克氏病疫苗免疫效果，能夠與大腸桿菌病、新城疫、雞支原體病混合感染， 死亡率會大大提高。IBDV在外界環(huán)境中極為穩(wěn)定，能夠在雞舍內(nèi)長期存在，特別耐熱，60°C 90 min病毒不被滅活；I抓V的毒株型也在不斷的變異，由八十年代之前的弱毒株變?yōu)槌瑥?qiáng) 毒株和變異毒株，從而使經(jīng)典疫苗不能抵抗變異毒株的攻擊。隨著集約化養(yǎng)禽業(yè)的興起和 國際貿(mào)易的增加，禽病流行日趨嚴(yán)重，造成家禽的高死亡率，嚴(yán)重制約著養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展，為 世界養(yǎng)雞業(yè)造成嚴(yán)重的損失，危及經(jīng)濟(jì)發(fā)展、食品安全和社會穩(wěn)定。
[0003] 當(dāng)前國內(nèi)生產(chǎn)的雞傳染性法氏囊活疫苗基本都是采用雞胚接種病毒后進(jìn)行增殖， 收獲感染胎兒經(jīng)組織研磨制備而成。因雞傳染性法氏囊病毒收獲的組織為胎兒，收獲時(shí)胎 兒發(fā)育情況嚴(yán)重影響半成品質(zhì)量，發(fā)育過緩胎兒較小，產(chǎn)量較低;胎兒發(fā)育較快則會出現(xiàn)較 多羽毛組織，降低半成品質(zhì)量。
[0004] 本發(fā)明采用獨(dú)特的病毒稀釋液將接種毒種進(jìn)行稀釋處理后，再接種至低日齡雞胚 上，感染胎兒后收獲感染胚體。解決了雞傳染性法氏囊病毒接種胎兒后胚體發(fā)育的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明的目的在于設(shè)計(jì)提供一種雞傳染性法氏囊病毒 稀釋液及其制備方法的技術(shù)方案。
[0006] 所述的一種雞傳染性法氏囊病毒稀釋液，其特征在于每1000ml憐酸緩沖液中含有 W下重量配比的組分:氨基酸組合1~2g、維生素組合1~3g、亞砸酸鋼10~20mg和復(fù)方中藥 多糖10~20g，所述的氨基酸組合包括脫氨酸、鄉(xiāng)氨酸和異亮氨酸，所述的維生素組合包括 維生素 B1、維生素 C和維生素 D，所述的復(fù)方中藥多糖由旋復(fù)花、白芥子、白附子和澤蘭提取 得到。
[0007] 所述的一種雞傳染性法氏囊病毒稀釋液，其特征在于該稀釋液的抑為6.2~7.2。
[0008] 所述的一種雞傳染性法氏囊病毒稀釋液，其特征在于所述的憐酸緩沖液由氯化鋼 6~lOg，氯化鐘0.05~0.5g，憐酸氨二鋼1~1.2g，憐酸二氨鐘0.05~0.5g，氯化巧0.05~ 0.2g和含6個(gè)結(jié)晶水的氯化儀0.05~0.2g溶于1000ml雙蒸水中得到。
[0009] 所述的一種雞傳染性法氏囊病毒稀釋液，其特征在于所述的每1000ml憐酸緩沖液 中含有W下重量配比的組分:氨基酸組合1.2~1.6g、維生素組合1.5~2.5g、亞砸酸鋼14~ 16mg和復(fù)方中藥多糖14~16邑。
[0010] 所述的一種雞傳染性法氏囊病毒稀釋液，其特征在于所述的氨基酸組合含有W下 重量百分比含量的氨基酸:脫氨酸20~50%、鄉(xiāng)氨酸20~40%和異亮氨酸30~60%，優(yōu)選為脫 氨酸20~35%、鄉(xiāng)氨酸25~35%和異亮氨酸氨酸40~50〇/〇。
[0011] 所述的一種雞傳染性法氏囊病毒稀釋液，其特征在于所述的維生素組合含有W下 重量百分比含量的維生素:維生素 B1 15~40%、維生素 C 20~50%和維生素 D 20~40%，優(yōu)選 為維生素 B1 20~35%、維生素 C 30~45%和維生素 D 30~35〇/〇。
[0012] 所述的一種雞傳染性法氏囊病毒稀釋液，其特征在于所述的復(fù)方中藥多糖按W下 步驟制得： a、 按旋復(fù)花20~40份、白芥子5~20份、白附子10~30份、澤蘭5~20份稱取各中藥原 料，切碎、洗凈后用冷水浸泡過夜，再加入原料重量15倍的純化水，水浴至90°C，并保持在90 心熬制2小時(shí)，熬制過程中每10分鐘攬拌一次； b、 棄去a中藥渣，收集藥液，室溫冷卻后經(jīng)100(K)rpm離屯、10分鐘，棄去沉淀，收集上清； C、將b中上清進(jìn)行醇沉，沉淀得到粗制中藥多糖； d、 用滅菌純化水洗涂C中粗制中藥多糖，洗涂后用20倍量的42°C滅菌純化水進(jìn)行溶解， 溶解后，按0.5%比例加入活性炭4°C吸附過夜，吸附后經(jīng)1000化pm離屯、10分鐘，棄去沉淀，收 集上清； e、 將d中上清液進(jìn)行10倍濃縮，制得中藥多糖濃縮液； f、 將e中中藥多糖濃縮液進(jìn)行真空冷凍干燥制得復(fù)合中藥多糖凍干粉。
[0013] 所述的一種雞傳染性法氏囊病毒稀釋液制備方法，其特征在于包括W下工藝步 驟： 1) 憐酸緩沖溶液的配制 按氯化鋼6~lOg，氯化鐘0.05~0.5g，憐酸氨二鋼1~1.2g，憐酸二氨鐘0.05~0.5g，氯 化巧0.05~0.2g和含6個(gè)結(jié)晶水的氯化儀0.05~0.2g溶于1000ml雙蒸水中，無菌條件下通 過0.22皿濾膜，過濾除菌備用； 2) 復(fù)方中藥多糖的制備 a、 按旋復(fù)花20~40份、白芥子5~20份、白附子10~30份、澤蘭5~20份稱取各原料，切 碎、洗凈后用冷水浸泡過夜，再加入原料重量15倍的純化水，水浴至90°C，并保持在90°C，熬 審IJ2小時(shí)，熬制過程中每10分鐘攬拌一次； b、 棄去a中藥渣，收集藥液，室溫冷卻后經(jīng)100(K)rpm離屯、10分鐘，棄去沉淀，收集上清； C、將b中上清進(jìn)行醇沉，沉淀得到粗制中藥多糖； d、用滅菌純化水洗涂C中粗制中藥多糖，洗涂后用20倍量的42°C滅菌純化水進(jìn)行溶解， 溶解后，按0.5%比例加入活性炭4°C吸附過夜，吸附后經(jīng)1000化pm離屯、10分鐘，棄去沉淀，收 集上清； e、 將d中上清液進(jìn)行10倍濃縮，制得中藥多糖濃縮液； f、 將e中中藥多糖濃縮液進(jìn)行真空冷凍干燥制得復(fù)合中藥多糖凍干粉； 3)接種雞胚用病毒稀釋液配制:按氨基酸組合1~2g、維生素組合1~3g、亞砸酸鋼10~ 20mg和復(fù)方中藥多糖10~20g，溶解于步驟1)制得的憐酸緩沖溶液中，充分混勻，用酸或堿 調(diào)節(jié)抑至6.2~7.2之間，無菌條件下通過0.22WI1濾膜，過濾除菌后置4°C保存?zhèn)溆谩?br>[0014] 所述的一種雞傳染性法氏囊病毒稀釋液制備方法，其特征在于所述的步驟3)中氨 基酸組合含有W下重量百分比含量的氨基酸:脫氨酸20~50%、鄉(xiāng)氨酸20~40%和異亮氨酸 30~60%，優(yōu)選為脫氨酸20~35%、鄉(xiāng)氨酸25~35%和異亮氨酸40~50%。
[0015] 所述的一種雞傳染性法氏囊病毒稀釋液制備方法，其特征在于所述的步驟3)中維 生素組合含有W下重量百分比含量的維生素:維生素 B1 15~40%、維生素 C 20~50%和維生 素 D 20~40%，優(yōu)選為維生素 B1 20~35%、維生素 C 30~45%和維生素 D 30~35%。
[0016] 本發(fā)明的有益效果是： (1)本發(fā)明所制備的稀釋液，在接種雞胚時(shí)能夠同時(shí)提供給雞胚必需的營養(yǎng)，可解決雞 胚低日齡培養(yǎng)難題。
[0017] (2)本發(fā)明所制備的稀釋液，可接種低日齡雞胚，因低日齡雞胚組織分化程度較 低，與現(xiàn)有技術(shù)相比，病毒更易在雞胚組織中增殖。
[0018] (3)本發(fā)明所制備的稀釋液接種雞胚后，可提高雞胚耐受病毒的能力，延長死亡時(shí) 間，即延長了病毒增殖時(shí)間，與現(xiàn)有技術(shù)相比提高了病毒滴度5倍W上。
【具體實(shí)施方式】
[0019] 為了使本發(fā)明更加容易理解，下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解， 運(yùn)些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。
[0020] 實(shí)施例1 一種雞傳染性法氏囊病毒稀釋液，該病毒稀釋液每1000ml憐酸緩沖液中含有:氨基酸 組合Ig(其中脫氨酸〇.2g、鄉(xiāng)氨酸0.4g、異亮氨酸0.4g)、維生素組合2g(其中維生素 B1 〇.5邑、維生素0 0.9邑、維生素0 0.6邑）、復(fù)方中藥多糖12邑、亞砸酸鋼15111邑，該稀釋液抑為6.5。 [0021 ] -種雞傳染性法氏囊病毒稀釋液的制備方法，其步驟是： (1)憐酸緩沖溶液的配制:按上述憐酸鹽緩沖液配方準(zhǔn)確稱取氯化鋼8g，氯化鐘0.2g， 憐酸氨二鋼1.15g，憐酸二氨鐘0.2g，氯化巧0.1 g，含6個(gè)結(jié)晶水的氯化儀0.1 g溶于1000ml雙 蒸水中，無菌條件下通過0.22皿濾膜，過濾除菌備用。
[0022] (2)復(fù)方中藥多糖的制備 a、按旋復(fù)花30份、白芥子15份、白附子20份和澤蘭15份稱取所述中藥原料，切碎、洗凈 后用冷水浸泡過夜，再加入原料重量15倍的純化水，水浴至90°C，并保持在90°C，熬制2小 時(shí)，熬制過程中每10分鐘攬拌一次。
[0023] b、棄去a中藥渣，收集藥液，室溫冷卻后經(jīng)1000化pm離屯、10分鐘，棄去沉淀，收集上 清。
[0024] C、采用公知的醇沉法，將b中上清進(jìn)行醇沉，沉淀為粗制中藥多糖。
[0025] d、用滅菌純化水洗涂C中粗制多糖，洗涂后用20倍量的42°C滅菌純化水進(jìn)行溶解， 溶解后，按ο. 5%比例加入活性炭4°C吸附過夜，吸附后經(jīng)1000化pm離屯、10分鐘，棄去沉淀，收 集上清。
[0026] e、采用公知的真空減壓濃縮法，將d中上清液進(jìn)行10倍濃縮，制得中藥多糖濃縮 液。
[0027] f、采用公知的真空冷凍干燥法，將e中藥多糖濃縮液進(jìn)行真空冷凍干燥制得復(fù)合 中藥多糖凍干粉。
[00%] (3)接種雞胚用病毒稀釋液配制:按上述優(yōu)選稀釋液組分?jǐn)?shù)準(zhǔn)確稱取脫氨酸0.2g、 鄉(xiāng)氨酸〇.4g、異亮氨酸0.4g、維生素 B1 0.5g、維生素 C 0.9g、維生素 D 0.6g、復(fù)方中藥多糖 12g、亞砸酸鋼15mg，按比例溶解于步驟（1)中的1000ml憐酸緩沖溶液中，充分混勻