c冷凍地，開啟真空至15化W下進(jìn)行升華，并升溫 至-10°c，在此溫度保持真空lOh，隨后繼續(xù)升溫到0°C并保持真空化。最后升溫至30°C保持 真空化，打粉包裝。 表2實(shí)施例7的HPLC數(shù)據(jù)表
[0041 ] 實(shí)施例8 實(shí)施例8與實(shí)施例7的區(qū)別在于： 選用按照實(shí)施例2制備的培養(yǎng)基。
[0042] 步驟1中，加入發(fā)酵液體積的0.5 %的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12%的鹽酸進(jìn)行成鹽;步驟2中， 陶瓷膜過濾，選用多通道陶瓷膜，通道數(shù)為8;步驟3、7和14中，壓力控制在2MPa，濾液溫度控 制在21°C，納濾的流速控制在320LA，納濾的濃縮體積倍數(shù)為4倍，納濾結(jié)束，采用純化水頂 洗8min;步驟4中，經(jīng)過一次納濾后進(jìn)入草酸沉淀罐，再加入一次納濾得到的濃縮液重量的 0.002 %的固體草酸鋼，攬拌時間30min后靜置;步驟8和15中，進(jìn)入一次結(jié)晶罐中進(jìn)行一次 結(jié)晶，加入二次納濾得到的濃縮液的重量10倍的乙酸，起始溫度控制為37°C，終點(diǎn)溫度為5 °C，降溫速度為2°C/min;步驟10中，待一次結(jié)晶體的溶液沸騰時加入一次結(jié)晶體重量的4% 的活性炭進(jìn)行脫色30min;步驟13中，超濾時，控制壓力O.lMPa;步驟17中，加入二次結(jié)晶體 重量9倍的去離子水。
[0043] 實(shí)施例9 實(shí)施例9與實(shí)施例7的區(qū)別在于： 選用按照實(shí)施例3制備的培養(yǎng)基。
[0044] 步驟1中，加入發(fā)酵液體積的0.2%的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為16%的鹽酸進(jìn)行成鹽;步驟2中， 陶瓷膜過濾，選用多通道陶瓷膜，通道數(shù)為12;步驟3、7和14中，壓力控制在2MPa，濾液溫度 控制在21°C，納濾的流速控制在320LA;納濾的濃縮體積倍數(shù)為4倍，納濾結(jié)束，采用純化水 頂洗8min;步驟4中，經(jīng)過一次納濾后進(jìn)入草酸沉淀罐，再加入一次納濾得到的濃縮液重量 的0.002%的固體草酸鋼，攬拌時間30min后靜置;步驟8和15中，進(jìn)入一次結(jié)晶罐中進(jìn)行一 次結(jié)晶，加入二次納濾得到的濃縮液的重量10倍的乙酸，起始溫度控制為37°C，終點(diǎn)溫度為 5°C，降溫速度為2°C/min;步驟10中，待一次結(jié)晶體的溶液沸騰時加入一次結(jié)晶體重量的 4%的活性炭進(jìn)行脫色30min;步驟13中，超濾時，控制壓力O.lMPa;步驟17中，加入二次結(jié)晶 體重量9倍的去離子水。 表3實(shí)施例9的HPLC數(shù)據(jù)表
[004引實(shí)施例10 實(shí)施例10與實(shí)施例7的區(qū)別在于： 選用按照實(shí)施例4制備的培養(yǎng)基。
[0046] 步驟1中，加入發(fā)酵液體積的0.3%的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為18%的鹽酸進(jìn)行成鹽;步驟2中， 陶瓷膜過濾，選用多通道陶瓷膜，通道數(shù)為14;步驟3、7和14中，壓力控制在2. IMPa，濾液溫 度控制在22°C，納濾的流速控制在36化A;納濾的濃縮體積倍數(shù)為5倍，納濾結(jié)束，采用純化 水頂洗8min;步驟4中，經(jīng)過一次納濾后進(jìn)入草酸沉淀罐，再加入一次納濾得到的濃縮液重 量的0.001%的固體草酸鋼，攬拌時間35min后靜置;步驟8和15中，進(jìn)入一次結(jié)晶罐中進(jìn)行 一次結(jié)晶，加入二次納濾得到的濃縮液的重量10倍的乙醇，起始溫度控制為40°C，終點(diǎn)溫度 為〇°C，降溫速度為rC/min;步驟10中，待一次結(jié)晶體的溶液沸騰時加入一次結(jié)晶體重量的 5%的活性炭進(jìn)行脫色30min;步驟13中，超濾時，控制壓力0.2MPa;步驟17中，加入二次結(jié)晶 體重量10倍的去離子水。
[0047] 實(shí)施例11 實(shí)施例11與實(shí)施例7的區(qū)別在于： 選用按照實(shí)施例5制備的培養(yǎng)基。
[0048] 步驟1中，加入發(fā)酵液體積的0.4%的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%的鹽酸進(jìn)行成鹽;步驟2中， 陶瓷膜過濾，選用多通道陶瓷膜，通道數(shù)為16;步驟3、7和14中，壓力控制在2.2MPa，濾液溫 度控制在23°C，納濾的流速控制在34化A;納濾的濃縮體積倍數(shù)為4倍，納濾結(jié)束，采用純化 水頂洗9min;步驟4中，經(jīng)過一次納濾后進(jìn)入草酸沉淀罐，再加入一次納濾得到的濃縮液重 量的0.003%的固體草酸鋼，攬拌時間45min后靜置;步驟8和15中，進(jìn)入一次結(jié)晶罐中進(jìn)行 一次結(jié)晶，加入二次納濾得到的濃縮液的重量10倍的乙酸，起始溫度控制為43°C，終點(diǎn)溫度 為12°C，降溫速度為2°C/min;步驟10中，待一次結(jié)晶體的溶液沸騰時加入一次結(jié)晶體重量 的4%的活性炭進(jìn)行脫色30min;步驟13中，超濾時，控制壓力ο. IMPa;步驟17中，加入二次結(jié) 晶體重量11倍的去離子水。 表4實(shí)施例11的HPLC數(shù)據(jù)表
[0049] 實(shí)施例12 實(shí)施例12與實(shí)施例7的區(qū)別在于： 選用按照實(shí)施例6制備的培養(yǎng)基。
[0050] 步驟1中，加入發(fā)酵液體積的0.2%的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為16%的鹽酸進(jìn)行成鹽;步驟2中， 陶瓷膜過濾，選用多通道陶瓷膜，通道數(shù)為12;步驟3、7和14中，壓力控制在2MPa，濾液溫度 控制在21°C，納濾的流速控制在320LA;納濾的濃縮體積倍數(shù)為4倍，納濾結(jié)束，采用純化水 頂洗8min;步驟4中，經(jīng)過一次納濾后進(jìn)入草酸沉淀罐，再加入一次納濾得到的濃縮液重量 的0.002%的固體草酸鋼，攬拌時間30min后靜置;步驟8和15中，進(jìn)入一次結(jié)晶罐中進(jìn)行一 次結(jié)晶，加入二次納濾得到的濃縮液的重量10倍的乙酸，起始溫度控制為37°C，終點(diǎn)溫度為 5°C，降溫速度為2°C/min;步驟10中，待一次結(jié)晶體的溶液沸騰時加入一次結(jié)晶體重量的 4%的活性炭進(jìn)行脫色30min;步驟13中，超濾時，控制壓力O.lMPa;步驟17中，加入二次結(jié)晶 體重量9倍的去離子水。 表5對比例1-5數(shù)據(jù)表
表6實(shí)施例7-11和對比例1-5的收率和純度表
[0051 ] 注:說明書中只給出實(shí)施例7、9和11的HPLC表格，其余實(shí)施例8、1 ο和12和對比例1 -5的HPLC表格與之類似，此處便不詳細(xì)描述，只給出最終的純度數(shù)值。
[0052] 從表6中可W看出： 對比實(shí)施例7-11和對比例1和2可得，當(dāng)各組分的用量多于或者少于本發(fā)明給出的用量 范圍時，在收率和純度上都有所降低，但多于本發(fā)明給出的用量范圍時的收率和純度均優(yōu) 于少于本發(fā)明給出的用量范圍時的收率和純度。
[0053] 對比實(shí)施例7-11和對比例3-5可得，缺少pH調(diào)節(jié)劑和無機(jī)鹽均會降低產(chǎn)品的收率 和純度，且同時缺少抑調(diào)節(jié)劑和無機(jī)鹽對收率和純度的影響要比單獨(dú)缺少抑調(diào)節(jié)劑或者無 機(jī)鹽對收率和純度的影響要大。同時可W看出，缺少無機(jī)鹽對收率的影響大于缺少pH調(diào)節(jié) 劑對收率的影響，缺少無機(jī)鹽對純度的影響小于缺少抑調(diào)節(jié)劑對純度的影響。
[0054] 對比實(shí)施例7-11和對比例6可得，雖然硝酸錠中的氮含量高于乙酸錠，但是將乙酸 錠換成硝酸錠卻導(dǎo)致收率和純度均有所下降，可見乙酸錠在本發(fā)明中起到的作用不僅僅是 作為氮源。
[0055] 對比實(shí)施例7-11和實(shí)施例12可得，雖然實(shí)施例12對純度和收率有一定的提升作 用，但是當(dāng)加入抑調(diào)節(jié)劑和氨基酸絡(luò)合物后能夠進(jìn)一步提升純度和收率。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種萬古霉素培養(yǎng)基，其特征是:包括如下重量份數(shù)的組分： 碳源 1.5-5份 氮源 0.05-0.15份 無機(jī)鹽 0.15-0.45份 水 90-110份 所述無機(jī)鹽包括硫酸鎳、硝酸鐵和氯化鈉，按照重量份，硫酸鎳:硝酸鐵:氯化鈉=〇. 5-2:0·5_2:1〇2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的萬古霉素培養(yǎng)基，其特征是:還包括重量份為0.04-0.06份的 pH調(diào)節(jié)劑，所述pH調(diào)節(jié)劑包括磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉，按照摩爾比，磷酸二氫鈉:磷酸氫 二鈉=0.15-0.19:1。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的萬古霉素培養(yǎng)基，其特征是:還包括甘氨酸、色氨酸、酪氨酸組 成的重量份為〇. 05-0.1份的氨基酸復(fù)合物，按照重量份，甘氨酸:色氨酸:酪氨酸=3-8:1:3-5〇4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的萬古霉素培養(yǎng)基，其特征是:所述碳源選自可溶性淀粉、葡萄 糖、麥芽糖中的一種。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的萬古霉素培養(yǎng)基，其特征是:所述氮源由尿素、棉籽餅粉和乙 酸銨混合而成，按照重量份，尿素:棉籽餅粉:乙酸銨=3-5:1:2-4。6. -種應(yīng)用萬古霉素培養(yǎng)基的萬古霉素制備方法，其特征是:包括如下步驟:搖瓶種子 接種、種子罐萬古霉素培養(yǎng)基培養(yǎng)、發(fā)酵罐萬古霉素培養(yǎng)基培養(yǎng)、預(yù)發(fā)酵液預(yù)處理、陶瓷膜 過濾、一次納濾、草酸沉淀、一次板框過濾、一次過柱純化、二次納濾、一次結(jié)晶、二次板框過 濾、活性炭脫色、脫色板框過濾、二次過柱純化、超濾、三次納濾、二次結(jié)晶、真空抽濾、晶體 溶解、冷凍干燥、打粉包裝，其中 ① 發(fā)酵液的預(yù)處理：按照發(fā)酵液體積的0.1-0.5%往萬古霉素發(fā)酵液加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 10-20%的鹽酸進(jìn)行成鹽，攪拌30min得到預(yù)處理液； ② 草酸沉淀:將一次納濾得到的濃縮液加入草酸沉淀罐，再加入一次納濾得到的濃縮 液重量的0.001-0.004%的固體草酸鈉，攪拌30-50min后靜置； ③ 活性炭脫色:將二次板框過濾得到的一次結(jié)晶體加入活性炭脫色罐，加入去離子水 溶解，攪拌并加熱，待一次結(jié)晶體的溶液沸騰時加入一次結(jié)晶體重量的3-6%的活性炭進(jìn)行 脫色30min。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的萬古霉素制備方法，其特征是:所述板框過濾中，過濾介質(zhì)為 濾板，所述濾板上預(yù)涂有2mm的助濾劑，所述助濾劑為活性炭。8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的萬古霉素制備方法，其特征是:所述一次結(jié)晶和二次結(jié)晶過程 中均加入晶體重量10倍的有機(jī)溶劑進(jìn)行結(jié)晶，所述有機(jī)溶劑選用乙醇、丙酮和乙醚中的其 中一種，所述一次結(jié)晶和二次結(jié)晶的起始溫度為35-45°C，終點(diǎn)溫度為0_15°C，降溫速度為 l-3°C/min〇9. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的萬古霉素制備方法，其特征是:所述晶體溶解步驟為:將真空 抽濾得到的二次結(jié)晶體加入溶解罐中，加入二次結(jié)晶體重量8-12倍的去離子水，攪拌30min 至二次結(jié)晶體完全溶解形成溶解液。10. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的萬古霉素制備方法，其特征是:所述一次過柱純化采用SP825 樹脂，所述二次過柱純化采用HP20SS樹脂。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種萬古霉素培養(yǎng)基及制備萬古霉素的方法，包括如下重量份數(shù)的組分：碳源1.5-5份氮源0.05-0.15份無機(jī)鹽0.15-0.45份水90-110份無機(jī)鹽包括硫酸鎳、硝酸鐵和氯化鈉，按照重量份，硫酸鎳：硝酸鐵：氯化鈉=0.5-2:0.5-2:1。本發(fā)明的有益效果：提高萬古霉素的收率和純度。
【IPC分類】C12R1/01, C12P21/02, C12N1/20
【公開號】CN105505833
【申請?zhí)枴緾N201610046440
【發(fā)明人】蘆琦, 陳曉靜
【申請人】雅賽利(臺州)制藥有限公司
【公開日】2016年4月20日
【申請日】2016年1月23日