專利名稱：：萬古霉素沉淀方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及抗生素生產(chǎn)
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種萬古霉素的沉淀方法。技術(shù)背景萬古霉素(Vancomycin)是1956年Micormick等從一株東方擬無枝酸菌發(fā)酵液中分離得到的一種糖肽類抗生素，是放線菌產(chǎn)生的糖肽類抗生素中具有代表性的一種。萬古霉素用于治療革蘭氏陽性菌引起的感染疾病，特別是目前臨床上對由p—內(nèi)酰胺類抗生素引起的耐藥金黃色葡萄球菌引起的嚴重感染疾病有較好的療效。由于萬古霉素的意義及其重要性，人們一直在尋找這種抗生素發(fā)酵混合物中分離萬古霉素的方法。萬古霉素的發(fā)酵和分離方法在美國專利(專利號3067099)中公布，之后也有專利公開過萬古霉素的回收方法，包括使用與水混合的非溶劑如異丙醇、乙醇或丙酮凈化發(fā)酵液，沉淀后分離產(chǎn)物(美國專利號4440753);使用磷酸鹽離析產(chǎn)物(歐洲專利號0145484);使用銅鹽離析產(chǎn)物(美國專利號4845194);調(diào)整發(fā)酵液pH到7.8，在不攪拌的情況下沉淀產(chǎn)物(歐洲專利號0323150);通過咪唑/萬古霉素混合后過濾回收(美國專利號4868285)。在抗生素的生產(chǎn)過程中，萬古霉素發(fā)酵液中不僅含有抗生素，而且還有不溶的菌絲體懸浮在未反應(yīng)的中間體稀溶液中，還有新陳代謝雜質(zhì)以及產(chǎn)物。提取抗生素是非常困難的，需要經(jīng)過分離，富集和純化的步驟，這些多級步驟不僅價格昂貴，而且每步都會造成萬古霉素的損失。美國專利(專利號5235037)公開了一種萬古霉素的沉淀方法，用于從萬古霉素水溶液中分離萬古霉素，該方法通過往萬古霉素水溶液中添加堿金屬鹽或堿土金屬鹽來沉淀萬古霉素，但是，該沉淀過程控制性不強，混合液過濾困難，得到的萬古霉素堿顏色較深，粉末呈粘狀，難以溶解。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種萬古霉素的沉淀方法，相比現(xiàn)有的沉淀方法，本發(fā)明的方法使沉淀過程易控制，混合液易過濾。本發(fā)明的萬古霉素沉淀方法是這樣實現(xiàn)的首先將萬古霉素水溶液的pH調(diào)節(jié)至8.0—9.5,然后往水溶液中加入銨鹽，攪拌20—40分鐘后，避光靜置15—20小時，最后獲得萬古霉素堿沉淀。根據(jù)本發(fā)明，所述銨鹽的加入量為2_10%，優(yōu)選的是2—7%。根據(jù)本發(fā)明，所述銨鹽包括NH4HC03或(NH4)2C03。通過本發(fā)明的方法沉淀萬古霉素后，經(jīng)過抽濾即可獲得萬古霉素堿的粉末。本發(fā)明的優(yōu)點在于，沉淀過程易控制，混合液易過濾，得到的萬古霉素堿顏色淺，粉末松散，易溶解。具體實施方式以下結(jié)合具體實施例，對本發(fā)明作進一步說明。應(yīng)理解，以下實施例僅用于說明本發(fā)明而非用于限定本發(fā)明的范圍。根據(jù)本發(fā)明，萬古霉素發(fā)酵液可以通過任何產(chǎn)萬古霉素的菌株在適當(dāng)?shù)臈l件下發(fā)酵獲得，例如通過東方擬無枝酸菌^^co/flro;w'sSIPI—43419發(fā)酵獲得(見申請?zhí)枮镃N01132048.6的中國發(fā)明專利申請)。根據(jù)本發(fā)明，所述萬古霉素水溶液，是指萬古霉素發(fā)酵液經(jīng)陶瓷膜過濾得到濾液，再使濾液通過大孔吸附樹脂，然后解吸得到含有萬古霉素的洗脫液，洗脫液經(jīng)活性炭脫色過濾后再通過鈉濾濃縮得到濃縮液。以下實施例中所涉及的百分比(％)，除特別說明外，均指重量百分比。實施例l一ll、從萬古霉素水溶液中沉淀萬古霉素按表1所示，分別取萬古霉素水溶液(效價110632u/ml，有效組分含量81.32%)，將溶液的pH值調(diào)節(jié)值8.0—9.5，然后加入適量的銨鹽，攪拌20—40分鐘后，避光靜置15一18小時，獲得萬古霉素堿沉淀。獲得的萬古霉素堿經(jīng)抽濾后即得到萬古霉素堿的粉末。測定萬古霉素堿的效價，同時以高效液相色譜法(HPLC)測定其中的有效組分含量，結(jié)果列于表l。同時取取萬古霉素水溶液(效價110632u/ml，有效組分含量81.32%)，以專利號為5,235,037的美國專利所報道的方法沉淀萬古霉素以作為對照(CK)，比較兩種方法所獲得的萬古霉素堿的性狀。表l、萬古霉素的沉淀<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>11CK(US5，235，037)觀察獲得的萬古霉素堿的性狀，結(jié)果如下實施例1一3、6—8所獲得的萬古霉素堿的顏色較淺、且粉末松散，實施例4和9獲得的萬古霉素堿的顏色較淺、粉末不松散，略有結(jié)塊現(xiàn)象，而實施例5和10的沉淀則呈現(xiàn)粘稠，不能過濾的情況，且顏色較深。相比之下，作為對照的實施例ll獲得的萬古霉素堿則顏色較深，且粉末略顯粘稠。分別以上述獲得的萬古霉素堿進行溶解性的實驗，結(jié)果顯示，實施例l一4、6—9獲得的萬古霉素堿的溶解性較好，而實施例5和10以及作為對照的實施例11獲得的萬古霉素堿則難以溶解?？v上所述，按照本發(fā)明的萬古霉素沉淀方法，在銨鹽加入量為2—10%的情況下，獲得的萬古霉素堿的質(zhì)量較佳，且本發(fā)明的方法明顯優(yōu)于現(xiàn)有的如專利號為US5,235,037所報道的方法。權(quán)利要求1.一種萬古霉素沉淀方法，用于從萬古霉素水溶液中沉淀萬古霉素，其特征在于包括以下步驟首先將萬古霉素水溶液的pH調(diào)節(jié)至8.0-9.5，然后往水溶液中加入銨鹽，攪拌20-40分鐘后，避光靜置15-20小時，最后獲得萬古霉素堿沉淀。2、如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述銨鹽包括NH4HC03或(NH4)2C03。3、如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，所述銨鹽的加入量為2_10%重量比。4、如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述銨鹽的加入量為2—7%重量比。全文摘要本發(fā)明公開了一種萬古霉素沉淀方法，用于從萬古霉素水溶液中沉淀萬古霉素，包括將萬古霉素水溶液的pH調(diào)節(jié)至8.0-9.5，然后往水溶液中加入銨鹽，攪拌20-40分鐘后，避光靜置15-20小時，最后獲得萬古霉素堿沉淀。本發(fā)明的優(yōu)點在于，沉淀過程易控制，混合液易過濾，得到的萬古霉素堿顏色淺，粉末松散，易溶解。文檔編號C07H17/08GK101260134SQ20071003781公開日2008年9月10日申請日期2007年3月5日優(yōu)先權(quán)日2007年3月5日發(fā)明者孟根水,廣桂珠,潘一斌,王小勇,石敏敏申請人:浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠