nX-Module-for-Vector-NTI-Advance.reg.us.html)
[0034] 用于確定查詢序列(本發(fā)明的序列）與主體序列之間最佳整體匹配，也被稱為全局 序列比對（global sequence al ignment)的另一種方法可使用CLUSTALW計算機程序 (Thompson等人，Nucleic Acids Research，1994,2(22) :4673-4680)確定，其基于Higgins 等人的算法（Computer Applications in the Biosciences(CABI0S)，1992,8(2) :189-191)。在序列比對中，查詢和主體序列都是DNA序列。以同一性百分比表示所述全局序列比 對的結(jié)果。通過兩兩比對計算同一性百分比的用于DNA序列的CLUSTALW比對的優(yōu)選參數(shù)為： Matrix = IUB，k-元組=1，頂對角線數(shù)=5,缺口罰分=3,缺口開放罰分=10,缺口延伸罰分 =0.1。對于多個比對，優(yōu)選以下CLUSTALW參數(shù):缺口開放罰分=10，缺口延伸參數(shù)=0.05;; 缺口分離罰分范圍：8;比對延遲同一"性％ =40。
[0035]還提供藥物組合物，其包含治療有效量的抗TFPI單克隆抗體和藥物可接受載體。 如本文所使用的，"治療有效量"意指抗TFPI單克隆抗體變體的量或這樣的抗體和因子VIII 或因子IX的組合的量，其需要有效增加體內(nèi)凝血時間，或另外地對有需要患者形成體內(nèi)可 測量的益處。精確量將取決于多種因素，包括但不限于組分和治療組合物的物理特性、意圖 患者群體、個體患者考慮等，且可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地確定。"藥物可接受載體"是可 被添加到活性成分以幫助配制或穩(wěn)定制備物并且不對患者導(dǎo)致顯著的不利毒性效應(yīng)的物 質(zhì)，且對患者沒有顯著不利的毒性作用。這樣的載體的實例是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的并且 包括水、糖，諸如麥芽糖或蔗糖、白蛋白、鹽，諸如氯化鈉等。其它載體在由E.W.Martin的 Remingtor/ s Pharmaceutical Sciences中作為實例描述。這樣的組合物將包含治療有效 量的至少一種抗TFPI單克隆抗體。
[0036] 藥學(xué)可接受的載體包括無菌水溶液或分散體和無菌粉末，用于臨時制備無菌注射 溶液或分散體。用于藥物活性物質(zhì)的此類介質(zhì)和試劑的用途是本技術(shù)領(lǐng)域已知的。所述組 合物優(yōu)選配制用于胃腸外注射。組合物可以配制成適合于高藥物濃度的溶液、微乳液、脂質(zhì) 體或其它有序結(jié)構(gòu)。載體可以是溶劑或分散介質(zhì)，含有例如，水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙 二醇、和液體聚乙二醇等)及其合適的混合物。在一些情況下，其將包括等滲劑，例如，組合 物中的糖、多元醇，諸如甘露醇、山梨醇或氯化鈉。
[0037] 根據(jù)需要，可以通過將所需量的活性化合物與上文列舉的成分的一種或組合摻入 適當(dāng)?shù)娜軇﹣碇苽錈o菌可注射溶液，隨后進行無菌微量過濾。通常地，通過將活性化合物摻 入含有堿性分散介質(zhì)和上文列舉的那些需要的其它成分的無菌媒介中制備分散體。在用于 制備無菌注射溶液的無菌粉末的情況中，一些制備方法是真空干燥和冷凍干燥(凍干），其 產(chǎn)生出活性成分外加來自先前無菌過濾溶液的任何另外期望的成分的粉末。
[0038] 人單克隆抗體可被用于治療目的，用于治療凝血中的遺傳和后天的不足或缺陷。 例如，人單克隆抗體可以用于阻斷TFPI與FXa的相互作用，或用于防止TF/FVIIa活性的TFPI 依賴性抑制。另外，人單克隆抗體還可以用于修復(fù)TF/FVIIa-驅(qū)動的FXa生成，以繞開FVIII 或FIX依賴的FXa擴增的不足。
[0039] 人單克隆抗體在止血病癥諸如血小板減少癥、血小板病癥和出血性病癥(例如，血 友病A，血友病B和血友病C)的治療中具有治療用途。這樣的病癥可以通過向需要其的患者 施用治療有效量的抗TFPI單克隆抗體變體進行治療。人單克隆抗體還在治療適應(yīng)癥諸如創(chuàng) 傷和出血性中風(fēng)的不受控制的出血中具有治療用途。因此，還提供用于縮短出血時間的方 法，其包括向需要其的患者施用治療有效量的本發(fā)明的抗TFPI人單克隆抗體變體。
[0040] 所述抗體可以用作單藥治療或與其它治療組合以解決止血病癥。例如，本發(fā)明的 一種或多種變體抗體與凝血因子諸如因子Vila、因子VIII或因子IX的共同施用相信可用于 治療血友病。在分別的實施方案中，因子VIII或因子IX在基本上不含因子VII下施用。"因子 VII"包括因子VII和因子Vila。
[0041] 用于治療凝血的遺傳的和后天的不足或缺陷的方法包括施用(a)結(jié)合人組織因子 途徑抑制劑的第一量變體單克隆抗體和(b)第二量的因子VIII或因子IX，其中所述第一和 第二量一同對于治療所述不足或缺陷是有效的。相似地，用于治療凝血的遺傳的和后天的 不足或缺陷的方法包括施用(a)結(jié)合人組織因子途徑抑制劑的第一量單克隆抗體變體和 (b)第二量的因子VIII或因子IX，其中所述第一和第二量一同對于治療所述不足或缺陷是 有效的，且進一步其中因子VII未共同施用。本發(fā)明還包括藥物組合物，其包含治療有效量 的本發(fā)明的單克隆抗體變體和因子VIII或因子IX的組合，其中所述組合物不包含因子VII。
[0042] 這些聯(lián)合治療可能降低了凝血因子需要的輸注頻率。通過共同施用或聯(lián)合治療意 指在一種組合物中的各自分別配制的或一同配制的兩種治療藥物的施用，和當(dāng)分別配制 時，在大約相同時間或不同時間，但是在相同治療時期內(nèi)施用。
[0043] 在一些實施方案中，本文中描述的一種或多種抗體變體可以組合使用以解決止血 病癥。例如，本文中描述的兩種或更多種抗體變體的共同施用相信可用于治療血友病或其 它止血病癥。
[0044] 所述藥物組合物可以腸胃外地施用于患有血友病A或B的主體，其劑量和頻率可以 隨出血事件的嚴(yán)重性而變化，或在預(yù)防性治療的情況下，可隨患者凝血缺陷的嚴(yán)重性而變 化。
[0045] 所述組合物可以作為推注或通過連續(xù)輸注施用至需要的患者。例如，以Fab片段呈 現(xiàn)的抗體變體的推注施用可以是〇 . 0025至100mg/kg體重、0.025至0.25mg/kg、0.010至 0.10mg/kg或0.10-0.50mg/kg的量。對于連續(xù)輸注，以Fab片段呈現(xiàn)的抗體變體可以以0.001 至100mg/kg體重/分鐘、0.0125至 1 · 25mg/kg/分鐘、0.010至0· 75mg/kg/分鐘、0 · 010至 1 · 0mg/kg/分鐘或 0 · 10-0 · 50mg/kg/分鐘施用 1-24 小時、1-12 小時、2-12 小時、6-12 小時、2-8 小時、或1-2小時的時期。對于以全長抗體(具有完全恒定區(qū)）呈現(xiàn)的抗體變體的施用，劑量 可為約l -l〇mg/kg體重、2_8mg/kg、或5_6mg/kg。這樣的全長抗體通常通過延續(xù)30分鐘到3小 時時期的輸注施用。施用的頻率取決于狀況的嚴(yán)重程度。頻率范圍可以為每周三次至每兩 周至六個月一次。
[0046] 另外，可以通過皮下注射向患者施用組合物。例如，可以每周、每兩周或每月通過 皮下注射向患者施用1 〇至1 〇〇mg抗TFPI抗體的劑量。
[0047] 提供了人組織因子途徑抑制劑(TFPI)的變體單克隆抗體。進一步提供了編碼其的 分離的核酸分子。還提供了包含變體抗TFPI單克隆抗體的藥物組合物和治療凝血的遺傳的 和后天的不足或缺陷的諸如血友病A和B的方法。還提供了通過向需要的患者施用抗TFPI單 克隆變體來縮短出血時間的方法。還提供了用于生產(chǎn)根據(jù)本發(fā)明公開的結(jié)合人類TFPI的變 體單克隆抗體的方法。
[0048]治療組合物包括抗體，其具有不同于親本TFPI結(jié)合抗體序列的結(jié)合區(qū)，其通過對 如親本序列定義的至少一種天然氨基酸進行一個或多個氨基酸組氨酸(H，HIS)取代的有意 [難以辨認(rèn)的（illegible)]選擇(intentional select ion)或工程改造。氨基酸變化賦予相 對于親本分子更長的循環(huán)半衰期T1/2。
[0049] 公開了對TFPI特異的抗體，其在pH6.0下比在pH7.0下以至少低20%的效率結(jié)合 TFPI，并且其顯示約400%的循環(huán)T1/2的改善。通過相對于親本序列定義的至少一種天然氨 基酸的氨基酸組氨酸(H，HIS)的取代，對不同于靶抗體諸如2A8-g200或4B7-gB9.7的抗體或 抗體結(jié)合區(qū)證明了減少TMDD的有益效果。特別地，2A8-g200的變體可具有如下取代中的任 意一個 JL-YSlHJH-YH^HJH-YlOOHJH-YSSHJL-FASHJL-SSOHJL-YdgHJL-I^THJL-VdSHJL-WgOH 及其組合。
[0050] 抗TFPI抗體2A8-g200和4B7-gB9.7變體可以體內(nèi)高親和力和高特異性結(jié)合TFPI (見TO 2011/109452)。圖 1顯示了2A8-g200和4B7-gB9 · 7，以及描述于W0 2011/109452中的 其它2A8和4B7變體的氨基酸序列信息。表1顯示了圖1顯示的2A8和4B7變體的可變重鏈和可 變輕鏈的相應(yīng)的SEQ ID N0。
[0051 ] 表1:圖1中顯示的人抗TFPI抗體的可變重鏈和可變輕鏈的相應(yīng)的SEQUENCE ID NO