>[0039] 包括以下組分：Tris-HC132mM pH7.6、氯化鈉22mM、EDTA0.05mM和DTT0.05mM，溶劑 為去離子水。
[0040] 實施例9 一種生物素化ATPS的儲存試劑
[0041 ]包括以下組分：Tris-HCl 36mM ρΗ7·6、氯化鈉22mM、EDTA0.06mM和DTT0.05mM，溶 劑為去離子水。
[0042] 實施例10-種生物素化ATPS的儲存試劑
[0043] 包括以下組分:Tris-HC125mM pH7.0、氯化鈉 10mM、EDTA0.02mM、DTT0.02mM和蔗糖 30mM，溶劑為去離子水。
[0044] 實施例11 一種生物素化ATPS的儲存試劑
[0045] 包括以下組分:Tris-HCl 30mM ρΗ7·2、氯化鈉 15111]\^0了六0.031111、01'1'0.03111]\1、蔗糖 40mM和山梨醇20mM，溶劑為去離子水。
[0046]實施例12-種生物素化ATPS的儲存試劑
[0047]包括以下組分：Tris-HCl 35mM ρΗ7·4、氯化鈉20mM、EDTA0.04mM、DTT0.04mM和蔗 糖50mM，溶劑為去離子水。
[0048]實施例13-種生物素化ATPS的儲存試劑
[0049] 包括以下組分：Tris-HCl 40mM ρΗ7·6、氯化鈉25mM、EDTA0.05mM、DTT0.06mM和蔗 糖60mM，溶劑為去離子水。
[0050] 實施例14 一種生物素化ATPS的儲存試劑
[0051 ]包括以下組分：Tris-HC145mM pH7.8、氯化鈉30禮』0了40.06111]\1、01'1'0.061111、蔗糖 70mM和山梨醇12mM，溶劑為去離子水。
[0052]實施例15-種生物素化ATPS的儲存試劑
[0053] 包括以下組分:Tris-HC150mM pH7·8、氯化鈉35mM、EDTA0·07mM、DTT0·07mM和蔗糖 80mM，溶劑為去離子水。
[0054] 實施例16-種生物素化ATPS的儲存試劑
[0055] 包括以下組分：Tris-HCl 25mM ρΗ7·0、氯化鈉 10mM、EDTA0.02mM、DTT0.02mM和蔗 糖100mM，溶劑為去離子水。
[0056]實施例17-種生物素化ATPS的儲存試劑
[0057]包括以下組分：Tris-HCl 30mM ρΗ7·2、氯化鈉 15111]\^0了40.031111、01'1'0.03111]\1、蔗糖 90mM和山梨醇1 OmM，溶劑為去離子水。
[0058]實施例18-種生物素化ATPS的儲存試劑
[0059] 包括以下組分：Tris-HCl 35mM ρΗ7·4、氯化鈉20111]\^0了40.041111、01'1'0.041111、蔗糖 50mM和山梨醇14mM，溶劑為去離子水。
[0060] 實施例19 一種生物素化ATPS的儲存試劑
[0061] 包括以下組分：Tris-HCl 35mM ρΗ7·4、氯化鈉20mM、EDTA0.04mM、DTT0.04mM和山 梨醇18mM，溶劑為去離子水。
[0062]實施例20-種生物素化ATPS的儲存試劑
[0063]包括以下組分:Tris-HC150mM pH8.0、氯化鈉35mM、EDTA0.08mM、DTT0.08mM和山梨 醇16mM，溶劑為去離子水。
[0064]實施例21-種生物素化ATPS的儲存試劑
[0065]包括以下組分：Tris-HCl 40mM ρΗ7·6、氯化鈉25mM、EDTA0.05mM、DTT0.06mM和硫 代硫酸鈉〇. 4mM，溶劑為去離子水。
[0066]實施例22-種生物素化ATPS的儲存試劑
[0067]包括以下組分：Tris-HCl 35mM ρΗ7·4、氯化鈉20mM、EDTA0.04mM、DTT0.04mM和硫 代硫酸鈉ο. 5mM，溶劑為去離子水。
[0068]實施例23-種生物素化ATPS的儲存試劑
[0069] 包括以下組分:Tris-HCl 25mM ρΗ7·0、氯化鈉 10111]\^0了六0.021111、01'1'0.02111]\1、蔗糖 100mM和硫代硫酸鈉0.6mM，溶劑為去離子水。
[0070] 實施例24-種生物素化ATPS的儲存試劑
[0071] 包括以下組分：Tris-HC150mM pH7.8、氯化鈉35禮40了六0.07111]\1、01'1'0.071111、蔗糖 80mM和硫代硫酸鈉0.7mM，溶劑為去離子水。
[0072]實施例25-種生物素化ATPS的儲存試劑
[0073]包括以下組分:Tris-HCl 36mM ρΗ7·6、氯化鈉22111]\^0了厶0.061111、01'1'0.05111]\1、山梨 醇14mM和硫代硫酸鈉0.6mM，溶劑為去離子水。
[0074]實施例26-種生物素化ATPS的儲存試劑
[0075] 包括以下組分:Tris-HCl 32mM ρΗ7·6、氯化鈉22111]\^0了厶0.051111、01'1'0.05111]\1、蔗糖 70mM、山梨醇14mM和硫代硫酸鈉0.5mM，溶劑為去離子水。
[0076] 對比例1 一種生物素化ATPS的儲存試劑
[0077] 包括以下組分:甘油100%。
[0078] 實驗例1儲存試劑對生物素化ATPS活性的保護作用
[0079] 將生物素化ATPS按照下述使用方法加入到實施例1-26和對比例1所述的儲存試劑 中所得的樣品分別編號為樣品1-27。
[0080] 使用方法:先將生物素化ATPS與甘油按照1:2的體積比混勻，得到生物素化ATPS的 甘油溶液;再將該生物素化ATPS的甘油溶液與儲存試劑按照3:1的體積比混合均勻。
[0081 ] 將樣品1-27分別于-80°c、-20°c和4°C放置1、3、6個月，于25°C、30°C和35°C下放置 12、24、481!。測定放置前和放置后的41?5活性，按下式計算殘余活力&1:
[0082] ar( % )=放置后活性/放置前活性X 100%
[0083] ATPS活性測定方法：
[0084] 利用ATPS和熒光素酶兩步偶聯(lián)反應測定ATPS的酶活。
[0085] 標準測活反應液的組成為：0.1mM Tris-Ac(pH7.75)、0.5mM EDTA、5mM MgAc2、 0.4mg/mL PVP、0.02%(w/v)BSA、lmM DTT、4yM PPi、4yM APS、0.4mMd-蟲熒光素和1.46yg/ mL熒光素酶。
[0086] 活性測定方法:取上述標準測活反應液50yL于生物發(fā)光檢測儀中進行基線測定； 然后快速加入lyL濃度為6Xl(T 5mg/mL的ATPS酶液，混合均勻后置于生物發(fā)光檢測儀中進行 實時測定。
[0087] 實驗結(jié)果見下表：
[0088] 表1儲存試劑對生物素化ATPS活性的保護作用
[0089]
[0090]
[0091 ]實驗例2反復凍融對生物素化ATPS活性的影響
[0092]將不加任何試劑的生物素化ATPS編號為樣品28，將樣品28和實驗例中的樣品1 -27 分別反復凍融1、3、5、10次后，測定殘余活力&1。殘余活力計算公式為&4%)=凍融11次后的 活性/凍融〇次的活性XI 〇〇%(其中n = l、3、5或10); ATPS活性測定方法同實驗例1。
[0093]實驗結(jié)果見下表
[0094]表2反復凍融對生物素化ATPS活性的影響
[0095]
【主權(quán)項】
1. 一種生物素化ATPS的儲存試劑，其特征在于:所述的儲存試劑包括以下組分:Tris-HC125 ~50mM、氯化鈉 10 ~35mM、EDTA0 · 02 ~0 · 08mM和DTTO· 02 ~0 · 08mM，溶劑為去離子水； 其中Tris-HCl的pH值為7.0~8.0; 所述的儲存試劑使用的使用方法為:先將生物素化ATPS與甘油按照1: 2的體積比混勻， 得到生物素化ATPS的甘油溶液;再將該生物素化ATPS的甘油溶液與所述的儲存試劑按照3: 1的體積比混合均勻。2. 如權(quán)利要求1所述的儲存試劑，其特征在于:所述的Tris-HCl的濃度為30~40mM。3. 如權(quán)利要求1所述的儲存試劑，其特征在于:所述的氯化鈉的濃度為10~30mM。4. 如權(quán)利要求1所述的儲存試劑，其特征在于:所述的EDTA的濃度為0.03~0.07mM。5. 如權(quán)利要求1所述的儲存試劑，其特征在于:所述的DTT的濃度為0.04~0.07mM。6. 如權(quán)利要求1-5任意一項所述的儲存試劑，其特征在于:所述的儲存試劑還包括蔗糖 30~100mM〇7. 如權(quán)利要求1-5任意一項所述的儲存試劑，其特征在于:所述的儲存試劑還包括山梨 醇10~20mM。8. 如權(quán)利要求1-5任意一項所述的儲存試劑，其特征在于:所述的儲存試劑還包括硫代 硫酸鈉0.4~0.8mM。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種生物素化ATPS的儲存試劑，該儲存試劑包括以下組分：Tris-HCl、氯化鈉、EDTA和DTT，溶劑為去離子水。本發(fā)明提供的儲存試劑能夠延長生物素化ATPS的儲存時間，減少反復凍融對其活性的影響；并且使得生物素化ATPS可以長期存放于-80℃、-20℃和4℃下，增加了其儲存溫度的選擇性；還能夠有效降低ATPS上生物素標簽的脫落率。
【IPC分類】C12N9/12, C12N9/96
【公開號】CN105441416
【申請?zhí)枴緾N201511021610
【發(fā)明人】高靜, 蔡亦梅, 吳超, 徐瀟, 張睿, 王者馥, 王緒敏, 殷金龍, 任魯風
【申請人】北京中科紫鑫科技有限責任公司
【公開日】2016年3月30日
【申請日】2015年12月31日