1. 9. IR(KBr): 3145,3061，3037,2929,2868,1718,1653,1597,1550,1506,1456,1379,1348,1247,1215， 1139,1064,743,696cm1·蟲 NMR (300MHz，DMS0-d6) δ /ppm :8. 81 (s，1H)，8· 37 (d，J = 9. 0Hz， lH)，8.16(d，J = 6.0Hz，1H) ,7.87-7. 28 (m，15H)，5.42 (s，2H)，5.08 (d，J = 15.0Hz，1H)， 4. 99 (d，J = 12. 0Hz，1H)，3. 26 (m，1H)，3. 60 (m，2H)，3. 44 (m，2H)，3. 33 (m，2H)，3. 24 (m，2H)， 3. 00 (m，2H)，1. 62 (m，1H)，1. 49 (s，1H)，1. 32 (m，2H)，1. 22 (m，2H)。
[0079] 實(shí)驗(yàn)例1評(píng)價(jià)化合物5a_q的細(xì)胞毒作用
[0080] 化合物5a-q用含0. 5% DMS0的1640培養(yǎng)基配制成所需濃度。分別將生長(zhǎng)狀態(tài)良 好、處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HL-60、S180、MCF-7、A549細(xì)胞按照4X 104個(gè)/mL的密度接種于96孔 板，每孔100 μ L。在37°C，5% C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4小時(shí)，按預(yù)設(shè)的濃度梯度100 μ Μ、50 μ Μ、 25 μ Μ、10 μ Μ和1 μ Μ加入經(jīng)滅菌處理的化合物5a_q的溶液，對(duì)照組加入等體積溶解樣品 的含0. 5% DMSO的1640培養(yǎng)基。繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)后，每孔加25 μ L濃度為5mg/mL的MTT 溶液，置于37°C孵育4小時(shí)，小心除去上清液后每孔加入100 μ L DMSO,振蕩約15min溶解沉 淀。立即于酶標(biāo)儀上570nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD (吸光度）值。按抑制率=[(含0. 5% DMSO的 1640培養(yǎng)基組的OD平均值-化合物5a_q組的OD平均值）/含0. 5 % DMSO的1640培養(yǎng)基 組的OD值]X 100 % "計(jì)算抑制率。實(shí)驗(yàn)平行重復(fù)3次，以抑制率對(duì)化合物5a_q的濃度作 圖，計(jì)算本發(fā)明化合物的IC5。（半數(shù)有效抑制濃度）值。
[0081] 化合物5a_q用含0. 5% DMS0的DMEM培養(yǎng)基配制成所需濃度。分別將生長(zhǎng)狀態(tài) 良好、處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HCT-8, SH-sy5y，細(xì)胞按照4X 104個(gè)/mL的密度接種于96孔板， 每孔100yL。在37°C、5% C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4小時(shí)，按預(yù)設(shè)的濃度梯度100μΜ、50μΜ、 25 μ Μ、10 μ Μ和1 μ Μ加入經(jīng)滅菌處理的化合物5a_q的溶液，對(duì)照組加入等體積溶解樣品 的含0. 5% DMS0的DMEM培養(yǎng)基。繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)后，每孔加25 μ L濃度為5mg/mL的MTT 溶液，置于37°C孵育4小時(shí)，小心除去上清液后每孔加入100 μ L DMS0,振蕩約15min溶解沉 淀。立即于酶標(biāo)儀上570nm波長(zhǎng)下測(cè)定0D (吸光度）值。按抑制率=[(含0. 5% DMS0的 DMEM培養(yǎng)基組的0D平均值-化合物5a-q組的0D平均值）/含0. 5 % DMS0的DMEM培養(yǎng)基 組的0D平均值]X 100%計(jì)算抑制率。實(shí)驗(yàn)平行重復(fù)3次，以抑制率對(duì)化合物5a_q的濃度 作圖，計(jì)算本發(fā)明化合物的IC5。（半數(shù)有效抑制濃度）值。
[0082] 結(jié)果列入表1和表2。從結(jié)果可看出本發(fā)明化合物除51，n，o，p，q外，其余化合物 都能有效地抑制六株腫瘤細(xì)胞增殖。
[0083] 表 1 化合物 5a_q 抑制 HCT-8, S180 和 SH_sy5y 增殖的活性（IC5。，無(wú) ± SD μΜ:)
[0084]
[0086] 表2化合物5a_q抑制HL60, A549和MCF-7增殖的活性（IC5。，SD μΜ )

[0089] η = 15
[0090] 實(shí)驗(yàn)例2評(píng)價(jià)化合物5a_q抑制腫瘤生長(zhǎng)的活性
[0091] 化合物5a_q用0. 5%的CMC-Na懸??；阿霉素和阿糖胞苷用生理鹽水溶解。用 0. 5%的CMC-Na懸??；阿霉素和阿糖胞苷用生理鹽水溶解。無(wú)菌條件下取接種于ICR小鼠 7天的S180肉瘤，加入適量生理鹽水配制成瘤細(xì)胞懸液，細(xì)胞數(shù)為1 X 107個(gè)/mL，接種于健 康雄性ICR小鼠前肢腋皮下，每只小鼠注射0. 2mL。腫瘤接種24h后，治療組小鼠每日口服 0. 2mL化合物5a_q的CMC-Na懸浮液，劑量為1 μ mol/kg，每天1次，連續(xù)給藥7天?？瞻捉M 小鼠每口服0. 2mL0. 5%羧甲基纖維素鈉溶液。陽(yáng)性對(duì)照小鼠每天腹腔注射阿霉素（劑量為 2 μ mol/kg)或阿糖胞苷（劑量為8. 2 μ mol/kg)，每天1次，連續(xù)給藥7天。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行至第 8天，稱小鼠體重，用乙醚將小鼠麻醉后將其斷頸處死，并剖取各組小鼠的腫瘤稱重，最后統(tǒng) 計(jì)各組動(dòng)物的抑瘤率。實(shí)體瘤的療效以瘤重抑制百分率表示，瘤重抑制率％= [1_(化合物 5組瘤重/空白組瘤重）]X 100%。結(jié)果列入表3。表3結(jié)果表明化合物5a_q組小鼠的瘤 重顯著小于空白組小鼠的瘤重，說(shuō)明化合物5a_q具有良好的抗腫瘤活性。它們的這個(gè)有效 劑量（Ιμπιο?/kg)比發(fā)明人公開(kāi)的1-(乙基-ΑΑ-0Βζ1)-β-咔啉-3-羧酸芐酯的有效劑量 (8. 9 μ mol/kg)低 8. 9 倍。
[0092] 表35a_r對(duì)S180荷瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)的影響(無(wú) ±SD g)
[0093]
[0094]
[0095] 注：η > 12 ;a)與0. 5 %羧甲基纖維素鈉組比較p < 0. 01 ;b)與生理鹽水比較p < 0. 05 ;c)與0. 5%羧甲基纖維素鈉組比較p < 0. 01，與阿糖胞苷組比較p > 0. 05。
[0096] 實(shí)驗(yàn)例3測(cè)定化合物5a_q的透射電鏡照片
[0097] 將5a_q按照5X 10 6M的濃度配置化合物的純水溶液，均勻的鋪在銅網(wǎng)上，在透射 電鏡（TEM，JEM-1230, JE0L)下觀察化合物的自組裝性質(zhì)。得到的照片見(jiàn)圖2。結(jié)果表明， 5a_q在水中均可形成納米顆粒，直徑在20_200nm之間。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 下式的1-(己基-Ser-AA-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋，式中殘基， kPhe殘基，kVal殘基、kAla殘基，kGly殘基，kAsp(OBzl)殘基，kGlu(OBzl)殘基， L-T;rp殘基，L-Tyr殘基，L-Ser殘基，L-T虹殘基，L-Pro殘基，L-Met殘基，L-Arg(N〇2)殘 基，kAsn殘基，kGln殘基和kLys殘基。2. 權(quán)利要求1的1-(己基-Ser-AA-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋的制備方法，該方法 包括： (I) 將khp-OBzl在Η氣醋酸的催化下與1，1，3,3-四甲氧基丙焼進(jìn)行 Pictet-Spengler縮合，得到1- (2, 2-二甲氧己基）-1，2, 3,4-四氨-目-巧晰-3-駿酸予 醋； 似將1-化2-二甲氧己基）-1，2,3,4-四氨-β-巧晰-3-駿酸予醋在四氨巧喃中用 高儘酸鐘氧化，得到1-化2-二甲氧己基）-目-巧晰-3-駿酸予醋； (3) 在濃鹽酸和冰醋酸的水溶液中1- (2, 2-二甲氧己基）-目-巧晰-3-駿酸予醋水解 為1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋； (4) 將1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋與肥1 ·Ser-Leu-OBz1還原性胺解，得到1-(己 基-Ser-Leu-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (5) 將1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋與肥1 'Ser-Phe-OBzl還原性胺解，得到1-(己 基-Ser-Phe-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (6) 將1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋與肥1 ·Ser-Val-OBzl還原性胺解，得到1-(己 基-Ser-Val-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (7) 將1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋與肥1 .Ser-Ala-OBzl還原性胺解，得到1-(己 基-Ser-Ala-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (8) 將1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋與肥1 'Ser-Gly-OBz還原性胺解，得到1-(己 基-Ser-Gly-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (9) 將1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋與肥1 'Ser-Asp(OBzl) -OBzl還原性胺解，得 到1-(己基-Ser-Asp(OBzl)-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (10) 將1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋與肥1 .Ser-Glu(OBzl)-OBzl還原性胺解， 得到1-(己基-Ser-Glu(OBzl)-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (II) 將1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋與肥1 ·Ser-T巧-OBzl還原性胺解，得到 1-(己基-Ser-T巧-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (12) 將1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋與肥1 ·Ser-Tyr-OBzl還原性胺解，得到 1-(己基-Ser-Tyr-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (13) 將1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋與肥1 ·Ser-Ser-OBzl還原性胺解，得到 1-(己基-Ser-Ser-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (14)將1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋與肥1 ·Ser-化r-OBzl還原性胺解，得到 1-(己基-Ser-T虹-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (巧）將1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋與肥1 ·Ser-Pro-OBzl還原性胺解，得到 1-(己基-Ser-Pro-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (16) 將1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋與肥1 ·Ser-Met-OBzl還原性胺解，得到 1-(己基-Ser-Met-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (17) 將1-己醒基-β-巧晰-3-駿酸予醋與肥1 'Ser-Arg(N02) -OBzl還原性胺解，得 到1-(己基-Ser-Arg(N02) -OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (18) 將1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋與肥1 ·Ser-Asn-OBzl還原性胺解，得到 1-(己基-Ser-Asn-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (19) 將1-己醒基-β-巧晰-3-駿酸予醋與肥1 ·Ser-Gln-OBzl還原性胺解，得到 1-(己基-Ser-Gln-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋； (20) 將1-己醒基-目-巧晰-3-駿酸予醋與肥1 .Ser-Lys(Fmoc) -OBzl還原性胺解， 得到l-(己基-Se;r-Lys(Fmoc)-0Bzl)-目-[?卡晰-3-駿酸予醋； (21) 將1-(己基-Ser-Lys(Fmoc)-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋冰浴下用脈巧的二甲 基甲醜胺（20% )溶液脫除Fmoc保護(hù)基得得到1-(己基-Ser-Lys-OBzl)-目-巧晰-3-駿 酸予醋。3. 權(quán)利要求1的1-(己基-Ser-ΑΑ-ΟΒζυ-β-巧晰-3-駿酸予醋的納米結(jié)構(gòu)。4. 權(quán)利要求1的1-(己基-Ser-AA-OBzl)-目-巧晰-3-駿酸予醋在制備抗腫瘤疾病藥 物中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了下式的1-(乙基-Ser-AA-OBzl)-β-咔啉-3-羧酸芐酯。公開(kāi)了它們的制備方法，公開(kāi)了它們的納米結(jié)構(gòu)，公開(kāi)了它們抑制腫瘤細(xì)胞增殖的活性，進(jìn)一步公開(kāi)了它們抑制S180小鼠腫瘤生長(zhǎng)的活性，闡明了它們?cè)谥苽淇鼓[瘤疾病藥物中的應(yīng)用。
【IPC分類】C07K5/062, A61P35/00, C07K1/06, A61K38/05, B82Y30/00
【公開(kāi)號(hào)】CN105315324
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410252600
【發(fā)明人】彭師奇, 趙明, 吳建輝, 王玉記, 王之京
【申請(qǐng)人】首都醫(yī)科大學(xué)
【公開(kāi)日】2016年2月10日
【申請(qǐng)日】2014年6月10日