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一種二肽分子及其制備方法和應用_2

文檔序號:9539520閱讀:來源:國知局
純化好的目標二膚溶液放入凍干機中進行濃縮,凍干成白色粉末。
[0035] 實施例2二膚對小鼠耳廓腫脹程度的影響,抗炎消腫鎮(zhèn)痛的作用
[0036] 取昆明種小鼠,雌雄各半,體重25-30g,按樣品量隨機分組:每組10只。 HY01-HY24(250mg/kg) (2mg/ml)、蔡了美麗(250mg/kg)、生理鹽水對照組 0).Iml/lOg)粗提 物劑量均折算為原動物生藥劑量(下同)。各組均經(jīng)口灌胃給藥,對照組經(jīng)口灌胃生理鹽 水。各組每天灌胃1次,連續(xù)4d,末次灌胃化后,尾靜脈注射Evan'Sblue50mg/kg,于 小鼠右耳雙面涂二甲苯2加1/面,2化后,拉頸處死小鼠,沿耳廓基線剪下雙耳,用直徑 7. 5mm的打孔器分別在雙耳同一部位打下圓耳片,電子天平稱重,求出重量差,用W表示 腫脹度(腫脹度=左耳耳片重-右耳耳片重)。按W下公式計算腫脹抑制百分率。
[0037] 抑制率(%) =(對照組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度)/對照組平均腫脹度 *100%。
[0038] 表1
[0039]
[0040]
[0041] 試驗分析;二膚分別進行二甲苯致小鼠耳廓腫脹試驗,觀察其是否具有抑制作 用。二甲苯誘導的小鼠耳片水腫為急性非特異性的炎癥模型,所導致的急性炎癥改變包括 血管擴張、毛細血管通透性增加、滲出等。從試驗結(jié)果看二膚對抑制小鼠的急性炎癥效果良 好,結(jié)果具有統(tǒng)計學意義。
[0042] 實施例3二膚對醋酸致小鼠扭體反應的影響,鎮(zhèn)痛作用
[0043] 取昆明種小鼠,雌雄各半,體重25-30g,隨機分組,二膚給藥組(250mg/kg)、對照 組5 %阿斯匹林可溶性淀粉溶液(250mg/kg)、生理鹽水組。給藥組和生理鹽水組末次灌胃 化后,分別腹腔注射0. 6%冰醋酸,各組在給致痛劑0. 2ml后觀察15min內(nèi)各組由醋酸引 起的扭體次數(shù),凡超過15min不扭體者按無扭體反應對待。
[0044] 表 2
[0045]
[0046] 結(jié)果表明,二膚組能有效減輕小鼠醋酸性腹腔疼痛反應。
[0047] 實施例4二膚對皮膚燒傷的試驗
[004引 1、實驗材料
[004引 1. 1樣品;按實施例1制得樣品二膚。
[0050] 1. 2實驗動物;18-22gKM小鼠,320只,雌雄各半。
[0051] 1. 3實驗試劑;氯化鋼注射液、濕潤燒傷膏(燦頭市美寶制藥有限公司)。
[0052] 2、皮膚創(chuàng)面修復功能評價方法
[0053] 2. 1對小鼠實驗性燙傷的影響
[0054] 160只KM小鼠按性別與體重隨機分為16組,10只/組(詳見表1),試驗時將小 鼠右后足妬部位置于預先調(diào)至55C恒溫水浴中15砂,此后每隔半小時各組小鼠分別于右 足妬部涂藥1次,共給藥3次,4. 5小時后將小鼠脫頸椎處死,于同一部位剪下兩足妬部,用 精密扭力天平稱重,W每鼠右足重減去左足重量為腫脹度并計算腫脹抑制率。
[00巧]2. 2對小鼠實驗性燒傷的影響
[0056] 將中間挖空2cmX2cm的石棉紙置于小鼠背上,用微量移液器吸取IOOuL無水己醇 滴于20mg棉球上,置于暴露處,點火燃燒造成II度燒傷模型。按性別與燒傷面積隨機分組, 10只/組。各組分別涂藥,連續(xù)涂15山Bid,末次給藥后用數(shù)碼相機拍照,用IPP5. 1圖像分 析軟件包測量各組動物燒傷面積。
[0057] 3、皮膚創(chuàng)面修復功能評價結(jié)果
[0058] 3. 1樣品對小鼠實驗性燙傷的影響
[005引表3樣品對小鼠實驗性燙傷的影響U ±SD,>
[0060]
[0061] 注;*:P<0. 05與對照組比較
[0062] 結(jié)果顯示,二膚對熱水燙傷致小鼠足妬的腫脹度有不同程度的降低,與對照組比 較均有明顯差異(P<〇. 05),提示二膚對燙傷有較好的保護作用。
[0063] 3. 2樣品對小鼠實驗性燒傷的影響
[0064] 表4樣品對小鼠實驗性燒傷的影響侶±巧)
[0065]
[006引 注:與模型組比較沖<0. 05
[0067] 結(jié)果顯示,與對照組比較,給藥15天,二膚組小鼠的創(chuàng)面結(jié)麻面積均明顯減少 (P<0. 05)。
[0068] 3. 3功能評價結(jié)果由上述實驗結(jié)果表明:二膚對燒燙傷所致皮膚創(chuàng)面均有修復作 用。
[0069] 實施例5二膚對胃潰瘍的治療作用
[0070] 1、實驗材料
[00川 1. 1樣品;按實施例1制得樣品二膚。
[0072] 1. 2實驗動物;KM小鼠,18~22g,160只,雌雄各半。SD大鼠,200~220g,204只, 雌雄各半。
[0073] 1. 3實驗試劑;鹽酸雷尼替了膠囊、達喜(鉛碳酸鎮(zhèn)片)。
[0074]2、樣品對胃潰瘍粘膜的保護功能評價方法 [00巧]2. 1無水己醇致小鼠胃粘膜損傷模型試驗
[007引160只KM小鼠按性別與體重隨機分組,10只/組(詳見表5),各組給予相應的藥 物,連續(xù)8天,第7天給藥后禁食2地,自由飲水,末次給藥后比,所有動物均ig無水己醇 0. 2ml/只,1小時后處死動物,結(jié)扎幽口,1 %甲醒固定,觀察并評定潰瘍指數(shù)(標準;條索狀 損傷的長度大于Imm者,測定其長度,每毫米計1分,其寬度大于Imm者計分加倍,長度與寬 度均小于1mm,計0. 5分,將計分相加即為該鼠的潰瘍指數(shù))并計算潰瘍抑制百分率。
[0077] 2. 2己酸致大鼠慢性胃潰瘍模型試驗
[0078] 除假手術(shù)組(12只),其余大鼠采用10 %醋酸按0. 05ml/只平刺于胃漿膜下 0.4-0. 5mm造模。術(shù)后造模大鼠進一步分組(詳見表6),并于第2日開始給藥,每日1次, 給藥14天,末日給藥后禁食禁水一夜后處死動物。W游標卡尺測定潰瘍最大長徑及垂直于 最大長徑的最大寬徑。計算潰瘍指數(shù)(潰瘍指數(shù)=潰瘍最大長徑X垂直于最大長徑的最 大寬徑)及潰瘍抑制率。
[0079]3、樣品對胃潰瘍粘膜的保護功能評價結(jié)果
[0080] 3. 1樣品對無水己醇致小鼠胃粘膜損傷的影響
[00引]表5樣品對無水己醇致小鼠胃粘膜損傷的影響巧±洗?
[0082]
[0083] 注;*:P<0. 05與對照組比較
[0084] 結(jié)果顯示,與對照組比較,二膚可使無水己醇致小鼠胃粘膜損傷的潰瘍指數(shù)明顯 降低(P<〇. 05),提示二膚對無水己醇致胃粘膜損傷有較好的保護作用。
[0085] 3. 2樣品對己酸致大鼠慢性胃潰瘍模型的影響
[008引表6樣品對己酸致大鼠慢性胃潰瘍模型的影響巧±貓)
[0087]
[008引注:與模型組比較沖<0. 05
[0089] 由上表顯示,模型組的潰瘍指數(shù)與假手術(shù)組有差異(P< 0. 05);二膚的潰瘍指數(shù) 與模型組比較有明顯改善(P< 0. 05)。
[0090] 3. 3功能評價結(jié)果由上述實驗結(jié)果表明:二膚對急、慢性胃潰瘍的黏膜具有修復 作用。
[0091] 實施例6二膚提高機體的免疫機能 [009引 1、實驗材料
[009引樣品;按實施例1制得的樣品。
[0094] 實驗動物;質(zhì)量為18~22gSPF級雄性BALB/C小鼠,雄性,隨機分組進行實驗。
[009引實驗方法;將小鼠飛隨機分為正常組、模型組、陽性組及樣品二膚劑量組,每組10 只。將樣品配成0. 5mg/ml受試液后給小鼠灌胃,正常組和模型組給予等量生理鹽水,陽性 組按20血Ag給予黃茂精,每天ig-次,連續(xù)14天。在給藥第1、2、3、8、9、10,除正常組外, 其余各組小鼠ip50mL/kg環(huán)磯腺巧,共6次,誘導免疫功能低下模型。
[0096] 2、提高免疫力功能評價方法
[0097] 通過實驗前后免疫低下小鼠免疫器官指數(shù):胸腺指數(shù)、脾指數(shù)、肝指數(shù)和吞瞻指 數(shù)、吞瞻系數(shù),用分光光度法測定小鼠血清中溶血素水平。
[0098] 3、增強免疫力功能評價結(jié)果
[0099] 3. 1對免疫低下小鼠免疫器官指數(shù)的影響
[0100] 表7對免疫低下小鼠免疫器官指數(shù)的影響
[010引注*表示與正常組相比P<
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