本發(fā)明涉及一種利用魚鱗制備ACE(血管緊張素轉換酶)抑制肽的方法。

背景技術：

魚鱗是魚類加工的主要副產(chǎn)品之一。魚鱗中含有豐富的蛋白質(約占魚鱗質量的50-70％)、脂肪(卵磷脂、多種脂肪酸)、多種礦物質、維生素和微量元素，但是大部分魚鱗都作為廢棄物丟棄而未能很好地開發(fā)利用。開發(fā)利用魚鱗資源對減少環(huán)境污染和提高魚類加工的附加值、對創(chuàng)造經(jīng)濟和社會效益都有很大的意義。

高血壓是全球范圍內的重大疾病，其發(fā)病率在全球已超過10億，估計我國患病人數(shù)超過1.6億。高血壓是引發(fā)心血管疾病和死亡的最主要危險因素，我國每年至少有一半的心血管病死亡是與高血壓有關的。同時，血壓升高還是多種疾病的導火索，會使冠心病、心力衰竭及腎臟疾患等疾病的發(fā)病風險增高。而由于部分高血壓患者并無明顯的臨床癥狀，高血壓又被稱為人類健康的“無形殺手”。因此高血壓的防治已成為全世界食品醫(yī)藥界面臨的一項艱巨任務。目前臨床常用的降壓藥物主要有利尿降壓藥、受體阻滯劑、鈣通道阻滯劑CCB、血管緊張素轉化酶抑制劑ACE I和血管緊張素II受體拮抗劑ARB，但大部分降壓藥物的副作用比較多。

ACE(血管緊張素轉換酶)在血壓調節(jié)中扮演著重要的角色，它是一種膜結合糖蛋白，ACE能夠促使血管緊張素I水解形成具有升壓作用的血管緊張素II，同時促進具有使血管舒張作用的緩激肽物質的水解，導致血壓升高。而ACE I就是通過抑制ACE(血管緊張素轉換酶)的活性達到降血壓的目的。相比其他降壓物質，ACE抑制肽是一種對高血壓有降壓作用同時副作用相對較小的降血壓藥，但還是會有如咳嗽、味覺功能紊亂以及皮疹等副作用。

從天然蛋白質中提取得到的ACE抑制肽安全性高，易于消化吸收，無副作用，因此從天然蛋白質中提取ACE抑制肽成為預防和治療高血壓最具開發(fā)價值的產(chǎn)品之一。目前人們已經(jīng)從大豆、帶魚、酪蛋白、槍魚等物質中獲得了ACE抑制肽，但采用魚鱗作為原料制備ACE抑制肽的技術還未見報道。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的首要目的在于提供一種利用魚鱗制備ACE(血管緊張素轉換酶)抑制肽的方法，該方法原料來源豐富、設備簡單、操作容易，既從魚鱗中提取高價值的ACE抑制肽，同時又實現(xiàn)其高附加值利用、充分發(fā)揮其資源優(yōu)勢。

本發(fā)明的另一目的在于提供由上述方法制得的ACE抑制肽。

本發(fā)明的再一目的在于提供上述的ACE抑制肽在制備降血壓藥物中的應用。

本發(fā)明的目的通過下述技術方案實現(xiàn)：

一種利用魚鱗制備ACE抑制肽的方法，包括以下步驟：

(1)將魚鱗水洗去雜質后，用10％(W/V)的NaCl溶液浸泡1-2天，中間換液一次，脫除雜蛋白和魚銀粉；將魚鱗撈出后再用0.4mol/L的HCl溶液、料液比1:10-1:20，浸泡1-2h，以脫除鈣鹽等無機鹽；

(2)將魚鱗用蒸餾水浸泡溶脹，接著用堿性蛋白酶酶解，然后離心，上清液為酶解液，將酶解液冷凍干燥得到ACE抑制肽；

步驟(1)所述的料液比優(yōu)選1:15；

步驟(2)所述的酶解，pH值優(yōu)選9，溫度優(yōu)選55℃，底物濃度為5g/100mL，加酶量為底物的6％，酶解時間優(yōu)選2h；酶解結束后在沸水浴中加熱10min終止酶解反應；

步驟(2)所述的離心是4℃、4000r/min離心15min。

由上述方法制得的ACE抑制肽可用于制備降血壓藥物。

魚鱗的主要成分為蛋白質和羥基磷灰石，其中蛋白質含量占(50％-70％)，通過鹽酸脫鈣后魚鱗中蛋白質含量達到90％以上。堿性蛋白酶可以特異性地切斷蛋白質中的肽鍵，魚鱗通過堿性蛋白質的水解作用可以產(chǎn)生多肽，通過體外ACE抑制率檢測到魚鱗水解物中含有能夠抑制ACE活性的多肽。

本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術具有如下的優(yōu)點及效果：

1、本發(fā)明方法的原料魚鱗是魚類加工的副產(chǎn)品，原料豐富，使魚鱗資源得到了充分的利用，減少環(huán)境污染的同時提高了魚鱗的附加值。

2、本發(fā)明技術成本低廉，采用酶法制備，工藝合理，操作簡單。產(chǎn)品為ACE抑制率較高的ACE抑制肽，與化學合成的ACE抑制肽相比，本發(fā)明制備的ACE抑制肽安全無毒、易于消化。

具體實施方式

下面結合實施例對本發(fā)明作進一步詳細的描述，但本發(fā)明的實施方式不限于此。

實施例1

一種利用魚鱗制備ACE抑制肽的方法，包括以下步驟：

(1)將魚鱗水洗去雜質后，用10％(W/V)的NaCl溶液浸泡48h，中間換液一次，脫除雜蛋白和魚銀粉；將魚鱗撈出后再用0.4mol/L的HCl溶液、料液比1:15浸泡1h，以脫除鈣鹽等無機鹽；

(2)將魚鱗用蒸餾水浸泡溶脹1h，然后用堿性蛋白酶酶解，酶解pH值9，溫度55℃，底物濃度為5g/100mL，加酶量為底物的6％，酶解時間2h；酶解結束后在沸水浴中加熱10min終止酶解反應；

(3)離心(4℃、4000r/min離心15min)，上清液為酶解液，將酶解液冷凍干燥得到ACE抑制肽，該ACE抑制肽體外ACE抑制率為86.20％。

實施例2

一種利用魚鱗制備ACE抑制肽的方法，包括以下步驟：

(1)將魚鱗水洗去雜質后，用10％(W/V)的NaCl溶液浸泡24h，中間換液一次，脫除雜蛋白和魚銀粉；將魚鱗撈出后再用0.4mol/L的HCl溶液、料液比1:15浸泡2h，以脫除鈣鹽等無機鹽；

(2)將魚鱗用蒸餾水浸泡溶脹1h，然后用堿性蛋白酶酶解，酶解pH值9，溫度60℃，底物濃度為5g/100mL，加酶量為底物的4％，酶解時間2h；酶解結束后在沸水浴中加熱10min終止酶解反應；

(3)離心(4℃、4000r/min離心15min)，上清液為酶解液，將酶解液冷凍干燥得到ACE抑制肽，該ACE抑制肽體外ACE抑制率為72.48％。

上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護范圍之內。