一種動物免疫佐劑及其制備方法和使用方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種以免疫刺激添加劑為特征的醫(yī)用配制品，特別是涉及一種用于動 物的免疫刺激添加劑。
【背景技術(shù)】
[0002] 免疫佐劑也稱佐劑或抗原佐劑，是一類單獨使用時一般無免疫原性，但與抗原物 質(zhì)合并使用（與抗原一起注射或預(yù)先注入機體）時能增強抗原物質(zhì)免疫原性，增強機體免 疫應(yīng)答，或改變機體免疫應(yīng)答類型的物質(zhì)。
[0003] 常用的佐劑可分為4類：無機佐劑，如氫氧化鋁，明礬等；有機佐劑，微生物及其產(chǎn) 物如分枝桿菌（結(jié)核桿菌、卡介苗）、短小桿菌、百日咳桿菌、內(nèi)毒素、細(xì)菌提取物（胞壁酰二 肽）等；合成佐劑，如人工合成的雙鏈多聚核苷酸（雙鏈多聚腺苷酸、尿苷酸）、左旋咪唑、 異丙肌苷等；油劑，如弗氏佐劑、花生油乳化佐劑、礦物油、植物油等。弗氏佐劑又可分為弗 氏不完全佐劑和完全佐劑兩種，是目前動物試驗中最常用佐劑。
[0004] 目前的佐劑雖然能滿足基本的增強免疫效果，但還有提升空間。因為目前的佐劑 主要通過物理吸附、分隔緩釋達到提高抗原利用率、或者藥物、生物制劑刺激免疫系統(tǒng)，但 鮮有直接通過直接修飾抗原增強免疫效果的佐劑出現(xiàn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種無毒、副作用，直接修飾抗原增強免疫效果 的動物免疫佐劑及其制備方法和使用方法。
[0006] 本發(fā)明一種動物免疫佐劑，其特征在于：包括油劑和免疫增強劑；其中，所述油劑 包括表面活性劑和60-70份的液體石蠟；所述表面活性劑包括20-35份羊毛脂和0. 1-2份 斯盤-80 ;所述免疫增強劑包括0. 05-0. 3份卡介苗、0. 1-1份胞壁酰二肽、1-5份左旋咪唑 和0. 5-3份納米級羥基磷灰石。
[0007] 進一步，本發(fā)明的一種動物免疫佐劑，所述免疫增強劑還包括1-3份黃芪多糖、 0. 01-0. 1份豬鏈球菌磷酸酶。
[0008] 更進一步，本發(fā)明的一種動物免疫佐劑，所述豬鏈球菌磷酸酶通過以下基 因序列合成制得：atggctttct cttctgttaa cctggacgaa aacccgcgta tccgtggtgg ttcttgcctg gctaccatca aaatcatgga aatcgctctgctgaccgacg ttggtcagaa acgttctaac aaccaggact acatcaaccg ttacaaaaac cgtgctggta tcgacctggt tgttctggctgacggtatgg gtggtcaccg tgctggtcac atcgcttctg aaatggctgc taccgacctg ggtgctgctt gggttgacac ccagctggttaccctgaacg acgttcgtga atggatggtt getatcateg acgctgaaaa ccagaaaatc cacgaactgg gtcagaccgaagaatacaaa ggtatgggta ccaccctgga agctgttgtt gttatcgaca accagatgat ctacgctcac gttggtgact ctcgtgttggtctgatccgt gacggtgaat acacccgtct gaccaacgac cactctctgg ttggtgctct ggttcgtgct ggtcagctga ccgaagaagaagctcagcgt cacccgcaga aaaacatcgt tacccagtct atcggtcagg ctgaaccgat cgaaccggac atcgctctgaaaaccctgga agttggtgac tacgttctga tcaactctga cggtctgacc aacatgatcc cgaccgaaga catccgtgac atcgttctgtctgacgtttc tatcgaatct aaagttgaaa ccctggttcg tttcgctaac aacgctggtg gtctggacaa catcaccgtt ggtctgctgcacatcaccga agaagctcgt〇
[0009] 本發(fā)明一種動物免疫佐劑的制備方法，其包括以下步驟：
[0010] 一、按照順序邊混合邊加入液體石蠟、羊毛脂、斯盤-80、納米級羥基磷灰石、左旋 咪唑、胞壁酰二肽，然后于2000-4000r/min下攪拌20-30min ;
[0011] 二、將攪拌后的材料用蒸汽加熱至120-130°C后進行滅菌20-40min ;
[0012] 三、滅菌后的佐劑冷卻后加入卡介苗混勻，即制得動物免疫佐劑。
[0013] 本發(fā)明的制備方法中原料的加入順序采用先油性后水性，先簡單后復(fù)雜，先穩(wěn)定 后不穩(wěn)定；首先保證的油包水的穩(wěn)定性，同時保持了原料的活性。
[0014] 進一步，本發(fā)明一種動物免疫佐劑的制備方法，所述步驟一中按質(zhì)量份數(shù)還加入 1-3份的黃芪多糖，其加入時間在納米級羥基磷灰石與左旋咪唑之間。
[0015] 進一步，本發(fā)明一種動物免疫佐劑的制備方法，所述步驟三中按質(zhì)量份數(shù)還加入 0. 01-0. 1份的豬鏈球菌磷酸酶，其加入時間在卡介苗之后。
[0016] 本發(fā)明一種動物免疫佐劑的使用方法，其步驟為：按質(zhì)量體積比向動物免疫佐 劑中加入千分之一到百萬分之一的水溶性碳二亞胺或戊二醇，然后與抗原按體積比為 2 : 1-1 : 2混合，乳化，滴水試驗合格后靜置lh，即可。
[0017] 本發(fā)明的動物免疫佐劑及其制備方法和使用方法與現(xiàn)有技術(shù)的不同之處在于：
[0018] 1、本發(fā)明的動物免疫佐劑能夠有效的誘導(dǎo)抗原特異性的細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng) 答，綜合利用物理吸附、分隔緩釋、藥物刺激和抗原結(jié)構(gòu)修飾等要素得到高效價、高靈敏度 的抗體。
[0019] 2、本發(fā)明中加入了黃芪多糖和豬鏈球菌磷酸酶，其抗體含量和反應(yīng)靈敏度具有增 強的作用。
[0020] 3、本發(fā)明中加入的納米級羥基磷灰石和水溶性碳二亞胺或戊二醇均能夠修飾抗 原，增加抗原的體積，從而增強抗原被識別的幾率，提高反應(yīng)靈敏度。
[0021] 4、采用本發(fā)明的方法制得的免疫佐劑能夠保持卡介苗的活性和其他原料的理化 性質(zhì)，有利于免疫佐劑發(fā)揮其作用。
【具體實施方式】
[0022] 下面結(jié)合實施例與驗證試驗對本發(fā)明的動物免疫佐劑及其制備方法和使用方法 作進一步的說明。
[0023] 實施例1
[0024] 本實施例一種動物免疫佐劑按照以下步驟制備：
[0025] -、稱取原料：分別稱取70g液體石蠟、31g羊毛脂、0.1 g斯盤-80、0. 3g卡介苗、 0. 3g胞壁酰二肽、4g左旋咪唑和3g納米級羥基磷灰石；
[0026] 二、按照順序邊混合邊加入液體石蠟、羊毛脂、斯盤-80、納米級羥基磷灰石、左旋 咪唑、胞壁酰二肽，然后于2000-4000r/min下攪拌20-30min ;
[0027] 三、將攪拌后的材料用蒸汽加熱至120-130°C后進行滅菌20-40min ;
[0028] 四、滅菌后的佐劑冷卻后加入卡介苗混勻，即制得動物免疫佐劑。
[0029] 實施例2
[0030] 本實施例一種動物免疫佐劑按照以下步驟制備：
[0031] -、稱取原料：分別稱取68g液體石蠟、20g羊毛脂、2g斯盤-80、0. 05g卡介苗、 0. 7g胞壁酰二肽、5g左旋咪唑和I. 2g納米級羥基磷灰石；
[0032] 二、按照順序邊混合邊加入液體石蠟、羊毛脂、斯盤-80、納米級羥基磷灰石、左旋 咪唑、胞壁酰二肽，然后于2000-4000r/min下攪拌20-30min ;
[0033] 三、將攪拌后的材料用蒸汽加熱至120-130°C后進行滅菌20-40min ;
[0034] 四、滅菌后的佐劑冷卻后加入卡介苗混勻，即制得動物免疫佐劑。
[0035] 實施例3
[0036] 本實施例一種動物免疫佐劑按照以下步驟制備：
[0037] -、稱取原料：分別稱取60g液體石蠟、35g羊毛脂、0. 6g斯盤-80、0. 24g卡介苗、 0.1 g胞壁酰二肽、2g左旋咪唑和2. 5g納米級羥基磷灰石；
[0038] 二、按照順序邊混合邊加入液體石蠟、羊毛脂、斯盤-80、納米級羥基磷灰石、左旋 咪唑、胞壁酰二肽，然后于2000-4000r/min下攪拌20-30min ;
[0039] 三、將攪拌后的材料用蒸汽加熱至120-130°C后進行滅菌20-40min ;
[0040] 四、滅菌后的佐劑冷卻后加入卡介苗混勻，即制得動物免疫佐劑。
[0041] 實施例4
[0042] 本實施例一種動物免疫佐劑按照以下步驟制備：
[0043] -、稱取原料：分別稱取62g液體石蠟、24g羊毛脂、I. 5g斯盤-80、0. 12g卡介苗、 Ig胞壁酰二肽、Ig左旋咪唑和0. 5g納米級羥基磷灰石；
[0044] 二、按照順序邊混合邊加入液體石蠟、羊毛脂、斯盤-80、納米級羥基磷灰石、左旋 咪唑、胞壁酰二肽，然后于2000-4000r/min下攪拌20-30min ;
[0045] 三、將攪拌后的材料用蒸汽加熱至120-130°C后進行滅菌20-40min ;
[0046] 四、滅菌后的佐劑冷卻后加入卡介苗混勻，即制得動物免疫佐劑。
[0047] 實施例5
[0048] 本實施例一種動物免疫佐劑按照以下步驟制備：
[0049] -、稱取原料：分別稱取65g液體石蠟、28g羊毛脂、Ig斯盤-80、0. 18g卡介苗、 0. 5g胞壁酰二肽、3g左旋咪唑和2g納米級羥基磷灰石；
[0050] 二、按照順序邊混合邊加入液體石蠟、羊毛脂、斯盤-80、納米級羥基磷灰石、左旋 咪唑、胞壁酰二肽，然后于2000-4000r/min下攪拌20-30min ;
[0051] 三、將攪拌后的材料用蒸汽加熱至120-130°C后進行滅菌20-40min ;
[0052] 四、滅菌后的佐劑冷卻后加入卡介苗混勻，即制得動物免疫佐劑。
[0053] 實施例6
[0054] 本實施例一種動物免疫佐劑與實施例5的不同之處在于，步驟二中還加入Ig黃芪 多糖，其加入時間在納米級羥基磷灰石與左旋咪唑之間；步驟四中還加入0. 2g豬鏈球菌磷 酸酶，其加入時間在卡介苗之后。
[0055] 實施例7
[0056]