一種二肽分子及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于蛋白質(zhì)領(lǐng)域，特別涉及一種二膚及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]k脯氨酸（Pro),英文名為L(zhǎng)(-)-Proline，別名：4-漠-2-(H氣甲基）苯礙醜氯 4-漠-2-(H氣甲基）苯礙醜基氯，CAS號(hào)為147-85-3,是植物蛋白質(zhì)的組分之一，并可W 游離狀態(tài)廣泛存在于植物體中。在干旱、鹽潰等脅迫條件下，許多植物體內(nèi)脯氨酸大量積 累。積累的脯氨酸除了作為植物細(xì)胞質(zhì)內(nèi)滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)外，還在穩(wěn)定生物大分子結(jié)構(gòu)、降 低細(xì)胞酸性、解除氨毒W(wǎng)及作為能量庫(kù)調(diào)節(jié)細(xì)胞氧化還原勢(shì)等方面起重要作用。
[0003]k丙氨酸，英文名為kAlanine，CAS號(hào)：56-41-7,C3H7N02 = 89. 10200°CW上升 華。是組成蛋白質(zhì)的一種成分。在營(yíng)養(yǎng)學(xué)中屬人體非必需的氨基酸。目前多從發(fā)酵法和天 然產(chǎn)物中提取。
[0004] 炎癥是具有血管系統(tǒng)的活體組織對(duì)損傷因子所發(fā)生的防御反應(yīng)。對(duì)機(jī)體的損傷的 局部組織所呈現(xiàn)的反應(yīng)稱為炎癥反應(yīng)，炎癥發(fā)展后期會(huì)產(chǎn)生滲出液，滲出物的壓迫和炎癥 介質(zhì)的作用可引起患者疼痛?，F(xiàn)在抗炎的臨床應(yīng)用藥物主要為化學(xué)合成藥物，如蔡了美 麗、剛巧美辛、化羅昔康、布洛芬等，送些化學(xué)藥物雖然抗炎效果明顯，但不能治本，不能 消除致炎的基本原因，大多都有較嚴(yán)重的不良反應(yīng)，給患者造成痛苦和損失。
[0005] 創(chuàng)面修復(fù)，創(chuàng)面是正常皮膚（組織）在外界致傷因子如外科手術(shù)、外力、熱、電流、 化學(xué)物質(zhì)、低溫W及機(jī)體內(nèi)在因素如局部血液供應(yīng)障礙等作用下所導(dǎo)致的損害。常伴有皮 膚完整性的破壞W及一定量正常組織的丟失，同時(shí)，皮膚的正常功能受損。也稱為傷口或者 創(chuàng)傷。創(chuàng)面修復(fù)既傷口修復(fù)。
[0006]消化道潰瘍病，胃潰瘍、十二指腸潰瘍統(tǒng)稱為消化道潰瘍病。由于生活節(jié)奏加快， 工作壓力加大，近年消化道潰瘍病的發(fā)病率不僅未見下降，反有上升趨勢(shì)。近10多年來(lái)本 病的癥狀也變得不典型，無(wú)規(guī)律的胃部隱痛常引不起人們的注意，直到發(fā)生嘔血或黑便時(shí) 方到醫(yī)院就診。消化性潰瘍主要指發(fā)生在胃和十二指腸的慢性潰瘍，亦可發(fā)生于食管下段、 胃空腸吻合口周圍及含有異位胃粘膜的美克爾（MECKEL)憩室。送些潰瘍的形成與胃酸和 胃蛋白酶的消化作用有關(guān)，故稱消化性潰瘍。近年研究發(fā)現(xiàn)潰瘍的形成與幽口螺旋桿菌 (HP)的存在有關(guān)。本病絕大多數(shù)巧5%W上）位于胃和十二指腸，故又稱胃十二指腸潰 瘍。本病的總發(fā)病率占人口的5-10%，十二指腸潰瘍較胃潰瘍多見，W青壯年多發(fā)，男多于 女，兒童亦可發(fā)病，老年患者所占比例亦逐年有所增。由于復(fù)發(fā)率很高，給患者帶來(lái)痛苦。
[0007] 免疫力是人體自身的防御機(jī)制，是人體識(shí)別和消滅外來(lái)侵入的任何異物（病毒、 細(xì)菌等）；處理衰老、損傷、死亡、變性的自身細(xì)胞W及識(shí)別和處理體內(nèi)突變細(xì)胞和病毒感 染細(xì)胞的能力?，F(xiàn)代免疫學(xué)認(rèn)為，免疫力是人體識(shí)別和排除"異己"的生理反應(yīng)。年老體弱 的人員由于自身免疫系統(tǒng)較弱，所W需要提高細(xì)胞的識(shí)別能力。免疫力低下是會(huì)造成人體 容易受到外界的感染，功能下降。
[000引在現(xiàn)有藥物中缺少可W同時(shí)治療多種疾病的二膚，臨床中療效好，毒性小的二膚 的產(chǎn)品未發(fā)現(xiàn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 為了尋找一種可W多角度修復(fù)人體創(chuàng)面和抗炎鎮(zhèn)痛，同時(shí)提高人體免機(jī)能的藥 物，發(fā)明人通過(guò)大量試驗(yàn)，廣泛的篩選，采用Fmoc保護(hù)的氨基酸來(lái)合成，得到大量二膚分 子，其中部分二膚分子獲得了意想不到的技術(shù)效果。意外地發(fā)現(xiàn)治療效果較好的二膚PA,即 k脯氨酸A-丙氨酸，其由Pro,Ala2個(gè)氨基酸殘基組成，相對(duì)分子量為186. 23,其氨基酸 序列如SEQID: 1所示。
[0010] 上述二膚的制備方法可W使用合成，也可W采用從生物體中提取純化得到。
[0011] 制備方法，其特征在于包括如下的步驟：
[0012] a.合成順序?yàn)閺腃端到N端；取1倍摩爾當(dāng)量的樹脂放入多膚合成儀反應(yīng)器中， 加入DCM(二氯甲焼）溶脹半小時(shí)，然后抽掉DCM，加入序列中第一個(gè)Fmoc保護(hù)的氨基酸 IOmmol，2倍摩爾當(dāng)量的DIEA(二異丙基己胺），適量的DMF(二甲基甲醜胺）、DCM溶液（適 量是指W可使樹脂充分鼓動(dòng)起來(lái)為宜），用氮?dú)夤呐莘磻?yīng)60min;然后加入約5倍摩爾當(dāng)量 甲醇，反應(yīng)半小時(shí)，抽掉反應(yīng)液，用DMF、甲醇洗凈；
[001引b.加入適量脈巧去除Fmoc(9-巧甲氧撰基）保護(hù)基，洗凈，巧立麗檢測(cè)；
[0014] C.往反應(yīng)器中加入序列中第二個(gè)氨基酸（也為2倍摩爾當(dāng)量），2倍摩爾當(dāng)量 皿TU(苯并H氮哇-N，N，N'，N' -四甲基脈六氣磯酸鹽）及DIEA，氮?dú)夤呐莘磻?yīng)半小時(shí)，抽掉 液體，用DMF,甲醇洗凈，巧H麗檢測(cè)；
[0015]d.將樹脂用氮?dú)獯蹈珊螅瑥姆磻?yīng)柱中取下并稱取重量，倒入燒瓶中，然后往燒瓶中 加一定量的95%TFA(H氣己酸）切割液，震蕩反應(yīng)2h，目的是將二膚從樹脂載體上裂解下 來(lái)并去除氨基酸的側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)；
[0016] e.濾掉樹脂，得到濾液，然后向?yàn)V液中加入大量己離，析出粗產(chǎn)物，然后離必，清洗 即可得到該序列的粗產(chǎn)物；
[0017]f.分析提純和質(zhì)譜檢測(cè)：用ESI(電噴霧電離）離子源質(zhì)譜儀和測(cè)序儀檢測(cè)該序 列的正確性，用高效液相色譜將粗品提純至要求純度；
[0018] g.收集純化好的目標(biāo)二膚溶液放入凍干機(jī)中進(jìn)行濃縮，凍干成白色粉末。
[0019] 本發(fā)明提供的二膚可作為藥品，普通食品、保健品或者消毒劑，化妝品，醫(yī)療器 械的組成部分。本發(fā)明還提供一種二膚的組合物，其中含有藥學(xué)可W接受的載體。組合物可 WW藥物制劑形式存在，該藥物制劑形式藥物組合物，可W按照制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制備，包括 將藥物活性成分，本發(fā)明的二膚與藥物載體混合，按照制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制成所需要的劑型。
[0020] 本發(fā)明中的二膚，分子量小、人工合成方便、純度很高，生產(chǎn)方面，適合大規(guī)模生 產(chǎn)，在應(yīng)用方面，送些二膚抗炎鎮(zhèn)痛效果明顯，對(duì)創(chuàng)面損傷、燒傷、燙傷、消化道潰瘍具有顯 著的治療效果；該二膚還有能提高動(dòng)物免疫機(jī)能的作用，二膚能夠在制備抗菌、抗炎鎮(zhèn)痛、 抗腫瘤和提高免疫力的藥物中的應(yīng)用。
【具體實(shí)施方式】
[0021] W下是結(jié)合具體試驗(yàn)對(duì)本發(fā)明的說(shuō)明，并不是對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制。
[0022] 實(shí)施例1本發(fā)明中二膚的制備方法
[0023]原料：樹脂（Wang Resin)，F(xiàn)moc保護(hù)的氨基酸，
[0024]試劑；N，N-二甲基醜胺值MF)，DCM，ME0H，己酸酢，化巧，DIEA，皿TU，六氨化巧 [002引儀器；十二通道半自動(dòng)多膚合成化高效液相色譜她LC)，型號(hào)；Waters2695檢測(cè) 試劑；苯酪試劑，化政巧H麗試劑
[0026] (1)合成順序?yàn)閺腃端到N端。
[0027] 似取IOmmol當(dāng)量的樹脂放入多膚合成儀反應(yīng)器中，加入DCM(二氯甲焼）溶脹 半小時(shí)，然后抽掉DCM，加入序列中第一個(gè)Fmoc保護(hù)的氨基酸IOmmolJOmmol的DIEA(二 異丙基己胺），適量的DMF(二甲基甲醜胺）、DCM溶液（適量是指W可使樹脂充分鼓動(dòng)起來(lái) 為宜），用氮?dú)夤呐莘磻?yīng)60min。然后加入約SOmmol當(dāng)量甲醇，反應(yīng)半小時(shí)，抽掉反應(yīng)液，用 DMF、甲醇洗凈。
[002引 做加入適量脈巧去除Fmoc(9-巧甲氧撰基）保護(hù)基，洗凈，巧立麗檢測(cè)。
[0029] (4)往反應(yīng)器中加入序列中第二個(gè)氨基酸（也為20mmol)JOmmol皿TU(苯并H氮 哇-N，N，N'，N' -四甲基脈六氣磯酸鹽）及DIEA，氮?dú)夤呐莘磻?yīng)半小時(shí)，抽掉液體，用DMF，甲 醇洗凈，巧H麗檢測(cè)。
[0030] (5)重復(fù)依步驟3、4的方式依次加入序列中氨基酸，抽掉液體，用DMF洗凈，巧H麗 檢測(cè)。
[003。（6)將樹脂用氮?dú)獯蹈珊?，從反?yīng)柱中取下并稱取重量，倒入燒瓶中，然后往燒瓶 中加一定量的95%TFA(H氣己酸）切割液，震蕩反應(yīng)2h，目的是將多膚從樹脂載體上裂解 下來(lái)并去除氨基酸的側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)。
[0032] (7)濾掉樹脂，得到濾液，然后向?yàn)V液中加入大量己離，析出粗產(chǎn)物，然后離必，清 洗即可得到該序列的粗產(chǎn)物。
[0033] (8)分析提純和質(zhì)譜檢測(cè)：用ESI(電噴霧電離）離子源質(zhì)譜儀檢測(cè)該序列分子量 的正確性，用高效液相色譜將粗品提純至要求純度。
[0034] (9)收集