一種利用豬血制備亞硝基血紅蛋白的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種食品添加劑的生產方法，特別涉及一種利用豬血制備亞硝基血紅蛋白的方法。
【背景技術】
[0002]亞硝基亞鐵血色原通常被認為是能使腌肉發(fā)色的物質。肉經亞硝酸鹽(或硝酸鹽)腌制后產生紅色的一氧化氮血紅蛋白(HbNO)，在鹽和加熱的作用下又會因珠蛋白變性而轉變成比較穩(wěn)定的色素一亞硝基亞鐵血色原，是一種粉紅色的色素。亞硝基血紅蛋白與亞硝基亞鐵血色原結構的一致性決定了它將是一種很安全無污染的肉制品添加劑。
[0003]作為合成亞硝基血紅蛋白原料之一的血紅蛋白來源廣泛且安全可靠。據資料顯示,豬血占豬活體總重的5%，屠宰后所能收集到的血液約占總量的60% -70%，豬血中蛋白質含量約19%，其中主要為血紅蛋白，占全血蛋白質總量的2/3。中國從1993年以來，肉類生產量一直居于世界第一的位置。因此，用豬血作為原料合成亞硝基血紅蛋白在經濟上是切實可行的。而且，豬血營養(yǎng)豐富，全血含有17%-21%的蛋白質，從氨基酸組成來看，血液蛋白質是一種優(yōu)質蛋白質，尤其是賴氨酸含量很高，接近9.0%，其必需氨基酸含量也高于人乳和全蛋。從蛋白質互補的角度來看，由于谷物蛋白質中賴氨酸含量低，蛋氨酸和骯氨酸含量高，異亮氨酸含量適當，血液的高賴氨酸含量使其成為很好的谷物蛋白互補物且易吸收。因此，用豬血合成亞硝基血紅蛋白不僅不會破壞血液的營養(yǎng)價值，而且能夠提高動物血資源綜合利用率和提高產品附加值。故亞硝基血紅蛋白將是一種多功能的食品添加劑，具有廣泛的開發(fā)和應用前景。

【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明的目的提供一種利用豬血制備亞硝基血紅蛋白的方法，該方法利用溶脹、離心相結合的方法從豬血中分離純化血紅蛋白，然后將血紅蛋白與亞硝酸鈉反應合成亞硝酸血紅蛋白。該方法工藝簡單、所需設備要求較低，適合工業(yè)化生產。
[0005]如上構思，本發(fā)明的技術方案是:一種利用豬血制備亞硝基血紅蛋白的方法，其特征在于:包括如下步驟:
[0006]①從新鮮豬血中分離出血細胞；
[0007]②從血細胞只能怪提取出血紅蛋白粗提液；
[0008]③純化血紅蛋白，并測定其純度:在步驟②中得到的血紅蛋白粗提液中加入抗氧化劑真空脫氣，并通入N2保護，于60°C水浴加熱30min使雜蛋白沉淀，然后離心取上清液；純化后的血紅蛋白溶液加入10mg/ml甘油后直于4 C冰箱中保存?zhèn)溆茫蛔詈笤贉y定血紅蛋白含量；
[0009]④合成亞硝基血紅蛋白:在純化后的血紅蛋白中加入NaOH，同時加入亞硝酸鈉、維生素C，調節(jié)pH為酸性，加熱至50-70°C保持25-45min，真空冷凍干燥后生成紅色粉狀物即為亞硝基血紅蛋白。
[0010]上述步驟②的具體方法是:加入血紅蛋白體積1.5倍的蒸餾水，混合均勻后電磁攪拌30min ;當溶液由暗紅轉為鮮紅時，將溶液以3000r / min離心15min，棄去沉淀，得血紅蛋白粗提液。
[0011]上述步驟③測定血紅蛋白含量的方法是:
[0012]①AHD-575試劑的配制:準確稱取聚乙二醇辛基苯基醚25.0g，加入0.1moI/LNaOH溶液定容至1L，過濾，室溫下保存?zhèn)溆茫?br>[0013]②標準曲線的制作:將豬血紅蛋白標準品配制成不同濃度的溶液，分別吸取0.1ml加入到30mLAHD-575試劑中，靜置反應5min，于575m波長下，以AHD-575試劑為空白，測定吸光度；以豬血紅蛋白標準品的濃度(g/L)為橫坐標，以吸光度為縱坐標，得出血紅蛋白溶液濃度X與吸光度值Y的關系的標準線及回歸方程；
[0014]③于潔凈的燒杯中，吸取血紅蛋白提取液樣品0.1ml,以AHD-575的方法測定吸光度A575，查標準曲線求得血紅蛋白含量(g/L)。
[0015]上述步驟④血紅蛋白:亞硝酸鈉:維生素C按照摩爾比=1:1?3:4?8的比例配制。
[0016]上述步驟④中調節(jié)pH為5.0?6.0。
[0017]上述步驟④中加入0.5gNa0H。
[0018]本發(fā)明具有如下的優(yōu)點和積極效果:
[0019]①本發(fā)明利用溶脹、離心相結合的方法從豬血中分離純化血紅蛋白，然后將血紅蛋白與亞硝酸鈉反應合成亞硝酸血紅蛋白。該方法工藝簡單、所需設備要求較低，適合工業(yè)化生產。
[0020]②本發(fā)明采用原料之一豬血，來源豐富且成本低。
[0021]③本發(fā)明的原料豬血含有豐富的營養(yǎng)價值，因此合成的亞硝基蛋白中攜帶了多種人體所需的營養(yǎng)物質。
[0022]④本發(fā)明制備的產品亞硝基血紅蛋白是一種安全無污染的食品添加劑。
【附圖說明】
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[0023]圖1是血紅蛋白標準曲線圖；
[0024]圖2是硝基血紅蛋白丙酮提取液紫外掃描圖。
【具體實施方式】
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[0025]下面結合實施例對本發(fā)明做進一步說明:
[0026]實施例1:一種利用豬血制備亞硝基血紅蛋白的方法，包括如下步驟:
[0027]1.血細胞的分離:取100mL新鮮豬血快速添加Ig檸檬酸鈉抗凝劑，用玻璃棒沿一個方向攪拌與豬血充分混勻，低溫運回實驗室。攪拌5min后過濾,3000r/min離心30min,棄上層血清；加入0.9%的生理鹽，攪拌均勻，3000r/min離心lOmin、棄上清(重復兩次)，收集紅血球并記錄體積。
[0028]2.提取血紅蛋白:加入血細胞體積1.5倍的蒸餾水，混合均勻后電磁攪拌30min ；當溶液由暗紅轉為鮮紅時，將溶液以3000r / min離心15min，棄去沉淀，得血紅蛋白粗提液。
[0029]3.血紅蛋白純化:將血紅蛋白粗提液中加入適量抗氧化劑Vc，真空脫氣，并通入N2保護，于60°C水浴加熱30min使雜蛋白沉淀，3000r / min離心15min，取上清液。純化后的血紅蛋白溶液加入10mg/ml甘油后直于4 C冰箱中保存?zhèn)溆谩?br>[0030]血紅蛋白純度測定:將豬血紅蛋白標準品配制成不同濃度的溶液，分別吸取0.1ml加入到30mLAHD-575試劑中，靜置反應5min，于575m波長下，以AHD-575試劑為空白，測定吸光度。以豬血紅蛋白標準品的濃度(g/L)為橫坐標，以吸光度為縱坐標，得出血紅蛋白溶液濃度X與吸