靶向脂質(zhì)體的制備及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及靶向脂質(zhì)體的制備及其應(yīng)用，具體涉及肝靶向脂質(zhì)體的制備及其應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0002] 肝臟相關(guān)疾病是影響人類(lèi)健康的重要疾病之一，我國(guó)每年因終末期肝病死亡 人數(shù)超過(guò)30萬(wàn)。然而目前用于治療肝病的藥物多為系統(tǒng)給藥，具有肝臟分布少、體內(nèi) 不穩(wěn)定、肝外副作用較多等缺點(diǎn)，限制了藥物的臨床應(yīng)用。因此，如何將藥物高效地傳 遞至肝臟，更好地發(fā)揮治療作用、降低肝外副作用是肝病治療領(lǐng)域亟待解決的重大問(wèn) 題（Poelstra K, Prakash J, Beljaars L. Drug targeting to the diseased liver[J]· Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society, 2012, 161(2) : 188-197)。肝臟靶向給藥系統(tǒng)可以將藥物特異性靶向肝臟，有利 于肝臟富集，減少藥物用量及降低全身的毒副作用（賀玲，李健和.肝靶向給藥系統(tǒng)的研 究進(jìn)展[J].研究進(jìn)展，2010，17(9):15-17)。脂質(zhì)體由于其免疫原性低、載藥范圍廣，具 有保護(hù)藥物活性、提高穩(wěn)定性、緩釋等優(yōu)點(diǎn)，是最常用的載藥模型之一。然而，普通的脂質(zhì) 體并不能完成靶向傳遞的功效，因此需對(duì)普通脂質(zhì)體進(jìn)行靶向修飾，使其達(dá)到主動(dòng)靶向 (Pranali PD,Swati BjVladimir PT, et al. Current trends in the use of liposomes for tumor targeting[J]· Nanomedicine，2013, 8(9):1509-1528)。
[0003] 乙型肝炎病毒是一種嗜肝類(lèi)病毒，其外膜蛋白的PreSl區(qū)是與肝細(xì) 胞受體結(jié)合的重要部位（Liang TJ. Hepatitis B:The Virus and Disease[J]· Hepatology，2009, 49 (5) :S13-S21)。最近研究揭示，鈉離子-?；悄懰峁厕D(zhuǎn)運(yùn)多肽NTCP (Sodium taurocholate cotransporting polypeptide)是 HBV 的功能性受體（Yan H，Zhong GjXu Gj et al. Sodium taurocholate cotransporting polypeptide is a functional receptor for human hepatitis B and D virus [J] · Elife，2012, I (e00049)，包括 D 基因 型preS/2-48在內(nèi)的源于PreSl的多段多肽均可以與其特異性結(jié)合（Gripon P，Cannie I, Urban S. Efficient inhibition of hepatitis B virus infection by acylated peptides derived from the large viral surface protein [J].J Virol, 2005, 79(3):1613-1622 ； Petersen Jj Dandri Mj Mier Wj et al.Prevention of hepatitis B virus infection in vivo by entry inhibitors derived from the large envelope protein[J]. Nat Biotechnolj 2008, 26(3):335-341 ；Schulze A, Schieck A, Ni Yj et al. Fine mapping of pre-S sequence requirements for hepatitis B virus large envelope protein-mediated receptor interaction [J]· J Virol，2010, 84(4) : 1989-2000)。在本發(fā)明申請(qǐng)的一個(gè)實(shí)施 例中，以 C 基因型 HBVpreS/13-32myl: (myr-GTNLSVPNPLGFFPDHQLDP)作為靶向序列，偶聯(lián) Mal-PEG-DSPE作為導(dǎo)向性材料，制備具有肝細(xì)胞靶向性的納米脂質(zhì)體，構(gòu)建一種新型的肝 細(xì)胞靶向給藥系統(tǒng)，并在細(xì)胞模型上對(duì)其靶向性進(jìn)行驗(yàn)證(任浩洋、常紅霞、蔡雯雯，一種具 有肝細(xì)胞選擇性的脂質(zhì)體的導(dǎo)向性評(píng)價(jià)[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2007, 23(1) :37-40)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，以HBVpreS/13-32胃r作為靶向序列（SEQ IDN0. 3)， 將其化學(xué)偶聯(lián)到Mal-PEG-DSPE (馬來(lái)酰亞胺-聚乙二醇-硬脂?；字Ｒ掖及?，生 成HBVpreS/13-32myl:-PEG-DSPE ;采用乙醇注入法制備脂質(zhì)體，包裹熒光素鈉 （Fluorescein 8〇乜11111^5)形成耶￥?代5/13-32胃1:45-1^(^，以穩(wěn)定表達(dá)階1^的!1印62為細(xì)胞模型，分析納 米脂質(zhì)體靶向性。
[0005] 本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例結(jié)果顯示，合成的靶向脂質(zhì)體呈類(lèi)圓形，大小均勻，粒徑為 (94. 09 ±9. 2) nm，達(dá)到納米級(jí)別；有效包裹熒光素鈉，包封率為89. 32 ±1. 02% ;與無(wú)靶向修 飾脂質(zhì)體相比，可遞送更多的熒光素鈉進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。HBVpreS/13-32m!T修飾的靶向脂質(zhì)體， 有較高的包封率，為納米脂質(zhì)體，能特異性地通過(guò)NTCP靶向肝細(xì)胞，有望成為一種新型的 肝細(xì)胞靶向給藥系統(tǒng)。
[0006] 因此，本發(fā)明提供一種靶向肝細(xì)胞的化合物，該化合物的結(jié)構(gòu)如下式1所示：
[0007] X-B (式 1)
[0008] 式 1 中，
[0009] X為與鈉離子-?；悄懰峁厕D(zhuǎn)運(yùn)多肽（NTCP)特異性結(jié)合的源于乙型肝炎病毒外膜 蛋白PreSl區(qū)的多肽；和
[0010] B為下式2所示的馬來(lái)酰亞胺-聚乙二醇-硬脂?；字Ｒ掖及肪酆衔铮?br>[0011]
[0012] (式 2)
[0013] 式2中，η為2 - 100的整數(shù)，DSPE為硬脂?；字Ｒ掖及?；
[0014] 其中，X通過(guò)式2的馬來(lái)酰亞胺部分與B相連。
[0015] 在一個(gè)具體實(shí)施例中，X為源于乙型肝炎病毒外膜蛋白PreSl區(qū)的第2-119位氨 基酸的片段。
[0016] 在一個(gè)具體實(shí)施例中，所述X優(yōu)選地為源于乙型肝炎病毒外膜蛋白PreSl區(qū)的第 13-119位氨基酸的片段。
[0017] 在一個(gè)具體實(shí)施例中，所述X進(jìn)一步優(yōu)選地為源于乙型肝炎病毒外膜蛋白PreSl 區(qū)的第13-59位氨基酸的片段。
[0018] 在一個(gè)具體實(shí)施例中，所述X進(jìn)一步優(yōu)選地為源于乙型肝炎病毒外膜蛋白PreSl 區(qū)的第13-49位氨基酸的片段。
[0019] 在一個(gè)具體實(shí)施例中，所述X進(jìn)一步優(yōu)選地為源于乙型肝炎病毒外膜蛋白PreSl 區(qū)的第13-39位氨基酸的片段。
[0020] 在一個(gè)具體實(shí)施例中，所述X進(jìn)一步優(yōu)選地為源于乙型肝炎病毒外膜蛋白PreSl 區(qū)的第13-32位氨基酸的片段。
[0021] 在一個(gè)具體實(shí)施例中，所述X的N端被脂肪酸或膽固醇修飾。
[0022] 在一個(gè)具體實(shí)施例中，所述X的N端被豆蘧酸修飾。
[0023] 在一個(gè)具體實(shí)施例中，所述片段的氨基酸序列如SEQ ID NO: 1 - 3中任一項(xiàng)所示。
[0024] 在一個(gè)具體實(shí)施例中，η為2 - 80的整數(shù)，優(yōu)選5 - 50的整數(shù)，優(yōu)選10 - 40的 整數(shù)。
[0025] 在一個(gè)具體實(shí)施例中，聚乙二醇的分子量在600 - 2500的范圍之內(nèi)，優(yōu)選為 1000 - 2500,更優(yōu)選為 1500 - 2000。
[0026] 在一個(gè)具體實(shí)施例中，X所示多肽在其C末端還含有半胱氨酸殘基，通過(guò)該半胱氨 酸殘基與B的馬來(lái)酰亞胺部分相連。
[0027] 在一個(gè)具體實(shí)施例中，X所示多肽在其C末端還含有半胱氨酸殘基，其氨基酸序列 如 SEQ ID NO:4 所示。
[0028] 在一個(gè)具體實(shí)施例中，X所示多肽的N末端被豆蘧?；揎?。
[0029] 在一個(gè)具體實(shí)施例中，本發(fā)明的化合物如下式3所示：
[0030]
[0031] 式3中，X、η和DSPE如上文所定義。
[0032] 在一個(gè)具體實(shí)施例中，本發(fā)明的化合物如下式4所示：
[0034] 式中的聚乙二醇的分子量為2000。
[0035] 本發(fā)明涉及一種用于遞送藥物的組合物，該組合物含有本發(fā)明式1、2、3或4所示 的化合物，以及磷脂酰膽堿、膽固醇和PEG-DSPE中的任一種、任意兩種或全部三種。
[0036] 在一個(gè)具體實(shí)施例中，本發(fā)明用于遞送藥物組合物含有本發(fā)明化合物和磷脂酰膽 堿，還任選地含有膽固醇和/或PEG-DSPE。
[0037] 在一個(gè)具體實(shí)施例中，本發(fā)明用于遞送藥物組合物中，本發(fā)明化合物、磷脂酰膽 堿、膽固醇和PEG-DSPE的重量比為1~100:1~1000:0~500:0~500。
[0038] 在一個(gè)具體實(shí)施例中，所述用于遞送藥物的組合物是脂質(zhì)體。
[0039] 本發(fā)明還涉及一種藥物組合物，該藥物組合物含有本發(fā)明的脂質(zhì)體及治療有效量 的藥物。
[0040] 本發(fā)明還涉及本發(fā)明式1、2、3和4所示化合物在制備治療乙型肝炎或抑制乙型肝 炎病毒的藥物中的用途。
【附圖說(shuō)明】
[0041] 圖 1 顯示 HBVpreS/13-32，-PEG-DS