僅用于解釋本發(fā) 明,而不能理解為對本發(fā)明的限制。實施例中未注明具體技術(shù)或條件的,按照本領(lǐng)域內(nèi)的文 獻所描述的技術(shù)或條件或者按照產(chǎn)品說明書進行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者,均 為可以通過市購獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
[0022] 實施例1:分離與篩選
[0023] (1)分離與純化:以各種傳統(tǒng)發(fā)酵食品為樣品,具體操作如下:用無菌生理鹽水 梯度稀釋樣品后,將其涂布于MRS固體培養(yǎng)基(配方:蛋白胨10. 0g,牛肉膏10. 0g,酵母膏 5. 〇g,檸檬酸氫二銨((NH4)2HC6H507)2. 0g,葡萄糖(C6H1206 ?H20)20. 0g,吐溫 801. 0ml,乙酸鈉 (CH3C00Na? 3H20) 5. 0g,磷酸氫二鉀(K2HP04 ? 3H20) 2. 0g,硫酸鎂(MgS04 ? 7H20) 0? 58g,硫酸 錳(MnS04 ?H20) 0. 25g,蒸餾水1000ml,瓊脂18. 0g),置于37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24~48h,觀 察菌落形態(tài)特征,并挑取MRS固體培養(yǎng)基上乳酸菌的疑似菌落,分別轉(zhuǎn)接到MRS液體培養(yǎng)基 (配方:從MRS固體培養(yǎng)基配方中去掉瓊脂)中進行純培養(yǎng)。共分離出125株菌,然后對每株 菌進行編號,依次標為Y-l、Y-2、Y-3......Y-125。
[0024] (2)菌株的篩選:對分離純化得到的這125株菌進行酸及膽鹽耐受力的測定,詳細 實驗步驟見實施例4 :酸及膽鹽耐受力評價,從中篩選得到酸及膽鹽耐受力最強的Y-9,其 酸及膽鹽綜合耐受力達到了 125.0%。Y-9來源于農(nóng)家自制酸奶。
[0025] 實施例2 :生理生化指標的測定鑒定菌種
[0026] 采用碳水化合物鑒定試劑條(生產(chǎn)企業(yè)名稱:bioMerieux,sa,版本號: 07945F-CN-2002/11),對實施例1中分離獲得的Y-9進行碳水化合物測定。
[0027] 用途及原理:API50CH采用50個生化試驗用來對微生物的碳水化合物的代謝進行 研究。API50CH試條由50個微量孔組成,用以研究碳水化合物及其衍生物底物的發(fā)酵。用 API50CHL培養(yǎng)基接種試條,使底物水解,然后檢測發(fā)酵試驗。試條孵育過程中,試條上的小 管內(nèi)在厭氧環(huán)境下產(chǎn)酸,pH改變而使培養(yǎng)基中指示劑顏色變化,由此可觀察到發(fā)酵作用。試 條上第一孔中不含任何活性成分,以此作為陰性控制。
[0028] 實驗步驟:
[0029] (1)試條的準備
[0030] 每條試條分別由5個小試條組成,每個小試條上有10個小管。
[0031] 準備孵育盒(包括底盤和蓋子)。
[0032] 在盒子底盤一端的加長部分記錄菌株的編號。
[0033] 加10ml蒸餾水或去離子水于孵育盒底盤中,使其填滿所有的孔,以保持濕潤的氣 體環(huán)境。
[0034] 從包裝袋中取出2個試條(0-19, 20-39),再把它們分為4個小試條 (0-9, 10-19, 20-29, 30-39)并全部放在孵育盒底盤中。取出另一個小試條(40-49)放在孵 育盒底盤中上述4個試條的后面,即完成試條的準備。
[0035] (2)接種物的準備
[0036] 在MRS固體培養(yǎng)基上接種Y-9,置于37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng),然后使用棉試子從固體培 養(yǎng)基上收集菌株,在API50CHL培養(yǎng)基中制備接種物(菌懸液)。菌懸液制備好后,應(yīng)立即使 用。
[0037] (3)接種試條
[0038] 用無菌加樣器按下述要求將菌懸液加到試條上的50個管中。
[0039] 將孵育盒底盤向前輕輕傾斜,使加樣器頭靠在杯的邊緣加入菌懸液,避免產(chǎn)生氣 泡,僅加滿管的部分,管的上部(杯)不要加菌懸液,這樣管內(nèi)可保持厭氧環(huán)境。當(dāng)菌懸液接 種完成后,液面應(yīng)避免出現(xiàn)新月形的凹陷或凸起。
[0040] 根據(jù)被檢細菌的生長需要,將試條放在37 °C進行孵育24小時和48小時后,閱讀試 條,記錄結(jié)果,見表1。
[0041] 表1 :碳水化合物測定結(jié)果(+表示陽性可利用此底物發(fā)酵,-表示陰性)
【主權(quán)項】
1. 一種植物乳桿菌,其于2013年9月6日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏編號 CCTCCN0:M2013391,保藏名稱為植物乳桿菌Y-9。
2. 權(quán)利要求1所述的植物乳桿菌在制備藥物或食品中的用途。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途,所述藥物或食品用于降低膽固醇、降血壓、提高免疫 力、減肥或調(diào)節(jié)腸道菌群。
4. 一種藥物,其特征在于,所述藥物包含: 權(quán)利要求1所述的植物乳桿菌;以及 醫(yī)藥用無毒載體。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物,其特征在于,所述藥物用于降低膽固醇、降血壓、提高 免疫力、減肥或調(diào)節(jié)腸道菌群。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物,其特征在于,所述醫(yī)藥用無毒載體為選自葡萄糖、乳 糖、蔗糖、淀粉、甘露醇、糊精、脂肪酸甘油酯、聚乙二醇、羥乙基淀粉、乙二醇、聚氧乙烯山梨 糖醇酐脂肪酸酯、氨基酸、明膠、白蛋白、水、生理食鹽水的至少一種, 任選地,所述藥物的劑型呈選自片劑、顆粒劑、散劑、膠囊劑、溶液劑、懸浮劑、乳劑、凍 干制劑的至少一種。
7. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物,其特征在于,進一步包括: 穩(wěn)定劑、濕潤劑、乳化劑、粘合劑、等滲劑的至少一種。
8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物,其特征在于,將所述藥物以4. 0XIO9CFU活菌/天的劑 量對動物進行給藥。
9. 一種食品,其特征在于,所述食品包含: 權(quán)利要求1所述的植物乳桿菌;以及 食品學(xué)上可接受的添加劑。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的食品,其特征在于,所述食品用于降低膽固醇、降血壓、提高 免疫力、減肥或調(diào)節(jié)腸道菌群, 任選地,所述食品的服用劑量為4. 0XIO9CFU活菌/天。
【專利摘要】本發(fā)明公開了植物乳桿菌及其用途,具體公開了植物乳桿菌及其在制備藥物或食品中的用途、藥物及食品,其中,該植物乳桿菌于2013年9月6日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏單位的地址為中國武漢武漢大學(xué),保藏編號為CCTCC NO:M2013391,保藏名稱為植物乳桿菌Y-9Lactobacillus plantarum Y-9。本發(fā)明的植物乳桿菌具有優(yōu)異的益生作用,耐酸和耐膽鹽能力,能夠長期保存,并能夠有效用于降低血中膽固醇、降血壓、提高免疫力、減肥或調(diào)節(jié)腸道菌群。CCTCC NO:M 201339120130906
【IPC分類】A23L1-29, A61P3-04, C12R1-25, A61P37-04, A61P1-00, A61K35-747, C12N1-20, A61P9-12, A61P3-06
【公開號】CN104694409
【申請?zhí)枴緾N201310655809
【發(fā)明人】宋垚, 劉峰, 顧銳, 陳富華, 仇婷, 劉力碩, 張興舉, 張耕耘
【申請人】深圳華大基因科技有限公司, 深圳華大農(nóng)業(yè)與循環(huán)經(jīng)濟科技有限公司
【公開日】2015年6月10日
【申請日】2013年12月6日